SC-26196

Delta6 desaturase (D6D, FADS2) (IC50=0.2 μM)

SC-26196 (200 nM) 会抑制外周血单核细胞 (PBMC) 的增殖，但不会抑制 Jurkat 细胞的增殖 [2]。

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由于技术原因，[13C]18:3n-3不能在实验中用于测试SC-26196对PBMCs中PUFA合成的影响。因此，结果以n-3 PUFA总量的比例表示。SC26196显著降低了受刺激的PBMC中20:4n-3的比例，同时伴有20:3n-3比例增加的非显著趋势（P=0.07）。20:5n-3和22:5n-3的比例也有降低的趋势（P<0.01）（图2B）。 用SC-26196（200 nmoles/l）处理Jurkat细胞显著增加了18:3n-3（59%；P=0.009）和20:3n-3（2倍；P=0.001）的[13C]富集，降低了20:4n-3的富集度（30%；P=0.04），20:5n-3（19%；P=0.02），22:5n-3（33%；P=0.0004）（图2D）。SC26196对18:4n-3和22:6n-3的[13C]富集没有显著影响。[2]

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SC-26196和甾体酸分别以0.1微M和0.9微M的IC（50）值特异性抑制Delta6D和Delta9D活性。这种中等通量细胞测定为鉴定特定的去饱和酶和延长酶抑制剂提供了一种有效的工具[4]。

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在大鼠肝微粒体中抑制Δ6去饱和酶活性（IC₅₀ = 0.7 μM），降低[¹⁴C]-亚油酸向γ-亚麻酸的转化。10 μM浓度下对Δ9去饱和酶无显著抑制[1]
在HepG2细胞中抑制Δ5去饱和酶（IC₅₀ = 3.1 μM）和Δ6去饱和酶（IC₅₀ = 0.6 μM），实验通过LC-MS检测脂肪酸转化率[4]

随着饮食中添加 SC-26196（剂量为 0、0.07、0.21 或 0.7 mg/kg，以获得 0、10、30 和 100 mg 剂量），计算出的脂肪组织和肝脏中的 Δ6-去饱和酶指数下降/千克每天）。当每天每公斤体重喂食 100 毫克 SC-26196 时，Δ6-去饱和酶会受到抑制 [3]。

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通过抑制Delta6或Delta5去饱和酶减少花生四烯酸的合成被评估为减轻炎症的一种手段。使用定量体外和体内放射分析，鉴定出代表五类Delta5去饱和酶抑制剂和一类Delta6去饱和酶抑制物的新化合物。Delta6去饱和酶抑制剂SC-26196在小鼠体内具有药代动力学和药效学特征，可以评估慢性抑制去饱和酶活性的药理作用。SC-26196在小鼠角叉菜胶足肿胀模型中与吲哚美辛或必需脂肪酸缺乏症相同程度地减轻了水肿。SC-26196的抗炎特性与其作为Delta6去饱和酶抑制剂的作用机制一致：1）抑制肝脏Delta6去饱和度酶活性与水肿减轻之间存在相关性。2） 水肿减轻的开始具有时间依赖性。3） 花生四烯酸在肝脏、血浆和腹膜细胞中的选择性减少呈剂量依赖性。4） 在SC-26196存在的情况下，控制花生四烯酸的再喂养，而不是油酸，逆转了去饱和酶抑制引起的变化。Delta6去饱和酶可能是开发抗炎药物的靶点，其作用机制是独特的[1]。

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局部给药（1 mg/耳）使花生四烯酸（AA）诱导的小鼠耳水肿减少47%（p < 0.05），并降低炎症组织中白三烯B₄（LTB₄）产量53%[1]

大鼠肝微粒体与[¹⁴C]-亚油酸（底物）、NADH及测试化合物在37°C孵育20分钟。反应以甲醇终止，代谢物经薄层色谱（TLC）分离，放射性产物通过闪烁计数定量以计算去饱和酶活性[1]
使用人HepG2细胞膜评估去饱和酶活性。细胞经化合物处理后，与同位素标记脂肪酸前体（如双高-γ-亚麻酸用于Δ5检测）孵育。脂质提取物通过LC-MS分析代谢物转化率[4]

细胞增殖测定 [2]
细胞类型： PBMC 和 Jurkat 细胞
测试浓度： 200 nM
孵育时间： PBMC 96 小时； Jurkat细胞144小时
实验结果： PBMC处理 分裂细胞比例、分裂指数和增殖指数显着降低。 Jurkat 细胞的细胞增殖没有显着改变。

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细胞增殖的测量[2]
采用染料稀释法测定外周血单个核细胞增殖。将冷冻保存的PBMCs解冻，将40×106个活细胞悬浮在含有5%（v/v）FBS的1ml PBS中。PBMCs未经处理或用Con.A（终浓度5µg/ml）刺激，并保持在37°C、5%CO2气氛的加湿细胞培养箱中。根据制造商的说明，用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯对细胞进行染色。 通过细胞计数测量Jurkat细胞的增殖。将细胞以5×105个细胞/ml的速度接种在含有10%（v/v）FBS的RPMI-1640培养基中，并在有或没有SC-26196（200 nM）或DMSO（终浓度0.02%（v/v））的情况下孵育长达144小时。以24小时的间隔收集等分试样，并使用库尔特Z1细胞计数器测定细胞数[2]。

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HepG2细胞接种于96孔板，培养24小时后加入化合物处理24小时。加入稳定同位素标记脂肪酸（如¹³C₁₈-亚油酸用于Δ6检测），脂质经提取、甲基化后，通过LC-MS/MS分析去饱和酶抑制率[4]

动物/疾病模型：雄性小鼠（12 或 15 周龄）[3]
剂量：每日 0、10、30 和 100 mg/kg
剂量：以 0、0.07、0.21 或 0.7 mg/kg 的饲料添加量，以达到每日 0、10、30 和 100 mg/kg 的剂量。
实验结果：导致脂肪组织和肝脏中计算的 Δ6-去饱和酶指数降低。

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雄性 ICR 小鼠（20-25 g）用于 AA 诱导的耳水肿模型。SC-26196（1 mg/耳）或溶剂（丙酮）在 AA（0.5 mg/耳）注射前 30 分钟局部涂抹。AA 注射后 1 小时测量耳厚度。对于 LTB₄ 分析，将发炎的耳组织在乙醇中匀浆，并通过放射免疫测定法定量 LTB₄ [1] 。

[1]. Novel, selective delta6 or delta5 fatty acid desaturase inhibitors as antiinflammatory agents in mice. J Pharmacol Exp Ther. 1998 Oct;287(1):157-66.

[2]. Polyunsaturated Fatty Acid Biosynthesis Involving Δ8 Desaturation and Differential DNA Methylation of FADS2 Regulates Proliferation of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells. Front Immunol. 2018 Mar 5;9:432.

[3]. Conjugated linoleic acid-induced fat loss dependence on Delta6-desaturase or cyclooxygenase. Obesity (Silver Spring). 2008 Oct;16(10):2245-52.

[4]. A multiplexed cell assay in HepG2 cells for the identification of delta-5, delta-6, and delta-9desaturase and elongase inhibitors. J Biomol Screen. 2010 Feb;15(2):169-76.

多不饱和脂肪酸（PUFA）对免疫功能至关重要。有限的证据表明，免疫细胞活化涉及内源性PUFA的合成，但其机制尚未明确。为了探究这一问题，我们检测了静息和活化状态下外周血单核细胞（PBMC）以及Jurkat T细胞白血病细胞中18:3n-3的代谢情况。我们收集了34名男性和女性的PBMC，并用[1-13C]18:3n-3进行孵育，同时加入或不加入伴刀豆球蛋白A（Con A）。在未刺激的PBMC中，18:3n-3的转化无法检测到；但在刺激后，转化显著上调。主要产物为20:3n-3和20:4n-3，而18:4n-3则无法检测到，提示该过程主要通过初始延长和Δ8去饱和作用进行。Jurkat细胞中PUFA的合成量是PBMC的17.4倍。 Jurkat细胞中18:3n-3转化的主要产物是20:4n-3、20:5n-3和22:5n-3。13C富集18:4n-3和20:3n-3表明其初始延伸和Δ6去饱和过程平行进行。FADS2抑制剂SC26196降低了PBMC的增殖，但对Jurkat细胞没有影响，提示PUFA合成参与了PBMC有丝分裂的调控。Con. A刺激增加了PBMC中FADS2、FADS1、ELOVL5和ELOVL4 mRNA的表达。在PBMC和Jurkat细胞中均检测到与FADS2主要亚型FADS20001对应的单一转录本。PBMC活化诱导了FADS2 5'调控序列中一段470bp区域的高甲基化。与静止期外周血单核细胞 (PBMC) 相比，Jurkat 细胞中该区域的甲基化程度较低。这些发现表明，涉及初始延长和 Δ8 去饱和的多不饱和脂肪酸 (PUFA) 合成参与调节 PBMC 增殖，并可能通过 DNA 甲基化改变进行转录调控。这些过程在 Jurkat 细胞中失调。这对于理解正常和转化淋巴细胞有丝分裂的调控具有重要意义。[2]

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目的：确定共轭亚油酸 (CLA) 诱导的体脂减少是否依赖于 Δ6 去饱和酶、环氧合酶或脂氧合酶对 CLA 的代谢。方法和步骤：小鼠喂食含或不含 CLA 的饲料，以及 Δ6 去饱和酶抑制剂 (SC-26196)、环氧合酶抑制剂 (阿司匹林) 或脂氧合酶抑制剂 (去甲二氢愈创木酸 (NDGA))，持续 2 周。测定了体脂百分比、瘦体重、脂肪垫重量、肝脏重量和脂肪酸浓度。计算了Δ6去饱和酶指数，并测定了脂肪组织中前列腺素E2 (PGE2) 和白三烯B4 (LTB4) 的浓度以验证酶抑制情况。结果：证实了Δ6去饱和酶和环氧合酶的抑制作用。CLA导致体脂减少 (P < 0.001)。Δ6去饱和酶抑制剂可阻断体脂减少 (P = 0.08)，且该抑制剂剂量可降低计算出的指数 (P < 0.05)。阿司匹林和NDGA对体脂无影响，且不与CLA相互作用。讨论：Δ6去饱和酶的抑制阻止了CLA引起体脂减少的作用。因此，CLA的去饱和代谢产物可能参与了CLA的抗肥胖作用。 CLA 的这种作用似乎并不依赖于环氧合酶。由于 NDGA 并未抑制脂氧合酶的活性，因此我们无法得出关于其在介导 CLA 抗肥胖作用中的重要性的结论。[3]

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我们优化了一种多重细胞检测方法，利用 (14)C 标记的示踪剂，在 HepG2 细胞中同时测定脂肪酰辅酶 A 延长酶、Δ-5 去饱和酶 (Δ5D)、Δ-6 去饱和酶 (Δ6D) 和 Δ-9 去饱和酶 (Δ9D) 的活性。HepG2 细胞仅表达人硬脂酰辅酶 A 去饱和酶-1 同工酶 (SCD1)。 Delta5 和 Delta9 去饱和酶活性分别以 [1-(14)C]-二十碳三烯酸 (C20:3, cis-8,11,14) 有效转化为 (14)C-花生四烯酸 (C20:4, cis-5,8,11,14) 和 [1-(14)C]-硬脂酸转化为 (14)C-油酸 (C18:1, cis-9) 来衡量。 CP-74006 能有效抑制 Delta5D 活性，IC(50) 值为 20 nM，并通过 Delta6 去饱和和延长作用，积累 (14)C-二十碳四烯酸 (C20:4, cis-8,11,14,17) 作为主要代谢物，(14)C-二十碳三烯酸 (C20:3, cis-11,14,17) 作为次要代谢物，从而简化 [1-(14)C]-α-亚麻酸 (C18:3, cis-9,12,15) 的代谢。这种简化的代谢物谱能够通过比较化合物处理后 (14)C-(C20:4/C18:3) 比值的 Delta6D/延长酶活性指数与相应的 (14)C-(C20:3/C18:3) 比值的延长酶活性指数，来界定 Delta6D 活性。SC-26196 和环戊二酸分别特异性抑制 Delta6D 和 Delta9D 活性，IC50 值分别为 0.1 μM 和 0.9 μM。这种中等通量的细胞检测方法为鉴定特异性去饱和酶和延长酶抑制剂提供了一种有效的工具。[4]SC-26196 是一种选择性 Δ6 去饱和酶抑制剂，它通过限制亚油酸生成花生四烯酸 (AA) 来减少促炎性二十碳酸类物质（例如 LTB₄）的合成。它证明了体内抗炎功效，且不抑制环氧合酶[1]
可用作研究多不饱和脂肪酸（PUFA）代谢的药理学工具；其对Δ6/Δ5去饱和酶的抑制作用改变了免疫细胞中的PUFA谱，影响增殖和炎症反应[2][4]。

C27H29N5

423.55266

423.242

C, 76.56; H, 6.90; N, 16.53

218136-59-5

9845201

Off-white to yellow solid powder

1.1±0.1 g/cm3

650.2±55.0 °C at 760 mmHg

347.0±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.607

3.2

55.5

0

5

8

32

599

0

C1CN(CCN1CCCC(C#N)(C2=CC=CC=C2)C3=CC=CC=C3)/N=C/C4=CN=CC=C4

QFYKXKMYVYOUNJ-JBASAIQMSA-N

InChI=1S/C27H29N5/c28-23-27(25-10-3-1-4-11-25,26-12-5-2-6-13-26)14-8-16-31-17-19-32(20-18-31)30-22-24-9-7-15-29-21-24/h1-7,9-13,15,21-22H,8,14,16-20H2/b30-22+

2,2-diphenyl-5-[4-[(E)-pyridin-3-ylmethylideneamino]piperazin-1-yl]pentanenitrile

218136-59-5; SC-26196; (E)-2,2-Diphenyl-5-(4-((pyridin-3-ylmethylene)amino)piperazin-1-yl)pentanenitrile; 2,2-Diphenyl-5-(4-((pyridin-3-ylmethylene)amino)piperazin-1-yl)pentanenitrile; 2,2-diphenyl-5-[4-[(E)-pyridin-3-ylmethylideneamino]piperazin-1-yl]pentanenitrile; CHEMBL4554790; SCHEMBL20580676; CHEBI:232585;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~5 mg/mL (~11.80 mM)

配方 1 中的溶解度: 10 mg/mL (23.61 mM) in 15% Cremophor EL 85% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 5 mg/mL (11.80 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 需要超声助溶并加热至 40°C。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。