| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
DNMT1
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK-3685032（6天）的中位生长IC50值为0.64 μM，这表明它抑制大多数癌细胞系的发育[1]。由于在整个 6 天持续时间内生长 IC50 降低，GSK-3685032（0.1-1000 nM，第 1-6 天）在 3 天后表现出生长抑制 [1]。 GSK3685032（10-1000 nM，第 4 天）可增加免疫相关基因转录，呈剂量依赖性[1]。 DNMT1 蛋白的表达被 GSK3685032（3.2-10,000 nM，2 天）抑制 [1]。 GSK3685032 诱导 DNA 低甲基化和基因激活 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在皮下 MV4-11 或 SKM-1 异种移植模型中，GSK-3685032（1-45 mg/kg；皮下注射，每天两次，持续 28 天）可减缓肿瘤的形成 [1]。小鼠药代动力学参数汇总：GSK-3685032[1]；剂量、途径； Cmax（纳克/毫升）； AUC0-8小时（h*ng/mL）； DNAUC（h*kg*ng/mL/mg）；清除率（mL/min/kg）；体积（升/千克）； T1/2（小时）2毫克/公斤； IV 5103 2418 1209 13 1.3 1.8 2 毫克/千克； SC 252 921 461 NA NA 2.8 2 mg/kg, SC 5473 15400 513 NA NA ND
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| 酶活实验 |
荧光耦合破碎光分析。[1]
如前所述，使用半甲基化发夹寡核苷酸检查DNMT的活性39。最终测定浓度由125 nM DNA寡核苷酸和（1）40 nM全长DNMT1、2μM SAM组成；（2） 600 nM DNMT3A/3L，2.5μM SAM；或（3）300 nM DNMT3B/3L，0.15μM SAM。DNMT1的反应在40分钟（26°C）后淬灭，DNMT3A/3L和DNMT3B/3L的反应在120分钟（37°C）后淬灭。将化合物（10点，三倍连续稀释，100%二甲亚砜）预先印在黑色反应板上（最终2%二甲基亚砜）。通过用1:4比例的全甲基/半甲基化发夹寡核苷酸（ATDBio定制合成的5-FAM-ATCTAG5-me-dCG5me-dCATCAGTTTTCTGATG5me-dCTAGA-Dabcyl-3和5-FAM-ATCSAG5-me-dCATCAGTTTCTGATG 5me-dCG5me-dcTAGA-Daccyl-3）代替DNMT反应，进行Gla1计数器筛选。对于可逆性研究，在DNMT1与化合物（10×IC50）预孵育20分钟后，加入底物后，复合物迅速稀释100倍。通过稀释后不同时间点的淬灭，在70分钟内评估DNMT1活性的恢复情况。如Ariazi等人所述，数据符合固定的稳态速度方程。 组蛋白甲基转移酶和激酶选择性。[1] 使用专有的HotSpot技术对甲基转移酶47和激酶48的抑制剂选择性进行了评估GSK-3685032在单一浓度（10μM）下对激酶组进行了测试。甲基转移酶面板加PIM1、PKD2/PRKD2和DYRK2以IC50格式进行测试（10点，三倍连续稀释）。 共价加合物的研究。[1] 在GSK3685032A（25μM）存在或不存在的情况下，将小鼠DNMT1（731–1602，5.6μM）与14-mer半甲基化DNA（25μM）在20mM Tris pH 7.5、50mM NaCl、5mM二硫苏糖醇、20%甘油和2.5%二甲亚砜中孵育20小时。然后将等分试样在0.05%TFA、0.1%甲酸溶液中稀释五倍，并注射20pmol蛋白质样品，在安捷伦6224 TOF LC-MS仪器上进行完整质量分析，并可能检测共价加合物。14-mer半甲基化DNA双链购自IDT（5-GGAGGC5me-dCGCCTGCT-3，带有补体链3-CCTCCGGCGGACGA-5）。 光亲和标记。[1] 在25μM光反应抑制剂（GSK3844831或GSK3901839）的存在下，将小鼠DNMT1（731–1602，5.7μM）与14-mer半甲基化DNA（25μM）在20 mM Tris pH 7.5、50 mM NaCl、5 mM二硫苏糖醇、20%甘油、2.5%二甲亚砜中孵育。在紫外光（λ=350nm）下进行光解45分钟。完整质量分析用于监测光标记掺入水平。光标记的mDNMT1用胃蛋白酶和因子XIII进行蛋白水解消化。通过相对于未标记mDNMT1的差异图谱鉴定标记的蛋白质片段，并使用液相色谱（LC）和基于串联质谱（MS/MS）的测序确定标记的氨基酸。使用Mascot v.2.6在内部蛋白质序列数据库中搜索MS/MS数据，以确定共价标记的位置。 DNMT1-DNA抑制剂复合物的形成。[1] DNMT1-DNA复合物是通过将DNMT1-DNA-SAH以约1:5:10的摩尔比孵育2小时制备的，并通过GE HiTrap肝素HP柱进一步纯化。双链DNA（5-GAGGCMGCTCT-3和5-GCAGGZGGCCTC-3，其中M为5-甲基胞嘧啶，Z为zebulline）含有12个碱基对的半甲基化寡核苷酸，用zebulline代替靶胞苷。在结晶之前，纯化的DNMT1-DNA复合物在4°C下与抑制剂（GSK-3685032或GSK3830052在二甲亚砜中）一起孵育1小时，蛋白质DNA与抑制剂的摩尔比约为1:8。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖测定[1]
细胞类型：15种白血病细胞、29种淋巴瘤细胞和7种多发性骨髓瘤细胞系，如EOL-1、Ki-JK、MM.IR细胞。 测试浓度： 0.01-100 μM 孵育时间： 6 天 实验结果： 证明细胞生长抑制大多数癌细胞系，中位生长 IC50 值为 0.64 μM。 细胞增殖测定 [1] 细胞类型： MV4-11 细胞 测试浓度： 0.1-1000 nM 孵育时间：1-6天 实验结果：3天后出现生长抑制，并且在整个6天的时间过程中生长IC50逐渐减小。 RT-PCR[1] 细胞类型： MV4-11 细胞 测试浓度： 10-10000 nM <孵育时间：4天 实验结果：MV4-11细胞处理后，CXCL11、IFI27、HLA-DQA1和MAGEA4以剂量依赖性方式增加。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： GDM-1 细胞 测试浓度： 3.2-10,000 nM 孵育时间：2天 实验结果：DNMT1蛋白表达受到抑制 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： MV4-11 异种移植模型（雌性 CD1-Foxn1 小鼠，12 周龄）或 SKM-1 异种移植模型（NOD.CB17-Prkdc1NCrCrl 小鼠，8-11 周龄）[1]
剂量： 1、5、15、30、45 mg/kg（10% Captisol，用 1 M 乙酸调节 pH 至 4.5-5，4 °C 保存，最多 1 周） 给药途径： 皮下注射，每日两次，连续 4 周 实验结果： 显示出具有统计学意义的剂量依赖性肿瘤生长抑制作用，在 ≥30 mg/kg 时出现显著的肿瘤消退。 GSK-3685032 或载体（10%将卡普替索（用1 M乙酸调节至pH 4.5–5，4 °C下保存最多1周）皮下注射，每日两次，每次剂量为10 ml/kg（每20 g体重0.2 ml）。DAC（太阳制药工业公司）腹腔注射，每周三次，每次剂量为10 ml/kg。 DAC 使用适量的厂家稀释剂（10 ml 水中含 68 mg 磷酸二氢钾和 11.6 mg 氢氧化钠）进行复溶，配制成浓度为 0.04 mg ml⁻¹ 的给药溶液，并在给药前立即使用（最终剂量为 0.4 mg kg⁻¹）。[1] 在查尔斯河实验室，我们评估了 GSK-3685032 在雌性 NOD.CB17-Prkdcscid/NCrCrl 小鼠 MV4-11 人系统性 AML 模型中的疗效。为了清除骨髓，在尾静脉注射 MV4-11 细胞前 3 天，我们开始给 10 周龄的小鼠注射环磷酰胺（150 mg kg⁻¹）。植入后 21 天，我们开始根据体重和给药剂量进行随机分组。本研究共纳入70只动物（每组10只），在30个研究日内进行给药。GSK-3685032或赋形剂每日皮下注射两次，DAC每周腹腔注射两次。每周测量三次体重。若单次观察到体重下降超过30%，或连续两次体重下降超过25%，则对动物实施安乐死。出现与肿瘤进展相关的临床症状，例如后肢功能障碍或眼球突出，也会导致安乐死。该研究的终点为76天。[1] 在未经处理的动物（每组3只小鼠，共9只小鼠）中进行了一项独立的药代动力学研究，小鼠分别接受单次静脉注射或皮下注射2 mg kg−1（静脉注射，雄性CD-1小鼠）、2 mg kg−1（皮下注射，雄性C57/BL6小鼠）或30 mg kg−1（皮下注射，雌性Nu/Nu小鼠）的GSK-3685032，并在给药后24小时内采集混合血样。采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定血药浓度，并使用Phoenix WinNonlin v.6.3（Certara）软件，通过非房室模型分析，根据平均血药浓度-时间曲线估算药代动力学参数。采用线性梯形法则计算血药浓度-时间曲线下面积，直至达到最大浓度（Cmax），之后采用线性或对数插值法则计算每个递增梯形下的面积。剂量归一化曲线下面积（AUC）通过将AUC0-8 h除以剂量计算得出。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DNA甲基化是转录沉默的关键表观遗传驱动因素，在癌症中普遍存在异常调控。使用去甲基化药物（例如胞苷类似物地西他滨或阿扎胞苷）逆转DNA甲基化，已在血液系统恶性肿瘤中显示出临床疗效。这些核苷类似物可掺入复制中的DNA，并通过不可逆的共价相互作用抑制DNA胞嘧啶甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B。这些药物对正常血细胞具有显著毒性，因此限制了其临床剂量。本文报道了GSK3685032的发现，这是一种高效的首创DNMT1选择性抑制剂。晶体学研究表明，GSK3685032可与DNMT1的活性位点环竞争，从而进入两个CpG碱基对之间的半甲基化DNA区域。 GSK3685032 在体外可显著降低 DNA 甲基化水平，激活转录并抑制癌细胞生长。与地西他滨相比，GSK3685032 具有更好的体内耐受性，因此在急性髓系白血病小鼠模型中可显著降低肿瘤发生率并延长生存期。[1]
本文描述了 GSK3685032 的发现，它是一种首创的高效、非核苷类、可逆、选择性 DNMT1 抑制剂。GSK3685032 通过一种独特的相互作用选择性地与 DNMT1 结合：该抑制剂与 DNMT1 活性位点环竞争进入半甲基化 DNA，并与 DNMT1 特有的转录激活结构域 (TRD) 相互作用。这种结合可导致 DNA 甲基化水平的快速降低和显著的转录激活。总体而言，GSK3685032 处理后 DNA 低甲基化（1-2 天）和转录激活（≥2 天）的动力学表明，敏感 AML 细胞生长和存活率的降低（≥4 天）与这些早期表观遗传改变直接相关。与 DNMT1 酶抑制作用增强相一致，GSK3685032 的生长抑制作用强于先前报道的非核苷类 DNMT 抑制剂（RG-108、SGI-1027 和 MC3343）[1]。尽管体外实验中 GSK3685032 与 DAC 之间存在许多相似之处，但值得注意的是，GSK3685032 表现出正常的剂量反应，在高剂量下仍能维持 DNA 去甲基化和转录激活，并且与 DAC 相比，尽管后者在表型上更有效，但 GSK3685032 仍能达到更高的最大去甲基化水平。这些观察结果表明，虽然DNA整合型泛DNMT抑制剂和非共价DNMT1选择性抑制剂的作用部分重叠，但传统的HMAs由于其非表观遗传作用机制而具有剂量限制性毒性。此外，由于DAC耐受性有限，这两类化合物在体内的靶点结合水平存在显著差异。GSK3685032能够实现更高的靶点结合率和DNA低甲基化水平，这明显转化为更强的抗肿瘤活性，在多种AML模型中均观察到肿瘤完全消退和总生存期延长。因此，GSK3685032是一种耐受性良好的小分子，适用于在体内研究选择性DNMT1抑制的下游效应，且不会产生DAC所观察到的复杂毒性。这些 DNMT1 选择性抑制剂毒性降低，耐受性和药代动力学得到改善，从而为 AML 提供了增强的临床机会，同时也有可能扩展到其他肿瘤类型，包括实体瘤适应症，而传统的 HMA 在这些适应症中活性有限。 |
| 分子式 |
C22H24N6OS
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|---|---|
| 分子量 |
420.5306
|
| 精确质量 |
420.173
|
| 元素分析 |
C, 62.83; H, 5.75; N, 19.98; O, 3.80; S, 7.62
|
| CAS号 |
2170137-61-6
|
| 相关CAS号 |
(R)-GSK-3685032;2170140-50-6;(S)-GSK-3685032;2170142-58-0
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| PubChem CID |
132233067
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
2.6
|
| tPSA |
158
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
684
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
S(C([H])(C(N([H])[H])=O)C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1=C(C#N)C(C([H])([H])C([H])([H])[H])=C(C#N)C(=N1)N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C1([H])[H])N([H])[H]
|
| InChi Key |
KNKHRZYILDZLRE-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C22H24N6OS/c1-2-16-17(12-23)21(28-10-8-15(25)9-11-28)27-22(18(16)13-24)30-19(20(26)29)14-6-4-3-5-7-14/h3-7,15,19H,2,8-11,25H2,1H3,(H2,26,29)
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| 化学名 |
2-((6-(4-aminopiperidin-1-yl)-3,5-dicyano-4-ethylpyridin-2-yl)thio)-2-phenylacetamide
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| 别名 |
GSK3685032; GSK-3685032; GSK3685032 HCl; SCHEMBL19716804; GSK-3685032 HCl; GTPL11750; BDBM491199; GSK 3685032
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~59.45 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3780 mL | 11.8898 mL | 23.7795 mL | |
| 5 mM | 0.4756 mL | 2.3780 mL | 4.7559 mL | |
| 10 mM | 0.2378 mL | 1.1890 mL | 2.3780 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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