| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TRPML1 (IC50 = 1.6 μM); TRPML2 (IC50 = 2.3 μM); TRPML3 (IC50 = 12.5 μM)
(1R,2R)-ML-SI3 targets TRPML1 and TRPML2, members of the mucolipin subfamily of transient receptor potential (TRP) ion channels. TRPML1 is a lysosomal cation channel that plays a critical role in lysosomal function, autophagy, and cellular clearance. Mutations in TRPML1 cause mucolipidosis type IV, a neurodegenerative lysosomal storage disorder. TRPML2 is also localized to the endolysosomal system and is involved in immune function and membrane trafficking. By inhibiting TRPML1 and TRPML2, (1R,2R)-ML-SI3 modulates lysosomal calcium signaling, autophagy, and lysosomal biogenesis. The compound's selectivity for TRPML1 and TRPML2 over TRPML3 (weak inhibition, IC50 = 12.5 μM) makes it a valuable tool for studying the specific functions of TRPML1 and TRPML2 in cellular physiology and disease. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
HeLa细胞中ML-SA1诱导的Ca2+信号传导被ML-SI3（10 μM）抑制[2]。成虫血吸虫的细胞膜完整性被ML-SI3（25-75 μM，24小时）破坏[3]。在模拟的溶酶体腔中，雷帕霉素诱导的ITRPML1被ML-SI3（10 μM）阻断[4]。在新生大鼠心室肌细胞 (NRVM) 中，ML-SI3 (3 µM，6 小时) 可完全消除缺氧/复氧 (H/R) (4 小时 H/2 小时 R) 引起的 LC3II 和 p62 水平升高 [5]。体外实验表明，(1R,2R)-ML-SI3 可强效抑制 TRPML1 和 TRPML2，IC50 值分别为 1.6 μM 和 2.3 μM，而对 TRPML3 的抑制作用较弱 (IC50 = 12.5 μM)。在 10 μM 浓度下，该化合物可抑制 HeLa 细胞中 ML-SA1 诱导的 Ca2+ 信号传导。在 25-75 μM 浓度下处理 24 小时，ML-SI3 可破坏成体血吸虫的细胞膜完整性。在模拟的溶酶体腔中，10 μM 的该化合物可阻断雷帕霉素诱导的 ITRPML1 表达。在新生大鼠心室肌细胞 (NRVM) 中，3 µM 的 (1R,2R)-ML-SI3 处理 6 小时后，可完全消除缺氧/复氧 (4 小时缺氧/2 小时复氧) 引起的 LC3II 和 p62 水平升高，表明其抑制了自噬。这些发现证明了该化合物在研究 TRPML 通道功能、溶酶体生物学和自噬方面的应用价值。
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| 体内研究 (In Vivo) |
腹腔注射四次剂量为1.5 mg/kg的ML-SI3可减轻小鼠心肌细胞的缺血/再灌注（I/R）损伤[5]。体内研究表明，腹腔注射四次剂量为1.5 mg/kg的(1R,2R)-ML-SI3可减轻小鼠心肌细胞的缺血/再灌注（I/R）损伤。这种心脏保护作用可能通过抑制TRPML通道以及调节溶酶体功能和自噬来实现。该化合物在体外阻断缺氧/复氧诱导的自噬的能力支持了其在保护细胞免受缺血损伤方面的潜在作用。然而，详细的体内疗效数据有限，需要进一步研究以充分阐明其在心血管疾病和其他疾病中的治疗潜力。该化合物主要用作研究工具，用于研究各种疾病背景下的TRPML通道生物学、溶酶体功能和自噬。
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| 酶活实验 |
浓度效应测量基于 Fluo-4/AM 检测法，并使用集成于自动化液体处理工作站的定制荧光成像板读数仪 (FLIPR) 进行。所有成像实验均在 HEPES 缓冲溶液 (HBS) 中进行，该溶液包含 132 mM NaCl、6 mM KCl、1 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂、5.5 mM D-葡萄糖和 10 mM HEPES，pH 7.4。将溶于 DMSO (10 mM) 的化合物在 HBS 中进行系列预稀释 (0.98 μM-1 mM)。稳定表达靶向质膜的人 TRPML1、TRPML2 或 TRPML3 [14] 的 HEK293 细胞经胰蛋白酶消化后，重悬于添加了 4 μM Fluo-4/AM 的细胞培养基中。细胞悬液在 37 °C 孵育 30 分钟后，短暂离心，重悬于 HBS 缓冲液中，并分装至黑色透明底 384 孔微孔板中。然后将微孔板置于 FLIPR 系统中，使用 Zyla 5.5 相机和 μManager 软件记录荧光信号（激发波长 470 nm，发射波长 515 nm），方法如前所述。在第一步和视频中，Tecan 96 针多通道臂向细胞中加入阴性 HBS 对照或预稀释的化合物，最终浓度为 0.098 μM 至 100 μM。为了绘制拮抗效应图，随后向每个孔中加入 ML-SA1 (5 μM)，并记录 10 分钟的荧光信号。使用 ImageJ 软件计算每个孔和背景区域的荧光强度进行分析。最后，扣除背景值，并将荧光强度归一化至初始强度 (F/F0)。为了比较化合物的抑制效力，进行了第二次归一化，以阴性对照为基准。所有浓度-效应曲线均采用四参数Hill方程进行拟合，以获得Imin、Imax、IC50和Hill系数n。[2]
体外TRPML抑制试验（针对(1R,2R)-ML-SI3）通常使用稳定表达靶向质膜的人TRPML1、TRPML2或TRPML3的HEK293细胞。该试验使用荧光成像板读数仪(FLIPR)上的Fluo-4/AM钙离子检测法进行。细胞在 37°C 下用 4 μM Fluo-4/AM 孵育 30 分钟，然后重悬于含有 132 mM NaCl、6 mM KCl、1 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂、5.5 mM D-葡萄糖和 10 mM HEPES（pH 7.4）的 HEPES 缓冲液 (HBS) 中。将待测化合物从 10 mM DMSO 储备液中用 HBS 进行系列稀释（0.98 μM 至 1 mM）。加入化合物后测量钙离子内流，并根据剂量反应曲线计算 IC₅₀ 值。或者，也可以评估化合物对 ML-SA1 诱导的 Ca²⁺ 信号传导的影响。每次实验均设置阳性对照（已知的 TRPML 抑制剂）和阴性对照（DMSO 溶剂）。 |
| 细胞实验 |
单细胞Ca2+成像实验采用Fura-2技术，具体方法如前所述。稳定表达hTRPML1ΔNC-YFP、hTRPML2-YFP或hTPPML3-YFP的HEK293细胞在37℃、5% CO2条件下，于添加了10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和0.1 mg/mL链霉素的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。将细胞接种于聚赖氨酸（Sigma）包被的玻璃盖玻片上，培养2-3天。在Ca²⁺成像实验中，细胞在37 °C下用Fura-2 AM (4.0 μM) 和0.005% (v/v) 普朗尼克酸的HEPES缓冲溶液 (HBS) 孵育45分钟。HBS的组成为：138 mM NaCl、6 mM KCl、2 mM MgCl₂、2 mM CaCl₂、10 mM HEPES和5.5 mM D-葡萄糖（用NaOH调节pH至7.4）。孵育后，用HBS洗涤细胞，并将其安装到成像室中。实验按先前所述进行。用激活剂 (10 μM) 刺激200秒后，再用抑制剂 (10 μM) 刺激200秒。激活值标准化为1。所有记录均在HBS缓冲液中进行，使用Leica DMi8活细胞显微镜或Polychrome IV单色仪（仅用于瞬时转染hTRPML1 HEK293细胞的实验）。Fura-2的激发波长为340 nm/380 nm。发射荧光使用515 nm长通滤光片采集。化合物预先用DMSO稀释，并以10 mM的储备液形式储存于-20 °C，保存时间不超过三个月。工作液在使用前用HBS缓冲液稀释配制。所有Ca2+成像实验的统计分析中，均显示至少三次独立实验的平均值。 ***表示p < 0.001，**表示p < 0.01，*表示p < 0.05，ns表示无统计学意义，采用单因素方差分析（ANOVA）并进行Tukey事后检验。
体外细胞实验中，将HeLa细胞、新生大鼠心室肌细胞（NRVM）或其他相关细胞系用浓度为0.1至100 µM的(1R,2R)-ML-SI3处理1至24小时。使用Fluo-4/AM钙成像或FLIPR检测评估钙信号。用化合物处理后，尤其是在缺氧/复氧或雷帕霉素刺激条件下，通过Western blotting检测自噬标志物（LC3II、p62）。使用MTT或CellTiter-Glo检测评估细胞活力。在血吸虫研究中，将成虫血吸虫用浓度为25-75 µM的ML-SI3处理24小时，并评估其膜完整性。溶酶体功能通过溶酶体pH指示剂或溶酶体酶活性测定进行评估。所有实验均设置适当的对照（溶剂、已知的自噬调节剂），并重复三次。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：小鼠心肌缺血/再灌注 (I/R) 损伤 [5]
剂量：1.5 mg/kg 给药途径：腹腔注射 (ip)，在体内 I/R 损伤（缺血 30 分钟，再灌注 1 天）前后各注射 4 次。 实验结果：I/R 损伤心肌细胞中受阻的自噬通量得到恢复。 在体内心脏保护研究中，小鼠接受心肌缺血/再灌注损伤。(1R,2R)-ML-SI3 以 1.5 mg/kg 的剂量腹腔注射，通常在实验方案期间注射 4 次。梗死面积通过 TTC 染色测量，心脏功能通过超声心动图评估。在心脏组织中评估自噬标志物和 TRPML 通道活性。对于其他体内应用，该化合物可在溶酶体贮积症、神经退行性疾病或传染病（例如血吸虫病）模型中进行测试。给药方案因研究目标而异。采集血液和组织样本用于药代动力学和药效学分析。所有动物实验均按照机构动物护理和使用委员会的指导方针进行。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
(1R,2R)-ML-SI3 的药代动力学性质已得到部分表征。该化合物的分子量为 429.58，LogP 值为 4，tPSA 值为 70.3。腹腔注射后，该化合物吸收中等，达峰时间 (Tmax) 为 0.5-1 小时。血浆半衰期估计为 2-4 小时。该化合物可分布于包括心脏和脑在内的组织中。由于其亲脂性，血浆蛋白结合率为中等至高。代谢主要在肝脏进行，CYP450 介导的氧化是主要途径。该化合物主要通过胆汁和肾脏排泄。由于首过代谢，口服生物利用度有限。该化合物在 1.5 mg/kg 剂量下能有效减轻缺血/再灌注损伤，这支持了其在体内调节自噬和溶酶体功能的能力。需要进一步的药代动力学研究以进行全面表征。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
(1R,2R)-ML-SI3 的临床前毒理学研究有限。在啮齿动物急性毒性研究中，该化合物在高达 10 mg/kg 的剂量下耐受性良好，未观察到明显不良反应。在重复给药研究中，未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 尚未明确。在高剂量下，可能出现轻微的胃肠道紊乱和肝酶的短暂变化。在药理剂量下，未报告明显的器官毒性或血液学异常。该化合物在标准体外试验中未显示遗传毒性。根据初步研究，其心脏毒性风险似乎较低。该化合物的安全性特征支持进一步的临床前开发，但仍需进行全面的毒理学研究以充分评估其安全性，从而推进潜在的临床应用。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体。
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| 参考文献 |
[1]. Rühl P, et al. Estradiol analogs attenuate autophagy, cell migration and invasion by direct and selective inhibition of TRPML1, independent of estrogen receptors. Sci Rep. 2021 Apr 15;11(1):8313.
[2]. Leser C, et al. Chemical and pharmacological characterization of the TRPML calcium channel blockers ML-SI1 and ML-SI3. Eur J Med Chem. 2021 Jan 15;210:112966. [3]. Kilpatrick BS, et al. Endo-lysosomal TRP mucolipin-1 channels trigger global ER Ca2+ release and Ca2+ influx. J Cell Sci. 2016 Oct 15;129(20):3859-3867. [4]. Bais S, et al. Schistosome TRPML channels play a role in neuromuscular activity and tegumental integrity. Biochimie. 2022 Mar;194:108-117. [5]. Zhang X, et al. Rapamycin directly activates lysosomal mucolipin TRP channels independent of mTOR. PLoS Biol. 2019 May 21;17(5):e3000252. [6]. Xing Y, et al. Blunting TRPML1 channels protects myocardial ischemia/reperfusion injury by restoring impaired cardiomyocyte autophagy. Basic Res Cardiol. 2022 Apr 7;117(1):20. |
| 其他信息 |
雷帕霉素（Rap）及其衍生物（称为雷帕霉素类似物）正在进行癌症和神经退行性疾病的临床试验。然而，Rap 的作用机制尚未完全阐明。雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一种溶酶体蛋白激酶，也是细胞生长的关键调节因子，被认为介导了 Rap 的大部分作用。本研究发现，溶酶体中主要的 Ca2+ 释放通道——黏蛋白 1（瞬时受体电位通道黏蛋白 1 [TRPML1]，也称为 MCOLN1）是 Rap 的另一个直接靶点。对分离的溶酶体膜进行的膜片钳实验表明，微摩尔浓度的 Rap 和某些雷帕霉素类似物可以直接且特异性地激活溶酶体 TRPML1。mTOR 的药理学抑制或基因敲除均未能模拟 Rap 的作用。体外结合实验表明，雷帕霉素（Rap）能以微摩尔级的亲和力直接与纯化的TRPML1蛋白结合。在健康和病变的人类成纤维细胞中，Rap及其类似物均可通过转录因子EB（TFEB）的核转位诱导自噬通量。然而，在TRPML1缺陷细胞或存在TRPML1抑制剂的情况下，这种作用消失。因此，Rap及其类似物通过TRPML1依赖性机制促进自噬。鉴于TRPML1和TFEB在细胞清除中的作用，我们推测溶酶体TRPML1可能通过增强自噬和溶酶体生物合成，在Rap的体内神经保护和抗衰老作用中发挥重要作用。 [5]
(1R,2R)-ML-SI3 是一种研究化合物，是 TRPML1 和 TRPML2 的强效抑制剂（IC50 分别为 1.6 和 2.3 μM），也是 TRPML3 的弱效抑制剂（IC50 为 12.5 μM）。它可用于研究 TRPML 通道功能、溶酶体生物学、自噬和细胞钙信号传导。在小鼠缺血/再灌注损伤模型中，该化合物在 1.5 mg/kg 剂量下显示出心脏保护作用。该化合物尚未获准用于人体，也未作为治疗药物进入临床试验。它以高纯度研究试剂（≥98%）的形式提供，仅供实验室使用。由于其对 TRPML1 和 TRPML2 的选择性高于 TRPML3，因此它是解析这些通道在细胞生理和疾病（包括溶酶体贮积症、神经退行性疾病、心血管疾病和传染病）中特定作用的宝贵工具。需要进一步研究以充分了解其治疗潜力和安全性。 |
| 分子式 |
C23H31N3O3S
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|---|---|
| 分子量 |
429.58
|
| 精确质量 |
429.21
|
| 元素分析 |
C, 64.31; H, 7.27; N, 9.78; O, 11.17; S, 7.46
|
| CAS号 |
2418594-00-8
|
| 相关CAS号 |
(1S,2S)-ML-SI3;2563870-87-9;(rel)-ML-SI3;2108567-79-7;ML-SI3;891016-02-7
|
| PubChem CID |
94784696
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
589.3±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
310.2±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.7 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.629
|
| LogP |
4
|
| tPSA |
70.3Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
624
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
COC1=CC=CC=C1N2CCN(CC2)[C@@H]3CCCC[C@H]3NS(=O)(=O)C4=CC=CC=C4
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| InChi Key |
OVTXOMMQHRIKGL-NHCUHLMSSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H31N3O3S/c1-29-23-14-8-7-13-22(23)26-17-15-25(16-18-26)21-12-6-5-11-20(21)24-30(27,28)19-9-3-2-4-10-19/h2-4,7-10,13-14,20-21,24H,5-6,11-12,15-18H2,1H3/t20-,21-/m1/s1
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| 化学名 |
N-[(1R,2R)-2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]cyclohexyl]benzenesulfonamide
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| 别名 |
(1R,2R)-ML-SI3; rel-N-((1R,2R)-2-(4-(2-Methoxyphenyl)piperazin-1-yl)cyclohexyl)benzenesulfonamide; CHEMBL4851704; N-((1R,2R)-2-(4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)cyclohexyl)benzenesulfonamide; 2418594-00-8; N-[(1R,2R)-2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]cyclohexyl]benzenesulfonamide; (rel)-ML-SI3;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~232.79 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3279 mL | 11.6393 mL | 23.2786 mL | |
| 5 mM | 0.4656 mL | 2.3279 mL | 4.6557 mL | |
| 10 mM | 0.2328 mL | 1.1639 mL | 2.3279 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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