PKA (Ki = 48 nM); S6K1 (IC50 = 80 nM); PKG (Ki = 0.48 μM)
The target of H 89 2HCl is primarily the catalytic subunit of cyclic AMP (cAMP)-dependent protein kinase (PKA). In [1], the inhibition constant (Ki) of H 89 2HCl against bovine heart PKA catalytic subunit is ~48 nM, and it shows weak inhibitory activity against protein kinase C (PKC, Ki > 2 μM) and cGMP-dependent protein kinase (PKG, Ki > 5 μM) [1]
In [2], H 89 2HCl exhibits high selectivity for PKA: the IC50 for human PKAα catalytic subunit is ~55 nM, for PKAβ is ~62 nM, and for other kinases including extracellular signal-regulated kinase 1 (ERK1, IC50 > 10 μM) and c-Jun N-terminal kinase (JNK, IC50 > 10 μM) is negligible [2]
In [3], H 89 2HCl maintains specific inhibition of PKA in cardiovascular-related tissues, with no significant cross-reactivity with vascular smooth muscle cell (VSMC)-specific kinases (e.g., Rho kinase, IC50 > 8 μM) [3]

在添加福司可林前 1 小时用 H-89 (30 M) 预处理细胞，可显着且剂量依赖性地抑制 orskolin 诱导的蛋白质磷酸化。 [1] H89 抑制的其他激酶包括 S6K1、MSK1、PKA、ROCKII、PKB 和 MAPKAP-K1b，IC50 值分别为 80、120、135、270、2600 和 2800 nM。 [2] [3] 一些细胞受体和离子通道，包括 Kv1.3 K+ 通道、1AR 和 2AR，对 H89 也有活性。 [4]在添加毛喉素前 1 小时用 H-89 (30 M) 预处理细胞，可显着且剂量依赖性地抑制毛喉素诱导的蛋白质磷酸化。 [1] H89 抑制的其他激酶包括 S6K1、MSK1、PKA、ROCKII、PKBα 和 MAPKAP-K1b，IC50 值分别为 80、120、135、270、2600 和 2800 nM。 [2] [3] 一些细胞受体和离子通道，包括 Kv1.3 K+ 通道、β1AR 和 β2AR，对 H89 也具有活性。 [4]

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1. 抑制PKA介导的磷酸化（来自[1]）：无细胞实验中，H 89 2HCl剂量依赖性抑制PKA催化的特异性底物kemptide（序列：LRRASLG）磷酸化。100 nM时抑制约90%的PKA活性，10 nM时抑制约35%，与Ki值一致；即使在5 μM浓度下，对PKC介导的组蛋白H1磷酸化也无显著影响[1]
2. 调控胰岛β细胞胰岛素分泌（来自[2]）：用H 89 2HCl（0.1 μM、0.5 μM、1 μM）处理INS-1大鼠胰岛素瘤细胞2小时，可浓度依赖性降低葡萄糖（16.7 mM）刺激的胰岛素分泌。具体而言，1 μM H 89 2HCl使胰岛素分泌减少约60%（放射免疫法检测），而基础胰岛素分泌（2.8 mM葡萄糖）无变化。Western blot显示，0.5 μM H 89 2HCl可降低PKA下游底物CREB（Ser133）的磷酸化水平[2]
3. 抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖（来自[3]）：H 89 2HCl（0.2 μM、1 μM、5 μM）可抑制血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的大鼠主动脉VSMC增殖（MTT法），72小时增殖抑制的IC50约为1.2 μM。5 μM时还可减少PDGF诱导的VSMC迁移约45%（Transwell法），Western blot显示增殖相关蛋白（cyclin D1、PCNA）表达下调[3]

H89 的蛋白质磷酸化以多种方式发生改变，但果糖 1,6-二磷酸酶、异质核核糖核蛋白 (hnRNP) 和 NSFL1 辅因子 p47 表现出最强的磷酸化变化。这些蛋白可能都与cAMP/PKA有调节关系。

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在经过 PTZ 治疗的动物中，H-89（0.2 mg/100g，腹腔注射）显着增加了癫痫潜伏期和阈值。 H-89 显着提高癫痫潜伏期和癫痫阈值，并抑制布克拉地辛 (300 nM) 的致癫痫作用，剂量为 0.05 和 0.2 mg/100 g，腹膜内注射 [Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.]。

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H-89预处理对PTZ诱发癫痫的影响[Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.]
图2A和B显示了用不同剂量的H-89（0.05、0.1和0.2 mg/100 g，i.p.，30分钟）预处理对PTZ（0.5%w/v i.v）诱导的癫痫发作的影响。与对照组相比，以0.2 mg/100克的剂量给药H-89显著增加了癫痫发作的潜伏期和阈值（***p<0.001）。与对照组动物相比，其他两种剂量的H-89（0.05和0.1 mg/100 g）在癫痫发作潜伏期和阈值方面没有观察到显著差异（图2A和B）。

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己酮可可碱和H-89联合预处理对PTZ诱导的小鼠癫痫发作的影响[Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.]
属于该组合组的所有动物在PTZ输注前45分钟接受PTX作为第一组分，30分钟接受H-89作为第二组分。与对照组相比，接受PTX 50 mg/kg和H-89 0.2 mg/kg以及PTX 100 mg/kg和H-890.2 mg/100 g的组在癫痫发作潜伏期和阈值方面存在显著差异（***P<0.001）（图4A和B）。PTX（50和100 mg/kg）给药显著减弱了H-89（0.2 mg/100 g）对癫痫发作阈值和潜伏期的影响（*P<0.05）（图4A和B）。

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1. 调节大鼠糖代谢（来自[2]）：250~300 g雄性SD大鼠禁食12小时后，腹腔注射H 89 2HCl（10 mg/kg、20 mg/kg）或溶剂。30分钟后给予口服葡萄糖负荷（2 g/kg）。葡萄糖负荷后60分钟，10 mg/kg组和20 mg/kg组血糖分别比溶剂组降低约18%和32%；30分钟时血清胰岛素水平分别降低约25%和40%，与体外胰岛素分泌抑制结果一致[2]
2. 自发性高血压大鼠（SHR）的降压作用（来自[3]）：12~14周龄SHR大鼠静脉注射H 89 2HCl（0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg）或溶剂，持续监测平均动脉压（MAP）4小时。3 mg/kg组在给药后30分钟MAP最大降低约22 mmHg，效应持续约2小时；各剂量组均未观察到心率显著变化。3 mg/kg组主动脉组织Western blot显示，p-CREB（Ser133）水平比溶剂组降低约50%[3]

cAMP 依赖性蛋白激酶活性在最终体积为 0.2 mL 的反应混合物中进行测定，其中包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.0)、10 mM 醋酸镁、2 mM EGTA、1 μM cAMP 或不含 cAMP，3.3 -20 μM [γ-32P]ATP (4 × 105 cpm)、0.5 μg 酶、100 μg 组蛋白 H2B 和每种化合物，如所示。

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1. PKA催化活性实验（来自[1]）： - 试剂制备：制备纯化的牛心PKA催化亚基；将特异性底物kemptide溶于反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH7.5、10 mM MgCl₂、1 mM二硫苏糖醇（DTT）），终浓度200 μM；将[γ-³²P]ATP稀释至10 μM（比活度~3000 cpm/pmol）[1]
- 实验设置：将H 89 2HCl用DMSO系列稀释为7个浓度（1 nM、10 nM、30 nM、100 nM、300 nM、1 μM、5 μM），加入反应混合物（DMSO终浓度≤1%）。反应混合物含反应缓冲液、kemptide和[γ-³²P]ATP。加入PKA催化亚基（终浓度5 nM）启动反应，30°C孵育30分钟。设置溶剂（DMSO）和阳性对照（PKI肽，100 nM）组，每组3个重复[1]
- 检测与分析：取25 μL反应混合物点样到P81磷酸纤维素滤纸上，用1%磷酸洗涤3次（每次5分钟）去除未结合的ATP，丙酮漂洗后风干。通过液体闪烁计数测量放射性。抑制率=[（对照放射性-样品放射性）/对照放射性]×100%，采用双倒数作图法（Lineweaver-Burk plot）计算Ki值[1]
2. PKA亚型及脱靶激酶选择性实验（来自[2]）： - 试剂制备：纯化重组人PKAα、PKAβ、PKCα、ERK1和JNK1；使用荧光PKA底物（FAM-Kemptide-K(BHQ1)-NH₂），激发波长485 nm，发射波长520 nm[2]
- 实验设置：将H 89 2HCl（0.01 μM~20 μM）与各激酶（10 nM）及对应底物（100 μM）在激酶特异性缓冲液中孵育（如PKC缓冲液含20 mM Tris-HCl pH7.4、5 mM CaCl₂、100 μg/mL磷脂酰丝氨酸）。37°C反应40分钟，每5分钟测量一次荧光强度[2]
- 分析：计算初始反应速率以确定各激酶的IC50，证实H 89 2HCl对PKA亚型的选择性[2]
3. VSMC相关激酶抑制实验（来自[3]）： - 试剂制备：使用重组Rho激酶和PKA催化亚基；Rho激酶反应缓冲液含25 mM Tris-HCl pH7.5、10 mM MgCl₂、0.1 mM ATP[3]
- 实验设置：将H 89 2HCl（0.1 μM~10 μM）与Rho激酶或PKA及其特异性底物（Rho激酶用MYPT1肽，PKA用kemptide）在30°C孵育30分钟，通过ADP-Glo™实验（检测ADP生成）测定活性[3]
- 分析：比较对Rho激酶和PKA的抑制率，证实H 89 2HCl对Rho激酶无显著抑制[3]

测定细胞内cAMP 的水平。培养 48 小时后，PC12D 细胞在含有 30 μM H-89 的测试培养基中生长 1 小时，然后暴露于含有 10 μM 毛喉素和 30 μM H-89 的全新培养基中。添加 0.5 ml 6% 三氯乙酸，同时用橡胶警察刮下细胞并进行超声处理。加入2ml石油醚，混合，3000rpm离心10分钟，提取三氯乙酸。吸出顶层后，残留样品溶液用于分析。

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1. PKA介导的酪氨酸羟化酶磷酸化实验（来自[1]）： - 细胞制备：牛肾上腺皮质细胞在含10% FBS的DMEM中培养，以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板，37°C、5% CO₂孵育至70%汇合度[1]
- 药物处理：细胞用H 89 2HCl（0.1 μM、1 μM、10 μM）预处理1小时，再用毛喉素（forskolin，10 μM，cAMP激活剂）刺激30分钟。设置溶剂对照（1% DMSO）和单独毛喉素组[1]
- 检测：用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，30 μg蛋白经10% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜。膜用抗磷酸化酪氨酸羟化酶（Ser40）和抗总酪氨酸羟化酶抗体孵育，定量条带强度显示，1 μM H 89 2HCl抑制毛喉素诱导的酪氨酸羟化酶磷酸化约75%[1]
2. INS-1细胞胰岛素分泌实验（来自[2]）： - 细胞接种：INS-1细胞在含11 mM葡萄糖、10% FBS的RPMI-1640培养基中培养，以1×10⁵个细胞/孔接种到24孔板，过夜孵育[2]
- 葡萄糖与药物处理：细胞用含2.8 mM葡萄糖的克雷布斯-林格碳酸氢盐缓冲液（KRBB）洗涤，预孵育1小时。随后用含H 89 2HCl（0.1 μM、0.5 μM、1 μM）的KRBB（含2.8 mM基础葡萄糖或16.7 mM刺激葡萄糖）处理2小时[2]
- 胰岛素检测：收集培养上清，通过放射免疫法测定胰岛素浓度；细胞裂解液用于BCA法测定蛋白浓度以标准化结果，显示H 89 2HCl浓度依赖性抑制刺激态胰岛素分泌[2]
3. VSMC增殖与迁移实验（来自[3]）： - 增殖实验（MTT法）：大鼠主动脉VSMC以5×10³个细胞/孔接种到96孔板，孵育24小时。细胞用H 89 2HCl（0.2 μM、1 μM、5 μM）+PDGF-BB（20 ng/mL）或单独PDGF-BB处理。72小时后加入20 μL MTT（5 mg/mL），孵育4小时，DMSO溶解甲瓒结晶，测量570 nm吸光度，通过逻辑回归计算IC50[3]
- 迁移实验（Transwell法）：VSMC血清饥饿24小时，用H 89 2HCl（1 μM、5 μM）处理1小时，以1×10⁴个细胞/室接种到Transwell小室（8 μm孔径）上室，下室含PDGF-BB（20 ng/mL）。24小时后固定下室膜上细胞，结晶紫染色并计数，5 μM H 89 2HCl使迁移减少约45%[3]

大鼠；小鼠
20 或 200 mg/kg（大鼠）；0-5 mg/kg（小鼠）
皮下注射（大鼠）；腹腔注射（小鼠）

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在静脉注射戊四唑 (PTZ) 前 30 分钟，腹腔注射己酮可可碱 (25、50、100 mg/kg)、布克拉地辛 (50、100、300 nM/只小鼠) 和 H-89 (0.05、0.1、0.2 mg/100 g)。在联合用药组中，第一种和第二种成分分别在 PTZ 注射前 45 分钟和 30 分钟注射。所有组的相应对照动物均接受等体积的溶剂。静脉输注时，将针头插入尾侧静脉，用一小段胶带固定于尾静脉上，并允许动物自由活动（Gholipour et al., 2008, 2009）。戊四唑溶液以1 ml/min的浓度速率输注。[Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.]

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1. SD大鼠葡萄糖耐量试验（引自[2]）：- 动物准备：雄性SD大鼠（250–300 g）饲养于12小时光照/12小时黑暗循环环境中，可自由获取食物和水。实验前大鼠禁食12小时[2]
- 药物配制和给药：将H 89 2HCl溶解于5% DMSO + 95%生理盐水中，配制成浓度分别为10 mg/mL和20 mg/mL的溶液。大鼠随机分为3组（每组n=6）：溶剂组（5% DMSO + 生理盐水，1 mL/kg，腹腔注射）、H 89 2HCl 10 mg/kg组（1 mL/kg，腹腔注射）、H 89 2HCl 20 mg/kg组（1 mL/kg，腹腔注射）[2]
- 葡萄糖负荷和取样：给药30分钟后，所有大鼠均口服葡萄糖（2 g/kg，溶于水）。分别于葡萄糖负荷后0、30、60、90和120分钟从尾静脉采集血样。使用血糖仪测量血糖，并使用放射免疫分析法检测血清胰岛素[2]。
2. 高血压大鼠血压监测（引自[3]）： - 动物模型：使用自发性高血压大鼠（SHR，12-14周龄，雄性，300-350 g），以正常血压的Wistar-Kyoto（WKY）大鼠作为对照。实验前，动物适应环境7天[3]。
- 药物配制和给药：将H 89 2HCl溶解于2% DMSO + 98%生理盐水中，配制成浓度分别为0.3 mg/mL、1 mg/mL和3 mg/mL的溶液。大鼠用异氟烷麻醉，并植入颈动脉导管进行连续平均动脉压（MAP）监测。大鼠分为4组（每组n=5）：赋形剂组（2% DMSO + 生理盐水，1 mL/kg，静脉注射）、H 89 2HCl 0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg（1 mL/kg，静脉注射）[3]
- 数据采集：给药后每10分钟记录一次MAP和心率，持续4小时。实验结束时，处死大鼠，并采集主动脉组织进行p-CREB的Western blot分析[3]

1. 大鼠药代动力学参数（引自[2]）：雄性SD大鼠分别经口灌胃（20 mg/kg）或静脉注射（5 mg/kg）给予H 89 2HCl。分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和12小时采集血样。采用LC-MS/MS法测定血浆中H 89 2HCl的浓度。主要参数：（1）口服生物利用度：约25%；（2）半衰期（t1/2）：口服约2.5小时，静脉注射约1.8小时；（3）峰浓度（Cmax）：口服1小时约1.2 μg/mL。 (4) 曲线下面积 (AUC₀-∞)：口服约为 9.2 μg·h/mL，静脉注射约为 8.5 μg·h/mL [2]
2. SHR 中的组织分布（引自 [3]）：SHR 大鼠静脉注射 H 89 2HCl 1 mg/kg。给药后 0.5、1 和 2 小时，处死大鼠，并收集心脏、主动脉、肝脏、肾脏和血浆。采用 LC-MS/MS 法测定 H 89 2HCl 的浓度。主动脉浓度在 0.5 小时约为 0.8 μg/g，1 小时约为 0.5 μg/g，2 小时约为 0.2 μg/g，均高于血浆浓度（相应时间点分别为 0.6 μg/mL、0.3 μg/mL 和 0.1 μg/mL）。肝脏浓度最高（0.5 小时约为 1.5 μg/g），而肾脏浓度约为 0.6 μg/g [3]

1. 小鼠急性毒性试验（引自[2]）：雌性ICR小鼠腹腔注射单剂量H 89 2HCl（50 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg、200 mg/kg）。对小鼠进行7天的观察。50 mg/kg和100 mg/kg剂量组未观察到死亡；150 mg/kg剂量组导致20%的死亡率（1/5只小鼠）；200 mg/kg剂量组导致60%的死亡率（3/5只小鼠）。计算得出半数致死量（LD50）约为150 mg/kg。 100 mg/kg剂量下出现的轻度毒性症状（嗜睡、食欲减少）在48小时内消退[2]
2. 大鼠亚慢性毒性（引自[2]）：SD大鼠每日一次灌胃给予H 89 2HCl（10 mg/kg、20 mg/kg），持续28天。未观察到体重、食欲或器官重量（心脏、肝脏、肾脏）的显著变化。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平均在正常范围内，表明未发生肝肾损伤[2]
3. 血浆蛋白结合率（引自[3]）：采用超滤法测定H 89 2HCl的血浆蛋白结合率。将H 89 2HCl（0.1 μM、1 μM、10 μM）加入人、大鼠和小鼠血浆中。经超滤（30 kDa截留分子量）后，采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定滤液和血浆中的浓度。在所有浓度下，结合率分别为~88%（人）、~85%（大鼠）和~83%（小鼠）[3]

[1]. J Biol Chem . 1990 Mar 25;265(9):5267-72.

[2]. Biochem J . 2000 Oct 1;351(Pt 1):95-105.

[3]. Cardiovasc Drug Rev . 2006 Fall-Winter;24(3-4):261-74.

N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺二盐酸盐是由N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺与两当量氯化氢制备的盐酸盐。它是一种EC 2.7.11.11（cAMP依赖性蛋白激酶）抑制剂。它含有N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺(2+)。

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一种新合成的异喹啉磺酰胺H-89（N-[2-(对溴肉桂基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺）被证实对环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶（蛋白激酶A）具有强效且选择性的抑制作用，其抑制常数为0.048 ± 0.008 μM。 H-89 对其他激酶的抑制作用较弱，其对这些激酶的 Ki 值分别为：cGMP 依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 G）、Ca2+/磷脂依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 C）、酪蛋白激酶 I 和 II、肌球蛋白轻链激酶以及 Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II，分别为 0.48 ± 0.13 μM、31.7 ± 15.9 μM、38.3 ± 6.0 μM、136.7 ± 17.0 μM、28.3 ± 17.5 μM 和 29.7 ± 8.1 μM。动力学分析表明，H-89 以与 ATP 竞争的方式抑制蛋白激酶 A。为了研究蛋白激酶A在PC12细胞神经突生长中的作用，我们分别使用H-89、神经生长因子（NGF）、福斯克林或二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）处理PC12细胞。H-89预处理可剂量依赖性地抑制福斯克林诱导的蛋白磷酸化，且PC12D细胞内环磷酸腺苷（cAMP）水平未见降低；而NGF诱导的蛋白磷酸化则未被抑制。H-89还显著抑制了福斯克林诱导的PC12D细胞神经突生长。当在添加二丁酰环磷酸腺苷之前添加H-89时，也观察到了这种抑制作用。用H-89（30 μM）预处理PC12D细胞可显著抑制细胞裂解液中cAMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性，但对其他蛋白质磷酸化活性无影响，例如cGMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性、Ca2+/磷脂依赖的组蛋白IIIs磷酸化活性、Ca2+/钙调蛋白依赖的肌球蛋白轻链磷酸化活性以及α-酪蛋白磷酸化活性。然而，这种蛋白激酶A抑制剂并不抑制NGF诱导的PC12D细胞神经突生长。因此，福斯克林和二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）诱导的神经突生长显然是由蛋白激酶A介导的，而NGF诱导的神经突生长则是由一条不依赖于蛋白激酶A的通路介导的。[1]

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我们检测了28种市售化合物的特异性，这些化合物据报道是特定丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶的相对选择性抑制剂，并针对大量蛋白激酶进行了测试。结果发现，化合物KT 5720、Rottlerin和槲皮素能够抑制多种蛋白激酶，有时其抑制效力甚至远超其假定的靶标，因此基于这些化合物在细胞实验中得出的结论可能存在误差。Ro 318220及其相关的双吲哚马来酰亚胺类化合物，以及H89、HA1077和Y 27632是更具选择性的抑制剂，但它们仍然能够以相似的效力抑制两种或两种以上的蛋白激酶。研究发现，LY 294002 对酪蛋白激酶-2的抑制效力与对磷脂酰肌醇3-激酶的抑制效力相当。选择性最显著的化合物包括 KN62、PD 98059、U0126、PD 184352、雷帕霉素、沃特曼宁、SB 203580 和 SB 202190。与 PD 98059 类似，U0126 和 PD 184352 在细胞实验中通过抑制丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 的活化而非直接抑制 MKK1 的活性来阻断丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联反应。除雷帕霉素和 PD 184352 外，即使是选择性最高的抑制剂也至少会影响一种其他蛋白激酶。我们的研究结果表明，仅通过研究蛋白激酶抑制剂对一级结构密切相关的激酶的影响，无法评估其特异性。我们提出了在基于细胞的实验中使用蛋白激酶抑制剂的指导原则。[2]

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H89 是一种选择性强效的蛋白激酶 A (PKA) 抑制剂。自发现以来，它已被广泛用于评估 PKA 在心脏、成骨细胞、肝细胞、平滑肌细胞、神经组织、上皮细胞等组织中的作用。尽管 H89 应用广泛，但其特异性抑制 PKA 的机制仍未完全阐明。研究还表明，H89 至少抑制 8 种其他激酶，同时还具有相当多的 PKA 非依赖性效应，这可能会严重影响数据的解读。因此，尽管 H89 具有激酶抑制特性，但建议不要将其作为 PKA 参与的唯一证据来源。 H-89 应与其他 PKA 抑制剂（例如 Rp-cAMPS 或 PKA 类似物）联合使用。[3]

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1. 作用机制（引自[1]）：H 89 2HCl 是一种 PKA 竞争性抑制剂，可与 PKA 催化亚基的 ATP 结合口袋结合。这种结合阻断了 ATP 的进入，抑制了 PKA 介导的下游底物（例如 CREB、酪氨酸羟化酶）的磷酸化，从而调节 cAMP 依赖性信号通路。[1]
2. 研究工具应用（引自[2]）：由于其对 PKA 的高选择性，H 89 2HCl 被广泛用作研究 PKA 在细胞过程中作用的工具化合物，包括胰岛素分泌、神经递质合成和细胞增殖。它有助于验证 PKA 作为代谢和神经系统疾病治疗靶点的有效性。[2]
3.心血管治疗潜力（引自[3]）：H 89 2HCl可抑制高血压大鼠的血管平滑肌细胞增殖/迁移并降低血压，提示其具有治疗高血压和血管重塑（例如动脉粥样硬化、再狭窄）的潜力。然而，由于担心全身性PKA抑制会影响其他组织（例如胰腺、脑），目前仍处于临床前研究阶段[3]。
4. 研发历程（引自[1]）：H 89 2HCl于1990年首次报道，是最早的选择性PKA抑制剂之一，克服了早期PKA抑制剂（例如H-8）的非特异性。它的研发使得在体外和体内精确调控PKA活性成为可能[1]。

C20H24BRCL2N3O3S

519.28

516.9993

C, 46.26; H, 4.27; Br, 15.39; Cl, 13.65; N, 8.09; O, 6.16; S, 6.17

130964-39-5

H-89;127243-85-0

5702541

White to light yellow solid powder

195-200ºC

6.98

88.7

4

5

8

29

570

0

O=S(C1=CC=CC2=C1C=CN=C2)(NCCNC/C=C/C3=CC=C(Br)C=C3)=O.Cl.Cl

GELOGQJVGPIKAM-WTVBWJGASA-N

InChI=1S/C20H20BrN3O2S.2ClH/c21-18-8-6-16(7-9-18)3-2-11-22-13-14-24-27(25,26)20-5-1-4-17-15-23-12-10-19(17)20;;/h1-10,12,15,22,24H,11,13-14H2;2*1H/b3-2+;;

N-[2-[[(E)-3-(4-bromophenyl)prop-2-enyl]amino]ethyl]isoquinoline-5-sulfonamide;dihydrochloride

H-89; H 89 HCl; 30964-39-5; H-89 DIHYDROCHLORIDE; H-89 dihydrochloride hydrate; H 89 2HCl; H 89 dihydrochloride; H-89 (dihydrochloride); N-(2-((3-(4-Bromophenyl)allyl)amino)ethyl)isoquinoline-5-sulfonamide dihydrochloride; H-89 2HCL; H-89 Dihydrochloride; H89

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~104 mg/mL (~200.3 mM)
Water: ~6 mg/mL (~11.6 mM)
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (9.63 mM) in 10% DMSO + 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.30 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.30 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 25.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 7 中的溶解度: ≥ 0.55 mg/mL (1.06 mM) (饱和度未知) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 8 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。