HIV-1/2 nucleotide reverse transcriptase

根据MTT实验，替诺福韦对HK-2细胞活力有有害影响，48小时和72小时的IC50值分别为2.77 μM和9.21 μM。替诺福韦可降低 HK-2 细胞中的 ATP 水平。在 HK-2 细胞中，替诺福韦（3.0 至 28.8 μM）可增强蛋白质羰基化和氧化应激。此外，替诺福韦能够导致 HK-2 细胞凋亡，这是由线粒体损伤引起的[1]。活化的 PBMC 中 R5 向性 HIV-1BaL 和 X4 向性 HIV-1IIIb 的复制被替诺福韦和 M48U1（在 0.25% HEC 中复合）抑制。此外，一些实验室毒株和患者来源的 HIV-1 分离株也受到抑制。除了对 PBMC 无毒之外，M48U1 和替诺福韦在 0.25% HEC 中的组合制剂还表现出针对 R5 倾向性 HIV-1BaL 感染的协同抗逆转录病毒功效 [2]。

在 BLT 人源化小鼠中，富马酸替诺福韦二吡呋酯（20、50、140 或 300 mg/kg）给药在阴道 HIV 攻击期间产生剂量依赖性活性。富马酸替诺福韦二吡呋酯（50、140 或 300 mg/kg）可显着减少 BLT 小鼠中的 HIV 传播[3]。在慢性感染 WHV 的土拨鼠中，富马酸替诺福韦二吡呋酯（0.5、1.5 或 5.0 mg/kg/天）会导致血清病毒血症出现剂量依赖性下降。对于治疗土拨鼠持续性 HBV 感染，富马酸替诺福韦二吡呋酯既安全又有效 [4]。

将细胞接种到48孔组织培养板（39000个细胞/mL）中，使其生长48小时，然后用赋形剂或替诺福韦处理。治疗期后，使用MTT法评估细胞存活率。MTT法依赖于NAD（P）H依赖性氧化还原酶将四唑染料3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）转化为甲氮[1]。

富马酸替诺福韦二吡呋酯 (TDF) 是一种核苷酸类似物，已获批准用于治疗人类免疫缺陷病毒 (HIV) 感染。体外研究表明，TDF 可抑制野生型乙型肝炎病毒 (HBV) 和拉米夫定耐药 HBV 突变株的复制，并可抑制 HIV 合并感染患者体内的拉米夫定耐药 HBV 以及 HIV 合并感染患者体内的 HBV。目前已发表的文献中缺乏 TDF 在非 HIV 合并感染或未接受过拉米夫定治疗的慢性 HBV 感染患者体内对抗野生型病毒的疗效数据。本研究采用安慰剂对照、剂量范围研究（剂量为 0.5 至 15.0 mg/kg 体重/天），评估了口服 TDF 对慢性土拨鼠肝炎病毒 (WHV) 感染（一种已建立的、具有预测性的抗病毒治疗动物模型）的抗病毒作用。每日一次，分别以0.5、1.5或5.0 mg/kg/天的剂量给予TDF治疗，持续四周，可显著降低血清WHV病毒载量（较治疗前水平降低0.2至1.5 log）。未观察到对血清中抗WHV核心抗体和抗WHV表面抗体水平，以及治疗组土拨鼠肝脏中WHV RNA或WHV抗原浓度的影响。接受TDF治疗的土拨鼠个体表现出WHV表面抗原血清载量的短暂下降，并且这些土拨鼠的血清WHV病毒载量、肝内WHV复制以及肝脏WHV抗原表达也均出现短暂下降。所有接受TDF治疗的土拨鼠均未观察到毒性反应。停药后，WHV病毒载量迅速恢复至治疗前水平。研究结论表明，在土拨鼠慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染模型中，口服TDF 4周安全有效。[5]

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20只成年慢性HBV携带土拨鼠按年龄、性别、体重和血清γ-谷氨酰转移酶（GGT）活性等分为五组，每组四只：（i）富马酸替诺福韦酯（TDF）15.0 mg/kg，每日一次；（ii）富马酸替诺福韦酯（TDF）5.0 mg/kg，每日一次；（iii）富马酸替诺福韦酯（TDF）1.5 mg/kg，每日一次；（iv）富马酸替诺福韦酯（TDF）0.5 mg/kg，每日一次；（v）安慰剂对照组。土拨鼠每日接受治疗，持续4周，停药后继续观察12周。

吸收、分布和排泄
HIV感染患者口服替诺福韦酯后，替诺福韦酯能迅速被吸收并代谢为替诺福韦。高脂餐后服用300 mg替诺福韦酯片剂可提高该药的口服生物利用度，表现为替诺福韦AUC0-∞增加约40%，Cmax增加约14%。相反，与空腹服用相比，与少量进食同服替诺福韦酯对替诺福韦的药代动力学无显著影响。食物的存在会使替诺福韦达到Cmax的时间延长约1小时。在进食状态下，未控制餐食内容的情况下，每日一次服用300 mg替诺福韦酯后，替诺福韦的Cmax和AUC分别为0.33 ± 0.12 μg/mL和3.32 ± 1.37 μg•hr/mL。
静脉注射替诺福韦后，约70-80%的剂量在给药后72小时内以原形替诺福韦的形式从尿液中排出。替诺福韦主要通过肾小球滤过和肾小管主动分泌清除。可能存在与其他经肾脏清除的化合物竞争清除的情况。
静脉注射1.0 mg/kg和3.0 mg/kg替诺福韦后，稳态分布容积分别为1.3 ± 0.6 L/kg和1.2 ± 0.4 L/kg。口服替诺福韦酯后，替诺福韦分布于大多数组织，其中肾脏、肝脏和肠道内容物中的浓度最高（基于临床前研究数据）。替诺福韦的清除率高度依赖于肾功能，且个体差异可能很大。总清除率估计约为 230 ml/h/kg（约 300 ml/min）。平均而言，肾清除率估计约为 160 ml/h/kg（约 210 ml/min），高于肾小球滤过率。这表明主动肾小管分泌是替诺福韦清除的重要组成部分。美国食品药品监督管理局 (FDA) 的药品标签提供了根据肾功能调整剂量的具体指南。对于肾功能不全的患者，在服用替诺福韦前务必查阅产品说明书，因为该药物在这些患者中的清除率可能差异很大。
静脉注射替诺福韦后，约70-80%的剂量在给药后72小时内以原形替诺福韦的形式从尿液中排出。单次口服替诺福韦后，其末端消除半衰期约为17小时。每日一次口服300毫克替诺福韦（进食后），24小时内约有32±10%的给药剂量从尿液中排出。替诺福韦主要通过肾小球滤过和肾小管主动分泌清除。可能存在与其他经肾脏排泄的化合物竞争清除的情况。
在替诺福韦浓度为0.01至25 μg/mL的范围内，替诺福韦与人血浆或血清蛋白的体外结合率分别低于0.7%和7.2%。静脉注射替诺福韦1.0 mg/kg和3.0 mg/kg后，稳态分布容积分别为1.3 ± 0.6 L/kg和1.2 ± 0.4 L/kg。
Viread是活性成分替诺福韦的水溶性二酯前药。空腹受试者口服Viread后，替诺福韦的生物利用度约为25%。空腹HIV-1感染者单次口服300 mg Viread后，血药浓度峰值（Cmax）在1.0 ± 0.4小时内达到。 Cmax 和 AUC 值分别为 0.30 ± 0.09 μg/mL 和 2.29 ± 0.69 μg·hr/mL。
在摄入高脂餐（约 700 至 1000 千卡，含 40% 至 50% 脂肪）后服用 300 mg 维瑞德片剂可提高其口服生物利用度，使替诺福韦的 AUC 增加约 40%，Cmax 增加约 14%。然而，与空腹服用相比，在摄入少量食物后服用维瑞德对替诺福韦的药代动力学没有显著影响。食物会使替诺福韦达到 Cmax 的时间延迟约 1 小时。在进食状态下，每日一次服用300毫克维瑞德（Viread）后，替诺福韦的Cmax和AUC分别为0.33±0.12微克/毫升和3.32±1.37微克·小时/毫升（未控制餐食成分）。
有关富马酸替诺福韦二吡呋酯（共6种）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
富马酸替诺福韦二吡呋酯是前药替诺福韦二吡呋酯的富马酸盐。替诺福韦二吡呋酯被吸收后转化为其活性形式替诺福韦，一种核苷单磷酸（核苷酸）类似物。替诺福韦随后在细胞内组成型表达的酶的作用下转化为活性代谢物替诺福韦二磷酸酯（一种链终止剂）。替诺福韦酯转化为活性药物形式需要两个磷酸化步骤。细胞色素P450酶系统不参与替诺福韦酯或替诺福韦的代谢。
富马酸替诺福韦酯是一种前药，在体内经二酯水解为替诺福韦后才具有活性，随后替诺福韦代谢为活性代谢物（替诺福韦二磷酸酯）。

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生物半衰期
单次口服给药后，末端消除半衰期约为17小时。
单次口服Viread后，替诺福韦的末端消除半衰期约为17小时。

蛋白质结合
在替诺福韦浓度范围为 0.01 至 25 μg/mL 时，替诺福韦与人血浆或血清蛋白的体外结合率分别为 <0.7% 和 <7.2%。

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相互作用
可能与降低肾功能或可能与替诺福韦竞争肾小管主动分泌的药物（例如，阿昔洛韦、西多福韦、更昔洛韦、伐昔洛韦、缬更昔洛韦）发生药代动力学相互作用；可能会出现替诺福韦或合并用药的血浆浓度升高。
替诺福韦生产商声明，替诺福韦不应用于治疗乙型肝炎病毒 (HBV) 感染。
与硫酸阿扎那韦存在药代动力学相互作用（每日一次服用 400 mg 阿扎那韦和 300 mg 富马酸替诺福韦酯时，阿扎那韦的血浆浓度和 AUC 降低（最低浓度降低 40%），而替诺福韦的血浆浓度和 AUC 升高）。与利托那韦增效的硫酸阿扎那韦存在药代动力学相互作用（每日一次服用 300 mg 阿扎那韦、100 mg 利托那韦和 300 mg 富马酸替诺福韦酯时，阿扎那韦的血浆浓度和 AUC 降低（最低浓度降低 23%），而替诺福韦的血浆浓度和 AUC 升高）。如果同时使用，建议每日一次，随餐服用阿扎那韦 300 mg、利托那韦 100 mg 和富马酸替诺福韦二吡呋酯 300 mg；除非低剂量利托那韦是该方案的组成部分，否则阿扎那韦不应与替诺福韦合用。应监测替诺福韦的毒性，如果出现与替诺福韦相关的不良反应，应停止用药。如果阿扎那韦与替诺福韦和组胺H2受体拮抗剂合用，对于既往接受过治疗的患者，推荐剂量为阿扎那韦400 mg、利托那韦100 mg和富马酸替诺福韦酯300 mg，每日一次，随餐服用。
与缓冲型地达诺辛制剂（儿童口服溶液，与抗酸剂混合；Videx）或含有肠溶地达诺辛颗粒的缓释胶囊（Videx EC）存在药代动力学相互作用，导致地达诺辛血浆浓度和AUC升高；替诺福韦的药代动力学无变化。可能导致早期病毒学失败、耐药突变快速选择、免疫无应答（例如，CD4+ T细胞计数下降）以及地达诺辛相关不良反应风险增加（例如，胰腺炎、神经病变）。如果地达诺辛和替诺福韦同时使用，应谨慎，并密切监测患者是否出现与地达诺辛相关的不良反应；如果出现此类不良反应，应停用地达诺辛。如果地达诺辛缓释胶囊与富马酸替诺福韦酯合用，推荐剂量为：体重≥60 kg且肌酐清除率≥60 mL/min的患者，每日一次，每次250 mg；体重<60 kg且肌酐清除率≥60 mL/min的患者，每日一次，每次200 mg。地达诺辛缓释胶囊和替诺福韦可以同时服用，并佐以少量食物（不超过 400 千卡，脂肪含量不超过 20%）或空腹服用。
有关富马酸替诺福韦二吡呋酯（共 10 种）的更多相互作用（完整）数据，请访问 HSDB 记录页面。

[1]. Establishment of HK-2 Cells as a Relevant Model to Study Tenofovir-Induced Cytotoxicity. Int J Mol Sci. 2017 Mar 1;18(3).

[2]. M48U1 and Tenofovir combination synergistically inhibits HIV infection in activated PBMCs and human cervicovaginal histocultures. Sci Rep. 2017 Feb 1;7:41018.

[3]. Predicting HIV Pre-exposure Prophylaxis Efficacy for Women using a Preclinical Pharmacokinetic-Pharmacodynamic In Vivo Model. Sci Rep. 2017 Feb 1;7:41098.

[4]. Menne S, Cote PJ, Korba BE, Antiviral effect of oral administration of tenofovir disoproxil fumarate in woodchucks with chronic woodchuck hepatitis virus infection. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Jul;49(7):2720-8.

治疗用途
抗HIV药物，逆转录酶抑制剂
富马酸替诺福韦酯与其他抗逆转录病毒药物联合使用，用于治疗成人1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）感染。/美国产品标签包含/
替诺福韦用于治疗成人慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染。该适应症基于乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性或阴性且肝功能代偿的成人慢性HBV患者的组织学、病毒学、生化和血清学反应。
富马酸替诺福韦酯（TDF）、恩曲他滨（FTC）和依非韦伦（EFV）是用于治疗HIV-1感染的每日一次单片复方制剂（Atripla）的三种成分。先前的细胞培养研究表明，替诺福韦（TFV，TDF 的母体药物）与恩曲他滨（FTC）的双重组合在抗 HIV 活性方面具有叠加或协同作用，这与两种化合物细胞内磷酸化水平的升高相关。在本研究中，研究人员证实 TFV+FTC、TFV+EFV、FTC+EFV 和 TFV+FTC+EFV 的组合在细胞培养中协同抑制 HIV 复制，并在生化分析中协同抑制 HIV-1 逆转录酶（RT）催化的 DNA 合成。研究人员采用了多种方法来定义协同作用，包括中位效应分析、MacSynergyII 和定量等效线图分析。我们发现，在 FTC-三磷酸（TP）存在下，HIV-1 RT 与 TFV 终止的 DNA 之间死端复合物（DEC）的形成增强，可能是 TFV+FTC 组合观察到的协同作用的原因，这可能是通过减少末端核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）的切除实现的。此外，研究人员发现，EFV能够促进TFV或FTC单磷酸酯（MP）末端DNA高效形成稳定的DEC样复合物，这有助于TFV二磷酸酯（DP）+EFV和FTC-TP+EFV组合对HIV-1逆转录酶（RT）的协同抑制作用。该研究证实了TFV+FTC、TFV+EFV、FTC+EFV和TFV+FTC+EFV组合的协同抗病毒活性与酶水平上对HIV-1 RT的协同抑制作用之间存在明确的相关性。研究人员提出，TFV+FTC+EFV协同作用的分子机制是：在组合中第二种和第三种药物存在的情况下，活性代谢物TFV-DP和FTC-TP水平升高，链末端DNA和HIV-1 RT的DEC形成增强。本研究进一步加深了对细胞培养中多种NRTI+NNRTI组合以及某些NRTI+NRTI组合的协同抗HIV-1作用的长期观察，并提供了生化证据，表明抗HIV药物组合可以提高细胞内药物疗效，而不会增加细胞外药物浓度。

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药物警告
/黑框警告/ 警告：乳酸性酸中毒/伴有脂肪变性的严重肝肿大和治疗后肝炎加重。已有报道称，使用核苷类似物（包括维瑞德）与其他抗逆转录病毒药物联合治疗时，会出现乳酸性酸中毒和伴有脂肪变性的严重肝肿大，甚至有致死病例。已有报道称，乙型肝炎病毒感染患者在停用包括维瑞德在内的抗乙型肝炎治疗后，会出现严重的急性肝炎加重。对于停用抗乙肝治疗（包括维瑞德）的患者，应密切监测肝功能，至少持续数月，并进行临床和实验室随访。如有必要，可考虑恢复抗乙肝治疗。
接受核苷类逆转录酶抑制剂单药治疗或联合其他抗逆转录病毒药物治疗的患者中，罕见报道出现乳酸性酸中毒和伴有脂肪变性的严重肝肿大（有时甚至致命）。大多数病例为女性；肥胖和长期使用核苷类逆转录酶抑制剂也可能是危险因素。对于已知存在肝病危险因素的患者，使用核苷类似物时应谨慎；然而，也有报道称，即使没有已知危险因素的患者也出现乳酸性酸中毒和伴有脂肪变性的严重肝肿大。任何出现提示乳酸性酸中毒或明显肝毒性（肝毒性体征包括肝肿大和脂肪变性，即使血清转氨酶浓度未显著升高）的临床或实验室检查结果的患者均应暂停替诺福韦治疗。
抗逆转录病毒治疗曾有报道出现体脂重新分布或积聚，包括中心性肥胖、背颈脂肪增生（水牛背）、四肢消瘦、面部消瘦、乳房增大和库欣综合征样外观。
接受富马酸替诺福韦酯治疗的HIV感染患者最常见的不良反应包括皮疹、腹泻、头痛、疼痛、抑郁、乏力和恶心。接受富马酸替诺福韦酯治疗的 HIV 感染患者最常见的不良反应是恶心。
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药效学
该药物通过抑制宿主细胞感染所需的酶来阻止 HIV-1 和乙型肝炎病毒感染中病毒复制所需的 DNA 链延伸。体外作用 在淋巴母细胞系、原代单核细胞/巨噬细胞以及外周血淋巴细胞中研究了替诺福韦对实验室和临床分离的 HIV-1 病毒的抗病毒活性。替诺福韦对 HIV-1 病毒的 EC50（50% 有效浓度）值范围为 0.04 μM 至 8.5 μM。 替诺福韦酯与其他药物的联合用药 在替诺福韦与核苷类逆转录酶抑制剂（阿巴卡韦、地达诺辛、拉米夫定、司他夫定、扎西他滨、齐多夫定）、非核苷类逆转录酶抑制剂（地拉韦啶、依非韦伦、奈韦拉平）以及蛋白酶抑制剂（安普那韦、茚地那韦、奈非那韦、利托那韦、沙奎那韦）的联合用药研究中，观察到了相加和协同作用。替诺福韦在细胞培养中显示出对HIV-1的抗病毒活性。

C19H30N5O10P

519.4478

519.173

C, 43.93; H, 5.82; N, 13.48; O, 30.80; P, 5.96

201341-05-1

Tenofovir Disoproxil fumarate;202138-50-9; 201341-05-1 (free) ; 147127-20-6 (Tenofovir); 206184-49-8 (hydrate); 379270-37-8 (alafenamide); 1571075-19-8 (aspartate)

5481350

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

642.7±65.0 °C at 760 mmHg

113-115

342.5±34.3 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.578

2.04

195.25

1

14

17

35

698

1

P(C([H])([H])O[C@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])N1C([H])=NC2=C(N([H])[H])N=C([H])N=C12)(=O)(OC([H])([H])OC(=O)OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])OC([H])([H])OC(=O)OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H]

JFVZFKDSXNQEJW-CQSZACIVSA-N

InChI=1S/C19H30N5O10P/c1-12(2)33-18(25)28-9-31-35(27,32-10-29-19(26)34-13(3)4)11-30-14(5)6-24-8-23-15-16(20)21-7-22-17(15)24/h7-8,12-14H,6,9-11H2,1-5H3,(H2,20,21,22)/t14-/m1/s1

[[(2R)-1-(6-aminopurin-9-yl)propan-2-yl]oxymethyl-(propan-2-yloxycarbonyloxymethoxy)phosphoryl]oxymethyl propan-2-yl carbonate

GS 4331; GS-4331; GS4331; Bis(POC)PMPA; PMPA prodrug; 9-((R)-2-((Bis(((isopropoxycarbonyl)oxy)methoxy)phosphinyl)methoxy)propyl)adenine; (r)-bis(poc)pmpa; bis-POC-PMPA; tenofovir bis(isopropyloxycarbonyloxymethyl) ester; Viread.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 38 mg/mL (~73.16 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。