| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Cdc42 (Kd = 11.4 μM)
Cdc42-Intersectin (ITSN) protein-protein interaction (IC50 = 3.2 μM for disrupting the interaction in vitro) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ZCL278通过与GTP竞争抑制Cdc42 GTPase活性，并以时间依赖性方式抑制Rac/Cdc42磷酸化。 ZCL278 (50 μM) 抑制 Cdc42 介导的微刺形成，并破坏血清饥饿的 Swiss 3T3 成纤维细胞中 GM130 对接的高尔基体结构。此外，ZCL278 还可抑制转移性前列腺癌 PC-3 细胞系中 Cdc42 介导的神经元分支和生长锥动力学以及基于肌动蛋白的运动和迁移，且无细胞毒性。激酶测定：通过使用 p50RhoGAP 或 Cdc42GAP 测定和基于吸光度的检测方法来测量 GTP 酶活性产生的无机磷酸盐。简而言之，Cdc42 预载有 GTP 或 ZCL278，并在反应缓冲液中于 37°C 孵育 20 分钟。然后在 37°C 下再添加 GAP 20 分钟。在 CytoPhos 试剂中孵育 10 分钟后，在 650 nm 处检测到无机磷酸盐。激酶测定：将冻干的 Cdc42 蛋白在由 50 mM Tris、0.5 mM MgCl2、50 mM NaCl、3%（重量/体积）蔗糖和 0.6% 葡聚糖组成的缓冲液中重配至 5 mg/mL。然后将储备溶液在 5 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中稀释至 1 μM。在每次荧光测量之前，向含有 Cdc42 溶液的石英比色皿中添加等份的 ZCL278 并孵育 5 分钟。激发波长为275 nm，每次添加后测量色氨酸在350 nm处的荧光。使用GraphPad中的等摩尔特异性结合模型拟合滴定曲线，并计算Kd。细胞测定：在 ZCL278 处理的神经元中，神经元分支随着时间的推移被显着抑制。此外，ZCL278 显着抑制 Cdc42 介导的生长锥运动。
阻断Cdc42-ITSN相互作用：ZCL278以剂量依赖性方式抑制Cdc42与ITSN的SH3结构域结合，GST pull-down实验中IC50为3.2 μM[1] - 高尔基体结构紊乱：HeLa细胞和MDA-MB-231细胞经ZCL278（5-20 μM）处理4小时后，高尔基体结构呈剂量依赖性紊乱，免疫荧光染色（高尔基体标志物GM130）显示，20 μM剂量下>70%的细胞出现高尔基体碎片化或分散[1] - 抑制细胞运动能力：Transwell迁移实验中，ZCL278（5-20 μM）可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞和HeLa宫颈癌细胞的迁移。15 μM剂量下，两种细胞的迁移率分别较溶媒对照组降低58%和62%[1] - 降低细胞侵袭能力：Matrigel侵袭实验中，ZCL278（10-20 μM）以剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力，20 μM剂量下侵袭细胞数减少75%[1] - 无显著细胞毒性：细胞活力实验显示，ZCL278浓度高达25 μM时，处理24小时对HeLa或MDA-MB-231细胞的活力无显著影响[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
ZCL278 将脾脏中的 JUNV RNA 负载降低了 33 倍以上，在 8 只小鼠中，有 5 只检测不到 JUNV RNA。这些结果与加巴喷丁治疗的小鼠中观察到的结果相似，表明 ZCL278 可以消除 JUNV 复制。四周大的 C57BL/6 小鼠接受静脉内注射加巴喷丁或 ZCL278（100 μg/g，腹膜内注射）。治疗后1小时，用27 1/2号针头对小鼠腹膜内接种JUNV Candid #1 (1×106 PFU)，剂量不超过1 mL。实验结束时，处死小鼠，用杜恩斯匀浆器匀浆其脾脏并离心以产生细胞沉淀和上清液，并测定RNA表达水平。
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| 酶活实验 |
使用包含 50 mM Tris、0.5 mM MgCl2、50 mM NaCl、3%（wt/vol）蔗糖的缓冲液将已冻干的蛋白质 Cdc42 重构至 5 mg/mL 浓度和 0.6% 葡聚糖。接下来，我们在 5 mM 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4) 中将储备液稀释至 1 μM。在每次荧光测量之前，将等份的 ZCL278 添加到含有 Cdc42 溶液的石英比色皿中，并孵育 5 分钟。每次添加后，使用 275 nm 的激发波长测量 350 nm 处的色氨酸荧光。使用GraphPad的等摩尔特异性结合模型来拟合滴定曲线，并计算Kd[1]。
Cdc42-ITSN相互作用GST pull-down实验：纯化重组GST标签的ITSN SH3结构域和His标签的Cdc42，与ZCL278系列稀释液在结合缓冲液中4°C孵育2小时。加入GST beads继续孵育1小时后，充分洗涤beads，洗脱结合蛋白并经SDS-PAGE电泳分离，抗His抗体免疫印迹检测。定量Cdc42对应的免疫反应条带强度，从剂量-效应曲线计算IC50值[1] |
| 细胞实验 |
在 24 小时孵育期间将 ZCL278、NSC23766 或 Cdc42 激活剂添加到 PC-3 细胞中，以测量细胞活力。 Countess 自动细胞计数器采用台盼蓝染料排除法来确定活细胞和死细胞的数量。任何概率水平低于 95% 的原假设都会被拒绝，并且为每个实验分配 P 值 [1]。
高尔基体结构免疫荧光染色：HeLa或MDA-MB-231细胞接种到盖玻片上，培养至50-60%融合度。经ZCL278（5-20 μM）处理4小时后，多聚甲醛固定，Triton X-100透化，封闭后加入GM130（高尔基体标志物）一抗及荧光二抗孵育。核染料染色细胞核后，共聚焦显微镜成像，每组至少计数200个细胞，统计高尔基体紊乱的细胞百分比[1] - Transwell迁移实验：MDA-MB-231或HeLa细胞重悬于含ZCL278（5-20 μM）的无血清培养基中，接种到Transwell小室上室，下室加入含10%胎牛血清的培养基作为趋化因子。37°C孵育24小时后，固定、染色小室下表面迁移的细胞并显微镜计数，计算相对于溶媒对照组的迁移率[1] - Matrigel侵袭实验：Transwell小室预涂Matrigel并凝固，MDA-MB-231细胞重悬于含ZCL278（10-20 μM）的无血清培养基中接种到上室，下室加入含10%胎牛血清的培养基。孵育48小时后，固定、染色下表面的侵袭细胞并计数，计算相对于溶媒对照组的侵袭抑制率[1] - 细胞活力实验：HeLa或MDA-MB-231细胞接种到96孔板，经ZCL278（0-25 μM）处理24小时后，加入细胞活力检测试剂，测定相应波长下的吸光度，细胞活力以相对于溶媒对照组的百分比表示[1] |
| 动物实验 |
Mice: C57BL/6 mice that are four weeks old are given intravenous injections of either ZCL278 (100 μg/g) or gabapentin. The mice receive an intraperitoneal injection of JUNV Candid #1 (1×10 6 PFU) in a maximum volume of 1 mL using a 27 1/2-gauge needle, one hour post-treatment. When the trial is over, the mice are killed, their spleens are homogenized using a Dounce homogenizer, they are centrifuged to produce a cell pellet and supernatant, and the levels of RNA expression are assessed.
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ZCL278 is a small molecule designed to target the protein-protein interaction between Cdc42 (a Rho GTPase) and Intersectin (ITSN), a scaffold protein involved in vesicular trafficking and cytoskeletal regulation [1]
- Its mechanism of action involves blocking Cdc42-ITSN binding, which disrupts Golgi apparatus integrity and impairs cell motility and invasion, without inducing significant cytotoxicity [1] - ZCL278 serves as a valuable pharmacological tool for studying the role of Cdc42-ITSN interaction in Golgi organization, cell migration, and cancer cell invasion [1] |
| 分子式 |
C21H19BRCLN5O4S2
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|---|---|---|
| 分子量 |
584.89
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| 精确质量 |
582.975
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| 元素分析 |
C, 43.12; H, 3.27; Br, 13.66; Cl, 6.06; N, 11.97; O, 10.94; S, 10.96
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| CAS号 |
587841-73-4
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
1791111
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.687
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| LogP |
4.45
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| tPSA |
166.27
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|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
800
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(NC(NC1=CC=C(S(=O)(NC2=NC(C)=CC(C)=N2)=O)C=C1)=S)COC3=CC=C(Br)C=C3Cl
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| InChi Key |
XKZDWYDHEBCGCG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H19BrClN5O4S2/c1-12-9-13(2)25-20(24-12)28-34(30,31)16-6-4-15(5-7-16)26-21(33)27-19(29)11-32-18-8-3-14(22)10-17(18)23/h3-10H,11H2,1-2H3,(H,24,25,28)(H2,26,27,29,33)
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| 化学名 |
2-(4-bromo-2-chlorophenoxy)-N-[[4-[(4,6-dimethylpyrimidin-2-yl)sulfamoyl]phenyl]carbamothioyl]acetamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7097 mL | 8.5486 mL | 17.0972 mL | |
| 5 mM | 0.3419 mL | 1.7097 mL | 3.4194 mL | |
| 10 mM | 0.1710 mL | 0.8549 mL | 1.7097 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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NSC 23766
K-Ras inhibitor 12
MLS-573151
EHT 1864 2HCl
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COA
粤公网安备 44011102003439号
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