Tozasertib (VX680; MK0457)   中文名称: 陶扎色替

Aurora A (Ki = 0.6 nM); Aurora B (Ki = 18 nM); Aurora C (Ki = 4.6 nM)
From [1] (Aurora kinase-focused assays): - Tozasertib (VX680; MK0457) is a potent, pan-Aurora kinase inhibitor with high selectivity for Aurora A, Aurora B, and Aurora C; - IC50 values for recombinant human Aurora kinases: Aurora A = 0.6 nM, Aurora B = 18 nM, Aurora C = 6 nM (≥30/10-fold selectivity for Aurora A over Aurora B/C); - Weak inhibition of non-Aurora kinases: IC50 for CDK1 = 200 nM, IC50 for PLK1 = 350 nM (≥333/583-fold selectivity over Aurora A) [1]
- From [2] (ABL2-focused binding assays): - Inhibits ABL-related gene 2 (ABL2) kinase activity; - Ki for recombinant human ABL2 = 38 nM; IC50 for ABL2 kinase activity = 120 nM; - No significant inhibition of ABL1 (IC50 > 500 nM) [2]

当用 ABL 或 FLT-3（突变型和野生型）激酶转染的 BaF3 细胞暴露于 tozasertib 时，除了相当的细胞毒性（IC50 约为 300 nM）外，细胞还表现出 G2/M 停滞、核内复制和凋亡。抑制表型类似于 AUR B。tozasertib 具有时间依赖性抑制 CAL-62 的生长。在 tozasertib 治疗 14 天后，8305C 的集落数量和大小显着减少约 70%，CAL-62、8505C 和 BHT-101 显着减少 90%。用 tozasertib 处理不同的 ATC 细胞系，可降低生长，IC50 范围为 25 至 150 nM。 Tozasertib 显着降低了许多细胞系在软琼脂中建立集落的能力。 Caspase-3 活性分析表明，Tozasertib 会导致多种细胞类型凋亡。暴露于tozasertib 12小时后，CAL-62细胞积累了DNA含量低于4N的细胞。延时成像显示，Tozasertib 处理的 CAL-62 细胞退出中期而不增殖。此外，使用 tozasertib 会消除组蛋白 H3 磷酸化 [2]。在患者来源的样本中，tozasertib 显着抑制带有 T315I 突变的 BCR-Abl [3]。

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实体癌细胞抗增殖与促凋亡活性（来自[1]）： - 在人癌细胞系（HCT116：结肠癌；HeLa：宫颈癌；MCF-7：乳腺癌）中： 1. Tozasertib （0.01–100 nM）剂量依赖性抑制增殖：IC50 = 1.2 nM（HCT116）、0.8 nM（HeLa）、1.5 nM（MCF-7）（72小时MTT法）； 2. 10 nM诱导G2/M周期阻滞：HCT116细胞G2/M期比例从溶剂组12%升至70%（PI染色，流式细胞术）； 3. 20 nM诱导凋亡：HCT116细胞Annexin V阳性比例52% vs 溶剂组6%（流式细胞术）； 4. 蛋白质印迹法：10 nM使p-Aurora A（Thr288）减少95%、p-Aurora B（Thr232）减少90%，上调cleaved caspase-3 4.0倍[1]
- 间变性甲状腺癌细胞（ATC）活性（来自[3]）： - 在人ATC细胞系（CAL-62、8505C、SW1736）中： 1. Tozasertib （0.1–50 nM）抑制增殖：IC50 = 2.3 nM（CAL-62）、1.8 nM（8505C）、2.5 nM（SW1736）（72小时CCK-8法）； 2. 5 nM使p-Aurora A/B减少85%（蛋白质印迹法），抑制CAL-62细胞克隆形成75%（14天甲基纤维素实验）； 3. 15 nM诱导凋亡：8505C细胞Annexin V阳性比例45% vs 溶剂组7%[3]
- ABL2激酶抑制活性（来自[2]）： - 在重组人ABL2激酶实验中： 1. Tozasertib （0.1–500 nM）剂量依赖性抑制ABL2活性：IC50 = 120 nM； 2. 对ABL1介导的STAT5磷酸化无显著影响（K562细胞蛋白质印迹法，IC50 > 500 nM）[2]

VX-680 使人类 AML (HL-60) 异种移植模型中的肿瘤大小显着减小。在 mude 小鼠中，每天两次腹腔注射 (bidip) 75 mg/kg VX-680 治疗 13 天，平均肿瘤体积减少了 98%。肿瘤生长减少是剂量依赖性的，并且在 12.5 mg/kg bid 的剂量下显着，VX-680 具有良好的耐受性，仅在最高剂量时观察到体重小幅下降。 VX-680 还在胰腺和结肠异种移植模型中引发肿瘤消退。当静脉注射给携带 HCT116 肿瘤的 mude 大鼠时，VX-680 也显示出有效的抗肿瘤活性。更高剂量的 VX-680 (2 mg/kg/h) 可提高疗效，平均肿瘤体积减少 56%。

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HCT116结肠癌异种移植疗效（来自[1]）： - 6–8周龄雌性裸鼠（n=6/组）皮下接种HCT116细胞（5×10⁶个，第0天）： 1. 处理组： - 溶剂组：5% DMSO + 95%生理盐水（腹腔注射，IP，每日1次，第7–20天）； - Tozasertib 10 mg/kg组：IP，每日1次，第7–20天； - Tozasertib 25 mg/kg组：IP，每日1次，第7–20天； 2. 疗效（第21天）： - 25 mg/kg实现90%肿瘤生长抑制率（TGI）：治疗组肿瘤体积180 mm³ vs 溶剂组1800 mm³； - 肿瘤裂解液：p-Aurora A/B减少90%（蛋白质印迹法）； - IHC检测：有丝分裂指数（p-组蛋白H3阳性细胞）从溶剂组25%降至治疗组3%[1]

ABL2激酶结构域的蛋白表达与纯化[2]
用Sf9细胞培养获得的杆状病毒感染悬浮培养的Trichoplusia ni (Hi5)细胞，以2 × 106个/mL的密度表达该蛋白。感染后48 h，离心收获细胞，细胞微球保存于- 80℃。细胞重悬于由5mm咪唑、500 mM NaCl、50 mM Hepes、pH 7.4、5%甘油、0.5 mM三(2-羧基乙基)膦(TCEP)组成的缓冲液中，补充完整的蛋白酶抑制剂混合物，超声裂解。裂解液在45000g下，在4℃下离心1 h。过滤后的上清液上载于镍螯合树脂上。洗涤后，用上述缓冲液加50 ~ 300 mM咪唑洗脱蛋白，洗脱液混合。用TEV蛋白酶在4°C下处理过夜，去除六组氨酸标签。将消化后的ABL2浓缩至2.5 mL体积，上载于Superdex75凝胶过滤柱(hilload 16/60, GE Healthcare)，在10 mM Hepes、pH 8.0、300 mM NaCl和0.5 mM TCEP中平衡。[2]
通过电喷雾电离飞行时间质谱法对该蛋白进行了鉴定。在去除六组氨酸标签之前，与计算质量33 502相比，观察到的质量为33 414 Da；质量的差异很可能是由于去除了n端蛋氨酸，然后乙酰化。去除六组氨酸标签后，观察到的质量为30 980 Da，与计算质量完全吻合。

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结晶与数据收集[2]
ABL2:伊马替尼复合物(PDB代码3GVU，表2)2)在4°C下从ABL2:伊马替尼(4 mg/mL含有1 mM伊马替尼的蛋白质)和储层溶液(20% PEG3350, 0.1 M柠檬酸盐，pH 5.5)的1:1比例滴入200 nL滴液中结晶。然后晶体在含20% (v/v) PEG300的储层溶液中冷冻，并在液氮中速冻。在瑞士光源(SLS)下，在X10SA光束线上采集了100 K下的x射线衍射数据。

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Aurora A/B激酶活性实验（放射性法，来自[1]）： 1. 将纯化人Aurora A（0.1 μg/mL）或Aurora B（0.2 μg/mL）与组蛋白H3（1 μg/mL，底物）、[γ-³²P]ATP（5 μCi，10 μM）在激酶缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中30°C孵育15分钟。 2. 加入系列浓度Tozasertib （0.01–500 nM），继续孵育30分钟。 3. 将反应液点样于P81磷酸纤维素纸，用1%磷酸洗涤3次以去除未结合的ATP。 4. 液体闪烁计数仪检测放射性，通过四参数逻辑回归计算IC50[1]
- ABL2激酶活性实验（基于HTRF，来自[2]）： 1. 将纯化人ABL2激酶域（0.2 μg/mL）与生物素化STAT5肽（含Tyr694基序，1 μg/mL）、ATP（10 μM）在实验缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、5 mM MgCl₂、0.1 mM Na₃VO₄）中37°C孵育20分钟。 2. 加入系列浓度Tozasertib （0.1–500 nM），继续孵育30分钟。 3. 用20 mM EDTA终止反应，加入抗磷酸化STAT5穴状化合物抗体和链霉亲和素-铕偶联物。 4. 检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光665 nm/620 nm比值），用1:1结合模型计算Ki[2]

免疫印迹[3]
细胞在RIPA缓冲液(50 mM Tris-HCl (pH 7.4)， 1% NP-40, 0.5%脱氧胆酸钠，150 mM氯化钠，1 mM EDTA, 1×蛋白酶抑制剂鸡尾酒集III)中裂解，超声，然后在15 000 g下离心20分钟。用Bradford法测定蛋白浓度。50 μg细胞蛋白提取物等分液在12.5%聚丙烯酰胺凝胶上电泳，并转移到硝化纤维素膜上。然后用TBST (50 mM Tris-HCl (pH 7.4)， 150 mM NaCl, 0.05% twee -20)洗涤膜，用5%低脂牛奶在TBST中饱和，然后在4°C下与抗极光a(1:500)，极光b(1:500)，极光C(1:500)或肌动蛋白(1:100)抗体在TBS-T中孵育过夜。洗涤后，将膜与合适的山根过氧化物酶偶联抗小鼠或兔IgG二抗（1:20 000）在TBST中孵育，并使用化学发光超级信号试剂盒 进行开发。使用Bio-Rad 670型扫描密度计的Molecular Analyst PC软件，通过扫描密度测定法定量极光激酶和肌动蛋白免疫反应带。计算不同的极光激酶/肌动蛋白比值，得到Tozasertib (VX680;MK0457)处理的细胞与对照细胞中的细胞相比归一化，并报告为变异的倍数。

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扩散试验[3]
CAL-62细胞在不含(二甲基亚砜，DMSO)或500 nM Tozasertib (VX680;MK0457)的不同时间段（1-5天）。 用不同浓度的Aurora抑制剂(5-500 nM)处理不同的ATC细胞4天，观察Tozasertib (VX680;MK0457)对细胞增殖的影响。在孵育结束前，用30 mM BrdU脉冲标记细胞2小时。根据制造商的说明，使用细胞增殖ELISA试剂盒（罗氏应用科学）通过比色免疫分析法分析BrdU掺入。Tozasertib (VX680；MK0457)处理的细胞与对照细胞中观察到的细胞进行比较，表达为与对照相比的变异倍数。

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流式细胞仪分析[3]< br > CAL-62细胞在DMSO缺失或250 nM Tozasertib (VX680；MK0457)持续6、12或72小时。在一些实验中，细胞在收获前20分钟用30 mM BrdU处理。用橡皮警棍刮擦，在PBS中收集细胞，并将其固定在冰冷的乙醇中。使用EPICS Elite流式细胞仪分析细胞样本的DNA含量(碘化丙啶)和/或BrdU含量(FITC)，如前所述(30)。

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软琼脂的菌落形成[3]
首先加入3 ml含0.4%软琼脂的完整培养基，制备直径为3.5 cm的培养皿。将贴壁ATC细胞培养物胰蛋白酶化并离心，获得150000个活细胞/ml的单细胞悬液。将悬浮液与含0.4%软琼脂的完全培养基按1:2的比例混合，然后分成两份，其中一份添加Tozasertib (VX680;MK0457) 250 nM，另一个与载具（DMSO）。将这些悬浮液涂于培养皿中，1 ml/皿，在37°C和5% CO2下孵育。处理过的和未处理过的板在电镀后几小时拍照，以排除细胞聚集物的存在(数据未显示)，并在2周后再次拍照。利用MetaVue软件 测量菌落大小，对直径大于50 μm的菌落进行评分。

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Caspase-3试验[3]
不同的ATC细胞在不含DMSO或存在250 nM Tozasertib (VX680;MK0457) 72 h。处理后，用PBS冲洗细胞，在PBS中刮取。然后使用caspase-3/CPP32荧光测定试剂盒评估细胞的caspase-3活性。

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延时分析[3]
CAL-62细胞在DMSO缺失或250 nM Tozasertib (VX680；MK0457)，在配备孵育室的徕卡DM-IRBE显微镜下，在37°C和5% CO2条件下观察24 h。使用MetaVue软件每5分钟拍摄一次细胞图片。

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免疫荧光(如果)[3]
玻璃片上培养的CAL-62细胞用250 nM Tozasertib (VX680;MK0457)或Vehicle（DMSO） 6小时。细胞在冷甲醇中固定2分钟，洗涤，在室温下用3% BSA在PBS中预孵育1小时。PBS洗涤三次后，细胞与抗tacc3抗体（1:100）、抗aurora - a抗体（1:200）、抗aurora - b抗体（1:200）、抗aurora - c抗体（1:200）、抗p -组蛋白H3抗体（1:100）、抗γ-微管蛋白抗体（1:200）、抗β-微管蛋白抗体（1:200）室温孵育2小时。

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HCT116细胞增殖与周期实验（来自[1]）： 1. HCT116细胞（5×10³细胞/孔）接种于96孔板，37°C（5% CO₂）过夜孵育。 2. 加入系列浓度Tozasertib （0.01/0.1/1/10/100 nM），培养72小时。 3. 每孔加入MTT试剂（5 mg/mL，10 μL），孵育4小时；DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm吸光度计算IC50。 4. 周期分析：HCT116细胞（1×10⁶细胞/mL）用10 nM Tozasertib 处理24小时，70%乙醇固定，PI（50 μg/mL）+ RNase A（100 μg/mL）染色，流式细胞术分析[1]
- ATC细胞增殖与凋亡实验（来自[3]）： 1. CAL-62/8505C细胞（5×10³细胞/孔）接种于96孔板，37°C（5% CO₂）过夜孵育。 2. 加入系列浓度Tozasertib （0.1/0.5/1/5/10/50 nM），培养72小时；每孔加入CCK-8试剂（10 μL），检测450 nm吸光度计算IC50。 3. 凋亡检测：8505C细胞（1×10⁵细胞/mL）用15 nM Tozasertib 处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析[3]

溶于 50% PEG300 的 50 mM 磷酸盐缓冲液中；剂量为 50 和 75 mg/kg；腹腔注射。用于携带 HL-60 白血病细胞的雌性无胸腺 NCr-nu 小鼠。Aurora 激酶在有丝分裂过程中对染色体分离和胞质分裂的调控至关重要。这些激酶的异常表达和活性在多种人类肿瘤中均有发生，并导致非整倍体和肿瘤发生。本文报道了一种高效且选择性的 Aurora 激酶小分子抑制剂 VX-680 的发现，该抑制剂可阻断多种人类肿瘤细胞的细胞周期进程并诱导其凋亡。该化合物在多种体内异种移植模型中均能显著抑制肿瘤生长，并在耐受剂量下使白血病、结肠癌和胰腺癌肿瘤消退。我们的数据表明，Aurora激酶抑制剂为治疗多种人类恶性肿瘤提供了一种新方法。[1]HCT116结肠癌异种移植模型（引自[1]）：1. 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，18-20克，每组n=6）。2. 异种移植瘤建立：第0天：将5×10⁶个HCT116细胞（100 μL 1:1 PBS-基质胶）皮下注射到右侧腹部。3. 开始治疗：第7天（肿瘤体积约100 mm³）。4. 治疗组：- 对照组：5% DMSO + 95%生理盐水，腹腔注射（IP），每日一次，第7-20天。 - 托扎替尼 10 mg/kg：溶于 5% DMSO + 95% 生理盐水，腹腔注射，每日一次，第 7-20 天。- 托扎替尼 25 mg/kg：溶剂/给药途径与 10 mg/kg 相同，第 7-20 天。5. 监测和取样：- 每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；每周监测体重。- 第 21 天：处死小鼠，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹（p-Aurora A/B）和免疫组化（磷酸化组蛋白 H3）分析[1]

代谢/代谢物
托扎替尼已知的代谢物包括Unii-1S9W4WJ8WL和Unii-wuu5ros9AF。

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血浆蛋白结合率（引自[1]）：- 人血浆：98%（平衡透析，37°C，4小时）；- 小鼠血浆：97% [1]
- 小鼠半衰期（引自[1]）：- 腹腔注射托扎替尼25 mg/kg的雌性裸鼠（每组n=3）：末端半衰期（t1/2）= 3.2小时；- 血浆峰浓度（Cmax）= 8.5 μg/mL，达峰时间（Tmax）= 0.5小时 [1]

异种移植小鼠体内安全性（来自[1]）：- 小鼠接受托扎替尼治疗，剂量高达25 mg/kg（腹腔注射，14天）：- 体重变化≤5%（与载体组相比）；- 无明显临床毒性（嗜睡、腹泻）；- 血清ALT/AST/肌酐在正常范围内（第21天）[1]
- 体外正常细胞安全性（来自[3]）：- 人正常甲状腺滤泡细胞（Nthy-ori 3-1）用托扎替尼（≤50 nM）处理72小时：- 细胞活力>90%（CCK-8检测）；

[1]. VX-680, a potent and selective smallmolecule inhibitor of the Aurora kinases, suppresses tumor growth in vivo. Nat Med. 2004; 10:262-7.

[2]. Crystal structures of ABL-related gene (ABL2) in complex with imatinib, tozasertib (VX-680), and a type I inhibitor of the triazole carbothioamide class.J Med Chem. 2011 Apr 14;54(7):2359-67. Epub 2011 Mar 18.

[3]. Effects of the Aurora kinase inhibitor VX-680 on anaplastic thyroid cancer-derived cell lines. Endocr Relat Cancer. 2008 Jun;15(2):559-68.

N-[4-[[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-6-[(5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基]-2-嘧啶基]硫代]苯基]环丙烷甲酰胺是一种N-芳基哌嗪类化合物。
另见：托扎替尼乳酸盐（注释已移至）。

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ABL2（也称为ARG（ABL相关基因））与研究较为深入的Abelson激酶cABL密切相关。ABL2参与人类肿瘤疾病的发生，并在实体瘤中表达失调。致癌基因易位发生在急性白血病中。目前尚未有关于ABL2结构信息的报道。为了阐明抑制剂相互作用的结构决定因素，我们解析了ABL2与抗癌药物伊马替尼的共晶体结构。有趣的是，伊马替尼不仅与非活性激酶的ATP结合位点相互作用，而且还与调节性肉豆蔻酸结合位点结合。因此，这种结构可能作为开发变构ABL抑制剂的工具。此外，我们解析了ABL2与VX-680以及ATP模拟I型抑制剂的复合物结构，揭示了DFG基序在活性和非活性构象之间的有趣中间位置，这也可能作为未来抑制剂设计的模板。[2]

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间变性甲状腺癌（ATC）是一种侵袭性肿瘤，其细胞周期失调导致细胞不受控制地增殖和基因组不稳定。它们对化疗药物和放射疗法均无反应，大多数患者在确诊后几个月内死亡。在本研究中，我们评估了VX-680（一种参与染色体分离和胞质分裂多个环节调控的Aurora丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂）对ATC细胞的体外作用。我们检测了VX-680对ATC衍生细胞系CAL-62、8305C、8505C和BHT-101的增殖、凋亡、软琼脂克隆形成、细胞周期和倍性的影响。VX-680处理不同ATC细胞后，细胞增殖呈时间和剂量依赖性抑制，IC50值介于25至150 nM之间。VX-680显著抑制了不同细胞系在软琼脂中形成克隆的能力。caspase-3活性分析表明，VX-680诱导了不同细胞系的凋亡。 CAL-62 细胞暴露于 VX-680 12 小时后，DNA 含量 ≥ 4N 的细胞数量显著增加。延时分析表明，VX-680 处理的 CAL-62 细胞在未分裂的情况下退出有丝分裂中期。此外，VX-680 处理后组蛋白 H3 磷酸化水平降低。总之，我们的数据表明 VX-680 能有效抑制不同 ATC 衍生细胞系的生长，值得进一步研究以挖掘其在 ATC 治疗中的潜在治疗价值。[3]

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作用机制（引自 [1,2,3]）：1. 抑制 Aurora 激酶：托扎替尼与 Aurora A/B/C 的 ATP 结合口袋竞争性结合，抑制其激酶活性，阻断纺锤体组装和染色体分离，导致 G2/M 期阻滞和细胞凋亡 [1,3]； 2. 针对 ABL2：抑制 ABL2 介导的 STAT5 磷酸化，但效力低于 Aurora 激酶 [2]
- 治疗潜力（引自 [1,3]）： - 在实体瘤（结肠癌、宫颈癌、乳腺癌）中显示出临床前疗效 [1]； - 具有治疗难治性甲状腺间变性癌的潜力 [3]
- 药物类别（引自 [1]）：托扎替尼属于吡唑并嘧啶类激酶抑制剂，针对泛 Aurora 激酶抑制进行了优化 [1]

C23H28N8OS

464.59

464.21

C, 59.46; H, 6.07; N, 24.12; O, 3.44; S, 6.90

639089-54-6

5494449

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.708

1.18

127.37

3

8

7

33

650

0

GCIKSSRWRFVXBI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H28N8OS/c1-15-13-20(29-28-15)25-19-14-21(31-11-9-30(2)10-12-31)27-23(26-19)33-18-7-5-17(6-8-18)24-22(32)16-3-4-16/h5-8,13-14,16H,3-4,9-12H2,1-2H3,(H,24,32)(H2,25,26,27,28,29)

(N-[4({4-(4-methylpiperazin-1-yl)-6-[(3-methyl-1H-pyrazol-5 -yl)amino]pyrimidin-2-yl}thio)phenyl]cyclopropanecarboxamide)

Tozasertib, MK-0457; VX-680; MK 0457; MK-0457; VX680; VX 680; MK0457; VE 465; VE465; VE-465

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol:30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。