Wnt-C59

PORCN (IC50 = 74 pM)[1]

通过阻断 Wnt 棕榈酰化、Wnt 与载体蛋白 Wntless/WLS 的相互作用、Wnt 分泌以及 Wnt β-连环蛋白报告活性的激活，确定 Wnt-C59 (C59) 在纳摩尔浓度下可在体外降低 PORCN 功能。 Wnt-C59 的 IC50 为 74 pM，可阻断 WNT3A 介导的驱动荧光素酶的多聚化 TCF 结合位点的激活[1]。

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Wnt-C59（C59）是PORCN酶活性的强效抑制剂[1]
诺华公司最近开发并获得了小分子2-（4-（2-甲基吡啶-4-基）苯基）-N-（4-（吡啶-3-基）苯）乙酰胺作为Wnt信号调节剂的专利。它以C59的名称从至少2个来源商购，并声称在纳摩尔浓度下抑制PORCN酶活性。然而，目前还没有关于其疗效和分子靶点的同行评审的公开信息。由于目前还没有一种有效、生物可利用和稳定的PORCN抑制剂，我们评估了C59。我们发现，使用许多基于细胞的检测，C59确实可以作为真正的PORCN抑制剂发挥作用。C59抑制WNT3A介导的驱动萤光素酶（Super8xTopFlash；STF）的多聚TCF结合位点的激活，IC50为74 pmol/L（图1A）。正如对PORCN抑制剂的预期，C59处理完全消除了Wnt分泌到培养基中的现象（图1A，插图）。与靶向PORCN的C59一致，PORCN过表达可以缓解WNT3A介导的STF活性的抑制，类似于无关的PORCN抑制剂IWP-1（参考文献21、22；图1B）。Wnt酰化是与载体蛋白WLS结合所必需的。WNT3A和WNT8A与WLS共免疫沉淀，但当细胞用C59预处理时，这种相互作用被阻断（图1C）。使用炔棕榈酸和点击化学，我们发现C59可以防止棕榈酸盐掺入WNT3A，这与抑制PORCN活性是一致的（图1D）。C59抑制小鼠PORCN所有剪接变体的活性（图2A）。在初步研究中，我们发现在爪蟾胚胎发生中产生发育表型需要非常高浓度的C59。与此一致，虽然非洲爪蟾PORCN在PORCN缺失的人类细胞中表达时具有活性，但其活性对C59的抑制具有抗性（图2A）。由于爪蟾蛋白与人类PORCN有77%的相同性，这提供了PORCN是C59分子靶标的遗传证据，表明了C59耐药性出现的机制，并表明相关性较低的MBOAT蛋白也不受C59的影响。表明抑制PORCN可能会阻止所有Wnt介导的信号传导，我们发现，当细胞用C59处理时，9个激活β-catenin的Wnts中有9个和4个额外的非正则Wnts中的4个失去了活性（图2B和C）。总之，C59是哺乳动物PORCN酰基转移酶活性的纳摩尔抑制剂，可阻断所有评估的人类Wnts的激活。因此，我们预计C59给药将阻止所有人类和小鼠Wnt依赖性信号传导。

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SUNE1细胞表现出对Wnt-C59（C59）的强耐受性，正如在许多其他人类癌症细胞系中报道的那样。在较高的Wnt-C59浓度（20μM）下，CNE1和HNE1细胞的生长能力都降低了，而HK1细胞对所有浓度（5μM、10μM和20μM）的Wnt-C5 9处理都很敏感。
SUNE1和HNE1细胞都显示出更大的形成球体的能力（图1A和1B）。它们在48小时对Wnt-C59治疗的IC50大于60μM。此外，这两种细胞系具有明显不同的体内细胞生长动力学，为确定Wnt-C59在鼻咽癌细胞中的生物学效应提供了良好的动物模型。
低浓度（1μM）的Wnt-C59（C59）处理抑制了SUNE1细胞，与未处理的对照细胞相比，3D生长明显受到抑制（图3A）。Wnt-C59对鼻咽癌细胞的抑制作用呈剂量依赖性；5μM和20μM Wnt-C59处理都可以阻止HNE1和SUNE1细胞系中球体的形成，但不能阻止CNE1细胞。然而，在第1至3周观察到，用Wnt-C59处理显示单层生长的细胞持续扩增，3D抑制和单层生长都是一致的（图3B）。
经过三周的治疗后，我们撤回了Wnt-C59（C59），并在对照细胞培养条件下继续培养细胞10至20天。HNE1细胞中没有明显的3D生长恢复或检测到，尽管细胞密度和孵育期足以使未处理的细胞产生3D生长。然而，在未经处理的培养条件下，单层生长的SUNE1细胞在20天内逐渐形成巨大的球体（图3C）。这些发现表明，Wnt-C59对茎干的抑制作用是不可逆的，如HNE1所示。Wnt抑制剂可以安全地根除整个细胞群中具有干性特性的HNE1细胞。

在小鼠中，wnt-C59 表现出良好的生物利用度。 Wnt-C59 下调 Wnt/β-catenin 靶基因，同时预防 MMTV-WNT1 转基因小鼠中乳腺癌的生长[1]。在人类癌症中，Wnt-C59 具有消除癌症干细胞的能力。 Wnt-C59 阻止 HNE1 和 SUNE1 细胞中球体的形成，从而以剂量依赖性方式抑制 NPC 细胞的干性特征 [2]。

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Wnt-C59（C59）可以给小鼠服用并防止肿瘤生长[1]
为了测试Wnt信号在体内的作用，我们评估了C59在小鼠体内的生物利用度和体内半衰期。静脉注射（2.5mg/kg）或口服（5mg/kg）后，化合物在血液中的半衰期约为1.94小时。值得注意的是，单次口服给药后至少16小时，C59浓度仍高于体外IC50 10倍以上（图3A）。根据药代动力学分析，每天给药一次C59，以测试其治疗既定Wnt驱动肿瘤的疗效。在携带小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）-WNT1转基因的小鼠中，小鼠WNT1的过表达导致从10周龄开始的乳腺腺癌发病率很高。值得注意的是，这些小鼠中出现的肿瘤仍然依赖于Wnt，但具有不同的分子表型和生长速率，这与WNT1扩大弱势群体然后经历二次打击的假设相一致
为了测试Wnt-C59（C59）的体内疗效，我们将2个独立的原发性MMTV-WNT1肿瘤的片段原位移植到裸鼠体内。在出现可触及的肿瘤后，用赋形剂或C59，10mg/kg/d治疗小鼠17天。C59给药可阻止或逆转所有接受治疗的小鼠的肿瘤生长（n=22；图3B）。经过17天的治疗，肿瘤被切除并进一步分析。最终肿瘤重量存在显著差异（图3C）。为了证实C59在免疫功能正常的小鼠中具有活性，我们监测了雌性未产妇Bl6-MMTV-WNT1小鼠的肿瘤发展情况。当肿瘤变得可触及时，用赋形剂或C59（5mg/kg/d）治疗小鼠。虽然参与这项研究的小鼠数量较少，但即使是较低剂量的C59也能显著抑制肿瘤生长（图3D）。最终肿瘤重量如补充图S2A所示。

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肿瘤生长抑制与肿瘤中Wnt/β-catenin信号传导减少有关[1]
为了确定肿瘤生长的抑制是否伴随着Wnt/β-catenin信号传导的抑制，我们通过定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测了同种异体移植物和原发性肿瘤中选定靶基因的表达。C59治疗的小鼠肿瘤中Axin2、Ccnd1、c-Myc和Tcf7转录物显著减少（图4A和补充图S2B）。Ki67染色显示，与c-Myc和CyclinD的减少相一致，经治疗的肿瘤增殖也显著降低（图4B）。

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Wnt-C59（C59）在体内抑制Wnt通路[2]
正如最近报道的那样，基质中的Wnt信号传导在干细胞生态位中起着至关重要的作用。因此，我们检测了肿瘤组织中活性β-catenin和Axin2的蛋白表达。这两种蛋白质在癌症巢周围的基质细胞中明显积累，尤其是在肿瘤组织的快速生长区域。对照组和注射SUNE1细胞的Wnt-C59处理的小鼠之间没有检测到这两种蛋白质的表达有明显差异，表明SUNE1（图4A）和HNE1细胞（图4B）中的肿瘤微环境具有良好的上调Wnt通路活性。Wnt-C59对注射SUNE1细胞的小鼠体内这些生长中的肿瘤的影响有限。 重要的是，与对照组小鼠相比，注射Wnt-C59细胞的HNE1小鼠肝脏（图4C）和肾脏（图4D）中活性β-catenin和Axin2的表达明显下调。这些发现证实，在41天的测定期内，Wnt-C59的给药对受试动物的Wnt通路产生了系统性影响，从而诱导了受试小鼠的肿瘤抑制。

Wnt分泌、TOPFlash分析、Dvl2移动转移和PORCN救援[1]
为了测定C59 IC50，用稀释到培养基中1/1000的化合物处理STF3a细胞，48小时后测量荧光素酶活性。为了监测Wnt分泌到培养基中，用C59处理STF3a细胞，C59稀释在以一半体积添加的含有1%FBS的新鲜培养基中。24小时后在4%SDS中收集裂解物。对于HT1080细胞中的SuperTOPflash测定，用50 ng Wnt、100 ng mCherry和650 ng SuperTOPflash在24孔板中转染实验。对于PORCN拯救实验，添加了100 ng 3xHA-mPORCN-D。为了测量Dvl2迁移率偏移，用200ng的每个Wnt质粒和600ng的mCherry转染。在100mM磷酸钠、pH 7.5、150mM NaCl、1%IGEPAL-CA630、完全蛋白酶抑制剂混合物中制备裂解物，并进行蛋白质印迹以检测Dvl2

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Wnt WLS交互[1]
用C末端V5标记的WNT3A或WNT8A转染6孔培养皿中的HeLa细胞。转染后6小时，用0.1%DMSO作为对照或加入终浓度为10nM的C59代替培养基。孵育过夜后，用缓冲液裂解细胞：50mM HEPES、150mM NaCl、1mM EDTA、0.5%NP-40和完全蛋白酶抑制剂）。用兔抗WLS C端多克隆抗体免疫沉淀共500μg裂解物。对V5和WLS进行蛋白质印迹（使用针对WLS的小鼠抗体）

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Alk-C16代谢标记和点击化学[1]
用C-末端V5标记的WNT3A转染在10cm板中以3×106细胞密度铺板的HT1080细胞。转染6小时后，用DMEM代替培养基，DMEM含有5%不含脂肪酸的BSA（Sigma），含有或不含有100μMω-炔基棕榈酸（Alk-C16），如先前报道所合成（3，4）。同时用0.1%DMSO作为对照或100nM C59处理细胞。过夜孵育后，用冷PBS洗涤细胞两次，并在缓冲液中制备细胞裂解物：50mM HEPES、150nM NaCl、1mM EDTA、1%NP-40和蛋白酶抑制剂（Roche）。将蛋白裂解物与抗V5抗体孵育过夜，然后加入30μL蛋白A/G加琼脂糖（50%浆液）2小时。将颗粒用裂解缓冲液洗涤四次，并重悬于磷酸钠缓冲液（100mM磷酸钠，pH 7.5，1%Nonidet P-40，150mM NaCl）中。然后将免疫沉淀的蛋白质在50μl体积中进行点击标记反应1小时RT，最终浓度依次加入以下试剂：0.1 mM生物素叠氮化物（Life Technologies）、1 mM Tris（2-羧乙基）膦盐酸盐（TCEP）、0.2 mM Tris[（1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基）甲基]胺（TBTA）溶于二甲基亚砜/叔丁醇（20%/80%）和1 mM CuSO4（在水中新制备）。标记的免疫沉淀蛋白通过SDS–PAGE解析，转移到PVDF膜上，用抗V5一级抗体印迹，然后用Dylight 680缀合的抗小鼠抗体和Dylight 800缀合的链亲和素印迹，然后在各自的通道中显现。

体外C59毒性研究[1]
HCT116、K562、HL60、A549、U-2-OS、U266、HCC1937、HCC38、MCF7、BT-20、MB157、MDA-MB-435S、MDA-MB-231、MDA-MBA-468、DLD1、SW480、T98G、A172、U-87MG、KATO III、SNU1、SNU5、SNU16、SK-MEL-5、SK-MEL-28、HS294T、A375、A2058、MEWO、FU97、IM95、IM95M、NUGC-3、NUGC-4、OCUM-1、SCH、MKN1、MKN7、MKN45 MKN74、AZ521、JHH2、SNU216、YCC-3（韩国细胞系库，韩国）、EOL-1在供应商规定的培养条件下生长。对于测定，将75μl培养基中的5000个细胞接种在黑色96孔板的每个孔中，并在37°C下孵育过夜。C59在培养基中以4倍原液的形式连续稀释，然后将25μl的每种稀释液加入细胞中，得到50μM至1.5 nM的最终浓度。处理2天后，向每个孔中加入100μl CellTiter-Glo®发光细胞活力测定试剂，并在室温下孵育10分钟。使用Tecan Safire仪器测量发光。

药代动力学分析[1]
使用 C57/BL6 小鼠。 C59溶于30%丙二醇溶液中，用于尾静脉注射；或溶于0.5%甲基纤维素和0.1%吐温-80的混合溶液中，用于口服。单次给药（静脉注射5 ml/kg，口服10 ml/kg）后，在指定时间点处死小鼠。采集血液样本。分离血浆，并使用经验证的生物分析LC/MS/MS方法进行分析。为测定样本中C59的浓度，在小鼠血浆中以1-1000 ng/ml的浓度范围，采用线性二次法（r² = 0.99）建立C59的标准曲线。三份质量控制样本的准确度和精密度分别在15%偏差和25%相对标准偏差以内。小鼠血浆中C59的定量下限为1 ng/ml。采用非房室模型（Gibaldi 和 Peter，1982）和 Phoenix WinNonlin 6.0 软件计算药代动力学参数。

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动物研究[1]
MMTV-WNT1 小鼠购自 Jackson Laboratories，并已回交至少六代至 C57/Bl6 小鼠。雌性未交配小鼠在肿瘤出现后随机分为对照组和治疗组。每日通过灌胃给予 C59 治疗或载体，隔日使用游标卡尺测量肿瘤大小。研究持续 21 天或直至肿瘤达到预设大小限制。处死小鼠后，切除肿瘤并称重，然后分离肿瘤组织用于 RNA 提取和组织学分析。

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溶于 0.5% 甲基纤维素和 0.1% Tween-80；10 mg/kg；灌胃

原位移植独立 MMTV-WNT1 肿瘤的雌性裸鼠

[1]. Pharmacological inhibition of the Wnt acyltransferase PORCN prevents growth of WNT-driven mammary cancer. Cancer Res. 2013 Jan 15;73(2):502-7.

[2]. Wnt-C59 arrests stemness and suppresses growth of nasopharyngeal carcinoma in mice by inhibiting the Wnt pathway in the tumor microenvironment. Oncotarget. 2015 Jun 10;6(16):14428-39.

豪猪蛋白 (PORCN) 是一种膜结合的 O-酰基转移酶，是 Wnt 棕榈酰化、分泌和生物活性所必需的。所有可评估的人类 Wnt 蛋白的活性均依赖于 PORCN，这表明抑制 PORCN 可能是一种治疗依赖于 Wnt 过度活性的癌症的有效方法。在本研究中，我们评估了 PORCN 抑制剂 Wnt-C59 (C59)，以确定其在培养细胞和小鼠中的活性和毒性。体外实验表明，C59 在纳摩尔浓度下即可抑制 PORCN 活性，其抑制作用体现在 Wnt 棕榈酰化、Wnt 与载体蛋白 Wntless/WLS 的相互作用、Wnt 分泌以及 Wnt 激活 β-catenin 报告基因活性等方面。在小鼠中，C59 显示出良好的生物利用度，每日一次口服给药即可维持血药浓度远高于 IC50。 C59 抑制了 MMTV-WNT1 转基因小鼠乳腺肿瘤的进展，同时下调了 Wnt/β-catenin 靶基因的表达。令人惊讶的是，小鼠未表现出明显的毒性，即使在治疗有效剂量下，肠道或其他组织也未出现病理变化。这些结果提供了临床前概念验证，表明通过使用 C59 等小分子抑制剂靶向 PORCN 可以抑制哺乳动物 Wnt 信号通路，并且这是一种安全可行的体内策略。[1] 在本研究中，我们证实小分子 C59 是 PORCN 酰基转移酶活性的纳摩尔级抑制剂，并表明小分子介导的 PORCN 抑制是预防 WNT1 驱动的小鼠肿瘤生长的有效方法。C59 抑制 Wnt 的棕榈酰化，但对非洲爪蟾 PORCN 无活性。因此，PORCN一级序列的改变赋予了其对C59的耐药性，从遗传学上证实了PORCN是C59的靶点。C59的效力比先前报道的PORCN抑制剂IWP1高100倍以上。我们发现，在能有效抑制MMTV-WNT1驱动的肿瘤生长的药物浓度下，C59对细胞或小鼠均无明显毒性。经治疗的小鼠肠道结构正常。当使用Fzd8CRD-Fc抑制Wnt信号通路时，也观察到了类似的肠道毒性缺失。我们推测，Wnt依赖性肿瘤对Wnt活性的轻微降低高度敏感，而正常组织（如肠道）对Wnt信号的降低具有更高的耐受性，和/或具有替代的自我更新途径。
Wnt通路通过β-catenin激活突变以及旁分泌和自分泌Wnt信号传导，促进多种癌症的进展。在多种非恶性疾病中也发现了Wnt信号通路表达增加。在许多情况下，相关的Wnt信号可能通过非β-catenin通路发挥作用。因此，即使在β-catenin未激活的疾病中，PORCN抑制剂也可能有效。因此，寻找能够有效靶向该通路的治疗方法一直是长期的研究目标。我们最近的研究证实，PORCN是精细调控Wnt依赖性细胞信号传导的关键节点，进一步支持了其作为治疗靶点的应用。因此，特异性且生物利用度高的PORCN抑制剂是极具吸引力的新型分子，除了其他Wnt信号通路激活的疾病外，还可能对多种癌症的治疗具有潜在价值。[1]Wnt/β-catenin信号通路是包括鼻咽癌（NPC）在内的许多人类肿瘤中癌干细胞（CSCs）生成的原因。近期研究表明，Wnt或PORCN抑制剂Wnt-C59（C59）能够抑制MMTV-WNT1转基因小鼠的肿瘤生长。然而，Wnt-C59在人类肿瘤中的作用尚不明确。本研究发现，所研究的鼻咽癌细胞系对Wnt-C59治疗的反应存在异质性。Wnt-C59给药后，小鼠体内SUNE1细胞的肿瘤生长立即受到抑制。注射HNE1细胞的小鼠在接受Wnt-C59治疗后未出现可见肿瘤，而对照组小鼠则100%出现肿瘤。Wnt-C59以剂量依赖的方式抑制鼻咽癌细胞的干性，其机制是通过抑制HNE1和SUNE1细胞的球体形成。因此，Wnt-C59具有清除人类肿瘤干细胞的潜力。在生长肿瘤周围的基质细胞中，活性β-catenin和Axin2蛋白的表达显著增强，证实了Wnt信号通路在微环境中作为细胞生长驱动力的重要性。这些新发现证实了Wnt-C59能够抑制鼻咽癌（NPC）中Wnt信号通路驱动的未分化细胞的生长。抗Wnt信号通路和抗癌症干细胞（CSC）策略都是可行的癌症治疗策略。[2]
为了检测Wnt-C59在动物体内的长期效应（目前尚未有相关报道），我们研究了HNE1细胞的肿瘤生长情况。这些细胞在小鼠体内形成生长性肿瘤需要更长的潜伏期，这反映了该细胞系中肿瘤内异质性较高。在对照组中，存活的肿瘤细胞（推测为CSC）在注射部位增殖，并在潜伏期后迅速形成进行性生长的肿瘤。相比之下，注射的肿瘤细胞在动物接受Wnt-C59治疗后死亡，并未形成可见的、进行性生长的肿瘤。虽然无法直接证实注射的HNE1细胞中存在癌症干细胞（CSCs），但球体抑制实验表明，Wnt-C59能够以不可逆的方式安全有效地清除具有干性特征的细胞。体外和体内实验均进一步证实了这些发现，并支持该细胞系中存在CSCs的观点。靶向CSCs以抑制肿瘤生长是当前癌症研究的一个主要方向。本研究结果表明，Wnt-C59能够有效抑制某些肿瘤细胞的Wnt信号通路和干性特征。我们提供的功能性证据表明，使用抗CSC药物控制肿瘤生长是一种可行的癌症治疗方法，并有望在人类肿瘤治疗中得到广泛应用。[2]

C25H21N3O

379.45

379.168

C, 79.13; H, 5.58; N, 11.07; O, 4.22

1243243-89-1

Wnt-C59;1243243-89-1

57519544

White to yellow solid

1.2±0.1 g/cm3

628.3±55.0 °C at 760 mmHg

333.8±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.648

4.19

54.88

1

3

5

29

508

0

O=C(NC1=CC=C(C2=CC=CN=C2)C=C1)CC3=CC=C(C4=CC(C)=NC=C4)C=C3

KHZOJCQBHJUJFY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H21N3O/c1-18-15-22(12-14-27-18)20-6-4-19(5-7-20)16-25(29)28-24-10-8-21(9-11-24)23-3-2-13-26-17-23/h2-15,17H,16H2,1H3,(H,28,29)

2-(4-(2-methylpyridin-4-yl)phenyl)-N-(4-(pyridin-3-yl)phenyl)acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O:5 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。