H+/K+-ATPase (IC50 = 0.29~0.52 μM); H+/K+-ATPase (Ki = 0.52 μM for inhibition of porcine gastric H+/K+-ATPase) [3]

替格拉赞抑制猪、狗和人的 H+/K+-ATP 酶活性。 Tegoprazan 以可逆且钾竞争性的方式抑制 pH+/K+-ATP 酶。当替戈拉赞剂量高达 0.15 μM 时，86% 的 H+/K+-ATP 酶活性被 3 μM 的替戈拉赞抑制 [1]。

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Tegolazan[（S）-4-（（5,7-二氟色满-4-基）氧基）-N，N，2-三甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酰胺]是一种钾竞争性酸阻断剂（P-CAB），是一种新型强效、高选择性的胃H+/K+-ATP酶抑制剂。Tegolazan在体外抑制猪、犬和人的H+/K+-ATP酶，IC50值范围为0.29至0.52μM，而犬肾Na+/K+-APTP酶的IC50值超过100μM。动力学分析显示，替戈拉赞以钾竞争方式抑制H+/K+-ATP酶，这种结合是可逆的[3]。

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- 泰戈拉唑（Tegoprazan）以浓度依赖方式抑制猪胃H+/K+-ATP酶活性，Ki为0.52 μM，对钾离子表现出竞争性抑制。它还抑制离体兔胃腺的酸分泌，降低酸输出，EC50为0.37 μM [3]
- 在Caco-2细胞单层中，泰戈拉唑（Tegoprazan）（10 μM）通过增加跨上皮电阻（TEER）和减少FITC-葡聚糖的细胞旁通透性来增强肠道屏障功能。通过qPCR和Western blot检测发现，它在mRNA和蛋白水平上均上调紧密连接蛋白（occludin、claudin-1、zonula occludens-1）的表达 [1]

在狗中，egoprazan（1.0 mg/kg，口服）可有效防止组胺引起的胃酸化。五肽胃泌素诱导酸化后，胃内 pH 值恢复到中性范围，剂量为 1.0–3.0 mg/kg，口服。在给予五肽胃泌素的狗中，依戈拉赞（3 mg/kg，面部）引起迁移性运动复合体立即胃 III 期收缩 [1]。

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炎症性肠病（IBD）是一种慢性免疫介导的疾病，其特征是胃肠道炎症持续时间延长。IBD可能是由肠道屏障功能障碍、肠道微生物群改变以及环境因素在遗传易感个体中诱导的肠道免疫异常引起的。质子泵抑制剂（PPI），如雷贝拉唑，经常用于抑制胃酸。然而，长期服用PPI会改变肠道微生物组的组成，可能会加重IBD的严重程度。本研究表明，替戈拉赞是一种钾竞争性酸阻断剂，可显著改善小鼠结肠炎，增强肠上皮屏障功能。Tegolazan缓解了肠道微生物群失调，促进了普通拟杆菌的生长。反过来，B.vulgatus通过抑制致病菌的上皮粘附来缓解肠道炎症。与雷贝拉唑不同，替戈拉赞不会引起肠道生态失调。我们的研究结果为替戈拉赞作为IBD的肠道保护剂和胃酸相关疾病的治疗剂的潜在作用提供了新的见解。[1]

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Tegolazan是一种新型的钾竞争性酸阻断剂（P-CAB），是下一代治疗药物，用于治疗胃食管反流病（GERD）和消化性溃疡等与酸相关的胃肠道疾病。在本研究中，我们比较了替戈拉赞与埃索美拉唑（一种代表性的质子泵抑制剂）的体外和体内药理学特性。使用从猪分离的含有胃H+/K+-ATP酶的离子泄漏囊泡进行体外酶测定。在胃食管反流病和消化性溃疡大鼠模型中评估了替戈拉赞的体内疗效。Tegolazan以可逆的方式抑制猪H+/K+-ATP酶的活性，IC50值为0.53μM，而埃索美拉唑显示出微弱且不可逆的抑制作用，IC50值是42.52μM。在GERD模型中，替戈拉赞在抑制食管损伤和胃酸分泌方面表现出剂量依赖性疗效，ED50为2.0mg/kg，比埃索美拉唑强15倍。在消化性溃疡模型中，与埃索美拉唑相比，替戈拉赞表现出更优的抗溃疡活性。在萘普生、乙醇和水浸泡束缚应激诱导的消化性溃疡模型中，替戈拉赞的ED50分别为0.1、1.4和0.1mg/kg。在醋酸诱导的消化性溃疡模型中，重复口服5天后，10mg/kg的替戈拉赞的治愈率高于30mg/kg的埃索美拉唑（分别为44.2%和32.7%）。因此，替戈拉赞是一种新型的P-CAB，对胃H+/K+-ATP酶具有强效和可逆的抑制作用，与之前的质子泵抑制剂相比，可能具有更强的疗效。[2]

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狗单次口服0.3至30mg/kg的替戈拉赞能很好地被吸收到血液中，并在胃组织/液体中的分布高于血浆。替戈拉赞能有效抑制组胺诱导的狗胃酸分泌，从给药后1小时开始，在1.0mg/kg的剂量下观察到完全抑制。此外，口服1和3mg/kg的替戈拉赞可将五肽胃泌素诱导的酸化胃pH值逆转至中性范围。有趣的是，在接受五肽胃泌素治疗的狗中，3 mg/kg的替戈拉赞立即诱发了迁移运动复合物的胃III期收缩，其他P-CAB，伏诺普拉赞也观察到了类似的效果。Tegolazan是一种新型的P-CAB，可能为胃酸相关和运动障碍疾病的治疗提供新的选择。[3]

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- 在乙酸诱导的结肠炎大鼠模型中，口服泰戈拉唑（Tegoprazan）（30和100 mg/kg/天）持续7天可减轻结肠损伤，表现为疾病活动指数（DAI）降低、宏观评分下降以及髓过氧化物酶（MPO）活性降低。它还通过增加结肠紧密连接蛋白表达和降低血清脂多糖（LPS）水平来改善肠道屏障功能 [1]
- 在幽门结扎大鼠中，泰戈拉唑（Tegoprazan）（1、3、10 mg/kg，口服）剂量依赖性地抑制基础胃酸分泌，在10 mg/kg时最大抑制率为94%。它还减少胃液的体积和酸度 [2]
- 在水浸应激诱导的胃损伤大鼠模型中，应激前1小时口服泰戈拉唑（Tegoprazan）（3、10、30 mg/kg）可剂量依赖性地降低损伤指数，30 mg/kg时抑制率为85%。在吲哚美辛诱导的胃损伤中也观察到类似的保护作用，10 mg/kg时对损伤形成的抑制率为78% [2]
- 泰戈拉唑（Tegoprazan）（0.3-10 mg/kg，口服）降低清醒大鼠的胃动力（通过放射性标记物的转运来测量）。它还以剂量依赖方式抑制麻醉大鼠中卡巴胆碱诱导的胃收缩 [3]

H+/K+-ATP酶抑制的动力学分析。[2]
酶动力学研究基于之前描述的猪离子泄漏测定法进行，但载体量（1µg）除外，并用不同浓度的钾（终浓度为2.0、2.5、3.5、5.0和10 mM KCl）和替戈拉赞（终浓度分别为0.15、0.30、0.45和0.60µM）进行了测试。

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犬肾脏Na+/K+-ATP酶活性的测定。[2]
用250mM蔗糖溶液将犬肾Na+/K+-ATP酶稀释至7mg/ml。在96孔聚苯乙烯板中的60µl酶反应混合物中测量犬肾Na+/K+-ATP酶活性，该混合物含有11µg蛋白质、试验化合物、100 mM NaCl、2 mM KCl、3 mM MgSO4、3 mmol Na2ATP和40 mM Tris（37°C下pH 7.4）。对于0%和100%抑制对照，酶反应分别在1%二甲亚砜和100µM哇巴因存在下进行。通过加入Na2ATP开始反应，将混合物在37°C下孵育30分钟，然后加入30µl含10%SDS的消泡剂A以停止反应。采用与猪试验相同的方法进行比色分析。

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对药理学相关分子的结合/功能的抑制。[2]
在10µM替戈拉赞存在的情况下，测试了对药理学相关分子、受体、离子通道、转运蛋白和酶的结合或功能活性的抑制作用。关于Na+/K+-ATP酶，在30µM下测试了替戈拉赞。所有检测均由Eurofins Cerep在标准抑制剂作为检测对照的情况下，根据其验证的检测方法进行(http://www.cerep.fr/cerep/users/pages/catalog/assay/catalog.asp).

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H+/K+-ATP酶抑制实验：分离猪胃H+/K+-ATP酶，在ATP和钾离子存在下与不同浓度的泰戈拉唑（Tegoprazan）孵育。通过检测无机磷酸盐的释放来测量ATP水解，并计算动力学参数（Ki）以评估与钾的竞争性抑制作用 [3]

细胞培养和治疗[1]
人结肠癌细胞系HT-29 和Caco-2[HTB-37™，美国典型培养物保藏中心（ATCC）]在含有10%热灭活胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素溶液的RPMI 1640中，在含5%CO2的加湿培养箱中保持在37°C。Caco-2细胞在含有10%FBS和1%青霉素-链霉素溶液的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。在显微镜下通过台盼蓝染色评估细胞存活率。Caco-2细胞用于评估肠屏障功能，用40 ng/mL肿瘤坏死因子（TNF）-α处理48小时可诱导屏障损伤。

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体外肠通透性测定[1]
接下来，为了评估肠上皮屏障功能，将Caco-2细胞植入Transwell系统的上腔（0.4μm孔）。通过分析上皮电阻（TEER）和FITC-葡聚糖（FD4）的细胞旁通量来评估上皮通透性。使用Millicell ERS仪器评估在Transwell室中培养的Caco-2细胞单层的电阻。将FITC-葡聚糖以1mg/ml的终浓度加入上室。加入FITC-葡聚糖两小时后，收集下室的培养基，并使用荧光微孔板读数器测量荧光强度。

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- Caco-2细胞肠道屏障功能实验：将Caco-2细胞接种在transwell插入物上并分化为单层。用泰戈拉唑（Tegoprazan）（0.1-10 μM）处理细胞24小时。测量TEER以评估屏障完整性，并使用FITC-葡聚糖通量评估细胞旁通透性。通过qPCR（mRNA）和Western blot（蛋白）分析紧密连接蛋白的表达 [1]
- 离体胃腺实验：分离兔胃腺，在刺激剂（组胺、卡巴胆碱）存在下与泰戈拉唑（Tegoprazan）（0.01-10 μM）孵育。通过对pH敏感的荧光染料积累来测量酸分泌，并确定EC50 [3]

测定犬血浆和胃液中替戈拉赞的浓度。[3]
\n8-11月龄的雄性比格犬在给药前禁食过夜，分别口服0.3、3和30 mg/kg的替戈拉赞（n = 2），并在给药后0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集血样。雄性海登海因袋（HP）犬口服1或3 mg/kg的替戈拉赞，并在给药后5或16小时采集血样和胃液。使用液相色谱-串联质谱法（API4000三重四极杆质谱仪）定量分析血浆和胃液中替戈拉赞的浓度，并使用Analyst程序1.4.1版进行计算。采用 WinNonlin 5.2.1 版本进行非房室模型分析，测定药代动力学参数。\n

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\nHP 犬模型胃酸分泌的测定。[3]
\n根据 Heidenhain (1879) 提出的方法构建胃囊。简而言之，雄性比格犬（体重 7–12 kg）先用咪达唑仑（0.2 mg/kg，肌注）和美托咪定（0.05 mg/kg，肌注）麻醉，再吸入异氟烷。注射硫酸阿托品（0.5 mg/ml，1 ml，肌注）并输注 Lactec D（100 ml/h）后打开腹腔。暴露胃部后，将脾门对侧的大弯部分改造成胃囊，并利用完整的胃网膜动脉为其提供充足的血液供应。胃体主体被重建，胃囊则通过植入的金属套管引流。缝合胃囊后，将套管经左侧腹壁引出腹腔。动物术后至少恢复3周。实验开始前，动物禁食过夜，但可自由饮水。通过持续静脉输注组胺（80 μg/mg/小时）刺激胃酸分泌，并在整个实验期间维持输注。实验过程中，每15分钟通过重力引流收集一次胃液样本。在开始输注组胺90分钟后，分别口服给予替戈拉赞、奥美拉唑或赋形剂（0.5%甲基纤维素）。在为期5天的重复给药研究中，连续5天口服给予受试药物或赋形剂，并在第1天和第5天检测其对组胺刺激的胃酸分泌的抑制作用。收集胃液样本并离心，使用自动滴定仪测定上清液的酸度。每15分钟测定一次胃酸分泌量（酸度×上清液体积），结果以每15分钟的毫当量表示。所有结果均使用MS EXCEL软件计算。\n

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\n体内肠道通透性测定[1]
\n在处死当天，通过测量4 kDa异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖的细胞旁通透性来评估肠道通透性。小鼠口服150 μL浓度为80 mg/mL的FITC-葡聚糖，并在给药4小时后采集血液。使用荧光微孔板读数仪测量荧光强度。\n

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\n - 醋酸诱导大鼠结肠炎模型：通过直肠内给予醋酸诱导结肠炎。将替戈普拉赞悬浮于0.5%羧甲基纤维素（CMC）中，从诱导后第1天开始，以30或100 mg/kg/天的剂量口服给药，连续7天。每日评估疾病活动指数（DAI），并在第7天处死大鼠，收集结肠组织进行宏观评分、髓过氧化物酶（MPO）活性测定和紧密连接蛋白分析[1]。
\n - 幽门结扎大鼠模型：大鼠禁食24小时后，在麻醉下进行幽门结扎。结扎后立即口服给予替戈普拉赞（1、3、10 mg/kg）或溶剂（0.5% CMC）。四小时后，收集胃液以测量其体积、酸度和酸分泌量[2]
\n - 胃损伤模型：对于水浸应激诱导的损伤模型，大鼠禁食后，口服给予替戈普拉赞（3、10、30 mg/kg）或溶剂，然后进行7小时的水浸应激。对于吲哚美辛诱导的损伤模型，大鼠在给予吲哚美辛前30分钟给予替戈普拉赞（3、10 mg/kg），4小时后评估损伤情况。损伤指数根据损伤的数量和大小计算[2]
\n - 胃动力研究：清醒大鼠禁食后，口服给予替戈普拉赞（0.3-10 mg/kg），30分钟后，经胃内给予放射性标记物。胃排空和转运通过30分钟时胃和肠道内的放射性计数来测量。在麻醉大鼠中，用卡巴胆碱诱导胃收缩，并静脉注射替戈拉赞（0.1-1 mg/kg）以评估其抑制作用[3]

[1]. Novel Potassium-Competitive Acid Blocker, Tegoprazan, Protects Against Colitis by Improving Gut Barrier Function. Front Immunol. 2022 May 25;13:870817.

[2]. Effects of Tegoprazan, a Novel Potassium-Competitive Acid Blocker, on Rat Models of Gastric Acid-Related Disease. J Pharmacol Exp Ther. 2019 Jun;369(3):318-327.

[3]. Tegoprazan, a Novel Potassium-Competitive Acid Blocker to Control Gastric Acid Secretion and Motility. J Pharmacol Exp Ther. 2018 Feb;364(2):275-286.

替戈普拉赞（Tegoprazan，又名CJ-12420）是由CJ Healthcare Corp.开发的一种用于治疗酸相关胃肠道疾病的新型治疗药物。该药是一种强效且高选择性的钾离子竞争性酸阻滞剂（P-CAB），起效迅速，并能长时间控制胃pH值。替戈普拉赞的强效和持久作用源于其能够缓慢地从胃腺清除，并且其作用不受胃酸水平的影响。此外，研究还发现其疗效不受进食的影响。

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作用机制
替戈普拉赞是一种强效且高选择性的钾离子竞争性酸阻滞剂。其作用机制不同于质子泵抑制剂，因为该药无需转化为活性形式，即可以可逆的钾离子竞争方式直接抑制H+/K+‐ATPase。这是因为替戈拉赞是一种耐酸弱碱，能够滞留在胃壁细胞的高酸性小管中。

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总之，新型P-CAB类药物替戈拉赞比传统PPI类药物具有更强且更可逆的胃酸抑制作用。然而，替戈拉赞对肠道炎症的影响尚不清楚。据报道，长期服用PPI会加重炎症性肠病（IBD）的病情。据我们所知，本研究首次证实替戈拉赞可通过增强肠道上皮屏障完整性、增加调节性T细胞（Tregs）水平以及调节肠道菌群组成来潜在地改善肠道炎症，这已通过体外和体内实验得到证实。此外，我们发现替戈拉赞能够促进一种特定共生菌——普通芽孢杆菌（B. vulgatus）的生长，而普通芽孢杆菌对抑制致病微生物至关重要。具体而言，我们的研究结果为使用质子泵抑制剂（PPI）和肽类抗酸剂（P-CAB）治疗炎症性肠病（IBD）的潜在策略提供了重要的见解，尽管所描述的变化背后的详细机制仍需进一步阐明。[1]

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P-CAB 是一类用于治疗酸相关胃肠道疾病的新型药物，被认为是下一代 PPI。沃诺拉生的临床评估表明，与目前可用的 PPI 相比，它在治疗胃食管反流病和消化性溃疡方面具有强效且持久的疗效。本研究中对替戈拉生进行的体外和体内动物药理学研究表明，替戈拉生具有与沃诺拉生相似的药理学特性。替戈拉生是一种新型 P-CAB，可能为胃酸相关疾病以及临床上应用的胃肠动力障碍疾病提供新的治疗选择。[3]

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替戈拉赞是一种新型钾离子竞争性酸阻滞剂 (P-CAB)，它通过与钾离子竞争抑制胃 H+/K+-ATP 酶，从而减少胃酸分泌。在酸相关疾病模型中，它表现出快速而显著的疗效，并且还能通过上调紧密连接蛋白来改善肠道屏障功能，从而在结肠炎中发挥保护作用 [1][2][3]

C20H19F2N3O3

387.37997174263

387.139

C, 62.01; H, 4.94; F, 9.81; N, 10.85; O, 12.39

942195-55-3

Tegoprazan-d6

23582846

Off-white to light yellow solid powder

3.2

67.4

1

6

3

28

581

1

O([C@H]1CCOC2=CC(=CC(=C12)F)F)C1C=C(C(=O)N(C)C)C=C2N=C(NC=12)C

CLIQCDHNPDMGSL-HNNXBMFYSA-N

InChI=1S/C20H19F2N3O3/c1-10-23-14-6-11(20(26)25(2)3)7-17(19(14)24-10)28-15-4-5-27-16-9-12(21)8-13(22)18(15)16/h6-9,15H,4-5H2,1-3H3,(H,23,24)/t15-/m0/s1

7-[[(4S)-5,7-difluoro-3,4-dihydro-2H-chromen-4-yl]oxy]-N,N,2-trimethyl-3H-benzimidazole-5-carboxamide

Tegoprazan; 942195-55-3; Tegoprazan [INN]; CJ-12420; UNII-W017G7IF4S; W017G7IF4S; CJ 12420; CJ12420; RQ-00000004; RQ00000004; RQ 00000004;K-CAB; LXI-15028;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~258.14 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。