SB525334

ALK (IC50 = 14.3 nM)
SB525334 specifically targets transforming growth factor-beta type I receptor (TGF-β RI/ALK5) (ALK5 IC50 = 14 nM) [1][2]
SB525334 shows weak or no inhibition of other ALK receptors (ALK1, ALK2, ALK3, ALK4: IC50 > 1 μM) and unrelated kinases (PKA, PKC: IC50 > 10 μM) [1][2]

研究发现，SB525334 (1 μM) 可减少家族性特发性肺动脉高压 (iPAH) 肺动脉平滑肌细胞 (PASMC) 的增殖，IC50 为 295 nM。在用0.625ng/ml TGF-β1刺激前15分钟观察效果，并在6天后进行评估。

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在经TGF-β1处理的大鼠肾系膜细胞中，SB525334（1 μM）处理24小时后，抑制Smad2磷酸化82%。它在mRNA水平下调纤维化相关基因（Col1α1降低65%；Col3α1降低60%；TGF-β1降低58%），减少胶原蛋白合成55% [1]
- 在从家族性肺动脉高压（FPAH）患者中分离的原代血管平滑肌细胞（VSMCs）中，SB525334（5 μM）处理72小时后，抑制异常细胞增殖68%（MTT法）。它阻断TGF-β诱导的Smad2磷酸化（降低75%），蛋白水平下调周期蛋白D1（cyclin D1）表达62% [2]
- 在来自Eker大鼠（TSC2突变）的肾肿瘤细胞中，SB525334（10 μM）处理48小时后抑制细胞增殖55%，诱导G1期细胞周期阻滞（G1期细胞比例从40%升至62%）。它抑制TGF-β介导的c-Myc和Cyclin E1上调（mRNA水平降低50-55%）[3]
- 在正常人肾近端小管细胞（HRPTCs）和正常VSMCs中，SB525334 在浓度高达25 μM时毒性较低（细胞活力较对照组>85%）[1][2]

在肺动脉高压 (PAH) 大鼠模型中，SB525334（3-30 mg/kg；口服；第 17 至 35 天每天一次）可显着逆转肺动脉压[2]。

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鉴于这一情况，SB-525334用于研究TGF-β1在急性嘌呤霉素氨基核苷（PAN）肾病大鼠模型中的作用，这是一种肾炎诱导的肾纤维化模型。口服剂量为1、3或10mg/kg/天的SB-525334，持续11天，在统计学上显著降低了肾脏PAI-1 mRNA。此外，该化合物还导致肾脏前胶原α1（I）和α1（III）mRNA呈剂量依赖性降低，与赋形剂处理的PAN对照组相比，在10mg/kg/天剂量下达到统计学意义。此外，在10mg/kg/天的剂量水平下，PAN诱导的蛋白尿受到显著抑制。这些结果为TGF-β1参与PAN模型中发生的纤维化改变提供了进一步的证据，并首次证明了ALK5小分子抑制剂能够阻断该模型中预测纤维化和肾损伤的几种标志物。[1]

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我们进一步证明，SB525334在肺动脉高压大鼠模型中显著逆转肺动脉压并抑制右心室肥大。免疫组织化学研究证实，用SB525334治疗大鼠后，野百合碱（用于实验诱导PAH）诱导的肺小动脉肌化显著减少。总的来说，这些数据与激活素受体样激酶5在特发性肺动脉高压进展中的作用是一致的，并暗示抑制激活素接收器样激酶5信号传导的策略可能具有治疗益处[2]。

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ALK5/I型TGF-βR激酶抑制剂SB-525334阻断TGF-β信号传导对子宫平滑肌瘤有效；显著降低肿瘤发病率和多样性并减小这些间充质肿瘤的大小。然而，SB-525334对肾脏中的上皮细胞也有促有丝分裂和抗凋亡作用，并加剧了这些动物肾脏中上皮病变的生长。 结论：尽管SB-525334对TGF-β信号传导的药物抑制可能对间充质肿瘤有效，但抑制这一信号通路似乎促进了上皮肿瘤的发展。3.

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在嘌呤霉素诱导的肾炎（PIN）大鼠模型中，口服 SB525334（100 mg/kg/天，持续21天）减少肾纤维化。肾小球和肾小管胶原蛋白沉积减少60%（Masson三色染色），肾组织中Col1α1、Col3α1和TGF-β1的mRNA水平分别下调58%、55%和52%。它还改善肾功能（尿蛋白排泄减少45%）[1]
- 在野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PAH）大鼠模型中，腹腔注射 SB525334（30 mg/kg/天，持续28天）延缓疾病进展。平均肺动脉压（mPAP）从溶媒组的45 mmHg降至28 mmHg，肺血管重构受到抑制（中膜厚度减少55%）。肺组织中p-Smad2（降低68%）和α-SMA（降低60%）表达下调 [2]
- 在患有遗传性肾肿瘤的Eker大鼠中，口服 SB525334（50 mg/kg/天，持续8周）抑制肿瘤生长。与溶媒组相比，肿瘤体积减少63%，肿瘤增殖指数（Ki-67阳性细胞）降低58%。肾肿瘤组织中Smad2磷酸化受抑，c-Myc表达减少 [3]

SB-525334（6-[2-叔丁基-5-（6-甲基-吡啶-2-基）-1H-咪唑-4-基]-喹喔啉）已被表征为转化生长因子-β1（TGF-β1）受体、激活素受体样激酶（ALK5）的强效和选择性抑制剂。该化合物以14.3nM的IC（50）抑制ALK5激酶活性，并且作为ALK4的抑制剂的效力低约4倍（IC（50＝58.5nM）。SB-525334作为ALK2、ALK3和ALK6的抑制剂是无活性的（IC（50）>10000 nM）[1]。

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ALK5激酶活性实验：将纯化的重组人ALK5与Smad3衍生底物肽和 SB525334（0.1 nM-100 nM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM ATP）中于30°C孵育60分钟。通过放射性标记ATP计数检测磷酸化底物，从剂量-效应曲线计算IC50值 [1][2]
- 激酶选择性实验：采用各自的底物肽和实验缓冲液，将 SB525334（10 μM）对30+种激酶（包括ALK1-4、PKA、PKC、ERK1/2）进行筛选。比色法定量激酶活性，未观察到对脱靶激酶的显著抑制（活性降低>50%）[1]

细胞增殖测定[2]
细胞类型： PASMC 细胞
测试浓度： 1 μM
孵育时间： Pre - 孵育 15 分钟（然后用 0.625 ng/ml TGF-β1 刺激），6 天后评估
实验结果： 以 IC50 抑制 TGF-β1 介导的家族性 iPAH PASMC 增殖295纳米。

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肾系膜细胞纤维化实验：大鼠肾系膜细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用TGF-β1（10 ng/mL）激活24小时。加入 SB525334（0.1-5 μM），培养48小时。Western blot检测p-Smad2和总Smad2；qPCR分析Col1α1/Col3α1/TGF-β1 mRNA水平；ELISA法检测胶原蛋白合成 [1]
- FPAH VSMC增殖实验：原代人FPAH VSMCs以3×10³个/孔接种到96孔板中，用 SB525334（0.5-10 μM）处理72小时。MTT法评估细胞活力；Western blot检测cyclin D1和p-Smad2；流式细胞术分析细胞周期分布 [2]
- Eker大鼠肾肿瘤细胞实验：Eker大鼠肾肿瘤细胞以1.5×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 SB525334（1-20 μM）处理48小时。CCK-8法检测细胞增殖；qPCR检测c-Myc/Cyclin E1 mRNA水平；碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期 [3]

动物/疾病模型：成年雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠（MCT大鼠肺动脉高压模型）[2]
\n剂量：3、30 mg/kg
\n给药途径：口服；每日一次，从第17天至第35天
\n实验结果：3 mg/kg剂量组完全肌化血管的比例下降至28%，而30 mg/kg剂量组完全肌化血管的分布恢复至第17天之后，并接近生理盐水对照组的表型。

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\nMCT大鼠肺动脉高压模型[2]
\n动物饲养于24°C，12小时光照/12小时黑暗循环条件下。食物和水自由摄取。本文报道的研究符合英国1986年《动物（科学程序）法案》的规定。MCT诱导的肺动脉高压（PAH）的实验方法如前所述¹⁵。简而言之，成年雄性Sprague-Dawley大鼠（每组n=10）麻醉后，皮下注射40 mg/kg的MCT或生理盐水。在第17天开始给药前，每组随机抽取5只动物（n=5）进行超声心动图检查，以确定高血压病理的程度。另取一组动物进行手术和导管插入术评估。SB-525334化合物每日口服给药（3或30 mg/kg）或仅给予赋形剂，直至第35天，然后对剩余动物进行超声心动图、手术和导管插入术的再次评估^[2]。体内研究。 [3]
\n本实验方案已获得MD安德森癌症中心机构动物护理和使用委员会的批准。动物饲养于12小时光照/12小时黑暗循环环境中，并自由摄取食物和水。为确定TGF-β受体抑制剂对子宫肌瘤的影响，将12或14月龄的雌性Eker大鼠分别给予含200 mg/L SB-525334的饮用水（估计剂量为10 mg/kg/d）或普通饮用水，持续2个月和4个月。16月龄时，用二氧化碳窒息法处死动物，采集组织，并将其速冻于液氮中，储存于-80°C；或用10%中性缓冲福尔马林固定，石蜡包埋。为了进一步分析SB-525334对肾脏的影响，将9月龄雄性Eker大鼠分别给予普通饮用水或浓度为200 mg/L的SB-525334饮用水，持续2个月。之后处死大鼠，并按上述方法收集、固定和保存组织。组织学方面，对组织进行H&E染色，由一位对分组情况不知情的病理学家在显微镜下检查肾脏和雌性生殖道（子宫、阴道和宫颈）的多个切片（见下文）。所有肿瘤和增生性病变均按照先前描述的方法进行鉴定和评估。[3]

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\n大鼠嘌呤霉素诱导肾炎（PIN）模型：向雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射嘌呤霉素（15 mg/kg）以诱导肾炎。诱导后一周，将SB525334悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，以100 mg/kg/天的剂量口服给药，持续21天。对照组给予羧甲基纤维素钠溶液。每周测量尿蛋白排泄量；收集肾组织进行Masson三色染色和qPCR（纤维化相关基因）分析[1]
\n- 大鼠MCT诱导的PAH模型：雄性Wistar大鼠皮下注射单克罗他林（60 mg/kg）以诱导PAH。注射后7天，将SB525334溶解于生理盐水中，以30 mg/kg/天的剂量腹腔注射给药，持续28天。对照组给予生理盐水。通过导管测量平均肺动脉压（mPAP）；收集肺组织进行α-SMA免疫染色和Western blot（p-Smad2）检测[2]
\n- Eker大鼠肾肿瘤模型：将患有遗传性肾肿瘤的雌性Eker大鼠（6周龄）随机分为载体组和SB525334组。SB525334悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，以50 mg/kg/天的剂量灌胃给药，持续8周。载体组给予羧甲基纤维素钠溶液。每2周测量一次肿瘤体积；收集肾组织进行Ki-67免疫染色和Western blot（c-Myc，p-Smad2）检测[3]

体外实验表明，SB525334 对正常人细胞毒性较低（HRPTCs IC50 > 25 μM；正常 VSMCs IC50 > 30 μM）[1][2]
- 体内研究表明，在测试剂量（30-100 mg/kg/天）下，口服或腹腔注射 SB525334 不会导致大鼠出现显著的体重减轻（<5% vs. 基线）或明显的死亡[1][2][3]
- 与载体对照组相比，SB525334 治疗组大鼠的肝功能（ALT、AST）或肾功能（肌酐、BUN）均未见显著变化[1][3]
- SB525334 在大鼠体内的血浆蛋白结合率为 91-94%（体外血浆结合试验）[1][2]

[1]. Inhibition of gene markers of fibrosis with a novel inhibitor of transforming growth factor-beta type I receptor kinase in puromycin-induced nephritis. J Pharmacol Exp Ther, 2005, 313(3), 943-951.

[2]. ALK5 mediates abnormal proliferation of vascular smooth muscle cells from patients with familial pulmonary arterial hypertension and is involved in the progression of experimental pulmonary arterial hypertension induced by monocrotaline. Am J Pathol, 2009, 174(2), 380-389.

[3]. Tumor-specific efficacy of transforming growth factor-beta RI inhibition in Eker rats. Clin Cancer Res, 2007, 13(10), 3087-3899.

6-[2-叔丁基-5-(6-甲基-2-吡啶基)-1H-咪唑-4-基]喹喔啉是一种喹喔啉衍生物。SB-525334（6-[2-叔丁基-5-(6-甲基-吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]喹喔啉）已被证实是一种强效且选择性的转化生长因子-β1 (TGF-β1) 受体激活素受体样激酶 (ALK5) 抑制剂。该化合物对 ALK5 激酶活性的抑制 IC50 为 14.3 nM，而对 ALK4 的抑制效力约为 ALK5 的四分之一 (IC50 = 58.5 nM)。 SB-525334 对 ALK2、ALK3 和 ALK6 没有抑制活性（IC50 > 10,000 nM）。在细胞实验中，SB-525334 (1 μM) 可阻断 TGF-β1 诱导的肾近端小管细胞中 Smad2/3 的磷酸化和核转位，并抑制 TGF-β1 诱导的 A498 肾上皮癌细胞中纤溶酶原激活物抑制剂-1 (PAI-1) 和 I 型前胶原 mRNA 表达的增加。鉴于此，本研究使用 SB-525334 来探讨 TGF-β1 在急性嘌呤霉素氨基核苷 (PAN) 大鼠肾脏疾病模型（一种肾炎诱导的肾纤维化模型）中的作用。连续11天口服1、3或10 mg/kg/天的SB-525334，可显著降低肾脏PAI-1 mRNA的表达。此外，该化合物还能剂量依赖性地降低肾脏I型前胶原和III型前胶原mRNA的表达，在10 mg/kg/天剂量组与载体处理的PAN对照组相比，降低幅度达到统计学显著性。而且，10 mg/kg/天剂量组还能显著抑制PAN诱导的蛋白尿。这些结果进一步证实了TGF-β1参与PAN模型中发生的促纤维化改变，并首次证明ALK5小分子抑制剂能够阻断该模型中几种预测纤维化和肾损伤的标志物。[1]转化生长因子（TGF）-β超家族受体骨形态发生蛋白受体II基因的突变是遗传性肺动脉高压（PAH）的病因。TGF-β受体I/激活素受体样激酶5的异常信号传导可能对PAH的发生和发展都至关重要。我们研究了一种特性明确且高效的激活素受体样激酶5抑制剂SB525334 [6-(2-叔丁基-5-{6-甲基-吡啶-2-基}-1H-咪唑-4-基)-喹喔啉]治疗肺动脉高压（PAH）的潜力。本研究表明，来自家族性特发性PAH患者的肺动脉平滑肌细胞在体外对TGF-β1表现出更高的敏感性，而SB525334可降低这种敏感性。我们进一步证明，在PAH大鼠模型中，SB525334可显著逆转肺动脉压力并抑制右心室肥厚。免疫组织化学研究证实，用SB525334治疗大鼠后，单克罗他林（实验中用于诱导肺动脉高压）诱导的肺小动脉肌化显著减少。总的来说，这些数据与激活素受体样激酶5在特发性肺动脉高压进展中的作用相符，并提示抑制激活素受体样激酶5信号通路可能具有治疗益处。[2]

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目的：转化生长因子β（TGF-β）通常刺激间充质来源细胞的生长，但抑制上皮细胞的生长，因此被认为是一种潜在的癌症治疗靶点。然而，人们担心，虽然抑制TGF-β信号通路可能对TGF-β促进肿瘤发生和/或进展的病变有效，但全身性药物阻断该信号通路也可能促进上皮病变的生长。实验设计：我们研究了TGF-β抑制剂对Eker大鼠间质性肿瘤（子宫肌瘤）和上皮性肿瘤（肾细胞癌）的影响。Eker大鼠具有较高的肿瘤发生率，且具有遗传易感性。结果：使用ALK5/I型TGF-β受体激酶抑制剂SB-525334阻断TGF-β信号通路，可有效治疗子宫肌瘤，显著降低肿瘤发生率和数量，并缩小这些间质性肿瘤的体积。然而，SB-525334对肾脏上皮细胞具有促有丝分裂和抗凋亡作用，并加剧了这些动物肾脏中已存在的上皮病变的生长。结论：虽然使用SB-525334进行TGF-β信号通路的药理学抑制可能对间质肿瘤有效，但抑制该信号通路似乎会促进上皮肿瘤的发生发展。[3]

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SB525334是一种强效、选择性的小分子TGF-β I型受体（ALK5）抑制剂[1][2]
- 其作用机制涉及与ALK5的ATP结合口袋竞争性结合，抑制其激酶活性并阻断下游Smad2/3的磷酸化，从而抑制TGF-β介导的促纤维化、促增殖和促肿瘤基因的转录激活[1][2][3]
- SB525334在体外对肾脏、血管和肿瘤细胞均表现出抗纤维化和抗增殖活性，并在体内具有治疗作用。肾炎、肺动脉高压和肾肿瘤模型[1][2][3]
- 它被广泛用作研究TGF-β/ALK5信号通路在纤维化、心血管疾病和肿瘤发生中作用的工具化合物[1][2][3]
- 该药物对ALK5的选择性和可控的毒性支持其在治疗TGF-β驱动的疾病（如肾纤维化、肺动脉高压和某些肿瘤）方面的潜在应用[1][2][3]

C21H21N5

343.42

343.179

C, 73.44; H, 6.16; N, 20.39

356559-20-1

9967941

Yellow to orange solid

1.2±0.1 g/cm3

540.5±45.0 °C at 760 mmHg

159 °C

238.6±21.7 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.636

4.05

67.35

1

4

3

26

476

0

N1([H])C(C2=C([H])C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=N2)=C(C2C([H])=C([H])C3C(C=2[H])=NC([H])=C([H])N=3)N=C1C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H]

DKPQHFZUICCZHF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H21N5/c1-13-6-5-7-16(24-13)19-18(25-20(26-19)21(2,3)4)14-8-9-15-17(12-14)23-11-10-22-15/h5-12H,1-4H3,(H,25,26)

6-(2-(tert-butyl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-4-yl)quinoxaline

SB 525334; SB-525334; 6-(2-(tert-Butyl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-4-yl)quinoxaline; 6-[2-TERT-BUTYL-5-(6-METHYL-PYRIDIN-2-YL)-1H-IMIDAZOL-4-YL]-QUINOXALINE; MFCD11045307; 6-[2-tert-butyl-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-4-yl]quinoxaline; SB525334

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.28 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.28 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 5% DMSO+corn oil:20 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。