Proteasome (IC50 = 5 nM)

体外活性：Carfilzomib 抑制多种细胞系和患者来源的肿瘤细胞（包括多发性骨髓瘤）的增殖，并诱导内在和外在的细胞凋亡信号通路以及 c-Jun-N 末端激酶 (JNK) 的激活。与硼替佐米相比，卡非佐米具有增强的抗 MM 活性，克服了对硼替佐米和其他药物的耐药性，并与地塞米松 (Dex) 具有协同作用。卡非佐米对 β5 亚基中的 ChT-L 活性具有优先的体外抑制效力，在 10 nM 剂量下抑制率超过 80%。短时间暴露于低剂量卡非佐米会导致β5组成型20S蛋白酶体和β5i免疫蛋白酶体亚基的优先结合特异性。用卡非佐米脉冲的 ANBL-6 细胞中 caspase 活性的测量显示，8 小时后 caspase-8、caspase-9 和 caspase-3 活性显着增加，分别比对照增加 3.2、3.9 和 6.9 倍8小时后的细胞。在卡非佐米脉冲处理的细胞中，线粒体膜完整性降低至 41% (Q1 + Q2)，而在媒介物处理的对照细胞中为 75%。在另一项研究中，卡非佐米还显示出针对血液系统和实体恶性肿瘤的临床前有效性。卡非佐米直接抑制破骨细胞形成和骨吸收。激酶测定：将 ANBL-6 细胞（2 × 106/孔）接种于 96 孔板中，并用 0.001 至 10 μM 剂量的卡非佐米处理 1 小时。然后裂解细胞（20 mM Tris-HCl、0.5 mM EDTA），并将澄清的裂解物转移至聚合酶链式反应 (PCR) 板。使用未处理的 ANBL-6 细胞裂解物生成标准曲线，起始浓度为 6 μg 蛋白质/μL。活性位点探针[生物素-(CH2)4-Leu-Leu-Leu-环氧酮；添加20 μM]并在室温下孵育1小时。然后通过添加 1% 十二烷基硫酸钠 (SDS) 并加热至 100°C 使细胞裂解物变性，然后在 96 孔多屏 DV 板中与每孔 20 μL 链霉亲和素-琼脂糖高性能珠混合并孵育 1 小时。然后用酶联免疫吸附测定 (ELISA) 缓冲液（PBS、1% 牛血清白蛋白和 0.1% Tween-20）洗涤这些珠子，并在平板摇床上与蛋白酶体亚基抗体在 4°C 下孵育过夜。使用的抗体包括小鼠单克隆抗β1、抗β2、抗β1i和抗β5i、山羊多克隆抗β2i和兔多克隆抗β5（针对KLH-CWIRVSSDNVADLHDKYS肽的亲和纯化抗血清）。洗涤珠子并与辣根过氧化物酶缀合的二抗山羊抗兔、山羊抗小鼠或兔抗山羊抗体一起孵育 2 小时。清洗后，使用 Supersignal ELISA 皮化学发光底物对珠子进行显色。进行发光检测。通过与标准曲线比较，将原始发光转换为μg/mL，并表示为相对于载体对照的抑制百分比。使用以下非 S 型剂量反应方程生成曲线拟合：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1 + 10̂((LogEC50 − X) × HillSlope))，其中 X 是浓度的对数，Y 是 %抑制作用，EC50是显示50%效果的剂量。细胞测定：WST-1 用于测定蛋白酶体抑制剂卡非佐米对细胞增殖的影响。相对于仅接受媒介物的平行对照细胞计算增殖抑制。使用 XLfit 4 软件，使用线性样条函数插值中值抑制浓度 (IC50)。耐药程度（DOR）的计算公式为：DOR = IC50（耐药细胞）/IC50（敏感细胞）。将用 100 nM 卡非佐米脉冲的 ANBL-6 细胞洗涤并悬浮在含有 5 μg/mL JC-1 的 PBS 中，JC-1 在线粒体中表现出电位依赖性积累。在 FacScan 上对从 525 nm 到 590 nm 的线粒体膜电位依赖性色移进行分析，并使用 CellQuest 软件对数据进行分析。

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随着硼替佐米（一种用于复发/难治性多发性骨髓瘤（MM）的第一类可逆蛋白酶体抑制剂）的批准，蛋白酶体已成为癌症治疗的重要靶点。然而，许多患者的疾病对硼替佐米没有反应，而另一些患者则产生了耐药性，这表明需要其他活性增强的抑制剂。因此，我们评估了一种新型的、不可逆的、与环氧霉素相关的蛋白酶体抑制剂Carfilzomib。在多发性骨髓瘤模型中，该药物能有效结合并特异性抑制胰凝乳蛋白酶样蛋白酶体和免疫蛋白酶体的活性，导致泛素化底物的积累。Carfilzomib诱导了剂量和时间依赖性的增殖抑制，最终导致细胞凋亡。程序性细胞死亡与c-Jun-N-末端激酶的激活、线粒体膜去极化、细胞色素c的释放以及内源性和外源性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶途径的激活有关。该药物还抑制了患者来源的MM细胞和其他血液系统恶性肿瘤患者的肿瘤细胞的增殖并激活了凋亡。重要的是，与硼替佐米相比，carfilzomib显示出更高的疗效，并且对硼替佐米布耐药的MM细胞系和临床硼替佐密布耐药患者的样本具有活性。Carfilzomib还克服了对其他常规药物的耐药性，并与地塞米松协同作用以增强细胞死亡。综上所述，这些数据为carfilzomib在多发性骨髓瘤中的临床评估提供了理论基础。[1]

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连续或生理性短暂给予Carfilzomib或丙佐米在体外对人MM细胞具有细胞毒性。在48小时的连续药物孵育下，Carfilzomi和丙佐米对10个与硼替佐米相似的人MM细胞系产生了细胞毒性作用。与之前的报告一致，硼替佐米的IC50约为2 nM，卡氟佐米为3 nM，丙佐米为25 nM（图1a）。然而，药代动力学数据表明，口服丙佐米后体内暴露于药物约4小时，静脉注射卡氟佐米或硼替佐米后约1小时。为了在体外更准确地复制这种生理情况，细胞用丙佐米短暂处理4小时，用卡氟佐米或硼替佐米处理1小时，然后在无药物培养基中再培养48小时。在短期治疗条件下，骨髓瘤细胞系仍然容易受到蛋白酶体抑制（图1b），尽管需要增加剂量才能达到类似的疗效（8 nM硼替佐米、6 nM卡氟佐米和50 nM丙佐米）。有效瞬时剂量仍远低于患者达到的最大血清水平（Cmax）（硼替佐米：0.162μM（静脉注射1.3mg/m2）；卡氟佐米：0.95μM（静脉注射20mg/m2）；丙佐米：3.8μM（口服30mg））。carfilzomib和丙佐米降低MM存活率的原因是抑制增殖和诱导凋亡（数据未显示），这与之前检查这些PI的报告一致。
阿曲佐米和卡氟佐米在体外抑制OC分化和功能。 Carfilzomib和丙佐米在体外促进成骨分化和矿化[3]。

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在套细胞淋巴瘤（MCL）细胞中，体外和体内检测了蛋白酶体抑制剂Carfilzomib与组蛋白脱乙酰酶（HDAC）抑制剂vorinostat和SNDX-275之间的相互作用。将极低、毒性轻微的卡氟佐米布浓度（如3-4nmol/L）与最低致死浓度的伏利诺司他或SNDX-275联合给药，可诱导多个MCL细胞系和原代MCL细胞的线粒体损伤和凋亡急剧增加。致死性增强与c-jun-NH，-激酶（JNK）1/2激活、DNA损伤增加（诱导λH2A.X）以及ERK1/2和AKT1/2失活有关。联合使用carfilzomib和组蛋白脱乙酰酶抑制剂（HDACI）可显著增加活性氧（ROS）的产生和G（2）-M阻滞。值得注意的是，自由基清除剂四（4-苯甲酸）卟啉（TBAP）阻断了carfilzomib/HDACI介导的ROS产生λH2A。X形成、JNK1/2激活和致死性。JNK1/2的遗传（短发夹RNA）敲除显著减轻了carfilzomib/HDACI诱导的细胞凋亡，但并不能阻止ROS的产生或DNA损伤。Carfilzomib/HDACI方案对硼替佐米耐药的MCL细胞也有活性[4]。

卡非佐米/Carfilzomib在体内异种移植模型中适度降低肿瘤生长。在连续或短暂的模拟治疗后，卡非佐米可有效降低多发性骨髓瘤细胞的活力。卡非佐米可增加非肿瘤小鼠的骨小梁体积，减少骨吸收并增强骨形成。

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基于环氧酮的PI对非荷瘤小鼠具有骨合成代谢作用[3]
体外证据表明，PI对OC和OB都有细胞自主作用。为了检查它们对非骨髓瘤骨的影响，将PI给药于非荷瘤免疫活性C57Bl/6小鼠两周。与硼替佐米相似，Carfilzomib或丙佐米治疗可增加骨小梁参数（图5a和b）。通过骨吸收导致的胶原蛋白分解产物（羧基末端端肽-胶原蛋白交联）的血清水平降低来衡量，所有三种PI都相对抑制了OC功能（图5c）。此外，与对照组相比，所有药物都显著增加了OB活性，这是通过血清中I型前胶原N-末端前肽（骨形成的标志物）水平的升高来衡量的（图5d）。值得注意的是，carfilzomib对I型前胶原N端前肽的增加明显大于硼替佐米。一致的是，双钙黄绿素标记表明PI增加了骨形成率（图5e）。这些数据表明，基于环氧酮的PIs carfilzomib和丙佐米通过合成代谢和抗分解代谢特性增强健康小鼠的骨体积，这些特性与硼替佐米相当甚至优于硼替佐密。

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Carfilzomib和丙佐米可减轻MM肿瘤负担，保护小鼠免受骨破坏[3]
为了研究carfilzomib和丙佐米联合治疗已建立的骨髓瘤的抗肿瘤和保骨作用，我们利用了两种体内小鼠模型。将5TGM1-GFP小鼠骨髓瘤细胞静脉注射到免疫功能正常的同基因C57Bl/KaLwRij小鼠体内，在28天内产生具有明显骨破坏的播散性肿瘤。51,52个5TGM1肿瘤建立了14天，之后按照与每种药物临床剂量相关的时间表给药硼替佐米、卡氟佐米或丙佐米（见材料和方法）。根据克隆型抗体IgG2b的血清水平（图6a）或由表达GFP的肿瘤细胞组成的BM或脾脏的百分比（图6b和c），所有PI均显著降低了肿瘤负担。所有PI治疗组的microCT对肿瘤诱导的骨丢失的保护作用都很明显（图6d和e），骨转换的血清标志物显示出显著的抗吸收（图6f）和骨合成代谢（图6g）作用。值得注意的是，尽管PI内的差异没有统计学意义，但与硼替佐米相比，卡非佐米和丙佐米观察到I型前胶原活性N端前肽增加的趋势。

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Carfilzomib/vorinostat方案在体内Granta异种移植物模型中的体内活性[4]
为了评估carfilzomib/vorinostat方案的体内活性，采用了类似于我们描述的DLBCL模型的Granta萤光细胞异种移植物侧翼模型（24）。动物侧腹接种10×106个细胞，肿瘤出现后，用2.0mg/kg carfilzomib（IV，BIW-第1、2天）±70mg/kg vorinostat（IP，TIW-第2、3天）治疗动物，然后每周监测两次肿瘤大小。值表示独立进行的两个单独实验的结果，通过结合两个实验的肿瘤生长数据计算每组的平均肿瘤体积。如图6A所示，单独使用伏利诺司坦的效果很小，而carfilzomib在第20天适度降低了肿瘤生长。然而，伏利诺司他/卡氟佐米布联合用药几乎消除了肿瘤生长。在接种了萤光素酶表达细胞的动物中进行了平行研究，并通过IVIS生物成像仪监测了肿瘤进展。与用单一药物或对照治疗的动物相比，联合治疗导致生物发光明显减少（图6B）。联合治疗的毒性，如脱发、体重减轻（<10%）很小（图6C）。最后，从切除的肿瘤中提取的蛋白质中获得的蛋白质印迹分析显示，磷酸化JNK，γH2A明显增加。X、 与单一药物或对照组相比，从用两种药物治疗的动物中获得的肿瘤中切割的胱天蛋白酶-3（图6D）与体外结果一致。

ANBL-6 细胞（以 2 × 10⁶/孔铺板）接受卡非佐米（Carfilzomib）处理 1 小时，剂量范围为 0.001 至 10 μM。下一步涉及裂解细胞（20 mM Tris-HCl、0.5 mM EDTA），然后将澄清的裂解物置于 PCR 板上。使用未经处理的 ANBL-6 细胞裂解物创建标准曲线，浓度为 6 μg 蛋白质/μL。添加活性位点探针（生物素-(CH2)4-Leu-Leu-Leu-环氧酮；20 μM）后，将混合物在室温下孵育一小时。将细胞裂解物加热至 100°C 并添加 1% 十二烷基硫酸钠 (SDS) 后，将混合物与 96 孔多屏 DV 板中每孔 20 μL 的链霉亲和素-琼脂糖高性能珠混合，并孵育混合物一个小时。在含有 PBS、1% 牛血清白蛋白和 0.1% Tween-20 的溶液中洗涤珠子后，将珠子与抗蛋白酶体亚基的抗体在平板摇床上于 4°C 下孵育整晚。使用的抗体包括山羊多克隆抗-β2i、兔多克隆抗-β5（针对KLH-CWIRVSSDNVADLHDKYS肽的亲和纯化抗血清）和小鼠单克隆抗-β1、抗-β2、抗-β1i和抗-β5i。将山羊抗兔、山羊抗小鼠或与辣根过氧化物酶缀合的兔抗山羊二抗应用于珠子，然后孵育 2 小时。 Supersignal ELISA 皮化学发光底物用于在清洗后对珠子进行显色。一种进行发光检测。原始发光表示为与载体对照相比的抑制百分比，并通过与标准曲线比较转换为 μg/mL。以下非 S 形剂量反应方程用于创建曲线拟合：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1 + 10̂((LogEC50 − X) × HillSlope))，其中 EC50 是表现出 50% 效应的剂量，X为浓度的对数，Y为抑制百分比。

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Carfilzomib亚基分析的酶联免疫吸附试验 将ANBL-6细胞（2×106/孔）铺在96孔板上，用0.001至10μM剂量的carfilzomib处理1小时。然后裂解细胞（20mM Tris-HCl，0.5mM EDTA），并将清除的裂解物转移到聚合酶链式反应（PCR）板上。使用未经处理的ANBL-6细胞裂解物以6μg蛋白质/μL的浓度开始生成标准曲线。加入活性位点探针[生物素-（CH2）4-Leu-Leu-Leu-Eu-环氧酮；20μM]，在室温下孵育1小时。然后通过添加1%十二烷基硫酸钠（SDS）并加热至100°C使细胞裂解物变性，然后在96孔多筛DV板中与每孔20μL链霉抗生物素蛋白琼脂糖高性能珠混合并孵育1小时。

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Carfilzomib亚基分析的竞争性结合[1]
用于通过竞争性结合确定carfilzomib亚基特异性的方案改编自Berkers等人。简而言之，在37°C下用增加的carfilzomi剂量预孵育ANBL-6细胞，然后加入半抗原标记的细胞渗透性乙烯砜（VS）蛋白酶体抑制剂VS-L3-AHx3-danysl。然后按照下一节中的详细说明制备蛋白质印迹，并用多克隆抗反义抗体进行检测。

WST-1 用于评估蛋白酶体抑制剂卡非佐米如何影响细胞生长。增殖抑制的计算基于单独给予媒介物的平行对照细胞。 XLfit 4 软件用于使用线性样条函数插值中值抑制浓度 (IC50)。使用以下公式确定耐药程度（DOR）：DOR = IC50（耐药细胞）/IC50（敏感细胞）。用 100 nM 卡非佐米脉冲后，清洁 ANBL-6 细胞并将其悬浮在含有 5 μg/mL JC-1 的 PBS 中，JC-1 是一种以电位依赖性方式在线粒体中积累的酶。使用 FacScan，检查从 525 到 590 nm 的线粒体膜电位依赖性色移。 CellQuest 软件用于分析数据。

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凋亡DNA断裂分析[1]
对于凋亡实验，将细胞接种到96孔板上，用300 nM（RPMI 8226，ANBL-6）或100 nMCarfilzomib（KAS-6/1，U266）的1小时脉冲处理，并允许其恢复24小时，然后根据制造商的规范使用细胞死亡检测ELISAPLUS试剂盒进行分析。DNA断裂的倍数增加表示为相对于载体处理的对照细胞的平均值。

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线粒体膜电位（ΔΨm）[1]
用100 nMCarfilzomib脉冲的ANBL-6细胞被洗涤并悬浮在含有5μg/mL JC-1 的PBS中，JC-1在线粒体中表现出潜在的依赖性积累。在FacScan上分析了线粒体膜从525到590 nM的潜在依赖性色移，并用CellQuest软件分析了数据。

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可行性分析[3]
共接种5×104个细胞/ml，进行标准MTT法。对于瞬时给药实验，用磷酸缓冲盐水洗涤细胞两次，并在1小时（硼替佐米，Carfilzomib）或4小时（丙佐米）后用无药物培养基替换。

在动物实验中使用Beige-nude-XID小鼠。将10×10⁶个Granta514细胞离心沉淀，并用1X PBS洗涤两次后，将细胞皮下注射到小鼠右侧腹部。待肿瘤出现后，对5-6只小鼠给予卡非佐米-伏立诺他联合治疗，并在整个治疗过程中追踪肿瘤的生长或消退情况。伏立诺他和卡非佐米分别溶解于DMSO和10%磺丁基醚β-环糊精（pH值为10 mM柠檬酸缓冲液）中。注射前，将药物稀释并分装成小份，于-80°C保存。体内药物治疗[3] 按照以下每周给药方案对小鼠进行PI给药：硼替佐米（1 mg/kg，第1天和第4天静脉注射）； 卡非佐米（C57Bl/6小鼠5 mg/kg，KaLwRij小鼠3 mg/kg，第1天和第2天静脉注射）；奥普佐米（30 mg/kg，每日一次灌胃，连续5天，之后休息2天）。对照组小鼠分别口服1%羧甲基纤维素（奥普佐米方案）和静脉注射10% Captisol（溶于pH 3.5的10 mM柠檬酸缓冲液中，卡非佐米方案）。如图5f所示，药物治疗14天后，按照Tomimori等人³⁴所述，腹腔注射RANKL，每次1 mg/kg，间隔24小时，共注射三次。最后一次注射RANKL后90分钟采集血清。

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动物实验[4]
动物实验采用Beige-nude-XID小鼠进行。将 10×10⁶ 个 Granta514 细胞离心沉淀，用 1X PBS 洗涤两次，然后皮下注射到小鼠右侧腹部。待肿瘤可见后，对 5 至 6 只小鼠进行卡非佐米（Carfilzomib）± 伏立诺他（vorinostat）治疗，并按先前所述方法监测肿瘤的生长或消退情况。伏立诺他（vorinostat）和卡非佐米（Carfilzomib）分别溶于 DMSO 和 10% 磺丁基醚-β-环糊精的 10mM 柠檬酸缓冲液中。将溶液分装后于 -80°C 保存，并在注射前按先前所述方法稀释。

吸收、分布和排泄
单次静脉注射27 mg/m²剂量后，Cmax = 4232 ng/mL；单次静脉注射27 mg/m²剂量后，AUC = 379 ng•hr/mL；卡非佐米不会在全身蓄积。在20至36 mg/m²剂量范围内，药物暴露量呈剂量依赖性增加。
稳态分布容积（Vd，20 mg/m²）= 28 L
全身清除率 = 151 - 263 L/小时。由于该值超过肝血流量，提示卡非佐米主要经肝外途径清除。

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代谢/代谢物
卡非佐米在肝脏中快速且广泛代谢。主要代谢产物为卡非佐米的肽片段和二醇，提示其主要代谢途径为肽酶裂解和环氧化物水解。细胞色素P450酶系统在卡非佐米的代谢中参与甚微。所有代谢产物均无活性。

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生物半衰期
静脉注射≥15 mg/m^2剂量后，卡非佐米在第1周期第1天从体循环中迅速清除，半衰期≤1小时。

肝毒性
在卡非佐米的大型临床试验中，血清转氨酶水平升高较为常见，发生率在 8% 至 13% 之间。然而，转氨酶水平超过正常值上限 (ULN) 5 倍的情况并不常见，发生率在 1% 至 2% 之间。一些研究报告称，接受卡非佐米治疗的患者出现了临床上明显的肝损伤，包括急性肝衰竭；然而，在大多数情况下，患者同时服用多种其他药物（例如来那度胺），因此卡非佐米在导致肝损伤中的具体作用并不总是明确的。肝损伤通常在第一个治疗周期内发生。已发表的文献中尚未描述卡非佐米引起的临床明显肝损伤的临床特征和损伤模式。卡非佐米的产品标签中已将肝毒性列为警告，建议在治疗期间监测血清酶。
可能性评分：D（可能导致临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无卡非佐米在哺乳期临床应用的信息。由于卡非佐米与血浆蛋白的结合率为97%，因此其在乳汁中的含量可能很低。制造商建议在卡非佐米治疗期间以及末次给药后 2 周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
在 0.4 - 4 微摩尔的浓度范围内，卡非佐米的蛋白结合率为 97%。

[1]. Blood . 2007 Nov 1;110(9):3281-90.

[2]. Curr Cancer Drug Targets . 2011 Mar;11(3):285-95.

[3]. Leukemia . 2013 Feb;27(2):430-40.

[4]. Mol Cancer Ther . 2011 Sep;10(9):1686-97.

卡非佐米是一种合成四肽，由吗啉-4-乙酰基、L-2-氨基-4-苯基丁酰基、L-亮氨酰和L-苯丙氨酰残基按顺序连接而成，其C端通过酰胺键与(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷-2-基]-1-氧代戊烷-1-酮的氨基相连。卡非佐米用于治疗多发性骨髓瘤患者，具有抗肿瘤和蛋白酶体抑制剂的双重作用。它是一种四肽，属于吗啉类化合物，也是一种环氧化物。卡非佐米是一种注射用抗肿瘤药物（仅限静脉注射）。从化学角度来看，它是一种修饰的四肽环氧化物，是环氧霉素的类似物。它也是一种选择性蛋白酶体抑制剂。 2012年7月，FDA批准卡非佐米用于治疗复发或难治性多发性骨髓瘤成人患者，可作为单药或联合疗法。
卡非佐米是一种蛋白酶体抑制剂。卡非佐米的作用机制是作为蛋白酶体抑制剂。
卡非佐米是一种不可逆的蛋白酶体抑制剂和抗肿瘤药物，用于治疗难治性多发性骨髓瘤。卡非佐米治疗期间血清酶升高的发生率较低，但有少数病例报告显示存在临床表现明显的急性肝损伤，其中一些病例甚至导致死亡。
卡非佐米是环氧霉素衍生物，具有潜在的抗肿瘤活性。卡非佐米不可逆地结合并抑制蛋白酶体20S催化核心亚基的胰凝乳蛋白酶样活性，蛋白酶体是一种负责降解多种细胞蛋白的蛋白酶复合物。蛋白酶体介导的蛋白水解抑制会导致多聚泛素化蛋白的积累，这可能导致细胞周期停滞、诱导细胞凋亡和抑制肿瘤生长。

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药物适应症
卡非佐米适用于治疗接受过一至三线治疗的复发或难治性多发性骨髓瘤成人患者，可联合来那度胺和地塞米松；或地塞米松；或达雷妥尤单抗和地塞米松；或达雷妥尤单抗、透明质酸酶-fihj和地塞米松；或伊沙妥昔单抗和地塞米松。它还可作为单药用于治疗接受过一种或多种疗法的复发或难治性多发性骨髓瘤患者。
FDA标签
卡非佐米（Kyprolis）联合达雷妥尤单抗和地塞米松、联合来那度胺和地塞米松，或单独联合地塞米松，适用于治疗至少接受过一种既往疗法的成人多发性骨髓瘤患者。
急性淋巴细胞白血病的治疗
多发性骨髓瘤的治疗

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作用机制
卡非佐米由四个修饰肽组成，是一种蛋白酶体抑制剂。卡非佐米不可逆且选择性地与20S蛋白酶体（26S蛋白酶体中的蛋白水解核心颗粒）的N端含苏氨酸的活性位点结合。该20S核心具有3个催化活性位点：胰凝乳蛋白酶位点、胰蛋白酶位点和类半胱天冬酶位点。卡非佐米（β5和β5i亚基）对胰凝乳蛋白酶位点的抑制是降低细胞增殖的最有效靶点，最终导致细胞周期阻滞和癌细胞凋亡。在高剂量下，卡非佐米会抑制胰蛋白酶位点和类半胱天冬酶位点。

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药效学
静脉注射卡非佐米后，在首次给药后1小时检测血液中蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性，结果显示蛋白酶体活性受到抑制。在第1个治疗周期的第1天，外周血单核细胞（PBMC）中蛋白酶体的抑制率在15 mg/m2剂量下为79%至89%，在20 mg/m2剂量下为82%至83%。此外，卡非佐米给药后，免疫蛋白酶体的LMP2和MECL1亚基的抑制率分别为26%至32%和41%至49%（剂量为20 mg/m²）。在每周给药期间，首次给药后蛋白酶体抑制作用可持续≥48小时。已观察到对卡非佐米的耐药性，尽管其机制尚未明确，但P-糖蛋白的上调被认为是一个促成因素。此外，研究表明卡非佐米的效力高于硼替佐米。泛素-蛋白酶体通路（UPP）是一个极具吸引力的化疗靶点，因为它对细胞周期、促生存和抗凋亡调节因子具有内在的严格调控作用，这些调节因子不成比例地促进恶性细胞的存活和增殖。硼替佐米是一种可逆的首创蛋白酶体抑制剂，已获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于治疗多发性骨髓瘤和复发/难治性套细胞淋巴瘤，并已被证实无论作为单药还是联合用药都疗效显著。卡非佐米是一种不可逆的第二代蛋白酶体抑制剂，其在体外和体内临床前研究中均显示出对血液系统恶性肿瘤和实体瘤的疗效。卡非佐米是一种肽基环氧酮类化合物，其作用机制与硼替佐米类似，均通过抑制20S蛋白酶体核心β5亚基上的胰凝乳蛋白酶样（ChT-L）活性发挥作用。目前，卡非佐米在临床应用中也取得了良好的疗效。除了传统的蛋白酶体抑制剂外，一种新的策略可能是特异性靶向血液系统特异性免疫蛋白酶体，从而提高整体疗效并减少脱靶效应。免疫蛋白酶体特异性抑制剂 IPSI-001 已被证实对组成型蛋白酶体具有抑制优势，并能更有效地诱导血液来源肿瘤细胞凋亡。本文将探讨卡非佐米的临床前和临床开发，并探索免疫蛋白酶体特异性抑制剂（如 IPSI-001）作为靶向血液系统恶性肿瘤的合理策略的潜力。[2] 蛋白酶体抑制剂（PI），尤其是硼替佐米，已成为多发性骨髓瘤（MM）的基石疗法，能够有效降低肿瘤负荷并抑制病理性骨破坏。在临床试验中，新一代环氧酮类不可逆蛋白酶体抑制剂卡非佐米，与硼替佐米相比，展现出更强的抗骨髓瘤疗效和更低的副作用。卡非佐米及其口服生物利用度更高的类似物奥普佐米，在持续或短期治疗后均能有效降低多发性骨髓瘤（MM）细胞的活力，模拟体内药代动力学。骨髓瘤细胞与骨髓微环境的相互作用会增加破骨细胞（OC）的数量和活性，同时抑制成骨细胞（OB），从而导致肿瘤生长和溶骨性病变的增加。在临床相关浓度下，卡非佐米和奥普佐米在体外可直接抑制破骨细胞的形成和骨吸收，同时增强成骨分化和基质矿化。相应地，在非肿瘤小鼠模型中，卡非佐米和奥普佐米可增加骨小梁体积，减少骨吸收，并促进骨形成。最后，在播散性MM小鼠模型中，基于环氧酮的蛋白酶抑制剂可降低小鼠5TGM1和人RPMI-8226肿瘤的负荷，并预防骨丢失。这些数据表明，除了抗骨髓瘤特性外，卡非佐米和奥普佐米还能有效地将骨微环境从分解代谢状态转变为合成代谢状态，并且与硼替佐米类似，可以减少多发性骨髓瘤的骨骼并发症。[3]

C40H57N5O7

719.91

719.425

C, 66.73; H, 7.98; N, 9.73; O, 15.56

868540-17-4

Carfilzomib-d8;1537187-53-3

11556711

White solid powder

1.2±0.1 g/cm3

975.6±65.0 °C at 760 mmHg

204-208°C

543.8±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.551

6.71

172.43

4

8

20

52

1180

5

C([C@@]1(OC1)C)(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN1CCOCC1)CCC1C=CC=CC=1)CC1C=CC=CC=1

BLMPQMFVWMYDKT-NZTKNTHTSA-N

InChI=1S/C40H57N5O7/c1-27(2)22-32(36(47)40(5)26-52-40)42-39(50)34(24-30-14-10-7-11-15-30)44-38(49)33(23-28(3)4)43-37(48)31(17-16-29-12-8-6-9-13-29)41-35(46)25-45-18-20-51-21-19-45/h6-15,27-28,31-34H,16-26H2,1-5H3,(H,41,46)(H,42,50)(H,43,48)(H,44,49)/t31-,32-,33-,34-,40+/m0/s1

(2S)-4-methyl-N-[(2S)-1-[[(2S)-4-methyl-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]-4-phenylbutanoyl]amino]pentanamide

PR-171; PR 171; PR171; Carflizomib; brand name: Kyprolis

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.47 mM) = in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。=

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配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.47 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+castor oil: 10 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。