CSF-1R (IC50 = 1 nM); c-Kit (IC50 = 3.2 μM); PDGFRβ (IC50 = 4.8 μM); Flt3 (IC50 = 9.1 μM)
Sotuletinib hydrochloride specifically targets the colony-stimulating factor 1 receptor (CSF-1R), also known as c-Fms or CD115. CSF-1R is a receptor tyrosine kinase that is activated by its ligands, CSF-1 (M-CSF) and IL-34. CSF-1R signaling plays critical roles in the survival, proliferation, and differentiation of macrophages, monocytes, and osteoclasts. CSF-1R is also expressed on microglia in the central nervous system, where it regulates microglial survival and function. The compound inhibits CSF-1R with an IC50 of 1 nM and demonstrates more than 1,000-fold selectivity against its closest receptor tyrosine kinase homologs. This high selectivity is important for minimizing off-target effects and for studying the specific role of CSF-1R in various biological processes.

在骨髓来源巨噬细胞 (BMDM) 中，盐酸索妥替尼可抑制 CSF-1 悬浮液的增殖 (EC50=67 nM) 并降低 CSF-1R 的磷酸化水平，而 CSF-1R 抑制剂同样可以抑制这种磷酸化。值得注意的是，体外培养的盐酸索妥替尼对任何 PDG 来源的肿瘤细胞系（均为 CSF-1R 阴性）、U-87 MG 人神经星形胶质瘤细胞的缺血反应，以及肿瘤细胞形成 PDG 球体均无影响。此外，它还降低了 CRL-2467 星形胶质细胞、Ink4a/Arf/BMDM（PDG 遗传背景）和 NOD/SCID BMDM 的活力。因此，盐酸索替尼可直接影响神经星形胶质细胞缺血，并预防CSF-1R破坏引起的巨噬细胞缺血[1]。体外实验表明，盐酸索替尼能有效抑制CSF-1R，IC50值为1 nM。该化合物对其最接近的受体酪氨酸激酶同源物具有超过1000倍的选择性，表明其具有高度靶向特异性。通过抑制CSF-1R，该化合物阻断了CSF-1R介导的信号通路，包括PI3K/AKT、MAPK/ERK和JAK/STAT通路。这导致CSF-1R依赖性细胞（包括巨噬细胞和小胶质细胞）的存活、增殖和分化减少。该化合物具有良好的脑渗透性，使其适用于研究中枢神经系统中的CSF-1R。盐酸索妥替尼被用作研究 CSF-1R 生物学和验证 CSF-1R 作为治疗靶点的研究工具。

在接受载体治疗的队列中，中位生存期为 5.7 周。盐酸索妥替尼显著延长了长期生存期；接受载体治疗的患者中有 64.3% 达到了 26 周的试验终点。选择该终点是因为 Ink4a/Arf/EGFR 突变体在大约 30 周时开始自发形成肿瘤，包括肉瘤和严重肿瘤。组织学研究结果与盐酸索妥替尼的长期耐受性良好，未观察到明显的副作用。根据组织学分级，所有接受载体治疗的小鼠的肿瘤均为高级别神经星形胶质瘤。另一方面，接受盐酸索妥替尼治疗的动物的肿瘤总体上明显较小，55.6% 的无症状小鼠在实验结束时未见明显病变 [1]。盐酸索妥替尼治疗的肿瘤及其周围基质的CSF1R染色均降低，且CSF1R阳性基质巨噬细胞数量显著低于载体对照组（P<0.05）[2]。

---

体内研究已在肌萎缩侧索硬化症（ALS）和转移性三阴性乳腺癌（TNBC）的临床前模型中进行了研究。作为一种可穿透血脑屏障的CSF-1R抑制剂，该化合物能够调节中枢神经系统中的小胶质细胞功能，这与ALS的研究密切相关。在癌症模型中，CSF-1R抑制可减少肿瘤相关巨噬细胞的浸润和功能，从而增强抗肿瘤免疫并抑制肿瘤生长。盐酸索妥替尼可升高肝酶并导致库普弗细胞减少，这些效应与肝脏中CSF-1R的抑制作用相符。关于该化合物的具体体内疗效数据可从描述该化合物的原始文献中获得。

BLZ945 是一种强效、口服生物活性且选择性的 CSF-1R（集落刺激因子 1 受体）抑制剂，IC50 为 1 nM，其对最接近的受体酪氨酸激酶同源物的选择性超过 1000 倍。
BLZ945 是一种对 CSF-1R 酪氨酸激酶具有高度选择性的小分子抑制剂（比其他酪氨酸激酶的选择性高 3200 倍以上；参考文献 27），本研究使用了该抑制剂。在体外阻断实验中，分别将 BLZ945 或 GW2580 溶解于 DMSO 中，配制成浓度分别为 10 mmol/L 和 1 mmol/L 的储备液。体内治疗中，BLZ945 溶解于 20% Captisol 溶液中，浓度为 16 mg/mL，并按照先前研究[3]的方法，每日以 200 mg/kg 的剂量进行灌胃给药。

---

细胞因子分析：在卡罗林斯卡大学医院核心实验室，采用 27 参数 Luminex 多重分析法分析了 SK-N-BE(2)、SK-N-AS 或 SK-N-FI 神经母细胞瘤细胞系培养基或上清液中的细胞因子含量。采用 ELISA 法测定 TCM 中人或鼠 M-CSF (CSF-1) 的浓度。[3]

---

采用激酶活性测定法评估盐酸索妥替尼对 CSF-1R 的抑制活性。将重组人 CSF-1R 激酶结构域与肽底物和 ATP 在不同浓度的测试化合物存在下进行孵育。底物的磷酸化程度可通过放射性标记的ATP（³³P-ATP）或荧光检测方法进行定量。IC50值由剂量反应曲线计算得出。对其他受体酪氨酸激酶的选择性则通过类似方法，利用一系列重组激酶进行评估。

CD34+造血祖细胞的分化[3]
在24孔板中，使用含有50 ng/mL GM-CSF和5 ng/mL TNFα的900 μL培养基进行CD34+细胞的成熟培养。或者，将上述三种人神经母细胞瘤细胞系的上清液与细胞因子以2:1的比例添加到祖细胞中。以在培养基中培养的CD34+细胞作为对照。为了阻断CSF-1R信号通路，向用细胞因子或细胞因子与SK-N-BE(2)上清液组合成熟的细胞中加入Sotuletinib (BLZ945) (500 nmol/L)。 7天后，通过洗涤和轻轻刮取收集所有细胞，并通过流式细胞术或基于CFSE的T细胞增殖实验评估细胞的表型和功能。

---

人单核细胞-肿瘤共培养[3]
根据我们已发表的方案，将原代人单核细胞与人神经母细胞瘤细胞系进行共培养。简而言之，将单核细胞与4×10⁵个SK-N-BE(2)、SK-N-AS或6×10⁵个SK-N-FI神经母细胞瘤细胞在6孔板中于3 mL培养基中共培养。未与肿瘤细胞共培养的单核细胞作为对照。64小时后，通过剧烈洗涤，然后轻轻刮取培养板收集细胞。通过流式细胞术评估细胞的表型变化，并使用微珠和MS柱分选HLA-DR+细胞。为了研究 CSF-1R 的作用，向单核细胞或共培养体系中添加了 500 nmol/L 的 Sotuletinib (BLZ945) 或 1 μmol/L 的 GW2580。

---

小鼠骨髓细胞分化[3]
根据先前描述的方案，从基因型为阴性的 TH-MYCN 小鼠中分离骨髓细胞，并诱导其分化为抑制性髓系细胞。简而言之，将 1×10⁶ 个分离的骨髓细胞接种于 6 孔板中，并在含有 NHO2A 肿瘤条件培养基 (TCM，与新鲜培养基 1:1 稀释) 的培养基中培养。作为对照，细胞在新鲜培养基中培养，或在含有 M-CSF (20 ng/mL) 的培养基中培养。为阻断 CSF-1R 信号通路，在培养物中加入浓度为 1 μmol/L 的 Sotuletinib (BLZ945) 或 GW2580，并以 DMSO 作为对照。4 天后，收集悬浮细胞并小心刮取孔中贴壁细胞，随后进行流式细胞术分析或 T 细胞抑制实验。

---

Sotuletinib 盐酸盐的细胞实验采用表达 CSF-1R 的细胞，例如巨噬细胞、小胶质细胞或转染了 CSF-1R 表达载体的细胞。将细胞用不同浓度的化合物处理特定时间。使用磷酸化特异性抗体通过蛋白质印迹法检测 CSF-1R 磷酸化水平。同时检测下游信号通路（例如 AKT、ERK 和 STAT3 磷酸化）。使用标准方法评估细胞活力、增殖和分化情况。在相关的细胞模型中评估该化合物对小胶质细胞功能的影响。

小鼠：使用游标卡尺测量肿瘤体积，计算公式为：体积 = (宽度)² × 长度/2。在 MMTV-PyMT 小鼠研究中，56-63 日龄雌性小鼠分别接受 200 mg/kg 的 sotuletinib 或 20% Captisol 溶剂。根据肿瘤大小将小鼠随机分组。每周测量两次肿瘤体积，每日灌胃给药一次。每五天腹腔注射一次大鼠 IgG 对照或 5A1 大鼠抗小鼠 CSF1 中和抗体，剂量为 10 mg/kg。将 MMTV-PyMT 转基因小鼠的福尔马林固定石蜡包埋肺组织进行连续切片，并用苏木精-伊红染色，以确定肺转移情况。肿瘤区域的评估基于肿瘤大小（肿瘤直径）、肿瘤负荷（肿瘤总面积除以肺总面积）以及以单盲方式计数的单个转移灶总数。最终值取自整个肺深度的平均值。

---

原位同种异体移植模型[2]
使用6-7周龄的雌性FVB/NJ小鼠和6-7周龄的雌性BALB/c裸鼠（CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl）。对于乳腺肿瘤病毒驱动的多瘤病毒中T抗原（MMTV-PyMT）原位同种异体移植模型，将10-13周龄雌性转基因MMTV-PyMT小鼠的自发性肿瘤混合，并用Liberase™（Roche）进行酶消化。将所得单细胞悬液立即按指定细胞剂量原位注射到同基因雌性FVB/NJ受体小鼠的单个乳腺脂肪垫中。对于CD45同种异型研究，从10-13周龄的MMTV-PyMT转基因雌性小鼠中取出自发性肿瘤，通过钝性分离法将其分割成3 mm的立方体。在雌性BALB/c裸鼠受体小鼠的乳腺脂肪垫上做一个小切口，将2个肿瘤样本放入脂肪垫内，并用手术钉封闭。5天后，重新打开伤口取出肿瘤样本。肿瘤按以下所述进行消化和分析。供体和受体小鼠在切除和植入前5天分别接受Sotuletinib (BLZ945)或载体处理，具体方法如下所述。

---

CSF1信号拮抗剂在自发性肿瘤模型中的药理学研究[2]
使用游标卡尺测量肿瘤大小，并根据公式：体积 = (宽度)² × 长度/2 计算肿瘤体积。在MMTV-PyMT小鼠研究中，将56-63日龄的雌性小鼠根据肿瘤体积随机分组，并分别给予20% Captisol®溶剂或200 mg/kg的Sotuletinib (BLZ945)。每日一次灌胃给药，每周两次测量肿瘤体积。每5天腹腔注射10 mg/kg的5A1大鼠抗小鼠CSF1中和抗体或大鼠IgG对照。为了计算MMTV-PyMT转基因小鼠的肺转移情况，将福尔马林固定、石蜡包埋的肺组织进行连续切片，并用苏木精-伊红（H&E）染色。肿瘤区域的评分依据肿瘤负荷（肿瘤总面积除以肺总面积）、大小（肿瘤直径）以及以单盲方式计数的单个转移灶总数。将这些值在整个肺组织深度范围内取平均值，得到最终值。在K14-HPV16小鼠研究中，每2个月给雌性小鼠植入缓释17β-雌二醇颗粒，以诱导宫颈和阴道上皮发生鳞状细胞癌。^43,44 小鼠在6月龄时（即报道的宫颈癌发病年龄）进行随机分组，并用Sotuletinib (BLZ945)治疗1个月。为了确定K14-HPV16转基因小鼠的宫颈肿瘤体积，将福尔马林固定、石蜡包埋的宫颈组织和肿瘤进行连续切片，以单盲方式对肿瘤面积进行评分，并将评分值乘以肿瘤深度。

---

盐酸索妥替尼的体内研究在ALS（例如SOD1-G93A转基因小鼠）和TNBC（例如小鼠异种移植模型）的动物模型中进行。该化合物通常通过灌胃或腹腔注射给药。在ALS模型中，终点包括生存分析、运动功能评估以及脊髓小胶质细胞活化和运动神经元丢失的组织病理学评估。在癌症模型中，监测肿瘤生长抑制情况。在组织中评估CSF-1R抑制的药效学标志物，包括CSF-1R磷酸化和小胶质细胞/巨噬细胞标志物。肝酶被用作库普弗细胞耗竭的标志物进行监测。

盐酸索妥替尼（分子量 434.94，分子式 C20H23ClN4O3S）的药代动力学特性已得到表征。该化合物可穿透血脑屏障，因此适用于中枢神经系统 CSF-1R 的研究。该化合物已配制成合适的载体，可用于口服或腹腔注射给药。储存建议包括：粉末在 -20°C 下储存长达 3 年，溶液在 -20°C 下储存 6 个月。包括口服生物利用度、半衰期和脑穿透率在内的完整药代动力学参数可从原始文献中获得。

盐酸索妥替尼仅供研究用途，尚未获准用于人体治疗。作为临床前开发的一部分，已开展了全面的毒理学评估，包括动物模型中的急性毒性和重复给药毒性研究。该化合物可升高肝酶并导致库普弗细胞减少，这些作用与肝脏中 CSF-1R 的抑制作用一致。这些作用将在毒理学研究中进行仔细评估。标准的安全性药理学评估将包括对免疫功能、肝功能和中枢神经系统的影响评估。

[1]. SF-1R inhibition alters macrophage polarization and blocks glioma progression. Nat Med. 2013 Oct;19(10):1264-72.

[2]. CSF1R inhibition delays cervical and mammary tumor growth in murine models by attenuating the turnover of tumor-associated macrophages and enhancing infiltration by CD8+ T cells. Oncoimmunology. 2013 Dec 1;2(12):e26968.

[3]. Targeting Suppressive Myeloid Cells Potentiates Checkpoint Inhibitors to Control Spontaneous Neuroblastoma. Clin Cancer Res (2016) 22 (15): 3849–3859.

盐酸索妥替尼是一种口服生物利用度高的集落刺激因子1受体（CSF-1R）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。CSF1R抑制剂BLZ945选择性地与肿瘤相关巨噬细胞（TAM）表面表达的CSF1R结合，阻断CSF1R活性并抑制CSF1R介导的信号转导通路。这抑制了TAM的活性和增殖，并重塑了TAM原有的免疫抑制特性。总之，这降低了肿瘤微环境中TAM介导的免疫抑制，重新激活了免疫系统，并增强了T细胞介导的抗肿瘤细胞反应。CSF1R，也称为巨噬细胞集落刺激因子受体（M-CSFR）和CD115（分化簇115），是其配体集落刺激因子1（CSF1）的细胞表面受体。该受体在肿瘤微环境中由肿瘤相关巨噬细胞 (TAM) 过度表达，并在免疫抑制和诱导肿瘤细胞增殖中发挥重要作用。

---

目的：神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外实体瘤，即使采用积极的多模式治疗，高危患者的预后仍然很差。神经母细胞瘤引起的炎症会导致抑制性髓系细胞的诱导，从而阻碍有效的抗肿瘤免疫反应。因此，我们旨在通过消除髓系细胞介导的免疫抑制来增强抗肿瘤免疫力。
实验设计：我们通过分析神经母细胞瘤患者的基因组数据集来验证髓系细胞的预后价值。本研究采用体外培养模型，利用新鲜分离的人类CD34+造血干细胞、原代人单核细胞和鼠骨髓细胞，深入分析了肿瘤来源因子对髓系造血及局部诱导抑制性髓系细胞的影响。为评估BLZ945单药治疗或联合免疫检查点抑制剂的疗效，我们使用了一种可自发发生侵袭性神经母细胞瘤的转基因小鼠模型（TH-MYCN）。
结果：我们发现浸润的CSF-1R+髓系细胞预示着神经母细胞瘤患者预后不良。体外实验表明，神经母细胞瘤来源因子干扰髓系细胞的早期发育，并通过M-CSF/CSF-1R相互作用赋予人单核细胞抑制功能。在类似于高危人类神经母细胞瘤（TH-MYCN）的转基因小鼠模型中，使用选择性抑制剂（BLZ945）拮抗CSF-1R可调节人和小鼠抑制性髓系细胞的诱导，并有效限制肿瘤进展。尽管免疫检查点抑制剂不足以控制肿瘤生长，但BLZ945与PD-1/PD-L1阻断抗体联合使用可实现更好的肿瘤控制。结论：我们的结果表明，CSF-1R信号通路在抑制性髓系细胞的诱导中起关键作用，并凸显了其作为人类癌症免疫疗法的临床潜力。[3] 肿瘤浸润巨噬细胞数量的增加与包括乳腺癌和前列腺癌在内的多种癌症患者的预后不良相关。集落刺激因子1受体（CSF1R）信号通路驱动肿瘤相关巨噬细胞（TAM）募集到肿瘤微环境，并促进TAM分化为促肿瘤表型。目前，有12项临床试验正在评估靶向CSF1/CSF1R信号通路的药物治疗多种恶性肿瘤（包括乳腺癌、白血病和胶质母细胞瘤）的疗效。研究表明，阻断CSF1R信号通路可以显著降低组织特异性的巨噬细胞数量。然而，仍需进一步研究以了解巨噬细胞减少的机制以及CSF1R抑制对其他肿瘤浸润免疫细胞的总体影响。我们使用高选择性小分子CSF1R抑制剂BLZ945发现，CSF1R抑制可降低肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的周转率，同时增加浸润宫颈癌和乳腺癌的CD8+ T细胞数量。具体而言，我们发现BLZ945可抑制小鼠乳腺肿瘤病毒驱动的多瘤病毒T抗原（MMTV-PyMT）乳腺癌模型中恶性细胞的生长。此外，我们发现BLZ945能够抑制表达角蛋白14的转基因人乳头瘤病毒16型（K14-HPV-16）宫颈癌模型中的肿瘤进展。我们的结果表明，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）以CSF1R依赖的方式持续更新，而持续抑制CSF1R通路可能是维持有效清除巨噬细胞作为抗癌疗法的关键。[2] 胶质母细胞瘤（GBM）包含多种分子亚型，包括神经前体GBM。大多数靶向胶质瘤细胞的治疗方法均以失败告终。一种替代策略是靶向胶质瘤微环境中的细胞，例如肿瘤相关巨噬细胞和小胶质细胞（TAMs）。巨噬细胞的分化和存活依赖于集落刺激因子-1（CSF-1）。我们使用 CSF-1 受体 (CSF-1R) 抑制剂靶向神经前体胶质母细胞瘤 (GBM) 小鼠模型中的肿瘤相关巨噬细胞 (TAM)，结果显著延长了小鼠的生存期并导致已形成的肿瘤消退。此外，CSF-1R 阻断还减缓了患者来源的胶质瘤异种移植瘤的颅内生长。令人惊讶的是，在接受治疗的小鼠中，肿瘤相关巨噬细胞 (TAM) 的数量并未减少。相反，胶质瘤分泌的因子，包括粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 和干扰素-γ (IFN-γ)，在 CSF-1R 抑制的情况下促进了 TAM 的存活。存活的 TAM 中替代激活的 M2 标志物的表达降低，这与肿瘤促进功能受损相一致。这些基因特征与神经祖细胞胶质母细胞瘤 (GBM) 患者的生存期延长相关。我们的研究结果表明，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）是神经祖细胞胶质瘤的一个有前景的治疗靶点，并证实了CSF-1R抑制剂在胶质母细胞瘤（GBM）治疗中的巨大潜力。[1]

---

盐酸索妥替尼（BLZ945盐酸盐）是一种强效、选择性强且能穿透血脑屏障的CSF-1R（c-Fms）抑制剂，其IC50值为1 nM。该化合物对其最接近的受体酪氨酸激酶同源物的选择性超过1000倍。CSF-1R是一种受体酪氨酸激酶，在巨噬细胞、小胶质细胞和破骨细胞的存活、增殖和分化中发挥着关键作用。目前，盐酸索妥替尼正被研究用于治疗肌萎缩侧索硬化症（ALS）和转移性三阴性乳腺癌（TNBC）。该化合物可升高肝酶并导致库普弗细胞减少，这些作用与 CSF-1R 抑制作用一致。盐酸索妥替尼的纯度 >98%，可用于研究用途。

C20H23CLN4O3S

434.94

434.117

C, 55.23; H, 5.33; Cl, 8.15; N, 12.88; O, 11.04; S, 7.37

2222138-31-8

Sotuletinib;953769-46-5;Sotuletinib dihydrochloride;2222138-40-9

141759984

Light yellow to brown solid powder

125

4

7

5

29

540

2

N([C@@H]1CCCC[C@H]1O)C1=NC2=CC=C(C=C2S1)OC1=CC=NC(=C1)C(=O)NC.Cl

IHWOVMRZEIHNGY-SATBOSKTSA-N

InChI=1S/C20H22N4O3S.ClH/c1-21-19(26)16-10-13(8-9-22-16)27-12-6-7-15-18(11-12)28-20(24-15)23-14-4-2-3-5-17(14)25;/h6-11,14,17,25H,2-5H2,1H3,(H,21,26)(H,23,24);1H/t14-,17-;/m1./s1

4-((2-(((1R,2R)-2-hydroxycyclohexyl)amino)benzo[d]thiazol-6-yl)oxy)-N-methylpicolinamide hydrochloride

Sotuletinib HCl; Sotuletinib hydrochloride, Sotuletinib monohydrochloride; QJE0UTG9TS; BLZ-945 dihydrochloride; SOTULETINIB DIHYDROCHLORIDE; UNII-QJE0UTG9TS; 2222138-40-9; Sotuletinib (dihydrochloride); 2-Pyridinecarboxamide, 4-((2-(((1R,2R)-2-hydroxycyclohexyl)amino)-6-benzothiazolyl)oxy)-N-methyl-, hydrochloride (1:2); Sotuletinib dihydrochloride?; BLZ945; BLZ 945; BLZ-945;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~100 mg/mL (~229.92 mM)
DMSO : ~100 mg/mL (~229.92 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。