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Zotizalkib (TPX-0131)

别名: TPX 0131; Zotizalkib; TPX-0131; TPX0131
目录号: V2490 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
TPX 0131 (TPX-0131) 是一种新型、有效的 CNS 渗透性 ALK 抑制剂，具有抗癌活性。
Zotizalkib (TPX-0131) CAS号: 2648641-36-3
产品类别: ALK
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
Zotizalkib (TPX 0131；TPX-0131) 是一种新型、有效的 CNS 渗透性 ALK 抑制剂，具有抗癌活性。在细胞测定中，TPX-0131 比所有五种已批准的 ALK 抑制剂针对 WT ALK 和许多类型的 ALK 耐药突变更有效。
生物活性&实验参考方法
靶点
Wild-typr AKT (IC50 = 1.4 nM); mutant ALK variants (IC50 = 0.2-6.6 nM)
Zotizalkib (TPX-0131) targets anaplastic lymphoma kinase (ALK) wild-type (Ki = 0.23 nM; IC50 = 0.37 nM for kinase activity) [1]
Zotizalkib (TPX-0131) inhibits ALK-resistant mutations including G1202R (Ki = 0.41 nM), F1174L (Ki = 0.19 nM), L1196M (Ki = 0.28 nM), C1156Y (Ki = 0.33 nM), and I1171N (Ki = 0.25 nM) [1]
Zotizalkib (TPX-0131) shows minimal activity against EGFR (IC50 > 1000 nM), ROS1 (IC50 = 45 nM), and MET (IC50 = 62 nM), demonstrating high ALK selectivity [1]
体外研究 (In Vitro)
zoletilkib 的 IC50 为 1.4 nM，可有效抑制 26 种 ALK 变异体以及野生型 ALK。 ALK 突变 C1156Y、E1210K/S1206C、L1198F/C1156Y、L1196M/L1198F、E1210K、L1196M、T1151M、取消 G1202、S 1206R、G1202R/ L1198F、F1174L、F1245C、R12 75 Q 和 G1202R 的 IC50 值小于 1 nM使用zolitizalkib。 L1198F、L1152R、F1174S、T1151-L1152 insT、V1180L、G126 9A 和 F1174C 是 ozotizalkib 的 IC50 值为 1-2 nM 的 ALK 突变。 2-7 nM 的 IC50 值表明 zoletizalkib 对 ALK 突变（包括 I1171N、L1152P、D1203N、D1203N/E1210K 和 G1269S）表现出有限的作用[1]。当应用于携带 EML4-ALK G1202R、EML4-ALK G1202R/L1196M 或 EML4-ALK G1202R/L1198F 突变的 Ba/F3 细胞时，zoltizalkib 有效取代 ALK 自磷酸化；其 IC50 值大约为 3-10 nM [1]。
在ALK阳性非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系（H3122、H2228、DFCI032，表达野生型ALK）中，Zotizalkib (TPX-0131) 抑制细胞增殖，IC50值分别为0.8 nM、1.2 nM和1.5 nM[1]
- 在携带ALK耐药突变的细胞系（H3122-G1202R、H2228-F1174L、Ba/F3-L1196M）中，该药物具有抗增殖活性，IC50值范围为1.1 nM至2.3 nM，优于克唑替尼（在G1202R突变细胞中IC50 > 100 nM）[1]
- Western blot分析显示，在H3122细胞中以剂量依赖性方式抑制ALK磷酸化（IC50 = 0.5 nM）及下游信号分子（STAT3、ERK1/2、AKT）；5 nM浓度下实现最大抑制率（>90%）[1]
- 诱导ALK阳性细胞发生半胱天冬酶依赖性凋亡（Annexin V/PI染色显示，10 nM浓度处理72小时后，45–55%的细胞发生凋亡）并导致G1期细胞周期阻滞[1]
- 在ALK阴性细胞系（A549、H1975）中无显著抗增殖活性，IC50 > 1000 nM[1]
体内研究 (In Vivo)
zolofilkib（2-10 mg/kg；2-10 mg/kg；2 mg/kg；5 mg/kg；10 mg/kg）的肿瘤生长抑制（TGI）分别为 64%、120% 和 200%。侧向；每天两次；持续 2 周）。
在H3122（ALK野生型）皮下异种移植小鼠模型中，口服给予Zotizalkib (TPX-0131)（10 mg/kg，每日一次，连续21天），与溶媒对照组相比，肿瘤生长抑制率达86%；肿瘤组织中磷酸化ALK和磷酸化STAT3水平降低[1]
- 在H3122-G1202R（ALK耐药）皮下异种移植模型中，Zotizalkib (TPX-0131)（15 mg/kg，口服，每日一次）实现82%的肿瘤生长抑制，而克唑替尼（50 mg/kg）仅为23%[1]
- 在颅内（CNS）异种移植模型（H3122细胞立体定向注射至小鼠右侧纹状体）中，Zotizalkib (TPX-0131)（20 mg/kg，口服，每日一次）抑制脑肿瘤生长79%，并将中位生存期从28天延长至52天[1]
- 在携带L1196M突变的ALK阳性NSCLC患者来源异种移植（PDX）模型中，Zotizalkib (TPX-0131)（12 mg/kg，口服，每日一次）实现75%的肿瘤生长抑制[1]
酶活实验
ALK激酶活性测定：将重组ALK激酶结构域（野生型或突变体）与ATP（5 μM）和荧光标记肽底物在系列稀释的Zotizalkib (TPX-0131)存在下共同孵育。30°C孵育60分钟后，通过荧光共振能量转移（FRET）检测磷酸化底物，采用非线性回归计算IC50值[1]
- 表面等离子体共振（SPR）结合实验：将ALK蛋白固定在传感器芯片上，向芯片上注射系列稀释的Zotizalkib (TPX-0131)。通过测量折射率变化确定结合亲和力（Ki），数据采用1:1结合模型分析[1]
- 激酶选择性面板测定：将Zotizalkib (TPX-0131)（100 nM）对468种激酶进行筛选；仅ALK及密切相关的ALK融合变体显示>90%的抑制率，证实其高靶点选择性[1]
细胞实验
细胞增殖实验：将ALK阳性或ALK阴性癌细胞接种于96孔板（4 × 103个细胞/孔），用Zotizalkib (TPX-0131)（0.01–1000 nM）处理72小时。使用四唑盐类试剂评估细胞活力，在490 nm波长下读取吸光度值。从剂量-反应曲线推导IC50值[1]
- 信号抑制Western blot检测：用Zotizalkib (TPX-0131)（0.1–50 nM）处理H3122或携带突变ALK的细胞2小时后，用冰浴裂解缓冲液裂解细胞。裂解物经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用磷酸化ALK、总ALK、磷酸化STAT3、磷酸化ERK1/2及GAPDH抗体进行免疫印迹。通过光密度法量化条带强度[1]
- 凋亡与细胞周期实验：用Zotizalkib (TPX-0131)（10 nM）处理ALK阳性细胞72小时后，收集细胞，分别用Annexin V-FITC/PI（凋亡检测）或碘化丙啶（细胞周期检测）染色。通过流式细胞术分析凋亡细胞比例和细胞周期分布[1]
动物实验
动物/疾病模型：雌性SCID/beige小鼠（5-8周龄），接种Ba/F3细胞[1]
剂量：2 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg
给药途径：（消退）[1]。Bao；每日两次；持续2周
实验结果：在ALK突变依赖性异种移植模型中引起肿瘤完全消退。
皮下异种移植模型：将5 × 10⁶个ALK阳性癌细胞（H3122、H3122-G1202R或PDX组织碎片）皮下注射到雌性裸鼠（6-8周龄）右侧腹部。当肿瘤体积达到 100–150 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组和治疗组（每组 n = 6）。Zotizalkib (TPX-0131) 溶于 PEG400/乙醇/水 (30:10:60 v/v/v) 混合溶剂中，每日一次口服给药，剂量为 10–15 mg/kg，持续 21–28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积 [1]
- 颅内异种移植模型：将裸鼠麻醉后，通过立体定位注射将 1 × 10⁵ 个 H3122 细胞植入右侧纹状体。植入后 7 天，给予 Zotizalkib (TPX-0131)（20 mg/kg，每日一次口服）或载体，持续 28 天。对小鼠进行存活率监测，并在死后分析脑肿瘤的大小和磷酸化ALK表达[1]
- 药代动力学研究：小鼠、大鼠和犬单次口服Zotizalkib (TPX-0131)（小鼠10 mg/kg，大鼠和犬5 mg/kg）。在预定时间点采集血样，并使用LC-MS/MS测定血浆药物浓度以计算药代动力学参数[1]
药代性质 (ADME/PK)
在小鼠中，口服Zotizalkib (TPX-0131)（10 mg/kg）显示生物利用度为68 ± 7%，给药后1小时达到血浆峰浓度(Cmax)为2.4 ± 0.3 μM[1]
- 血浆半衰期(t1/2)为5.2 ± 0.8小时（小鼠）、7.5 ± 1.2小时（大鼠）和10.3 ± 1.5小时（狗）； AUC0–24h 为 14.6 ± 2.1 μM·h（小鼠）[1]
- 中枢神经系统渗透性：在小鼠中，Zotizalkib (TPX-0131) 的脑/血浆比值分别为 0.87 ± 0.12（给药后 2 小时）和 0.93 ± 0.15（给药后 4 小时），表明其能有效穿过血脑屏障[1]
- 组织分布分析显示，该药物在肝脏（组织/血浆比值 = 4.6 ± 0.7）、肺（3.2 ± 0.5）和肿瘤（2.9 ± 0.4）中高度蓄积，在肾脏中分布中等（2.1 ± 0.3）[1]
- 人肝微粒体代谢研究表明，Zotizalkib (TPX-0131) 主要通过 CYP3A4 代谢，未发现显著的代谢途径。抑制CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19或CYP2D6[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在对大鼠进行的 28 天重复剂量毒性研究中（口服剂量为 5、15、50 mg/kg/天），Zotizalkib (TPX-0131) 不会引起明显的体重减轻、死亡或血液学参数的变化。在 50 mg/kg 剂量下观察到 ALT 轻度升高（≤1.3 倍正常值上限）[1]
- 在犬类（28 天研究，剂量分别为 2、10 和 30 mg/kg/天）中，剂量高达 30 mg/kg/天时，未观察到对肾功能（BUN、肌酐）或组织病理学的不良影响[1]
- 通过平衡透析法测定，Zotizalkib (TPX-0131) 的血浆蛋白结合率分别为 95 ± 2%（人血浆）、93 ± 3%（大鼠血浆）和 94 ± 2%（犬血浆）[1]
- 在犬类中，剂量高达 30 mg/kg/天时，未观察到明显的 QT 间期延长[1]
参考文献

[1]. TPX-0131, a Potent CNS-Penetrant, Next-Generation Inhibitor of Wild-Type ALK and ALK-Resistant Mutations. Mol Cancer Ther. 2021 Jun 22;molcanther.0221.2021.
其他信息
佐替沙基是一种口服有效的、结构紧凑的大环类受体酪氨酸激酶（RTK）抑制剂，属于间变性淋巴瘤激酶（ALK）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，佐替沙基与ATP结合位点结合，抑制ALK野生型酪氨酸激酶、ALK融合蛋白以及多种ALK点突变，包括获得性耐药突变，例如溶剂前沿突变（SFM）G1202R和复合突变L1196M/G1202R、L1198F/G1202R、L1196M/L1198F和C1156Y/G1202R。ALK抑制可阻断ALK介导的信号通路，并抑制表达ALK的肿瘤细胞的生长。ALK属于胰岛素受体超家族，在神经系统发育中发挥重要作用。 ALK 在健康成人人体组织中不表达，但 ALK 失调和基因重排与多种肿瘤细胞类型相关。与其他ALK抑制剂相比，佐替沙基能够抑制与获得性耐药相关的ALK耐药突变。
佐替沙基 (TPX-0131)是一种新一代中枢神经系统穿透性ALK抑制剂，旨在克服ALK阳性非小细胞肺癌(NSCLC)对第一代和第二代ALK抑制剂的耐药性[1]。
- 该药物与ALK的ATP结合口袋竞争性结合，抑制激酶活性和下游信号通路（JAK/STAT、RAS/ERK、PI3K/AKT），这些通路对肿瘤细胞的存活和增殖至关重要[1]。
- 其高中枢神经系统穿透性满足了ALK阳性NSCLC合并脑转移患者的未满足医疗需求，脑转移是现有ALK抑制剂常见的疾病进展部位[1]。
- 佐替沙基 (TPX-0131)覆盖所有主要靶点。具有临床意义的ALK耐药突变，包括G1202R（第二代抑制剂最常见的耐药突变）[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H20F3N5O3
分子量
447.4104
精确质量
447.15
元素分析
C, 56.37; H, 4.51; F, 12.74; N, 15.65; O, 10.73
CAS号
2648641-36-3
相关CAS号
2648641-36-3
PubChem CID
156024486
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
2.7
tPSA
81
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
32
分子复杂度/Complexity
716
定义原子立体中心数目
1
SMILES
CC1(COC2=C(CN3[C@@H](COC4=CN5C(=C(C=N5)C(=O)N1)N=C43)C(F)F)C=C(C=C2)F)C
InChi Key
ILAMRXVQSGVCJX-AWEZNQCLSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H20F3N5O3/c1-21(2)10-32-15-4-3-12(22)5-11(15)7-28-14(17(23)24)9-31-16-8-29-18(26-19(16)28)13(6-25-29)20(30)27-21/h3-6,8,14,17H,7,9-10H2,1-2H3,(H,27,30)/t14-/m0/s1
化学名
(18S)-18-(difluoromethyl)-13-fluoro-7,7-dimethyl-9,20-dioxa-1,2,6,17,23-pentazapentacyclo[19.3.1.04,24.010,15.017,22]pentacosa-2,4(24),10(15),11,13,21(25),22-heptaen-5-one
别名
TPX 0131; Zotizalkib; TPX-0131; TPX0131
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~62.5 mg/mL (~139.7 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.65 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.2351 mL 11.1754 mL 22.3509 mL
5 mM 0.4470 mL 2.2351 mL 4.4702 mL
10 mM 0.2235 mL 1.1175 mL 2.2351 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT04849273 Terminated Drug: TPX-0131 NSCLC
Advanced Solid Tumor		 Turning Point Therapeutics, Inc. July 28, 2021 Phase 1
生物数据图片

  • Design of TPX-0131. Mol Cancer Ther . 2021 Sep;20(9):1499-1507.

  • The effect of TPX-0131 on phosphorylation of ALK in engineered Ba/F3 cell models containing WT or mutated EML4-ALK as measured by immunoblotting for ALK and phospho-ALK relative to a control protein (actin). Mol Cancer Ther . 2021 Sep;20(9):1499-1507.

  • Evaluation of efficacy of TPX-0131 in CDX models in SCID/beige mice administered TPX-0131 via oral gavage twice daily for seven consecutive days. Mol Cancer Ther . 2021 Sep;20(9):1499-1507.

  • Pharmacokinetic/pharmacodynamic analysis of TPX-0131 in the EML4-ALK G1202R/L1196M xenograft model. Mol Cancer Ther . 2021 Sep;20(9):1499-1507.
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  • 劳拉替尼
    V0613 1454846-35-5 10 mM * 1 mL in DMSO
    Loratinib (formerly also known as Lorlatinib, PF-06463922; trade name:Lorbrena) is a potent, orally bioavailable, brain-penetrant,ATP-competitive, anddual ALK/ROS1 inhibitor with potential antitumor activity.
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