Evofosfamide (TH-302)   中文名称: 艾伏磷酰胺

Hypoxia-activated prodrug

Evofosfamide (TH-302) 诱导 γH2AX 和细胞凋亡。在 p53 充足和缺乏的细胞中，evofosfamide 均表现出相当的缺氧选择性、浓度依赖性细胞毒活性。 Evofosfamide (TH-302) 单独治疗会导致 G2/M 细胞积聚。在用 evofosfamide 处理的细胞中，PF47736 抑制 Chk1 可减少 evofosfamide (TH-302) 介导的常氧和缺氧条件下的 G2/M 期阻滞[1]。

Evofosfamide (TH-302) 是一种前药，可在实体瘤中常见的缺氧条件下选择性激活。在用 Evofosfamide (TH-302) 治疗的小鼠中，Hs766t 基因肿瘤中标准化 Ktrans 的平均值降低了 69.2%，Mia PaCa-2 基因肿瘤中降低了 46.1%，SU.86.86 基因肿瘤中降低了 46.1%。 4.9%。将 Hs766t 和 Mia PaCa-2 治疗组与对照组相比，两种变化均具有统计学意义（P<0.01）[2]。呼吸 95% 氧气后，缺氧分数 (HF) 显着下降至 2.1%±4.7% (P < 0.001)，而呼吸 7% 氧气后，缺氧分数 (HF) 显着增加至 29.5%±14.7% (P= 0.029）。增加的氧气暴露使 TH-302 无效，并将横纹肌肉瘤大鼠的 T4×SV 从 20.4 天缩短至 15.3 天（P=0.007），而对照动物的 T4×SV 更长。 TH-302治疗的肿瘤的T4×SV从30.8±5.9天（Evofosfamide（TH-302）+放疗）减少到25.7±2.9天（Evofosfamide（TH-302）+放疗+95％O2）。 [3]

在常氧 (21% O2) 或缺氧 (N2) 条件下，将浓度为 0.1 μM 的 Evofosfamide (TH-302) 和 PF477736 或 AZD7762 给予细胞 2 小时。在常氧条件下，在 Chk1 抑制剂存在下洗涤细胞后，再培养 22 小时。使用细胞周期试剂和番石榴流式细胞仪测定细胞在75%乙醇中固定后的细胞周期分布。在常氧 (21% O2) 或缺氧条件下，将 HT-29 细胞暴露于 Evofosfamide (TH-302)e（8 nM、40 nM、200 nM、1 μM 和 5 μM）和 0.1 μM AZD7762 2 小时。 N2）。洗涤后，细胞用 0.1 μM AZD7762 继续培养 46 小时。 Caspase 活性使用基于发光的测定法进行测量[1]。

[1]. Enhancement of hypoxia-activated prodrug TH-302 anti-tumor activity by Chk1 inhibition. BMC Cancer. 2015 May 21;15:422.

[2]. MR Imaging Biomarkers to Monitor Early Response to Hypoxia-Activated Prodrug TH-302 in Pancreatic Cancer Xenografts. PLoS One. 2016 May 26;11(5):e0155289.

[3]. TH-302 in Combination with Radiotherapy Enhances the Therapeutic Outcome and Is Associated with Pretreatment [18F]HX4 Hypoxia PET Imaging. Clin Cancer Res. 2015 Jul 1;21(13):2984-92.

TH-302 is a novel cancer therapeutic specifically activated under the low oxygen or "hypoxic" conditions typical of solid tumor cancer cells. TH-302 is a nitroimidazole-linked prodrug of a brominated derivative of an isophosphoramide mustard previously used in cancer drugs such as ifosfamide, cyclophosphamide, and glufosfamide. TH-302 has been shown, in preclinical studies, to be both efficacious and well tolerated.
Evofosfamide is a hypoxia-activated prodrug of the cytotoxin bromo-isophosphoramide mustard (Br-IPM) conjugated with 2-nitroimidazole, with potential antineoplastic activity. When exposed to hypoxic conditions, such as those found in hypoxic tumors, the 2-nitroimidazole moiety of evofosfamide is reduced. This releases the DNA-alkylating Br-IPM moiety, which introduces intra- and inter-strand DNA crosslinks in nearby cells; the crosslinks inhibit both DNA replication and cell division, and may lead to apoptosis of cells in the tumor. The inactive form of the prodrug is stable under normoxic conditions, which may limit systemic toxicity.

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Drug Indication
Investigated for use/treatment in solid tumors.

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Mechanism of Action
TH-302 combines a 2-nitroimidazole oxygen-sensing trigger with a masked DNA crosslinker. Upon activation in oxygen deficient zones, TH-302 is converted selectively to the drug's active form, dibromo isophosphoramide mustard, a potent alkylator. TH-302 targets levels of severe hypoxia that are found in tumors but are rare in normal tissues - this is how selective targeting of the tumor occurs. After conversion to the active form of the drug, the hypoxic cells are exposed to high concentrations of released cytotoxic agent, which can also diffuse into the adjacent regions of the tumor.

C9H16BR2N5O4P

449.036200523376

446.93

C, 24.07; H, 3.59; Br, 35.59; N, 15.60; O, 14.25; P, 6.90

918633-87-1

11984561

Solid powder

0.6

114

2

7

9

21

374

0

UGJWRPJDTDGERK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C9H16Br2N5O4P/c1-15-8(6-12-9(15)16(17)18)7-20-21(19,13-4-2-10)14-5-3-11/h6H,2-5,7H2,1H3,(H2,13,14,19)

2-bromo-N-[(2-bromoethylamino)-[(3-methyl-2-nitroimidazol-4-yl)methoxy]phosphoryl]ethanamine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% Propylene glycol , 5% Tween 80 , 65% D5W: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。