(+)-Bicuculline   中文名称: 必扣扣灵

GABAA receptor (IC50 = 2 μM); (+)-Bicuculline is a competitive antagonist of the GABAA receptor (gamma-aminobutyric acid type A receptor) . It inhibits GABA-induced currents by binding to the GABA recognition site on the receptor in a reversible manner . In electrophysiological studies, it shows an IC50 of 9 μM for inhibiting recombinant α1β1γ2 GABAA channels activated by 3 μM GABA, while its effective concentration range in various assays is typically 1–100 μM . The compound does not target GABAB receptors, which are metabotropic G-protein coupled receptors .

BicucuLline（1 和 3 μM）（(+)-BicucuLline；d-BicucuLline）对 GABA 产生最高的反应。 BicucuLline 是 α1β2η2L GABAA 受体的竞争性拮抗剂，因为它平行地将 GABA 剂量反应曲线向右移动，而不降低 GABA 最大反应 [3]。

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在首次发表其作为抑制性神经递质GABA受体拮抗剂的作用40多年后，痉挛性生物碱BicuuLline继续被研究。这一历史视角突出了发现荷包牡丹碱作为GABA拮抗剂的关键方面，以及对这种和其他GABA拮抗剂持续的兴趣。GABA受体的分子生物学、药理学和生理学的令人兴奋的进展为发现新的拮抗剂提供了持续的刺激，这些拮抗剂对无数GABA受体亚类的选择性越来越高。与荷包牡丹碱结构无关的有趣GABA拮抗剂包括加巴嗪、亚水杨基水杨酰肼、RU5135和4-（3-联苯基-5-（4-哌啶基）-3-异恶唑。荷包牡丹碱成为GABAA受体的基准拮抗剂，但并非所有离子型GABA受体都对荷包牡丹素敏感。此外，并非所有GABAA受体拮抗剂都是惊厥药。因此，随着GABA受体研究的发展，仍然会有惊喜。[1]

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小电导钙激活钾通道（SK通道）仅由细胞内钙离子门控，其活性是许多可兴奋细胞中动作电位后缓慢后超极化（AHP）的原因。脑切片研究通常使用GABAA（γ-氨基丁酸）受体拮抗剂BicuuLine（bicuulline-m）的甲基衍生物来减少GABA能突触的强直性抑制作用，或研究这些突触在专门神经网络中的作用。然而，最近的证据表明，荷包牡丹碱-m可能对GABAA受体没有特异性，也可能阻断缓慢的AHP。因此，在爪蟾卵母细胞中表达后，研究了荷包牡丹碱-m对克隆的apamin敏感SK2和apamin不敏感SK1通道的影响。结果表明，在用于切片记录的浓度下，当应用于外向贴片时，荷包牡丹碱-m能有效阻断apamin敏感的SK2电流和apamin不敏感的SK1电流。Apamin不敏感的SK1电流在切除的斑块中下降。补丁切除后，荷包牡丹碱-m阻断的效力也随着时间的推移而降低。定点突变改变SK1孔外前庭中的两个残基，赋予apamin敏感性，也减少了贴片中电流的下降，并赋予了与SK2无法区分的荷包牡丹碱-m稳定的敏感性。因此，在切片记录中使用荷包牡丹碱-m可能会掩盖对apamin敏感的缓慢AHPs，而这些AHPs是神经元兴奋性的重要决定因素。此外，荷包牡丹碱-m不敏感的慢AHPs可能表明潜在的通道已经耗尽。2.

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倍半萜三内酯白果内酯是50:1银杏叶提取物的活性成分之一，广泛用于增强记忆和学习。发现白果内酯可以拮抗γ-氨基丁酸（GABA）对重组α（1）β（2）γ（2L）GABA（A）受体的直接作用。采用双电极电压钳法评估了白果内酯对非洲爪蟾卵母细胞中表达的α（1）β（2）γ（2L）GABA（A）受体GABA直接作用的影响，并将其与经典的GABA（A）受体竞争性拮抗剂BicuuLline和非竞争性拮抗物苦味毒素的影响进行了比较。白果内酯（IC（50）=4.6+/-0.5微M）在α（1）β（2）γ（2L）GABA（A）受体上对40微M GABA（GABA EC（50））的效力几乎与荷包牡丹碱和苦托毒素（IC（50%）分别为2.0+/-0.1和2.4+/-0.5微m）一样强。虽然白果内酯和苦味毒素显然是非竞争性拮抗剂，但白果内酯的效力在高GABA浓度下会降低，这表明存在竞争性拮抗作用[3]。

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荷包牡丹碱、苦味毒素和白果内酯剂量依赖性地抑制了40μM GABA产生的Cl-电导（图2A-C）。当这些化合物在100μM下单独使用时，没有观察到任何影响。图3A–E分别显示了苦毒毒素和白果内酯对10μM GABA（EC10）、40μM GABA和100μM GABA的抑制剂量-反应曲线。图3B还包括荷包牡丹碱对40μM GABA的抑制剂量-反应曲线（EC50）。表1列出了每种化合物的IC50和nH值。[3]

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在1和3μM荷包牡丹碱存在下的GABA浓度-效应曲线（图5A和B）显示了平行的右移，并达到了GABA的最大反应。在1和3μM荷包牡丹碱存在下，GABA反应分别为GABA最大反应的99.5%（P=0.9415）和101.0%（P=0.0702）（表2）。1和3μM的荷包牡丹碱增加了GABA EC50值：分别为1.6倍（41.0-67.0μM）和3.6倍（36.1-129.0μM）（表2）。Bicuulline似乎使GABA的剂量-反应曲线平行向右移动，而不会降低GABA的最大反应，这表明它是α1β2γ2L GABAA受体的竞争性拮抗剂[3]。

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(+)-荷包牡丹碱是一种强效的GABAA受体竞争性拮抗剂。在放射性配体结合实验中，它通过置换与大鼠脑膜结合的[³H]muscimol，显示出其与GABA识别位点结合的能力 。在全细胞膜片钳记录中，荷包牡丹碱以浓度依赖的方式竞争性拮抗GABA诱导的内向氯电流，使GABA的浓度-效应曲线平行右移而不影响最大反应 。其阻断GABAA诱导电流的IC50约为1–3 μM 。(+) -荷包牡丹碱的拮抗作用是可逆的，增加GABA浓度可克服其效应 。在牛嗜铬细胞中，荷包牡丹碱通过膜片钳技术记录，抑制了GABA诱发的跨膜氯电流 。

荷包牡丹碱/BicucuLline可用于动物建模中创建惊厥模型。[5]

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在258只出生后第3天至第22天的未成熟大鼠中研究了γ-氨基丁酸（GABA）拮抗剂BicucuLline/荷包牡丹碱的作用。行为和皮层电图事件相关。早在出生后第三天，BicucuLline/荷包牡丹碱就诱导了行为和心电图癫痫发作，此时荷包牡丹素的CD50最低，因此对它的敏感性最高。因此，对于出生后第一周涉及大鼠的癫痫研究，荷包牡丹碱可能是一种合适的惊厥药[4]。

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(+)-荷包牡丹碱的体内效应高度依赖于剂量和给药途径。全身给药（例如腹腔注射3 mg/kg）通过阻断全脑的GABA能抑制，发挥强效的中枢神经系统惊厥作用，在动物模型中诱导强直-阵挛性癫痫发作和癫痫持续状态 。然而，研究发现，将荷包牡丹碱甲碘化物局部注射到特定脑区（如纹状体）可产生意外的抗惊厥作用，保护大鼠免受全身性荷包牡丹碱或其他惊厥药诱导的癫痫发作，表明GABA能信号在癫痫发生和抑制中具有复杂的、区域特异性的作用 。此外，直接注射到丘脑网状核已被证明能增强神经元的低阈值钙峰爆发，该效应是通过阻断小电导钙激活钾通道而非GABAA受体介导的 。

GABAA受体的放射性配体结合实验： 为评估荷包牡丹碱的结合亲和力，可采用置换放射性配体的标准方案。从大鼠脑（通常是大脑皮层）中通过匀浆和离心分离出膜制备物。然后将膜制备物与固定浓度的[³H]muscimol和不同浓度的(+) -荷包牡丹碱一起孵育。非特异性结合通过在过量的未标记GABA或高浓度荷包牡丹碱存在下确定。孵育后，通过快速过滤到玻璃纤维滤膜上分离结合和游离的放射性配体，并用液体闪烁计数仪测量滤膜上残留的放射性。然后可计算出(+) -荷包牡丹碱置换50%特异性结合的[³H]muscimol所需的浓度（IC50）。

电生理记录[3]
注射后2-8天，用双电极电压钳技术测量受体活性。记录微电极用微量移液器制造，并填充3 M KCl溶液。将卵母细胞置于细胞浴中，电压钳制在-60 mV。细胞持续用ND96缓冲液超灌。在Macintosh Quadra 605计算机上，使用Geneclamp 500放大器、Mac Lab 2e记录器和Chart 3.5.2版程序记录了药物应用引起的电流。测试了药物对GABAA受体GABA的直接激活。为了测量药物对受体激活的抑制作用，将药物加入含有GABA的缓冲溶液中，其浓度在受体处产生10%、50%、75%、90%和100%的效果（GABA EC10、EC50、EC75、EC90和EC100），以构建GABA抑制剂量-反应曲线。采用相同的程序，但拮抗剂浓度固定，GABA浓度增加，构建GABA剂量-反应曲线。每次用药之间允许3-5分钟的洗脱期，以防止受体脱敏。

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基于细胞的(+)-荷包牡丹碱实验通常采用电生理技术而非传统的细胞活力测定。全细胞膜片钳记录： 将表达GABAA受体的细胞（如HEK293细胞或原代神经元）在钳制电压（通常接近氯离子反转电位）下进行电压钳制。通过快速灌流系统将GABA快速施加到细胞上以诱发内向电流。为测试拮抗作用，细胞先用(+) -荷包牡丹碱短时预孵育，然后与GABA共同施加。测量在荷包牡丹碱存在下峰值电流幅度的降低。通过在存在和不存在固定浓度荷包牡丹碱的情况下施加一系列GABA浓度，并绘制所得的浓度-效应曲线，可以确定拮抗作用的竞争性质，因为荷包牡丹碱会引起GABA剂量-效应曲线平行右移而不降低最大反应 。

非洲爪蟾卵母细胞中α1β2γ2L GABAA受体的表达[3]
雌性非洲爪蟾用0.17% 3-氨基苯甲酸乙酯生理盐水麻醉，并手术切除卵巢的一部分。将卵巢部分用含有82.5 mM NaCl、2 mM KCl、1 mM MgCl2·6H2O、5 mM HEPES、pH 7.4的OR-2缓冲液冲洗，然后悬浮于胶原酶A溶液（2 mg/ml，溶于OR-2缓冲液）中2小时，以将卵母细胞与结缔组织和卵泡细胞分离。释放的卵母细胞用添加了2.5 mM丙酮酸钠、0.5 mM茶碱和50 μg/ml庆大霉素的ND96缓冲液彻底冲洗，并收集V至VI期卵母细胞。将亚克隆到pcDM8载体中的人α1、β2和γ2L cDNA用限制性内切酶NOT1线性化。含有α1、β2和γ2L cDNA的线性化质粒用T7 RNA聚合酶进行转录，并使用“mMESSAGE mMACHINE”试剂盒进行5,7-甲基鸟苷加帽。使用Nanoject注射器，通过直径为15–20 μm的微量移液器，将10 ng/50 nl的α1、β2和γ2L cRNA 1:1:1混合物注射到单个去卵泡卵母细胞的细胞质中。卵母细胞在 ND96 缓冲液中于 16 °C 的轨道摇床上孵育，每日更换两次缓冲液。

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药代动力学研究[6]
使用雄性 Sprague-Dawley 大鼠（200–220 g）。实验前 12 小时禁食，但可自由饮水。分别于给予 比库库林（15 mg/kg）后 0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5 和 6 小时，从尾静脉采集血样（0.3 mL）至肝素化 1.5 mL 聚乙烯管中。血样立即以 3000 g 离心 10 分钟。所得血浆（100 μL）储存于 -20 °C 直至分析。使用 DAS（药物和统计）软件分析每只大鼠血浆中比库库林浓度随时间的变化。

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大鼠癫痫诱导与评估模型： 为研究系统性惊厥活性，通常使用成年大鼠（如Sprague-Dawley或Wistar品系）。(+) -荷包牡丹碱配制成溶液（例如，溶于少量0.1 N HCl，用生理盐水稀释，并调节pH至约3.0）。动物接受单次腹腔注射，剂量为3 mg/kg。给药后，立即将动物放入干净、透明的笼子中进行观察。在标准观察期内（例如30-60分钟）记录癫痫发作的潜伏期、持续时间和严重程度。癫痫发作的严重程度通常采用改良的Racine量表进行评分。在一些模型中，可能会使用亚惊厥剂量（<3 mg/kg）来降低癫痫发作阈值，以测试潜在的抗惊厥药物。需要注意的是，荷包牡丹碱对光敏感，应现用现配并避光保存 。

比库啉是一种邻苯二甲酰异喹啉生物碱，目前因其作为γ-氨基丁酸（GABA）拮抗剂而备受关注。本研究建立了一种简便灵敏的液相色谱-质谱联用方法，用于测定大鼠血浆中比库啉的浓度，检测范围为5-500 ng/mL。以咪达唑仑为内标，采用乙腈-甲醇（9:1，v/v）进行蛋白质沉淀作为样品前处理。色谱分离在Zorbax SB-C18（2.1 mm × 150 mm，5 μm）色谱柱上进行，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，采用梯度洗脱。电喷雾电离（ESI）源在正离子模式下运行；选择离子监测（SIM）模式用于定量分析，目标碎片离子分别为m/z 368（比库啉）和m/z 326（内标）。线性校准的相关系数 r > 0.99。精密度测量的变异系数 (CV) 小于 13%。该方法的准确度为 93.6% 至 100.5%。血浆中比库啉的平均回收率为 80.5% 至 91.8%。该方法已成功应用于大鼠灌胃给予 15 mg/kg 比库啉后的药代动力学研究。[6]

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荷包牡丹碱的药代动力学特性主要在大鼠模型中通过静脉和灌胃给药进行了表征。该化合物吸收迅速，但从体循环中消除也很快 。它具有中等的血浆蛋白结合率和较低的口服生物利用度，表明其存在广泛的首过代谢或胃肠道吸收不良 。值得注意的是，荷包牡丹碱能够穿过血脑屏障，从而发挥其中枢神经系统效应。全身给药后，其主要分布组织是肾脏、肝脏和大脑，这些器官血流量高，化合物可能在此蓄积和代谢 。

毒性概述
比库啉主要作用于离子型GABAA受体，该受体是配体门控离子通道，主要负责氯离子跨细胞膜的转运，从而对靶神经元产生抑制作用。这些受体是苯二氮卓类药物及相关抗焦虑药物的主要靶点。比库啉对GABAA受体的半数抑制浓度（IC50）为3 μM。除了是一种强效的GABAA受体拮抗剂外，比库啉还可用于阻断Ca2+激活的钾通道。国际药理学联合会（IUPHAR）将对比库啉的敏感性定义为GABAA受体定义的主要标准之一。

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小鼠腹腔注射LD50为8480 μg/kg，《当代毒理学》，1(199)，1993

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(+)-荷包牡丹碱最显著的毒性是其强效的中枢神经系统兴奋活性，表现为在仅略高于受体阻断所需剂量时即可诱发惊厥和癫痫 。这种致惊厥效应是其作为GABAA受体拮抗剂的目标药理学作用的直接后果，也是其在研究应用中的剂量限制性毒性。例如，腹腔注射3 mg/kg的剂量足以在大鼠中诱导强直-阵挛性惊厥和癫痫持续状态 。除这种急性神经毒性外，现有研究文献中未详细提供关于慢性毒性、遗传毒性或器官特异性毒性（如肝毒性）的具体数据，因为荷包牡丹碱几乎完全作为急性研究工具而非治疗候选药物使用。

[1]. Johnston GA. Advantages of an antagonist: bicuculline and other GABA antagonists. Br J Pharmacol. 2013;169(2):328-336.

[2]. Bicuculline block of small-conductance calcium-activated potassium channels. Pflugers Arch. 1999;438(3):314-321.

[3]. Bilobalide, a sesquiterpene trilactone from Ginkgo biloba, is an antagonist at recombinant alpha1beta2gamma2L GABA(A) receptors. Eur J Pharmacol. 2003;464(1):1-8.

[4]. Bicuculline induced seizures in infant rats: ontogeny of behavioral and electrocortical phenomena. Brain Res Dev Brain Res. 1990 Dec 15;57(2):291-5.

[5]. Induction of immediate early gene encoded proteins in the rat hippocampus after bicuculline-induced seizures: differential expression of KROX-24, FOS and JUN proteins. Neuroscience. 1992;48(2):315-24.

[6]. Determination of bicuculline in rat plasma by liquid chromatography mass spectrometry and its application in a pharmacokinetic study. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2014 Mar 15:953-954:143-6.

比库库林是一种苄基异喹啉生物碱，其化学名称为6-甲基-5,6,7,8-四氢[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]异喹啉，其5-pro-S位被(6R)-8-氧代-6,8-二氢呋喃并[3,4-e][1,3]苯并二氧杂环戊烯-6-基取代。它是一种光敏性GABA_A受体竞争性拮抗剂。比库库林最初于1932年在植物生物碱提取物中被发现，并已从荷包牡丹（Dicentra cucullaria）、茯苓（Adlumia fungosa）、紫堇科植物和多种延胡索属植物中分离得到。它可用作农用化学品、中枢神经系统兴奋剂、GABA门控氯离子通道拮抗剂、神经毒素和GABA_A受体拮抗剂。它是一种异喹啉生物碱，属于异喹啉类化合物和苄基异喹啉生物碱。
比库库林是一种光敏性GABAA受体竞争性拮抗剂。它最初于1932年在植物生物碱提取物中被发现，并已从荷包牡丹（Dicentra cucullaria）、茯苓（Adlumia fungosa）、紫堇科（Fumariaceae）植物和几种延胡索属（Corydalis）植物中分离得到。
据报道，延胡索（Corydalis repens）、匍匐延胡索（Corydalis decumbens）和其他一些有相关数据的生物体中也发现了比库库林。
比库库林是一种光敏性GABAA受体竞争性拮抗剂。它最初于1932年在植物生物碱提取物中被发现，并已从荷包牡丹（Dicentra cucullaria）、茯苓（Adlumia fungosa）、紫堇科（Fumariaceae）植物和几种延胡索属（Corydalis）植物中分离得到。由于比库库林能阻断GABA受体的抑制作用，其作用类似于癫痫。世界各地的实验室利用这一特性进行癫痫的体外研究，通常是在啮齿动物脑片制备的海马或皮层神经元中进行研究。该化合物也常用于分离谷氨酸能（兴奋性氨基酸）受体功能。
比库库林是一种从荷包牡丹和其他植物中提取的异喹啉生物碱。它是GABA-A受体的竞争性拮抗剂。

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采用特异性抗血清进行免疫细胞化学染色，以评估大鼠海马在比库库林诱导癫痫发作15分钟后，六种即刻早期基因编码蛋白（KROX-24、c-FOS、FOS B、c-JUN、JUN B和JUN D）的区域表达水平。在长达24小时的不同发作后恢复期，对背侧海马的连续切片进行了检查。结果表明，即刻早期基因的合成和积累呈现出复杂的时空模式。在齿状回中，可以最明显地区分出三类主要的即刻早期基因产物：KROX-24和c-FOS的表达水平在发作终止后2小时迅速升高，并在8小时内恢复至基线水平。FOS B、c-JUN和JUN B的表达水平则较为缓慢地升高，在齿状回中于发作终止后4小时达到峰值。这些即刻早期基因产物在长达24小时的时间内，在不同的海马亚群中均表现出高于正常水平的表达。JUN D的表达出现时间最晚，且伴有癫痫发作诱导的免疫反应性持续升高。尽管各个转录因子的表达时间存在差异，但所有检测的即刻早期基因编码蛋白在海马亚群中的诱导顺序均相同：首先在齿状回颗粒细胞中诱导，随后依次在CA1和CA3神经元中诱导。我们的数据表明，癫痫持续状态后，大脑中几种即刻早期基因编码蛋白的合成存在异步性。FOS和JUN蛋白通过同源或异源二聚体复合物在AP-1和其他DNA结合位点发挥作用。不同即刻早期基因产物的表达时间进程差异强烈提示，在癫痫持续状态后的不同时间点，不同的AP-1复合物发挥作用。体外研究表明，不同的AP-1复合物具有不同的DNA结合亲和力以及不同的转录调控效应。我们的结果表明，这些分子机制在体内也有效。[5]

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比库啉是GABAA受体的竞争性拮抗剂（Akaike等，1985）。比库啉对 GABAA 受体的竞争性拮抗作用和苦味素对 GABAA 受体的非竞争性拮抗作用，在人 α1β2γ2L 亚基组合中也有体现。在 α1β2γ2L GABAA 受体上，比库啉表现出竞争性拮抗剂的一般特性，使 GABA 浓度-效应曲线平行移动，且对 GABA 的最大反应没有影响。[3]

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(+)-荷包牡丹碱（NSC 3219）的分子式为C20H17NO6，分子量为367.4，研究级化合物的纯度>99%（HPLC）。该化合物对光敏感，通常以粉末形式在-20°C、避光条件下储存，可稳定保存长达3年 。其IUPAC名称为[R-(R,S)]-6-(5,6,7,8-四氢-6-甲基-1,3-二氧杂环戊烯并[4,5-g]异喹啉-5-基)呋喃[3,4-e]-1,3-苯并二氧杂环戊烯-8(6H)-酮 。虽然它是一种经典的GABAA拮抗剂，但研究表明，荷包牡丹碱的季铵衍生物（如荷包牡丹碱甲碘化物、荷包牡丹碱甲氯化物）也能直接阻断小电导钙激活钾通道，这是一种在解释实验结果时应考虑的脱靶效应 。

C20H17NO6

367.35

367.105

C, 65.39; H, 4.66; N, 3.81; O, 26.13

485-49-4

38641-83-7；66016-70-4

10237

Off-white to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

542.3±50.0 °C at 760 mmHg

196-198 ºC

281.8±30.1 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.665

2.88

66.46

0

7

1

27

615

2

CN1CCC2=CC3=C(C=C2[C@H]1[C@H]4C5=C(C6=C(C=C5)OCO6)C(=O)O4)OCO3

IYGYMKDQCDOMRE-ZWKOTPCHSA-N

InChI=1S/C20H17NO6/c1-21-5-4-10-6-14-15(25-8-24-14)7-12(10)17(21)18-11-2-3-13-19(26-9-23-13)16(11)20(22)27-18/h2-3,6-7,17-18H,4-5,8-9H2,1H3/t17-,18+/m0/s1

(R)-6-((S)-6-methyl-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-yl)-[1,3]dioxolo[4,5-e]isobenzofuran-8(6H)-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。