Thapsigargin

别名: thapsigargin; 67526-95-8; MFCD00083511; Z96BQ26RZD; CHEMBL96926; CHEBI:9516; (-)-Thapsigargin; (3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butanoyloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate; 毒胡萝卜素;毒胡萝卜素, 来源于毒胡萝;内质网应激诱导剂, 微粒体 Ca2+-ATPase 抑制剂;抑制不同类型的病毒 (HCoV-229E、MERS-CoV、COVID-19)的 复制。
目录号: V9143 纯度: = 99.53%
Thapsigargin 是一种新型、有效的肌浆/内质网 Ca2+ ATP 酶 (SERCA) 的非竞争性抑制剂,也是一种内质网 (ER) 应激诱导剂。
Thapsigargin CAS号: 67526-95-8
产品类别: ATPase
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
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纯度/质量控制文件

纯度: = 99.53%

产品描述
Thapsigargin 是一种新型、有效的非竞争性肌浆/内质网 Ca2+ ATP 酶 (SERCA) 抑制剂,也是一种内质网 (ER) 应激诱导剂。它是一种有效的、细胞渗透性的、不依赖于 IP3 的细胞内钙释放剂,其作用是阻断由血管抑制素和内皮抑素诱导的细胞内 Ca2+ 的短暂增加,并通过破坏细胞内游离 Ca2+ 水平来诱导细胞凋亡。
生物活性&实验参考方法
靶点
Ca2+-ATPase
体外研究 (In Vitro)
Thapsigargin(0.001-1 μM;持续 2 天和 4 天)以时间和剂量依赖性方式降低 MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞的细胞增殖 [2]。毒胡萝卜素(0.001-1 μM;持续 2 天和 4 天)。 Thapsigargin(0.001-1 μM;持续 2 天和 4 天)抑制 mTOR 活性并增加 MH7A 细胞中细胞周期蛋白 D1 的表达 [2]。毒胡萝卜素减少 Ca2+ 进入人中性粒细胞 [1]。在有 (IC50=0.353 nM) 或无 (IC50=0.448 nM) KCl 预刺激的情况下,毒胡萝卜素均可抑制卡巴胆碱诱发的 [Ca2+]i 瞬变,但在没有 KCl 预刺激的情况下则不然。 KCl 预刺激发现了额外的微量成分,导致低分级 (IC50=4814 nM)。相比之下,KCl 诱导的 [Ca2+]i 瞬时变化仅表现出一种成分,在缺乏两种成分平均值 (IC50=3343 nM) 且存在卡巴胆碱预刺激 (IC50 =6858) 的情况下,向毒胡萝卜素的转变非常低纳米)[3]。此外,毒胡萝卜素通过 Ca2+ 的 SOCE 流入磷酸化 p38 MAPK,从而抑制 TNF-α。
体内研究 (In Vivo)
Thapsigargin(注射;0.25 μg/g、0.5 μg/g 和 1 μg/g;24 小时)导致促炎趋化因子的表达增加 2 至 5 倍。毒胡萝卜素引发全身免疫反应的能力更为敏感[4]。
为了评估体内内质网应激,我们在小鼠腹膜间注射thapsigargin (TG) (0.5ug/g/体重)或TUN (1ug/g/体重)。在体内为TUN选择的剂量在其他人使用的剂量的中间范围内,并且根据先前研究的小鼠存活率评估,不会引起细胞毒性作用。不幸的是,在体内选择thapsigargin (TG) 剂量一直很困难,因为thapsigargin (TG) 在体内使用的文献很少。为了继续在小鼠模型中使用thapsigargin (TG) 来评估thapsigargin (TG) 在内质动脉应激诱导中的有效性,我们需要证明我们的TG剂量(0.5ug/g/体)不会影响小鼠的生存。事实上,我们发现使用thapsigargin (TG) 0.5ug/g/体重的剂量是安全的,并且不会对这些小鼠的生存产生任何不良影响(补充图2)。然后,我们通过评估关键ER应激和UPR标记物的表达,检查了TG或TUN处理小鼠肝脏和脂肪组织中ER应激的诱导。[4]
酶活实验
Thapsigargin是微粒体Ca(2+)-ATP酶的抑制剂,是诱导储存调节的Ca2+内流的重要工具。在本文中,我们发现,在高于500 nM的浓度下,thapsigargin也具有相反的作用:它抑制储存调节的Ca2+流入负载Fura-2的人类中性粒细胞。由于thapsigargin经常以高达2微米的浓度使用,因此其对质膜Ca2+通量的抑制作用值得考虑。[1]
[Ca2+]的测量,除非另有说明,否则将106个Fura-2负载的细胞悬浮在3ml Ca2+培养基中。在Deltascan双波长荧光光谱仪中记录荧光的变化,使用340nm和380nm作为激发波长,使用505nm作为发射波长。在37°C下连续搅拌进行测量。[Ca2+],通过[18]中详述的方法,从340和380 nm激发的荧光比率计算得出。Mn2+内流的测量该测量在与[Ca2+1]相同的条件下进行,不同之处在于激发波长为360nm,在该波长下Fura-2的荧光独立于[Ca2+]。通过添加100μM的MnCl2来引发Mn2+内流。
细胞实验
细胞增殖测定 [2]
细胞类型: MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞
测试浓度: 0.001、0.1 和 1 μM
孵育持续时间: 2 和 4 天
实验结果: 防止细胞增殖。时间和剂量依赖性方式。

细胞凋亡分析[2]
细胞类型: MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞
测试浓度: 0.001、0.1 和 1 μM
孵育时间:2天和4天
实验结果:以时间和剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型: MH7A 人类类风湿关节炎滑膜细胞
测试浓度: 0.001、0.1 和 1 μM
孵育持续时间:2天和4天
实验结果:mTOR活性受损并导致细胞周期蛋白D1表达
动物实验
动物/疾病模型:雄性 balb/c (Bagg ALBino) 小鼠 (20-25 g) [4]
剂量: 0.25 μg/g、0.5 μg/g 和 1 μg/g
给药途径: 注射;24 小时
实验结果:趋化因子和促炎因子表达增加 2 至 5 倍。
体内内质网应激的诱导[4]
雄性 Balb/c 小鼠的饲养和护理均符合《实验动物饲养和使用指南》。衣霉素和毒胡萝卜素 (TG) 购自 Sigma 公司,溶于二甲基亚砜 (DMSO),并用无菌 150 mM 葡萄糖溶液稀释至 10 μg/μl 的浓度。雄性Balb/c小鼠(20-25g)按先前所述方法腹腔注射衣霉素溶液(1μg/g体重)。毒胡萝卜素溶液采用剂量反应法进行实验(0.25μg/g、0.5μg/g和1μg/g体重)。对照组小鼠腹腔注射对照缓冲液(含1% DMSO的150mM葡萄糖溶液)。脂肪组织和肝脏组织于处理后24小时采集,而用于油红O染色的肝脏组织则于内质网应激诱导剂处理后5天采集。
参考文献

[1]. Thapsigargin inhibits Ca2+ entry into human neutrophil granulocytes. Biochem J. 1995 Jan 15;305 ( Pt 2):525-8.

[2]. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.

[3]. Differential thapsigargin-sensitivities and interaction of Ca2+ stores in human SH-SY5Y neuroblastoma cells. Brain Res. 2004 Jun 18;1011(2):177-86.

[4]. Modeling Acute ER Stress in Vivo and in Vitro. Shock. 2017 Apr;47(4):506-513.

[5]. Inhibiting coronavirus replication in cultured cells by chemical ER stress. bioRxiv 2020.08.26.266304;.

[6]. Store-operated calcium entry (SOCE) contributes to phosphorylation of p38 MAPK and suppression of TNF-α signalling in the intestinal epithelial cells. Cell Signal. 2019 Nov;63:109358.

其他信息
毒胡萝卜素是一种有机杂三环化合物,属于六氧取代的6,7-愈创木内酯,分离自伞形科植物Thapsia garganica L.的根部。它是一种强效皮肤刺激剂,在传统医学中用作抗刺激剂。毒胡萝卜素抑制Ca²⁺转运ATP酶介导的钙离子进入肌浆网,因此常用于研究胞质钙浓度升高的影响。它是一种EC 3.6.3.8(Ca²⁺转运ATP酶)抑制剂和钙通道阻滞剂。它是一种倍半萜内酯、有机杂三环化合物和丁酸酯。
据报道,在 Thapsia gymnesica、Thapsia garganica 和 Thapsia villosa 中均发现了 Thapsigargin,并有相关数据。
一种存在于 Thapsia 属植物根部的倍半萜内酯。它能抑制肌浆网钙转运 ATP 酶。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C34H50O12
分子量
650.75
精确质量
650.33
元素分析
C, 62.75; H, 7.74; O, 29.50
CAS号
67526-95-8
PubChem CID
446378
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
沸点
699.6±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
209.0±25.0 °C
蒸汽压
0.0±5.0 mmHg at 25°C
折射率
1.540
LogP
6.61
tPSA
171.96
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
12
可旋转键数目(RBC)
17
重原子数目
46
分子复杂度/Complexity
1270
定义原子立体中心数目
8
SMILES
C(C(=O)O[C@H]1[C@]2([H])[C@@](OC(C)=O)(C[C@@H]([C@@]3([C@](C)(O)C(=O)O[C@]3(C2=C(C)[C@@H]1OC(=O)/C(/C)=C\C)[H])O)OC(CCC)=O)C)CCCCCC
InChi Key
IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N
InChi Code
InChI=1S/C34H50O12/c1-9-12-13-14-15-17-24(37)43-28-26-25(20(5)27(28)44-30(38)19(4)11-3)29-34(41,33(8,40)31(39)45-29)22(42-23(36)16-10-2)18-32(26,7)46-21(6)35/h11,22,26-29,40-41H,9-10,12-18H2,1-8H3/b19-11-/t22-,26+,27-,28-,29-,32-,33+,34+/m0/s1
化学名
(3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butyryloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate
别名
thapsigargin; 67526-95-8; MFCD00083511; Z96BQ26RZD; CHEMBL96926; CHEBI:9516; (-)-Thapsigargin; (3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butanoyloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~76.83 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (7.68 mM) in 10% DMSO + 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.5367 mL 7.6834 mL 15.3669 mL
5 mM 0.3073 mL 1.5367 mL 3.0734 mL
10 mM 0.1537 mL 0.7683 mL 1.5367 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT01056029 COMPLETED Drug: G-202 Advanced Solid Tumors GenSpera, Inc. 2010-01 Phase 1
生物数据图片
  • Thapsigargin inhibits MH7A cell proliferation. Histograms showed that the cell proliferation is impaired after thapsigargin treatment (0.001, 0.1, and 1 μM) in MH7A cells, by (SRB) colorimetric assay. Results are averages of three independent experiments.[2]. Wang H, et al. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.
  • Thapsigargin induces cell apoptosis in MH7A cells. Hoechst stainings (a) and histograms (b) showing the increased cell death (%) after thapsigargin treatment in MH7A cells. Results are averages of three independent experiments. Data represent mean ± SEM. *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001, and N.S.: not statistically significant.[2]. Wang H, et al. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.
  • Thapsigargin inhibits cyclin D1 expression in MH7A cells. ((a)-(b)) Western blots and histograms showing that the cyclin D1 protein levels decreased in MH7A cells by thapsigargin treatment. Results are averages of three independent experiments. Data represent mean ± SEM. **P < 0.01 and ***P < 0.001. (c) Real-time PCR results showing that the cyclin D1 mRNA levels decreased in MH7A cells by thapsigargin treatment. Results are averages of three independent experiments. Data represent mean ± SEM. **P < 0.01 and ***P < 0.001.[2]. Wang H, et al. Effects of thapsigargin on the proliferation and survival of human rheumatoid arthritis synovialcells. ScientificWorldJournal. 2014 Feb 9;2014:605416.
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