β-catenin/TCF mediated transcription; β-catenin/CBP interaction; CBP (IC50 = 3 μM); CREB - binding protein (CBP) [3]

在 MCF7 细胞中，ICG-001 (5 μM) 可抑制瘦素诱导的 EMT、侵袭和肿瘤球形成 [1]。在早老蛋白-1突变细胞中，ICG-001可以在表型上拯救正常神经生长因子（NGF）诱导的神经元分化和神经元生长，突出了神经元分化的重要性以及TCF/β-连环蛋白信号通路在神经突生长中的功能。 2]。在 SW480 细胞中，ICG-001 (25 μM) 处理降低了生存素和细胞周期蛋白 D1 RNA 和蛋白质的稳态水平； β-连环蛋白可增加这两种蛋白质的含量。 ICG-001 可在体外抑制结肠癌细胞的发育，并特异性引发转化细胞的凋亡，但不会引发正常结肠细胞的凋亡 [3]。

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- 选择性地诱导转化的结肠直肠细胞凋亡，而对正常结肠细胞无此作用，并减少结肠癌细胞的体外生长。它特异性结合CBP，下调β-连环蛋白/T细胞因子（TCF）信号传导，选择性抑制β-连环蛋白/TCF报告基因构建体TOPFlash，而不影响FOPFlash构建体。其机制是破坏β-连环蛋白与CBP之间的相互作用，而不是β-连环蛋白与p300之间的相互作用[3]
- 抑制瘦素诱导的乳腺癌细胞上皮-间质转化（EMT）、侵袭和肿瘤球形成。用ICG-001处理MCF7细胞可阻断瘦素诱导的β-连环蛋白积累和核转位增加，从而减少β-连环蛋白向启动子的募集。其机制与抑制瘦素通过Akt激活诱导的糖原合酶激酶3β（GSK3β）磷酸化，以及降低Wnt1和MTA1的表达有关[1]

在小鼠中，ICG-001（每天 5 毫克/千克）强烈抑制 β-连环蛋白信号传导，同时保留上皮细胞 [2]。服用水溶性 ICG-001 9 周后，结肠和小肠息肉的形成减少了 42%。这种影响与非甾体类抗炎药物 MK-231 的效果相当，后者已在该模型中反复证明了疗效。在 SW620 裸鼠肿瘤消退异种移植模型中，ICG-001（150 mg/kg，静脉注射）在 19 天的治疗过程中引起肿瘤体积显着减小，但未导致死亡或体重减轻 [3]。

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- 在结肠癌的Min小鼠和裸鼠异种移植模型中有效，可减少肿瘤生长[3]
- 在肺纤维化小鼠模型中抑制Wnt/β-连环蛋白/CBP信号传导，有助于逆转肺纤维化[2]

Coimmunoprecipitations [4]
对于β-catenin-CBP/P300/E-cadherin/N-cadherin共免疫沉淀，MGC-803细胞分别在ICG-001条件下孵育48 h， 100 μg蛋白提取物在共免疫沉淀（Co-IP）缓冲液中稀释至1 mL。蛋白样品中加入2 μg β-catenin 抗体，在4℃下旋转孵育过夜。加入20 μL 50%蛋白A/ g琼脂糖珠浆（在Co-IP缓冲液中平衡），4℃孵育2 h后，用Co-IP缓冲液洗涤4次（每次洗涤1 ml），并用1倍上样缓冲液稀释。Western blotting检测CBP、P300 、E-cadherin、N-cadherin。

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亲和纯化。[3]
细胞在蛋白结合缓冲液中裂解[PBB， 20 mM Hepes, pH 7.9/100 mM NaCl/0.5 mM EDTA/0.5% Nonidet P-40/6 mM MgCl2/5 mM 2-巯基乙醇/一片完全蛋白酶抑制剂混合物]。生物素化的ICG-002在室温下与含有50% DMSO和50% PBB的缓冲液中含有50%链亲和素琼脂糖珠的50%浆液结合过夜。洗净微珠以去除未结合的ICG-002，然后与全细胞裂解液孵育。用100 μM ICG-001特异性洗脱的蛋白或用SDS煮沸洗脱的蛋白进行免疫印迹和银染色。

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- 将SW480细胞的核提取物与包被有ICG-002的链霉亲和素-琼脂糖珠孵育，然后加入ICG-001。洗脱结合蛋白后，用抗CBP抗体进行免疫印迹或银染，以确认CBP是ICG-001的靶点[3]
- 在SW480细胞中，将全长CBP、p300或β-连环蛋白质粒与TOPFlash共转染，用ICG-001处理，24小时后进行荧光素酶测定，以验证ICG-001特异性作用于CBP而非p300[3]

RLE-6TN细胞qPCR研究。[3]
为评价ICG-001对α-SMA和1型胶原表达的影响，在ICG-001（5.0 μM）存在或不存在的情况下，用TGF-β1 （0.25 ng/mL）处理RLE-6TN细胞。24 h后，收获细胞，分离mRNA进行qPCR分析。RNA用SuperScript逆转录酶进行逆转录。采用实时荧光定量PCR系统HT7900，采用SYBR-Green PCR进行定量PCR。扩增方案设定为：95℃变性10 min， 95℃变性15 s，退火/延伸1 min， 60℃数据采集40个循环。 所用引物对如下：α-SMA正向5′-ATGGCTCCGGGCTCTGTAA-3′和反向5′-ACAGCCCTGGGAGCATCA-3′；胶原蛋白1α正向5 ‘ -TTGACCCTAACCAAGGATGC-3 ’和反向5 ‘ - caccccttctgcgttgtat -3 ’。

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肺成纤维细胞。[3]
原代成纤维细胞培养来源于接受移植手术的IPF患者的肺组织，经相关机构的知情同意和伦理批准，如前所述。从ATCC获得1例IPF患者的细胞系（CCL-134）。以ICG-001(5 μM)或DMSO对照处理IPF成纤维细胞48 h后，分离mRNA进行qPCR分析。

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- 结肠癌细胞实验：培养结肠癌细胞，加入ICG-001，观察细胞凋亡和生长状态，并通过报告基因测定检测β-连环蛋白/TCF信号通路的活性[3]
- 乳腺癌细胞实验：将MCF7细胞血清饥饿16小时，然后用100 ng/ml瘦素处理或不处理，同时加入ICG-001或不加入。观察细胞形态变化，通过免疫荧光或Western blot检测β-连环蛋白的积累和核转位情况，评估细胞的EMT、侵袭和肿瘤球形成能力[1]

溶于水；300 mg/kg；口服给药
7 周龄雄性 C57BL/6J-Apc Min/+

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博来霉素诱导小鼠肺纤维化。[2]
所有动物实验程序均已获得华盛顿大学动物护理委员会的批准。在预防肺纤维化的研究中，C57BL/6J 小鼠和 BAT-gal 转基因小鼠（表达由 B6D2F1 小鼠产生的、在 β-catenin/TCF 反应元件控制下编码 β-半乳糖苷酶的大肠杆菌 lacZ 基因）在第 0 天皮下植入微型渗透泵（200 μL Alzet Model 2001 渗透泵，输送速率为 1.0 ± 0.15 μL/h；Durect 公司），泵内分别含有 ICG-001（5 mg/kg/天，溶于生理盐水）、水溶性地塞米松（1 mg/kg/天，溶于生理盐水）或生理盐水对照。24 小时后（第 1 天），经鼻内给予 0.08 单位博来霉素（溶于 50 μL 生理盐水）。对照组在第 1 天经鼻给予 50 μL 生理盐水。小鼠在第 10 天处死。在炎症和早期纤维化反应期的干预研究中，C57BL/6J 小鼠在第 0 天经鼻给予博来霉素（0.08 单位）或生理盐水，随后在第 5 天每日两次口服吡非尼酮 [5-甲基-1-苯基-2-(IH)-吡啶酮，400 mg/kg/d，溶于 0.5% 羧甲基纤维素]，或通过微型渗透泵输注 ICG-001（5 mg/kg/天）或生理盐水对照，治疗期为 10 天。在长期逆转已建立的纤维化研究中，小鼠分组，于第0天经鼻给予博来霉素（0.08单位），于第21天植入含有ICG-001（5 mg/kg/天）或生理盐水的微型渗透泵，并于第42天处死。取肺组织进行组织病理学、qPCR和胶原蛋白测定。

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Min小鼠模型。[3]
7周龄雄性C57BL/6J-ApcMin/+和WT C57BL/6J小鼠经口给予ICG-001（300 mg/kg/天）或载体（1%羧甲基纤维素），每日一次，每周六次，持续9周。舒林酸溶于饮用水中（160 ppm，溶于8 mM Na2PO4缓冲液，pH 7.6）。 16周时，使用解剖显微镜手动计数息肉数量。

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体内异种移植和治疗实验[4]
体内研究采用4-6周龄雄性裸鼠。将MGC-803细胞（2 × 10⁶个细胞溶于200 μl PBS）皮下注射到裸鼠右侧腹部以建立肿瘤模型。7天后，每天向肿瘤内注射50 mg/kg的ICG-001。PBS作为对照。治疗持续4周。使用数字游标卡尺测量肿瘤大小，并使用以下公式计算肿瘤体积：体积 = 0.5 × 宽度² × 长度。

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- 结肠癌小鼠模型：使用Min小鼠和裸鼠，接种结肠癌细胞建立异种移植模型，然后给予ICG-001观察肿瘤生长情况，但文献中未描述具体的给药途径、频率和剂量[3]
- 肺纤维化小鼠模型：文献中未描述使用ICG-001治疗肺纤维化小鼠模型的具体动物实验操作流程[2]

[1]. Leptin-induced epithelial-mesenchymal transition in breast cancer cells requires β-catenin activation via Akt/GSK3- and MTA1/Wnt1 protein-dependent pathways. J Biol Chem, 2012, 287(11), 8598-8612.

[2]. Inhibition of Wnt/beta-catenin/CREB binding protein (CBP) signaling reverses pulmonary fibrosis. Proc Natl Acad Sci USA, 2010, 107(32), 14309-14314.

[3]. A small molecule inhibitor of beta-catenin/CREB-binding protein transcription [corrected]. Proc Natl Acad Sci USA, 2004, 101(34), 12682-12687.

[4]. ICG-001 suppresses growth of gastric cancer cells and reduces chemoresistance of cancer stem cell-like population. J Exp Clin Cancer Res. 2017 Sep 11;36(1):125.

(6S,9aS)-6-[(4-羟基苯基)甲基]-8-(1-萘甲基)-4,7-二氧代-N-(苯基甲基)-3,6,9,9a-四氢-2H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-1-甲酰胺是一种肽。

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脂肪细胞因子谱的紊乱，尤其是瘦素水平升高，是乳腺肿瘤进展和转移的主要原因；然而，其潜在机制尚不完全清楚。特别是，瘦素是否参与上皮-间质转化（EMT）仍未可知。本文提供了分子证据，表明瘦素诱导乳腺癌细胞发生从上皮细胞向梭形间质细胞形态的转变。为了探究可能调控瘦素诱导上皮间质转化（EMT）的下游介质，我们发现瘦素、转移相关蛋白1（MTA1）和Wnt1信号通路组分之间存在功能性相互作用。瘦素可增加β-catenin的积累和核转位，进而促进启动子募集。沉默β-catenin或使用小分子抑制剂ICG-001可抑制瘦素诱导的EMT、侵袭和肿瘤球形成。机制上，瘦素通过激活Akt刺激糖原合成酶激酶3β（GSK3β）的磷酸化，导致GSK3β-LKB1-Axin复合物的形成显著减少，从而增加β-catenin的积累。瘦素处理还可增加Wnt1的表达，进而促进GSK3β的磷酸化。抑制Wnt1可阻断瘦素刺激的GSK3β磷酸化。我们还发现，瘦素可增加Wnt1信号通路的重要调节因子MTA1的表达。MTA1是瘦素介导的Wnt/β-catenin通路调控的关键组成部分，因为MTA1的沉默会抑制瘦素诱导的Wnt1表达、GSK3β磷酸化和β-catenin活化。此外，对瘦素处理的乳腺肿瘤的分析显示，Wnt1、pGSK3β和波形蛋白（vimentin）的表达增加，同时β-catenin在细胞核内的积累增加，E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达降低，这为瘦素与MTA1/Wnt信号通路在乳腺癌细胞上皮-间质转化（EMT）过程中存在先前未被发现的相互作用提供了体内证据。[2]

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特发性肺纤维化（IPF）/寻常型间质性肺炎是一种进行性肺部瘢痕形成和破坏的严重疾病。包括皮质类固醇在内的抗炎疗法对这种最终致命的疾病疗效有限。目前亟需寻找能够与肺纤维化发病机制中的关键分子通路相互作用的新型药物，以预防或逆转这些患者的肺纤维化进展。由于特发性肺纤维化（IPF）患者肺部存在Wnt/β-catenin信号通路的异常激活，我们选择ICG-001作为靶点，利用该通路干预肺纤维化。ICG-001是一种小分子，能够以环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CBP）依赖的方式特异性抑制T细胞因子/β-catenin的转录。ICG-001选择性地阻断β-catenin/CBP的相互作用，而不干扰β-catenin/p300的相互作用。我们在此报告，ICG-001（5 mg/kg/天）能够显著抑制β-catenin信号通路，减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化，同时保护肺上皮细胞。 ICG-001 与博来霉素联合用药可预防纤维化，后期给药则能逆转已形成的纤维化并显著提高生存率。由于目前尚无有效的特发性肺纤维化 (IPF) 治疗方法，选择性抑制 Wnt/β-catenin 依赖性转录提示了一种潜在的独特肺纤维化治疗方法。[2]

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大多数结肠癌中存在腺瘤性息肉病 (APC) 的遗传性和体细胞突变，导致 β-catenin 反应基因的激活。为了鉴定该通路的小分子拮抗剂，我们利用二级结构模板化合物库筛选转化后的结直肠癌细胞，寻找能够抑制 β-catenin 反应报告基因的化合物。我们鉴定出 ICG-001，这是一种小分子，它通过特异性结合环磷酸腺苷 (cAMP) 反应元件结合蛋白来下调 β-catenin/T 细胞因子信号通路。 ICG-001 选择性地诱导转化细胞凋亡，但不诱导正常结肠细胞凋亡，可抑制结肠癌细胞的体外生长，并且在 Min 小鼠和裸鼠结肠癌异种移植模型中有效。[3]

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背景：ICG-001 是一种小分子，可与 CREB 结合蛋白 (CBP) 结合，从而破坏其与 β-catenin 的相互作用，并抑制 CBP 作为 Wnt/β-catenin 介导的转录共激活因子的功能。鉴于其抑制 Wnt/β-catenin 信号通路的能力，ICG-001 已被用于某些肿瘤类型中发挥其抗癌作用。本文研究了 ICG-001 及其在胃癌 (GC) 治疗中的潜在作用。
方法：体外和体内实验均使用了胃癌细胞系 SGC-7901、MGC-803、BGC-823 和 MKN-45。本研究采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术、迁移和侵袭实验以及肿瘤球培养等方法，在体外评估了细胞增殖、肿瘤球形成、转移、肿瘤发生以及对化疗药物的耐药性。体内实验则采用无胸腺裸鼠皮下移植瘤模型进行。通过 qRT-PCR、Western blot、免疫共沉淀和免疫荧光分析等方法检测了 RNA 和蛋白质水平的变化。
结果：本研究表明，ICG-001 可显著抑制多种胃癌细胞系的生长和转移，诱导细胞凋亡，并增强体外肿瘤球的抑制作用。其机制可能是 ICG-001 能有效阻断 β-catenin 与 CBP 和 N-cadherin 的结合，同时促进 β-catenin 与 P300 和 E-cadherin 的结合，而非改变 β-catenin 的分布和表达。
结论：我们的研究结果表明，ICG-001 可抑制胃癌细胞系的生长和转移，降低其干细胞样特性和化疗耐药性，提示 ICG-001 是一种潜在的胃癌小分子治疗药物。
关键词：胃癌；生长；ICG-001；干细胞样特性； Wnt/β-catenin信号通路。[4]

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ICG-001是一种小分子抑制剂，旨在靶向Wnt/β-catenin信号通路，而大多数结肠癌都存在可激活该通路的突变。ICG-001通过与CBP结合，可以破坏β-catenin与CBP之间的相互作用，从而抑制β-catenin/TCF介导的基因转录。[3]

C33H32N4O4

548.63

548.242

C, 72.24; H, 5.88; N, 10.21; O, 11.66

780757-88-2

1422253-38-0 (PRI-724);847591-62-2 (deleted);780757-88-2 (ICG001);

11238147

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

895.6±65.0 °C at 760 mmHg

133-134ºC

495.4±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.722

4.01

93.19

2

4

6

41

930

2

C1CN([C@H]2CN(C(=O)[C@@H](N2C1=O)CC3=CC=C(C=C3)O)CC4=CC=CC5=CC=CC=C54)C(=O)NCC6=CC=CC=C6

HQWTUOLCGKIECB-IHLOFXLRSA-N

InChI=1S/C33H32N4O4/c38-27-15-13-23(14-16-27)19-29-32(40)35(21-26-11-6-10-25-9-4-5-12-28(25)26)22-30-36(18-17-31(39)37(29)30)33(41)34-20-24-7-2-1-3-8-24/h1-16,29-30,38H,17-22H2,(H,34,41)/t29-,30+/m1/s1

rel-(6R,9aR)-Hexahydro-6-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-8-(1-naphthalenylmethyl)-4,7-dioxo-N-(phenylmethyl)-2H-pyrazino[1,2-a]pyrimidine-1(6H)-carboxamide

ICG-001; ICG 001; ICG-001; 847591-62-2; 780757-88-2; (S,S)-ICG 001; (6S,9aS)-N-benzyl-6-(4-hydroxybenzyl)-8-(naphthalen-1-ylmethyl)-4,7-dioxooctahydro-1H-pyrazino[1,2-a]pyrimidine-1-carboxamide; (6S,9aS)-6-(4-hydroxybenzyl)-N-benzyl-8-(naphthalen-1-ylmethyl)-4,7-dioxo-hexahydro-2H-pyrazino[1,2-a]pyrimidine-1(6H)-carboxamide; ICG001

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.56 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声和加热处理
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1.67 mg/mL (3.04 mM) in 15% Cremophor EL + 85% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 1.67 mg/mL (3.04 mM) in 17% Polyethylene glycol 12-hydroxystearate in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。