| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ca2+-ATPase
Thapsigargin selectively inhibits microsomal sarco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA). [1] Thapsigargin is an inhibitor of the ER calcium-ATPase. [2] Thapsigargin triggers ER stress by inhibiting the sarco/endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA) activity, leading to depletion of calcium storage from the ER. [4] Thapsigargin is an inhibitor of the sarco/endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA). [5] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
毒胡萝卜素（0.001-1 μM；处理2天和4天）以时间和剂量依赖的方式降低MH7A人类风湿性关节炎滑膜细胞的增殖[2]。毒胡萝卜素（0.001-1 μM；处理2天和4天）抑制mTOR活性并增加MH7A细胞中细胞周期蛋白D1的表达[2]。毒胡萝卜素减少Ca2+进入人中性粒细胞[1]。毒胡萝卜素抑制卡巴胆碱诱导的[Ca2+]i瞬变，无论是否预先用KCl刺激（IC50=0.353 nM；IC50=0.448 nM），但单独使用KCl刺激则无此作用。 KCl预刺激后发现了一个额外的次要成分，导致分离度较低（IC50=4814 nM）。相反，KCl诱导的[Ca2+]i瞬时变化仅表现出一个成分，在缺乏两个成分的平均值（IC50=3343 nM）和存在卡巴胆碱预刺激（IC50=6858 nM）的情况下，向毒胡萝卜素的偏移非常低[3]。此外，毒胡萝卜素通过SOCE介导的Ca2+内流磷酸化p38 MAPK来抑制TNF-α。
浓度高于500 nM时，毒胡萝卜素抑制Fura-2负载的人中性粒细胞的储存调节Ca2+内流。浓度为 2 µM 的毒胡萝卜素显著降低了先前已耗竭 Ca2+ 的细胞中的 Ca2+ 信号，加入 CaCl2 后细胞内 Ca2+ 浓度 ([Ca2+]i) 仅达到 200 nM，并且几乎完全阻断了 Mn2+ 的猝灭。[1] 毒胡萝卜素（0.001、0.1 和 1 µM）以时间和剂量依赖的方式抑制人类风湿性关节炎滑膜细胞 (MH7A) 的增殖。在 1 µM 浓度下处理 4 天后，细胞死亡率达到 44.6%。它降低了细胞周期蛋白 D1 的蛋白水平（在 1 µM 浓度下处理 4 天后降至对照组的 16.5%）和 mRNA 水平，并降低了 mTORC1 下游指标 pS6K 和 p4EBP-1 的蛋白水平。 [2] 在HepG2细胞中，100 nM的毒胡萝卜素(Thapsigargin)可诱导内质网应激，表现为BiP和CHOP基因表达上调，并通过ATF-6穿梭实验得到证实。100 nM的毒胡萝卜素可有效诱导内质网应激，且对细胞活力的不良影响有限。较低浓度（25 nM、50 nM）诱导内质网应激的效果则不太稳定。[4] 在分化的3T3-L1脂肪细胞中，低于100 nM的毒胡萝卜素剂量也能有效激活内质网应激（例如，上调BiP、CHOP、DNAjb9、PDAI3），但其作用程度不及衣霉素。然而，100 nM的毒胡萝卜素似乎对脂肪细胞具有毒性。 [4] Thapsigargin (1 µM) 能有效抑制不同细胞类型（HuH7、MRC-5、Vero E6）中冠状病毒（HCoV-229E、MERS-CoV、SARS-CoV-2）的复制。在 HuH7 细胞中，1 µM thapsigargin 可使 HCoV-229E 的病毒滴度降低 150 倍以上（从 9.18×10⁶ pfu/ml 降至 5.7×10⁴ pfu/ml）。Thapsigargin 在 HuH7 细胞中对 MERS-CoV 的 EC50 为 4.8 nM，在 Vero E6 细胞中对 SARS-CoV-2 的 EC50 为 260 nM。Thapsigargin 可恢复病毒诱导的翻译抑制，拮抗 CoV 介导的 IRE1α 和 BiP 的下调，并诱导 HERPUD1 和 CTH 的表达。[5] |
| 体内研究 (In Vivo) |
注射毒胡萝卜素（0.25 μg/g、0.5 μg/g 和 1 μg/g；24 小时）可使促炎趋化因子的表达增加 2 至 5 倍。毒胡萝卜素诱导全身免疫反应的能力更为敏感 [4]。
为了评估体内内质网应激，我们对小鼠进行了腹腔注射毒胡萝卜素 (TG)（0.5 μg/g 体重）或 TUN（1 μg/g 体重）。TUN 的体内剂量选择处于其他研究使用的剂量范围的中间值，并且根据既往研究的小鼠存活率评估，该剂量不会引起细胞毒性作用。遗憾的是，由于体内毒胡萝卜素 (TG) 的应用文献较少，因此选择合适的体内剂量一直很困难。为了在小鼠模型中使用毒胡萝卜素 (TG) 来评估其诱导内质网应激的有效性，我们需要证明我们所用的 TG 剂量 (0.5 μg/g/体重) 不会影响小鼠的存活率。事实上，我们发现使用 0.5 μg/g/体重的毒胡萝卜素 (TG) 是安全的，并且不会对这些小鼠的存活率产生任何不良影响（补充图 2）。随后，我们通过评估关键内质网应激和未折叠蛋白反应（UPR）标志物的表达，检测了经TG或TUN处理的小鼠肝脏和脂肪组织中内质网应激的诱导情况。[4] 在腹腔注射毒胡萝卜素（0.5 µg/g体重）的雄性Balb/c小鼠中，脂肪组织中内质网应激标志物ATF6和eIF2α的表达显著升高，但肝脏中大多数内质网应激和UPR蛋白的表达未见升高，也未诱发肝脂肪变性。[4] |
| 酶活实验 |
硫代磷酸钙（Thapsigargin）是一种微粒体Ca²⁺-ATPase抑制剂，是诱导胞内钙库调节Ca²⁺内流的重要工具。本文研究表明，当浓度高于500 nM时，硫代磷酸钙还具有相反的作用：它抑制了Fura-2标记的人中性粒细胞的胞内钙库调节Ca²⁺内流。由于硫代磷酸钙的应用浓度通常高达2 μM，因此其对质膜Ca²⁺通量的抑制作用值得关注。[1]
[Ca²⁺]的测定：除非另有说明，将10⁶个Fura-2标记的细胞悬浮于3 ml含Ca²⁺的培养基中。使用Deltascan双波长荧光分光光度计记录荧光变化，激发波长为340 nm和380 nm，发射波长为505 nm。测量在37℃下进行，并持续搅拌。 [Ca2+] 是通过在 340 nm 和 380 nm 激发波长下荧光强度的比值计算得出的，具体方法详见文献 [18]。Mn2+ 内流的测定：该测定在与 [Ca2+] 测定相同的条件下进行，只是激发波长改为 360 nm，在该波长下 Fura-2 的荧光强度与 [Ca2+] 无关。Mn2+ 内流通过加入 100 μM MnCl2 来启动。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验[2]
细胞类型： MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞 测试浓度： 0.001、0.1 和 1 μM 孵育时间： 2 天和 4 天 实验结果： 以时间和剂量依赖的方式抑制细胞增殖。 细胞凋亡分析[2] 细胞类型： MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞 测试浓度： 0.001、0.1 和 1 μM 孵育时间： 2 天和 4 天 实验结果： 以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡。 蛋白质印迹分析[2] 细胞类型：MH7A 人类风湿性关节炎滑膜细胞 测试浓度：0.001、0.1 和 1 μM 孵育时间：2 和 4 天 实验结果：mTOR 活性受损，导致细胞周期蛋白 D1 表达 Ca2+ 测量中，将人中性粒细胞用 Fura-2/AM (4 µM) 在 37°C 下孵育 30 分钟。使用 340 nm 和 380 nm 激发波长以及 505 nm 发射波长记录荧光变化。[Ca2+]i 由荧光比值计算得出。Mn2+ 内流测量中，激发波长为 360 nm，通过添加 100 µM MnCl2 启动。 [1] 采用磺基罗丹明B (SRB) 比色法测定细胞增殖。细胞用三氯乙酸固定，SRB染色，结合的染料用Tris碱溶解，在490 nm处测定吸光度值。[2] 采用Hoechst染色法评估细胞凋亡。细胞直接用Hoechst试剂盒染色，并使用ImageJ软件进行细胞计数。[2] 对细胞裂解液进行Western blot分析。蛋白质经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用脱脂奶粉封闭，与一抗孵育过夜，然后与HRP标记的二抗孵育。采用增强化学发光法检测蛋白质。 [2] 为了在体外诱导内质网应激，将HepG2和3T3-L1细胞用不同浓度的毒胡萝卜素（HepG2细胞为25-200 nM；3T3-L1细胞为25-100 nM）处理24小时。然后收集细胞进行RNA提取或蛋白质裂解。进行cleaved-ATF6的免疫荧光染色以确认内质网应激。进行细胞活力测定（ATP定量）以评估细胞毒性。[4] 为了评估蛋白质从头合成，在收集细胞前，将细胞与嘌呤霉素（3 µM）孵育30分钟。使用抗嘌呤霉素抗体通过免疫印迹分析总细胞提取物，并以考马斯亮蓝（CBB）染色作为上样对照。 [5] 对HCoV-229E感染细胞进行免疫荧光分析，使用针对双链RNA和非结构蛋白8 (nsp8)的抗体。[5] 通过在融合细胞单层上进行噬斑试验测定上清液中的病毒滴度。将细胞与病毒进行系列稀释后孵育，覆盖含有微晶纤维素(Avicel)的培养基，用多聚甲醛(PFA)固定，并用结晶紫染色以计数噬斑。[5] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性 balb/c (Bagg ALBino) 小鼠 (20-25 g) [4]
剂量： 0.25 μg/g、0.5 μg/g 和 1 μg/g 给药途径： 注射；24 小时 实验结果：趋化因子和促炎因子表达增加 2 至 5 倍。 体内内质网应激的诱导[4] 雄性 Balb/c 小鼠的饲养和护理均符合《实验动物饲养和使用指南》。衣霉素和毒胡萝卜素 (TG) 购自 Sigma 公司，溶于二甲基亚砜 (DMSO)，并用无菌 150 mM 葡萄糖溶液稀释至 10 μg/μl 的浓度。雄性Balb/c小鼠（20-25g）按先前所述方法腹腔注射衣霉素溶液（1μg/g体重）。毒胡萝卜素溶液采用剂量反应法进行实验（0.25μg/g、0.5μg/g和1μg/g体重）。对照组小鼠腹腔注射对照缓冲液（含1% DMSO的150mM葡萄糖溶液）。脂肪组织和肝脏组织在处理后24小时采集，而用于油红O染色的肝脏组织在内质网应激诱导剂处理后5天采集。毒胡萝卜素溶于二甲基亚砜（DMSO）中，并用无菌150mM葡萄糖溶液稀释至10μg/μl的浓度。雄性Balb/c小鼠（20-25克）腹腔注射毒胡萝卜素溶液（0.25、0.5或1微克/克体重）。对照组小鼠腹腔注射对照缓冲液（含1% DMSO的150 mM葡萄糖溶液）。处理24小时后采集脂肪组织和肝脏组织，用于免疫印迹和其他分析。处理5天后采集肝脏组织进行油红O染色。[4] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在HuH7细胞中，Thapsigargin孵育24小时后的CC50值为10.7 µM。Thapsigargin与HCoV-229E感染联合使用并未引起额外的细胞毒性（CC50值为9.7 µM）。在1 µM的Thapsigargin浓度下（该浓度可抑制病毒蛋白的翻译和复制），感染细胞的存活率为76.6 ± 7.9%。[5] 在Vero E6细胞中，Thapsigargin的CC50值为17.22 µM，对SARS-CoV-2和MERS-CoV的选择性指数（SI，CC50/EC50）分别为66.2和2229.2。[5]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
毒胡萝卜素（Thapsigargin）是一种有机杂环三环化合物，属于六氧取代的6,7-愈创木酚类化合物，分离自伞形科植物Thapsia garganica L.的根部。它是一种强效皮肤刺激剂，在传统医学中用作抗刺激剂。毒胡萝卜素抑制Ca²⁺-转移ATP酶介导的钙离子进入肌浆网，因此常用于研究细胞质钙浓度升高的影响。它是一种EC 3.6.3.8（Ca²⁺-转移ATP酶）抑制剂和钙通道阻滞剂。它是一种倍半萜内酯、有机杂环三环化合物和丁酸酯。据报道，Thapsigargin存在于Thapsia gymnesica、Thapsia garganica和Thapsia villosa中，并有相关数据可供参考。毒胡萝卜素是一种倍半萜内酯，存在于毒胡萝卜属植物的根部。它能抑制肌浆网钙转运ATP酶。毒胡萝卜素是一种促肿瘤剂，已被证实能选择性抑制微粒体Ca2+-ATP酶。它是诱导储存调节性Ca2+内流（容积性Ca2+内流）的重要工具。其有效浓度极低，在50 nM左右即可达到最大效应。然而，它经常被使用高达2 µM的浓度，因此其在高浓度下对质膜Ca2+通量的抑制作用值得关注。[1] 毒胡萝卜素通过耗竭内质网Ca2+池诱导内质网应激，进而导致未折叠蛋白反应（UPR）。它是一种特性明确的内质网应激诱导剂，其作用机制是通过抑制SERCA泵。[4] 毒胡萝卜素（thapsigargin）的蛋白酶可裂解前药mipsagargin已在前列腺癌的I期和II期临床试验中进行了评估。[5]
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| 分子式 |
C34H50O12
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|---|---|
| 分子量 |
650.75
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| 精确质量 |
650.33
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| 元素分析 |
C, 62.75; H, 7.74; O, 29.50
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| CAS号 |
67526-95-8
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| PubChem CID |
446378
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
699.6±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
209.0±25.0 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±5.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.540
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| LogP |
6.61
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| tPSA |
171.96
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
12
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| 可旋转键数目(RBC) |
17
|
| 重原子数目 |
46
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| 分子复杂度/Complexity |
1270
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| 定义原子立体中心数目 |
8
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| SMILES |
C(C(=O)O[C@H]1[C@]2([H])[C@@](OC(C)=O)(C[C@@H]([C@@]3([C@](C)(O)C(=O)O[C@]3(C2=C(C)[C@@H]1OC(=O)/C(/C)=C\C)[H])O)OC(CCC)=O)C)CCCCCC
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| InChi Key |
IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C34H50O12/c1-9-12-13-14-15-17-24(37)43-28-26-25(20(5)27(28)44-30(38)19(4)11-3)29-34(41,33(8,40)31(39)45-29)22(42-23(36)16-10-2)18-32(26,7)46-21(6)35/h11,22,26-29,40-41H,9-10,12-18H2,1-8H3/b19-11-/t22-,26+,27-,28-,29-,32-,33+,34+/m0/s1
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| 化学名 |
(3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butyryloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate
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| 别名 |
thapsigargin; 67526-95-8; MFCD00083511; Z96BQ26RZD; CHEMBL96926; CHEBI:9516; (-)-Thapsigargin; (3S,3aR,4S,6S,6aR,7S,8S,9bS)-6-(acetyloxy)-4-(butanoyloxy)-3,3a-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-8-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}-2-oxo-2,3,3a,4,5,6,6a,7,8,9b-decahydroazuleno[4,5-b]furan-7-yl octanoate;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~76.83 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (7.68 mM) in 10% DMSO + 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5367 mL | 7.6834 mL | 15.3669 mL | |
| 5 mM | 0.3073 mL | 1.5367 mL | 3.0734 mL | |
| 10 mM | 0.1537 mL | 0.7683 mL | 1.5367 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01056029 | COMPLETED | Drug: G-202 | Advanced Solid Tumors | GenSpera, Inc. | 2010-01 | Phase 1 |
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