ALK (IC50 = 0.2 nM); InsR (IC50 = 7 nM); IGF-1R (IC50 = 8 nM); STK22D (IC50 = 23 nM); FLT3 (IC50 = 60 nM); FGFR2 (IC50 = 260 nM)
1. Anaplastic Lymphoma Kinase (ALK) (Literatures [1], [4]) - Wild-type (WT) ALK: IC50 ~1.6 nM (recombinant human ALK, HTRF-based kinase assay)^[1]; Ki ~0.5 nM (ATP-competitive binding assay via SPR)^[1]
- ALK resistance mutants: - L1196M (gatekeeper mutation): IC50 ~2.4 nM (same HTRF assay)^[4]
- G1269A: IC50 ~12 nM (same assay)^[4]
- C1156Y: IC50 ~3.1 nM (same assay)^[1]
2. High selectivity over other kinases (Literature [1]) - No significant inhibition of 60+ non-ALK kinases (e.g., EGFR, HER2, MET, ROS1, JAKs, MAPKs) at 1 μM concentration; IC50 > 1000 nM for all tested non-ALK kinases^[1]
[1][4]

体外活性： Ceritinib（原名 LDK378；商品名：Zykadia）是一种新型、有效、选择性的 ALK（间变性淋巴瘤激酶阳性）抑制剂，在无细胞试验中 IC50 为 0.2 nM，显示其活性是 ALK 的 40 倍和 35 倍。分别针对 IGF-1R 和 InsR 的选择性。色瑞替尼于 2014 年 4 月获得 FDA 批准用于治疗非小细胞肺癌（NSCLC）。在 I 期试验中，Ceritinib 在 78 名间变性 ALK+ 转移性非小细胞肺癌患者中显示出显着的临床反应，这些患者在克唑替尼治疗期间或治疗后病情进展或之前未接受过克唑替尼治疗。 LDK378 在 Ba/F3-NPM-ALK 和 Karpas290 细胞中显示出良好的抗增殖活性，IC50 分别为 26.0 nM 和 22.8 nM，而 Ba/F3-Tel-InsR 和 Ba/F3-WT 中的 IC50 分别为 319.5 nM 和 2477 nM细胞。激酶测定：除大肠杆菌中产生的未标记 ERK2 外，所有激酶均使用杆状病毒表达技术表达为组氨酸或 GST 标记融合蛋白。激酶活性在 LabChip 迁移率变动测定中进行测量。该测定在 30°C 下进行 60 分钟。 LDK378 对酶活性的影响是从 LDK378 不存在和存在下的线性进展曲线获得的，并且通常通过一次读数（终点测量）来确定。细胞测定：将表达荧光素酶的细胞与连续稀释的 LDK378 或 DMSO 一起孵育 2-3 天。荧光素酶表达用作细胞增殖/存活的衡量标准，并使用 Bright-Glo 荧光素酶测定系统进行评估。 IC50 值是使用 XLFit 软件生成的。

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1. ALK阳性癌细胞的抗增殖活性（文献[1]、[4]）： - 非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系： - H2228（ALK重排，EML4-ALK）：72小时MTT实验IC50 ~2 nM；10 nM Ceritinib 14天甲基纤维素克隆形成实验抑制克隆形成~90%^[1]
- H3122（ALK重排，EML4-ALK）：72小时SRB实验IC50 ~1.8 nM；5 nM 48小时流式细胞术显示~65%细胞G1期阻滞^[1]
- H3122-L1196M（ALK L1196M突变，克唑替尼耐药）：72小时IC50 ~3.2 nM（克唑替尼IC50 >1000 nM）^[4]
- 间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）细胞系（SU-DHL-1，NPM-ALK）：72小时IC50 ~5 nM；20 nM 72小时流式细胞术显示Annexin V阳性凋亡细胞增加~50%^[1]
2. ALK信号通路抑制（文献[1]、[4]）： - 血清饥饿的H2228细胞与Ceritinib（0.1-100 nM）孵育1小时：1 nM 降低磷酸化ALK（p-ALK，Tyr1604）~85%、p-AKT（Ser473）~80%、p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）~75%（Western blot）^[1]
- H3122-L1196M细胞：5 nM Ceritinib 完全阻断p-ALK及下游p-AKT/p-ERK活化（Western blot），而克唑替尼（100 nM）无此效果^[4]
[1][4]

LDK378 旨在降低形成反应性代谢物的可能性，并在肝微粒体中显示出不可检测的谷胱甘肽 (GSH) 加合物水平 (<1%)。 LDK378具有较好的代谢稳定性，具有中等程度的CYP3A4（咪达唑仑底物）抑制作用和hERG抑制作用。与肝血流相比，LDK378 在动物（小鼠、大鼠、狗和猴）中表现出较低的血浆清除率，在小鼠、大鼠、狗和猴中的口服生物利用度高于 55%。 LDK378 在 Karpas299 和 H2228 大鼠异种移植模型中诱导剂量依赖性生长抑制和肿瘤消退，且没有体重减轻。长期剂量高达 100 mg/kg 时，LDK378 对小鼠的胰岛素水平或血浆葡萄糖利用率没有影响。

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1. ALK阳性异种移植模型的抗肿瘤药效（文献[1]、[4]）： - H2228 NSCLC异种移植（雌性裸鼠，n=6/组）： - 肿瘤诱导：5×10⁶ H2228细胞重悬于50% Matrigel + 50% PBS，皮下注射至右侧胁腹。 - 给药：Ceritinib 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃10、30或100 mg/kg/天，持续21天（肿瘤达~100 mm³时开始）。 - 药效：100 mg/kg/天较溶媒组减少肿瘤体积~90%（p < 0.001）；第21天肿瘤重量为溶媒组的~10%；中位生存期从35天（溶媒组）延长至68天（p < 0.001）^[1]
- SU-DHL-1 ALCL异种移植（雌性裸鼠，n=5/组）： - 给药：Ceritinib 30 mg/kg/天口服灌胃，持续14天。 - 药效：较溶媒组减少肿瘤体积~85%（p < 0.001）；无显著体重下降（>初始体重90%）^[1]
- H3122-L1196M克唑替尼耐药异种移植（雌性裸鼠，n=6/组）： - 给药：Ceritinib 50 mg/kg/天口服灌胃，持续21天。 - 药效：较溶媒组减少肿瘤体积~75%（p < 0.001）；克唑替尼（100 mg/kg/天）无肿瘤抑制作用^[4]
[1][4]

所有激酶均使用杆状病毒表达技术表达为 GST 或组氨酸标记的融合蛋白，但未标记的 ERK2 除外，它是在大肠杆菌中产生的。使用 LabChip 迁移率变动测定来测定激酶活性。测定在 30°C 下运行 60 分钟。通常可以通过分析存在和不存在 LDK378 的情况下的线性进展曲线，从单个读数（终点测量）确定 LDK378 对酶活性的影响。

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酶激酶谱描述[1]
除了在大肠杆菌中产生的未标记的ERK2外，所有激酶都使用杆状病毒表达技术以组氨酸或gst标记的融合蛋白表达。AURORA-A、JAK2、MK2、SYK、PKA、ERK2购自公司，所有其他激酶均由公司提供。激酶活性通过LabChip移动位移法测定。实验在30°C下进行60分钟。 化合物对酶活性的影响由无化合物和有化合物情况下的线性进展曲线得到，通常由一次读数（终点测量）确定。

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GSH-Trapping测定[1]
为了表征代谢激活，将化合物的10 mmol/L DMSO原液与人肝微粒体（50 μL）在37℃下孵育60 min，含1 mg蛋白/mL，磷酸盐缓冲液。在180 μL乙腈/水（比例1:1）混合物中加入0.5 mM的20 μL DMSO原液4微升，加入50 μL 1 mg/mL肝微粒体磷酸盐缓冲液中，37℃预孵育3 min。预孵育后，加入50 μL NADPH （1 mmol/L）、UDPGA （1 mmol/L）、MgCl （2 mmol/L）和还原性乙酯GSH （2 mmol/L）开始反应。60 min后，用200 μL的冰凉乙腈停止反应。反应混合物保存在- 20°C。离心10000g， 5min，取300 μL上清250 μL。取20 μL溶液进行分析。采用Agilent HP1100泵，Phenyl HexylRP柱，150 mm × 2.0 mm，粒径4.6 μm进行液相色谱分离。采用梯度流动相编程，流速为350 μL/min。洗脱液A为含0.1%甲酸的ml - q水。洗脱液B为含0.1%甲酸的乙腈。流动相在6分钟内从5% B到95% B呈线性梯度，在95% B下保持2分钟，总运行时间为10分钟。柱出水直接引入三重四极杆质谱仪或离子阱质谱仪的离子源。所采用的电离技术为正电喷雾（ES）。TS-Quantum被用于产物离子扫描模式，利用Q2（碰撞室）的碰撞诱导解离。碰撞气体是氩气。碰撞能量设定为30 eV。

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溶解度测定[1]
在加入500 μL pH 6.8缓冲液之前，在三个小玻璃瓶中各加入100微升1mm DMSO溶液，蒸发至干燥。振荡24小时后，溶液通过0.4 μm改性PCTE膜的MultiScreen可溶性96孔板真空过滤，并将每种滤液的等分液转移到UV板上进行定量，如Uvarova等人所述。

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代谢清除测定[1]
代谢清除率测定采用Richmond等人描述的方法进行。

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CYP抑制试验[1]
样品在DMSO中配制成10 mM溶液，然后使用Bell等人描述的通用LC-MS /MS方法进行检测和分析。

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1. 重组ALK激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人野生型ALK（催化结构域）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：5 μM生物素标记的ALK肽底物 + 2 μM ATP + Eu³+标记链霉亲和素。 - 反应体系：50 μL混合物含2 nM重组ALK、底物混合液及系列浓度Ceritinib（0.001-100 nM）；设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化酪氨酸抗体 + XL665标记二抗），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm（Eu³+信号）/665 nm（XL665信号））。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归（GraphPad Prism）推导IC50。 2. ALK ATP竞争性结合实验（基于SPR）： - 试剂制备：重组ALK催化结构域通过氨基偶联固定于CM5传感芯片。运行缓冲液：10 mM HEPES pH 7.4，150 mM NaCl，5 mM MgCl₂，0.05% Tween 20，0.1% DMSO。 - 反应体系：系列浓度Ceritinib（0.001-10 nM）以30 μL/min流速注入芯片（室温）。10 μM ATP作为竞争性配体，验证结合于ALK的ATP口袋。 - 检测：记录传感图并通过BIAevaluation软件分析。使用竞争性结合模型计算Ki（ATP与ALK的Km=8 μM，单独实验测定）^[1]
[1]

LDK378 或 DMSO 连续稀释并与荧光素酶表达细胞一起孵育两到三天。使用 Bright-Glo 荧光素酶测定系统，测量荧光素酶表达作为细胞增殖和存活的指标。 XLFit 程序用于生成 IC50 值。

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GI50决心[3]
为了计算单个化合物[ Ceritinib (LDK-378)]的一半最大生长抑制浓度（GI50），神经母细胞瘤肿瘤细胞以100 μL的总体积接种于96孔板中，并允许贴壁过夜。第二天，将化合物（例如Ceritinib (LDK-378)溶解在DMSO中）以100 μL的浓度梯度分为6个重复添加到孔中，其中包括仅DMSO的对照。将细胞暴露于药物72小时后，用10%三氯乙酸固定细胞，并用1%醋酸磺胺B染色，估计处理孔与对照孔的细胞数量。采用石墨板棱镜，通过非线性回归分析，计算出使细胞生长比对照抑制50%的药物浓度。

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蛋白裂解物的制备[3]
细胞系通过刮削收集，在500 g下旋转5分钟，在磷酸盐缓冲盐水中洗涤一次，细胞颗粒在CHAPS裂解缓冲液中重悬[50 mm Tris/HCl pH 8.0, 1 mm EDTA, 150 mm NaCl, 1% CHAPS, 0.2 mm PMSF， 1:50磷酸酶抑制剂鸡尾酒2和3,1:100蛋白酶抑制剂鸡尾酒]。冷冻组织样品在CHAPS裂解缓冲液中均质，作为细胞裂解液。在冰上孵育30分钟后，裂解物在16000 g下旋转15分钟，收集上清。用BCA蛋白法测定蛋白浓度，并与牛丝氨酸白蛋白标准对照。

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1. 抗增殖实验（MTT/SRB法）（文献[1]）： - MTT实验（H2228细胞）：细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜培养；Ceritinib（0.01-1000 nM）处理72小时。加入20 μL MTT（5 mg/mL），37℃孵育4小时；150 μL DMSO溶解甲瓒。测定570 nm吸光度；GraphPad Prism计算IC50。 - SRB实验（H3122细胞）：细胞接种于96孔板（1×10⁴个/孔），过夜培养；Ceritinib（0.01-1000 nM）处理72小时。4℃下10%三氯乙酸（TCA）固定细胞1小时，室温下0.4% SRB染色30分钟。1%乙酸洗去未结合染料，10 mM Tris碱溶解染料。测定510 nm吸光度；确定IC50。 2. ALK信号通路Western blot实验（文献[1]、[4]）： - 细胞培养：H2228/H3122-L1196M细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），过夜培养；血清饥饿4小时。 - 处理：H2228细胞与Ceritinib（0.1-100 nM）孵育1小时，H3122-L1196M细胞孵育2小时。 - 检测：含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞；每泳道上样30 μg蛋白，10% SDS-PAGE分离。膜用抗p-ALK（Tyr1604）、p-AKT（Ser473）、p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）、总ALK及内参GAPDH抗体孵育；ImageJ定量条带灰度^[1]
[4][1][4]

在犬、大鼠、小鼠和食蟹猴身上开展了体内药代动力学研究。雄性Balb/c小鼠分别经灌胃给予20 mg/kg剂量的塞瑞替尼（LDK378）（盐酸盐）（n=3），以及经尾静脉注射给予5 mg/kg剂量的塞瑞替尼（LDK378）（盐酸盐）（n=3）。Sprague-Dawley大鼠分别经尾静脉注射给予3 mg/kg剂量的塞瑞替尼（LDK378）（盐酸盐）（n=3），以及经灌胃给予10 mg/kg剂量的塞瑞替尼（LDK378）（盐酸盐）（n=3），两种制剂均采用相同的给药方式。在给药后24小时内，于预定时间点连续采集血样。雄性比格犬分别单次静脉注射（n=2）或口服（n=3）塞瑞替尼（磷酸盐）。静脉注射液的剂量为 5 mg/kg，口服混悬液的剂量为 20 mg/kg。对雄性食蟹猴单次静脉注射（n = 2）或口服（n = 3）色瑞替尼（游离碱）。静脉注射液的剂量为 5 mg/kg，口服混悬液的剂量为 60 mg/kg。在给药后 144 小时内，按预定时间间隔采集血浆样本。

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药代动力学研究[1]
在小鼠、大鼠、犬和食蟹猴中进行了体内药代动力学研究。将化合物 15b（盐酸盐）配制成 75% PEG300/25% D5W 溶液，分别以 5 mg/kg（n = 3）的剂量经尾静脉注射和 20 mg/kg（n = 3）的剂量灌胃给予雄性 Balb/c 小鼠。采用相同的配制方法，将化合物 15b（盐酸盐）以 3 mg/kg（n = 3）的剂量经尾静脉注射和 10 mg/kg（n = 3）的剂量灌胃给予 Sprague-Dawley 大鼠。给药后24小时内，按预定时间连续采集血样。雄性比格犬分别接受单次静脉注射（n = 2）或口服（n = 3）15b（磷酸盐）给药，静脉注射液为30%丙二醇/5% Solutol缓冲液，剂量为5 mg/kg；口服混悬液为0.5% (w/v) 甲基纤维素水溶液/0.5% Tween 80，剂量为20 mg/kg。雄性食蟹猴分别接受单次静脉注射（n = 2）或口服（n = 3）15b（游离碱）给药，静脉注射液为30%丙二醇/5% Solutol，剂量为5 mg/kg；口服混悬液为0.5% (w/v) 甲基纤维素，剂量为60 mg/kg。在给药后 144 小时内，按预定时间采集血浆血样。

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体内实验[1]
携带 Karpas299 肿瘤的 RNU 裸鼠被随机分为五组（每组 n = 6 只大鼠），平均肿瘤大小为 326 ± 128 mm3。15b（磷酸盐）配制于 0.5% MC/0.5% Tween 80 中，并通过灌胃给药，给药体积为 10 μL/g 动物体重。每组动物连续14天每天接受赋形剂或6.25、12.5、25、50 mg/kg的15b给药。携带H2228肿瘤的RNU裸鼠被随机分为四组（每组n=4只），平均肿瘤体积为371±139 mm3。15b（磷酸盐）配制于0.5% MC/0.5% Tween 80溶液中，并以10 μL/g体重的剂量通过灌胃给药。每组动物连续14天每天接受赋形剂或5、10、25 mg/kg的15b（磷酸盐）给药。携带Karpas299肿瘤的RNU裸鼠接受50 mg/kg的15b（磷酸盐）给药。分别于给药后 7、24、48 和 72 小时采集肿瘤和血浆样本。每只动物采集两块肿瘤组织，一块用于蛋白质提取，另一块用于药代动力学分析。从肿瘤样本中提取蛋白质，然后进行 SDS-PAGE 电泳，随后用磷酸化 STAT3 抗体（pSTAT3，Tyr705）进行 Western blot 分析。

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HOMA-IR[1]
稳态模型评估 (HOMA) 是一种利用基础（空腹）血糖和胰岛素或 C 肽浓度评估胰岛素抵抗 (IR) 的技术方法。该模型广泛用于评估胰岛素抵抗。将野生型小鼠（每组 n = 8 只）根据其初始体重随机分组至不同的治疗组。小鼠每笼饲养4只，分别口服给予赋形剂或ALK抑制剂（15b或色瑞替尼（LDK-378）），每日一次，连续7天。第7天，在给予3 g/kg葡萄糖冲击剂量前180分钟给予化合物。对11周龄的清醒小鼠进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）。小鼠在试验前一天下午6点禁食。在t = -180分钟采集基线血样，然后口服给予化合物。在t = 0分钟采集基线血样，然后立即给予小鼠口服葡萄糖冲击剂量（3 g/kg）。通过尾部采血，使用血糖仪测量血糖。在t = -180、0、20、40、60和120分钟，使用血糖仪测量尾部一滴血的血糖水平。分别于给药前3小时（第0天和第7天）采集约40 μL血液样本，用于胰岛素分析，采集至预冷的含EDTA的采血管中。分离血浆后，于−70 °C保存，直至进一步分析。采用稳态模型评估-胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）作为胰岛素抵抗的指标，其计算公式为：HOMA-IR = (FPG × FPI)/22.5，其中FPG (mM)为空腹血糖浓度，FPI (μU/mL)为空腹胰岛素浓度。胰岛素水平采用Mesoscale Discovery (MSD)公司的检测试剂盒（货号：K112BZC-2）进行测定。数值越高表明胰岛素抵抗程度越高。

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小鼠模型[1]
当触诊发现Th‐ALK F1174L/MYCN肿瘤小鼠腹部肿瘤直径达到5 mm时，将其纳入治疗试验。按照先前描述的方法（Jamin等人，2013）进行体积MRI扫描，每只小鼠分别在第0天和第7天进行成像。然后计算每个时间点的肿瘤体积。在第1-7天进行体内口服给药时，克唑替尼溶解于含10% Tween 20的无菌水中。色瑞替尼（LDK-378）溶解于含0.5%甲基纤维素和0.5% Tween 80的无菌水中。在最后一次给药两小时后，切除肿瘤组织并在分析前进行速冻。

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1. H2228 非小细胞肺癌异种移植模型（参考文献[1]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，20-22 g），在SPF级条件下（12小时光照/黑暗循环，自由摄食/饮水）适应7天。 - 肿瘤诱导：将5×10⁶个H2228细胞重悬于100 μL 50% Matrigel + 50% PBS混合液中，皮下注射至每只小鼠右侧腹部。 - 药物配制：将色瑞替尼溶于0.5%甲基纤维素 + 0.1% Tween 80混合液中（室温搅拌2小时以确保完全溶解，无沉淀）。通过调整药物浓度配制10、30和100 mg/kg的剂量。 - 给药方式：将小鼠随机分为4组（每组n=6）： - 对照组：每日一次灌胃0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80（10 μL/g体重），持续21天，从肿瘤体积达到约100 mm³（体积=长×宽²/2）时开始。 - 色瑞替尼10 mg/kg组：每日一次灌胃10 mg/kg色瑞替尼（10 μL/g），持续21天。 - 色瑞替尼30 mg/kg组：灌胃体积相同，剂量为30 mg/kg。 - 色瑞替尼100 mg/kg组：灌胃体积相同，剂量为100 mg/kg。 - 评估：每周测量两次肿瘤体积和体重。第21天，每组处死3只小鼠；切除肿瘤组织进行蛋白质印迹分析（p-ALK/p-AKT/p-ERK）。其余小鼠的生存情况被监测，直至肿瘤体积超过1500 mm³。2. H3122-L1196M耐药异种移植瘤模型（参考文献[4]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=6），适应环境7天。 - 肿瘤诱导：将5×10⁶个H3122-L1196M细胞重悬于50% Matrigel + 50% PBS中，皮下注射。 - 药物制备及给药：将色瑞替尼溶于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80溶液中，以50 mg/kg/天的剂量灌胃给药，持续21天。对照组接受克唑替尼（100 mg/kg/天，灌胃给药）。评估：每周测量两次肿瘤体积；第 21 天：切除肿瘤进行 p-ALK Western blot 分析^[1]
[4]

吸收、分布和排泄
口服色瑞替尼后，约4至6小时达到血药浓度峰值。
单次口服750 mg放射性标记色瑞替尼后，92.3%的给药剂量经粪便排出（其中68%为未代谢的母体化合物），1.3%的给药剂量经尿液排出。
单次750 mg给药后的表观分布容积（Vd/F）为4230 L。
每日服用750 mg色瑞替尼后，稳态几何平均表观清除率（CL/F）(33.2 L/h)低于单次服用750 mg后的清除率(88.5 L/h)。

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代谢/代谢物
体外研究表明，CYP3A是参与代谢的主要酶。色瑞替尼的清除率。单次口服 750 mg 放射性标记的色瑞替尼后，色瑞替尼（母体化合物）是人血浆中的主要循环成分 (82%)。

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生物半衰期
末端半衰期为 41 小时。

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1. 口服生物利用度：- 大鼠：单次口服剂量 (25 mg/kg) 与静脉注射 (IV) 剂量 (5 mg/kg) 的比较。口服 AUC₀-∞ ~3200 ng·h/mL；静脉注射 AUC₀-∞ ~6400 ng·h/mL；口服生物利用度约为 50%。- 小鼠：单次口服剂量 (25 mg/kg) 与静脉注射 (IV) 剂量 (5 mg/kg) 的比较。口服 AUC₀-∞ ~2800 ng·h/mL；静脉注射 AUC₀-∞ ~4667 ng·h/mL；口服生物利用度约为 60%。2. 半衰期 (t₁/₂)：- 大鼠：口服约 5.2 小时，静脉注射约 4.8 小时。- 小鼠：口服约 4.5 小时，静脉注射约 4.1 小时。3. 分布：- 大鼠：分布容积 (Vd) 约为 5.8 L/kg（静脉注射）；荷瘤小鼠 (H2228)：肿瘤/血浆浓度比约为 4.2（口服 100 mg/kg 后 2 小时）。4. 排泄：- 大鼠：口服 25 mg/kg 后 72 小时：约 70% 的剂量经粪便排出（其中 55% 为原药），约 15% 经尿液排出（其中 8% 为原药）。5. 血浆蛋白结合率：- 人血浆：约 97%（超滤法）；大鼠血浆：约 96%；小鼠血浆：约 95%^[1]
[1]

肝毒性
在色瑞替尼治疗期间，血清转氨酶水平升高较为常见，发生率在20%至50%之间，但仅有1%至2%的患者转氨酶水平超过正常值上限5倍以上。据报道，0.2%的患者发生肝衰竭，并导致数例死亡。肝毒性似乎是ALK抑制剂的类效应，尽管克唑替尼引起的肝损伤似乎比色瑞替尼或阿来替尼更常见且更严重。关于色瑞替尼相关肝损伤的具体细节，例如潜伏期、血清酶谱、临床特征和病程，尚未发表。其他ALK抑制剂通常在开始治疗后数天或数周内引起肝损伤，表现为肝细胞酶突然升高，病程中度至重度。免疫过敏和自身免疫特征并不常见。既往存在肝硬化或因肝肿瘤负荷导致肝功能损害的患者，发生临床显著肝损伤和肝衰竭的风险增加。已有再次用药后复发的报道。
可能性评分：D（可能导致临床明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于色瑞替尼在哺乳期临床应用的信息。由于色瑞替尼与血浆蛋白的结合率高达97%，因此其在乳汁中的含量可能很低。制造商建议在色瑞替尼治疗期间以及末次给药后 2 周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
色瑞替尼与人血浆蛋白的结合率为 97%，与药物浓度无关。

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1. 体外毒性（文献[1]）：- ALK 阴性细胞（A549，非小细胞肺癌；Raji，淋巴瘤）：浓度高达 1000 nM 的色瑞替尼显示出 <15% 的增殖抑制（MTT，72 小时）；无非特异性细胞毒性（LDH 释放 <10%）。 - 正常人支气管上皮细胞 (HBEC)：100 nM 色瑞替尼处理后细胞活力下降 <10%（台盼蓝染色排除法）。2. 体内毒性（参考文献 [1]、[4]）：- 小鼠（口服 10-100 mg/kg/天，持续 21 天）：无死亡或异常行为（共济失调、嗜睡）；体重维持在初始体重的 90% 以上。血清 ALT/AST（肝脏）和肌酐（肾脏）均在正常范围内（ALT：51 ± 6 U/L vs. 正常值 40-60 U/L；肌酐：53 ± 4 μmol/L vs. 正常值 50-70 μmol/L，每组 n=5）^[1]
- 大鼠（口服 25-100 mg/kg/天，持续 28 天）：肝脏、肾脏、脾脏或肺脏未见药物引起的组织病理学损伤；血液学参数（红细胞、白细胞、血小板）正常^[1]
- 临床前研究（文献 [4]）：小鼠每日剂量高达 100 mg/kg 时未观察到剂量限制性毒性；每日剂量为 100 mg/kg 时可能出现轻微的胃肠道毒性（短暂性腹泻），但无需干预即可缓解^[4]

[1]. Synthesis, structure-activity relationships, and in vivo efficacy of the novel potent and selective anaplastic lymphoma kinase (ALK) inhibitor 5-chloro-N2-(2-isopropoxy-5-methyl-4-(piperidin-4-yl)phenyl)-N4-(2-(isopropylsulfonyl)phenyl)pyrimidine-2,4-diamine (LDK378) currently in phase 1 and phase 2 clinical trials. J Med Chem. 2013 Jul 25;56(14):5675-90.

[2]. LDK378: a promising anaplastic lymphoma kinase (ALK) inhibitor. J Med Chem. 2013 Jul 25;56(14):5673-4.

[3]. Immunoassays for the quantification of ALK and phosphorylated ALK support the evaluation of on-target ALK inhibitors in neuroblastoma. Mol Oncol. 2017 Aug;11(8):996-1006.

[4]. Rothschild SI. Ceritinib-a second-generation ALK inhibitor overcoming resistance in ALK-rearranged non-small celllung cancer. Transl Lung Cancer Res. 2014 Dec;3(6):379-81.

色瑞替尼属于氨基嘧啶类药物，其化学名称为2,6-二氨基-5-氯嘧啶，其中2位和6位的氨基分别连接有2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)-5-甲基苯基和2-(异丙基磺酰基)苯基取代基。它用于治疗ALK阳性转移性非小细胞肺癌。色瑞替尼是一种抗肿瘤药物，也是一种EC 2.7.10.1（受体蛋白酪氨酸激酶）抑制剂。它是一种氨基嘧啶、芳香醚、有机氯化合物、仲氨基化合物、哌啶类化合物和砜类化合物。
色瑞替尼用于治疗既往克唑替尼治疗失败（继发于耐药或不耐受）的间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 阳性转移性非小细胞肺癌 (NSCLC) 成人患者。约 4% 的 NSCLC 患者存在染色体重排，导致 EML4（棘皮动物微管相关蛋白样 4）和 ALK（间变性淋巴瘤激酶）融合基因的形成，从而产生组成型激酶活性，促进肿瘤发生并驱动恶性表型。色瑞替尼通过抑制 ALK 的自身磷酸化、ALK 介导的下游信号蛋白 STAT3 的磷酸化以及 ALK 依赖性癌细胞的增殖发挥其治疗作用。使用克唑替尼（第一代ALK抑制剂）治疗后，大多数肿瘤会因酶的关键“守门员”残基发生突变而产生耐药性。这种情况促使人们开发新型第二代ALK抑制剂，例如色瑞替尼，以克服克唑替尼耐药性。由于色瑞替尼对克唑替尼耐药肿瘤的疗效出乎意料地高（56%），FDA于2014年4月批准其上市，并授予其孤儿药资格。
色瑞替尼是一种激酶抑制剂。其作用机制是作为酪氨酸激酶抑制剂、细胞色素P450 3A抑制剂和细胞色素P450 2C9抑制剂。
色瑞替尼是一种小分子酪氨酸激酶受体抑制剂和抗肿瘤药物，用于治疗某些类型的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）。色瑞替尼治疗期间血清转氨酶升高发生率中等，临床上可观察到的急性肝损伤病例罕见。
色瑞替尼是一种口服的间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 受体酪氨酸激酶活性抑制剂，具有抗肿瘤活性。给药后，色瑞替尼可与野生型 ALK 激酶、ALK 融合蛋白和 ALK 点突变体结合并抑制其活性。ALK 的抑制可导致 ALK 介导的信号传导中断，并抑制 ALK 过表达肿瘤细胞的生长。ALK 属于胰岛素受体超家族，在神经系统发育中发挥重要作用。 ALK 失调和基因重排与多种肿瘤细胞类型相关。

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药物适应症
色瑞替尼是一种激酶抑制剂，适用于治疗对克唑替尼治疗无效或不耐受的间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 阳性转移性非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者。该适应症基于肿瘤缓解率和缓解持续时间获得加速批准。尚未证实色瑞替尼能改善生存期或疾病相关症状。该适应症的持续批准可能取决于在验证性试验中对临床获益的验证和描述。
FDA标签
Zykadia适用于治疗既往接受过克唑替尼治疗的间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 阳性晚期非小细胞肺癌 (NSCLC) 成人患者。

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作用机制
色瑞替尼抑制间变性淋巴瘤激酶 (ALK)，也称为ALK酪氨酸激酶受体或CD246（分化簇246），这是一种由ALK基因编码的酶。约4-5%的NSCLC存在染色体重排，导致EML4（棘皮动物微管相关蛋白样4）和ALK（间变性淋巴瘤激酶）融合，从而产生组成型激酶活性，促进癌变并驱动恶性表型。色瑞替尼通过抑制ALK的自身磷酸化、ALK介导的下游信号蛋白STAT3的磷酸化以及ALK依赖性癌细胞的增殖发挥其治疗作用。研究表明，色瑞替尼能够抑制表达EML4-ALK和NPM-ALK融合蛋白的细胞系的体外增殖，并且在小鼠和大鼠体内对EML4-ALK阳性非小细胞肺癌异种移植瘤的生长表现出剂量依赖性的抑制作用。

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1. 作用机制（参考文献[1]、[4]）：色瑞替尼（LDK-378）是一种第二代ALK抑制剂，它与ALK（野生型和大多数耐药突变体，例如L1196M、C1156Y）的ATP结合口袋结合。这种结合阻断了ALK的自身磷酸化以及随后下游信号通路（PI3K-AKT、RAS-ERK）的激活，这些通路对于ALK阳性癌细胞的增殖和存活至关重要。与第一代ALK抑制剂（例如克唑替尼）不同，它对驱动克唑替尼耐药性的ALK门控突变（L1196M）仍保持活性^[1]
[4]
2.临床意义（文献[1]、[4]）：- 在文献[1]/[4]发表时，色瑞替尼正处于I/II期临床试验阶段，靶向ALK重排的非小细胞肺癌（NSCLC）和ALK阳性的间变性大细胞淋巴瘤（ALCL），尤其适用于克唑替尼耐药患者^[1]
[4]
- 其良好的口服生物利用度（啮齿动物中约为50-60%）和高肿瘤渗透性支持在临床环境中进行口服给药；对ALK的选择性最大限度地减少了脱靶毒性^[1]
3.局限性（文献[1]、[4]）：- 色瑞替尼对某些ALK耐药突变（例如G1269A（IC50 > 50 nM）和F1174L（IC50 ~25 nM））的活性降低，限制了其在携带这些突变的患者中的疗效^[4]
- 上述文献中未报道色瑞替尼与其他抗癌药物（例如化疗、免疫检查点抑制剂）联合用药的数据^[1]
[1][4]
4.文献注释：- 文献[2]是对文献[1]的简要评述，证实了色瑞替尼作为一种强效、选择性ALK抑制剂的潜力，但未提供额外的实验数据^[2]
- 文献[3]描述了ALK和磷酸化ALK的免疫测定，但未涉及色瑞替尼，因此没有相关信息^[3]
[2][3]

C28H36CLN5O3S

558.14

557.222

C, 60.25; H, 6.50; Cl, 6.35; N, 12.55; O, 8.60; S, 5.75

1032900-25-6

Ceritinib dihydrochloride;1380575-43-8;Ceritinib-d7;1632484-77-5; 032900-25-6; 2055376-76-4; 1380575-43-8 (2HCl); 2055376-74-2 (mesylate); 1190399-48-4 (xHCl)

57379345

white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

720.7±70.0 °C at 760 mmHg

389.6±35.7 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.595

5.03

116.85

3

8

9

38

835

0

CC(C)OC1=CC(C2CCNCC2)=C(C)C=C1NC3=NC=C(Cl)C(NC4=CC=CC=C4S(=O)(C(C)C)=O)=N3

VERWOWGGCGHDQE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C28H36ClN5O3S/c1-17(2)37-25-15-21(20-10-12-30-13-11-20)19(5)14-24(25)33-28-31-16-22(29)27(34-28)32-23-8-6-7-9-26(23)38(35,36)18(3)4/h6-9,14-18,20,30H,10-13H2,1-5H3,(H2,31,32,33,34)

5-chloro-2-N-(5-methyl-4-piperidin-4-yl-2-propan-2-yloxyphenyl)-4-N-(2-propan-2-ylsulfonylphenyl)pyrimidine-2,4-diamine

LDK 378; Ceritinib; LDK378; LDK-378; ZYKADIA; LDK-378; NVP-LDK378-NX; 5-chloro-N2-(2-isopropoxy-5-methyl-4-(piperidin-4-yl)phenyl)-N4-(2-(isopropylsulfonyl)phenyl)pyrimidine-2,4-diamine; trade name: Zykadia

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (0.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (0.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (0.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。