EGFR (IC50 = 2 nM)

体外活性：Erlotinib HCl 有效抑制完整细胞中的 EGFR 活化，包括 HNS 人头颈肿瘤细胞 (IC50 20nM)、DiFi 人结肠癌细胞和 MDA MB-468 人乳腺癌细胞。 Erlotinib HCl (1 μM) 诱导 DiFi 人结肠癌细胞凋亡。厄洛替尼抑制一组 NSCLC 细胞系的生长，包括 A549、H322、H3255、H358 H661、H1650、H1975、H1299、H596，IC50 范围为 29 nM 至 >20 μM。 Erlotinib HCl(2 μM) 显着抑制 AsPC-1 和 BxPC-3 胰腺细胞的生长。厄洛替尼盐酸盐与吉西他滨联合使用在 KRAS 突变的胰腺癌细胞中被认为具有累加效应。 10 微摩尔的 Erlotinib HCl 可抑制 EGFR Y845（Src 依赖性磷酸化）和 Y1068（自动磷酸化）位点的磷酸化。与厄洛替尼盐酸盐联合使用可以下调雷帕霉素刺激的 Akt 活性，并对细胞生长抑制产生协同作用。激酶测定：96 孔板在 37°C 下孵育过夜，每孔加入 100 μL 0.25 mg/mL PGT 的 PBS 溶液。通过抽吸除去过量的PGT，并用洗涤缓冲液（PBS中的0.1% Tween 20）洗涤板3次。激酶反应在 50 μL 50 mM HEPES (pH 7.3) 中进行，其中含有 125 mM 氯化钠、24 mM 氯化镁、0.1 mM 原钒酸钠、20 μM ATP、1.6 μg/mL EGF 和 15 ng EGFR，亲和力从A431细胞膜纯化。添加 DMSO 中的厄洛替尼 HCl，使 DMSO 最终浓度为 2.5%。通过添加 ATP 启动磷酸化，并在室温下持续摇动 8 分钟。通过抽吸反应混合物终止激酶反应并用洗涤缓冲液洗涤4次。通过每孔 50 μL HRP 偶联的 PY54 抗磷酸酪氨酸抗体孵育 25 分钟来测量磷酸化 PGT，该抗体在封闭缓冲液（PBS 中的 3% BSA 和 0.05% Tween 20）中稀释至 0.2 μg/mL。通过抽吸除去抗体，并用洗涤缓冲液洗涤板4次。通过添加 TMB Microwell 过氧化物酶底物（每孔 50 μL）来产生结肠测量信号，并通过添加 0.09 M 硫酸（每孔 50 μL）来终止。通过测量 450 nm 处的吸光度来估算磷酸酪氨酸。对照信号通常为 0.6-1.2 吸光度单位，在没有 AlP、EGFR 或 PGT 的孔中基本上没有背景，并且与 10 分钟的孵育时间成正比。细胞测定：将呈指数生长的细胞（A549、H322、H3255、H358 H661、H1650、H1975、H1299、H596 细胞）接种于 96 孔塑料板中，并暴露于埃罗替尼、培美曲塞或恒定浓度组合的连续稀释液中比例为 4:1，一式三份，持续 72 小时。通过细胞计数和 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物测定来测定细胞活力。生长抑制表示为药物处理的存活细胞与 PBS 处理的对照细胞的百分比（被认为是 100% 活力）。 IC50 值是与未处理的对照细胞相比，药物暴露 72 小时导致 50% 细胞生长抑制的浓度，并通过 CalcuSyn 软件计算。

在 100 mg/kg 的剂量下，Erlotinib HCl 完全阻止 EGF 诱导的人类 HN5 肿瘤中 EGFR 的自磷酸化，该肿瘤作为无胸腺小鼠的异种移植物以及治疗小鼠的肝脏 EGFR 的自磷酸化。 Erlotinib HCl (100 mg/Kg) 抑制 H460a 和 A549 肿瘤模型，抑制率分别为 71% 和 93%。

包被 96 孔板的过程包括每孔加入 100 μL 0.25 mg/mL PGT 的 PBS 溶液，在 37 °C 下孵育一整夜。使用抽吸去除多余的 PGT，并对板进行 3 次洗涤缓冲液洗涤（PBS 中的 0.1% Tween 20）。使用 50 μL 50 mM HEPES (pH 7.3)，其中含有 0.1 mM 原钒酸钠、125 mM 氯化钠、24 mM 氯化镁、20 μM ATP、1.6 μg/mL EGF 和来自 A431 细胞膜的 15 ng 亲和纯化的 EGFR用于激酶反应。通过在 DMSO 中添加盐酸厄洛替尼可达到 2.5% 的最终 DMSO 浓度。添加 ATP 后，磷酸化开始，并在室温下持续振荡八分钟。通过抽吸反应混合物终止激酶反应，并用洗涤缓冲液洗涤 4 次。通过每孔 50 μL HRP 偶联的 PY54 抗磷酸酪氨酸抗体孵育 25 分钟来测量磷酸化 PGT，该抗体在封闭缓冲液（PBS 中的 3% BSA 和 0.05% Tween 20）中稀释至 0.2 μg/mL。通过抽吸除去抗体，并用洗涤缓冲液洗涤板4次。通过添加 TMB Microwell 过氧化物酶底物（每孔 50 μL）来产生结肠测量信号，并通过添加 0.09 M 硫酸（每孔 50 μL）来终止。通过测量 450 nm 处的吸光度来估算磷酸酪氨酸。在没有 AlP、EGFR 或 PGT 的孔中，对照信号通常在 0.6 至 1.2 吸光度单位之间，几乎没有背景，并且与 10 分钟的孵育时间成正比。

将一式三份的、呈指数生长的细胞接种到厄洛替尼、培美曲塞或以 4:1 恒定浓度比连续稀释的组合中 72 小时。使用细胞计数和 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物测定来测量细胞活力。与 PBS 处理的对照细胞（被认为 100% 存活）相比，经药物处理的对照细胞存活的百分比称为生长抑制。 CalcuSyn 软件确定 IC50 值，即与未处理的对照细胞相比，药物暴露 72 小时导致细胞生长抑制 50% 的浓度。

Mice: Erlotinib (5 mg/kg) is administered p.o. or i.p. to Bcrp1/Mdr1a/1b^-/- and WT mice. The selection of i.p. administration is predicated on full bioavailability and optimal drug absorption. Three series of samples are taken from the lateral tail vein tip. Whole blood samples are taken during the first series at 15, min, 0.5, 1.5, 5, and 10 h following injection. The sampling times of the two subsequent series are adjusted to 5 and 15 minutes and 0.5, 1.5, 4, and 8 hours after injection based on the findings of this initial group. Blood samples are collected, centrifuged right away, and the plasma is kept at -20°C until high-performance liquid chromatographic analysis is performed.
Rats: There are male Crl:CD (SD) rats (244-297 g) that are seven weeks old. Erlotinib hydrochloride (10 mg/kg and 20 mg/kg) is given orally to the animals by gavage.

[1]. Cancer Res . 1997 Nov 1;57(21):4838-48.

[2]. Clin Cancer Res . 2007 Jun 1;13(11):3413-22.

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[7]. Neuroendocrinology . 2012;96(3):228-37.

C22H23N3O4.HCL

429.90

429.1455339

C, 61.47; H, 5.63; Cl, 8.25; N, 9.77; O, 14.89

183319-69-9

Erlotinib-d6 hydrochloride;1189953-78-3;Erlotinib;183321-74-6;Erlotinib mesylate;248594-19-6;Erlotinib-13C6 hydrochloride;1210610-07-3;Erlotinib-d6;1034651-23-4

White to off-white solid powder

COCCOC1=C(C=C2C(=C1)C(=NC=N2)NC3=CC=CC(=C3)C#C)OCCOC.Cl

GTTBEUCJPZQMDZ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H23N3O4.ClH/c1-4-16-6-5-7-17(12-16)25-22-18-13-20(28-10-8-26-2)21(29-11-9-27-3)14-19(18)23-15-24-22;/h1,5-7,12-15H,8-11H2,2-3H3,(H,23,24,25);1H

N-(3-ethynylphenyl)-6,7-bis(2-methoxyethoxy)quinazolin-4-amine;hydrochloride

NSC718781 HCl; NSC-718781 HCl; CP358774 HCl, NSC 718781 HCl; CP-358774 HCl; CP 358774 HCl; OSI-774 HCl; OSI 774 HCl; OSI774 HCl; Erlotinib hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 0.5 mg/mL (1.16 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 5.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 2: ≥ 0.5 mg/mL (1.16 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 5.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 3: 0.5 mg/mL (1.16 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), suspension solution; with ultrasonication.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 5.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

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Solubility in Formulation 4: 15% Captisol: 15 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。