PKA (Ki = 48 nM); S6K1 (IC50 = 80 nM); PKG (Ki = 0.48 μM)

当使用 ATP 时，H-89 会竞争性抑制蛋白激酶 A。在 PC12D 细胞中，H-89 以剂量依赖性方式抑制毛喉素诱导的蛋白质磷酸化，而不降低细胞内环 AMP 水平。在 PC12D 细胞中，H-89 强烈抑制毛喉素引起的神经突发育。在 PC12D 细胞裂解物中，H-89 (30 μM) 显着降低 cAMP 依赖性组蛋白 IIb 磷酸化活性 [1]。 H-89 (1-2 μM) 显着延迟了大鼠皮质纤维的重新启动，这很可能是由于它对 T 系统电位产生了负面影响。 H-89 (10-100 μM) 改变大鼠皮肤纤维收缩装置的 Ca32 敏感性，并抑制 SR 的净 Ca2+ 吸收 [2]。

在经过 PTZ 治疗的动物中，H-89（0.2 mg/100g，腹腔注射）显着增加了癫痫潜伏期和阈值。 H-89 显着提高癫痫潜伏期和癫痫阈值，并抑制布克拉地辛 (300 nM) 的致癫痫作用，剂量为 0.05 和 0.2 mg/100 g，腹膜内注射 [3]。

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H-89预处理对PTZ诱发癫痫的影响[3]
图2A和B显示了用不同剂量的H-89（0.05、0.1和0.2 mg/100 g，i.p.，30分钟）预处理对PTZ（0.5%w/v i.v）诱导的癫痫发作的影响。与对照组相比，以0.2 mg/100克的剂量给药H-89显著增加了癫痫发作的潜伏期和阈值（***p<0.001）。与对照组动物相比，其他两种剂量的H-89（0.05和0.1 mg/100 g）在癫痫发作潜伏期和阈值方面没有观察到显著差异（图2A和B）。

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己酮可可碱和H-89联合预处理对PTZ诱导的小鼠癫痫发作的影响[3]
属于该组合组的所有动物在PTZ输注前45分钟接受PTX作为第一组分，30分钟接受H-89作为第二组分。与对照组相比，接受PTX 50 mg/kg和H-89 0.2 mg/kg以及PTX 100 mg/kg和H-890.2 mg/100 g的组在癫痫发作潜伏期和阈值方面存在显著差异（***P<0.001）（图4A和B）。PTX（50和100 mg/kg）给药显著减弱了H-89（0.2 mg/100 g）对癫痫发作阈值和潜伏期的影响（*P<0.05）（图4A和B）。

cAMP 依赖性蛋白激酶活性在最终体积为 0.2 mL 的反应混合物中进行测定，其中包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.0)、10 mM 醋酸镁、2 mM EGTA、1 μM cAMP 或不含 cAMP，3.3 -20 μM [γ-32P]ATP (4 × 105 cpm)、0.5 μg 酶、100 μg 组蛋白 H2B 和每种化合物，如所示。

测定细胞内cAMP 的水平。培养 48 小时后，PC12D 细胞在含有 30 μM H-89 的测试培养基中生长 1 小时，然后暴露于含有 10 μM 毛喉素和 30 μM H-89 的全新培养基中。添加 0.5 ml 6% 三氯乙酸，同时用橡胶警察刮下细胞并进行超声处理。加入2ml石油醚，混合，3000rpm离心10分钟，提取三氯乙酸。吸出顶层后，残留样品溶液用于分析。

rat; mice
20 or 200 mg/kg (Rat); 0-5 mg/kg (Mice)
s.c. (Rat); i.p. (Mice)

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Pentoxifylline (25, 50, 100 mg/kg), bucladesine (50, 100, 300 nM/mouse) and H-89 (0.05, 0.1, 0.2 mg/100 g) were administered intraperitoneally (i.p.) 30 min before intravenous (i.v.) infusion of PTZ. In combination groups, the first and second components were injected 45 and 30 min before PTZ infusion. In all groups, the respective control animals received an appropriate volume of vehicle. For the i.v. infusion, the needle was inserted into the lateral tail vein, fixed to the tail vein by a narrow piece of adhesive tape, and the animal was allowed to move freely (Gholipour et al., 2008, 2009). PTZ solution was infused at a concentration rate of 1 ml/min.[3]

[1]. Inhibition of forskolin-induced neurite outgrowth and protein phosphorylation by a newly synthesized selective inhibitor of cyclic AMP-dependent protein kinase, N-[2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H-89), of PC12D pheochromocytoma cells. J Biol Chem. 1990 Mar 25;265(9):5267-72.

[2]. Effects of the PKA inhibitor H-89 on excitation-contraction coupling in skinned and intact skeletal muscle fibres. J Muscle Res Cell Motil. 2001;22(3):277-86.

[3]. Effects of pentoxifylline and H-89 on epileptogenic activity of bucladesine in pentylenetetrazol-treated mice. Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.

N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺属于异喹啉类化合物，是由异喹啉-5-磺酸的磺酸基与N(1)-[3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]乙烷-1,2-二胺的伯氨基缩合而成的磺酰胺。它是一种蛋白激酶A抑制剂，属于EC 2.7.11.11（cAMP依赖性蛋白激酶）抑制剂。它属于异喹啉类化合物、磺酰胺类化合物、溴苯类化合物、烯烃类化合物和仲氨基化合物。它是N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺(2+)的共轭碱。

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新合成的异喹啉磺酰胺 H-89 (N-[2-(对溴肉桂酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺) 被证明对环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 A）具有强效和选择性的抑制作用，抑制常数为 0.048 +/- 0.008 μM。 H-89 对其他激酶的抑制作用较弱，其对这些激酶的 Ki 值分别为：cGMP 依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 G）、Ca2+/磷脂依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 C）、酪蛋白激酶 I 和 II、肌球蛋白轻链激酶以及 Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II，分别为 0.48 ± 0.13 μM、31.7 ± 15.9 μM、38.3 ± 6.0 μM、136.7 ± 17.0 μM、28.3 ± 17.5 μM 和 29.7 ± 8.1 μM。动力学分析表明，H-89 以与 ATP 竞争的方式抑制蛋白激酶 A。为了研究蛋白激酶A在PC12细胞神经突生长中的作用，我们分别使用H-89、神经生长因子（NGF）、福斯克林或二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）处理PC12细胞。H-89预处理可剂量依赖性地抑制福斯克林诱导的蛋白磷酸化，且PC12D细胞内环磷酸腺苷（cAMP）水平未见降低；而NGF诱导的蛋白磷酸化则未被抑制。H-89还显著抑制了福斯克林诱导的PC12D细胞神经突生长。当在添加二丁酰环磷酸腺苷之前添加H-89时，也观察到了这种抑制作用。用H-89（30 μM）预处理PC12D细胞可显著抑制细胞裂解液中cAMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性，但对其他蛋白质磷酸化活性无影响，例如cGMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性、Ca2+/磷脂依赖的组蛋白IIIs磷酸化活性、Ca2+/钙调蛋白依赖的肌球蛋白轻链磷酸化活性以及α-酪蛋白磷酸化活性。然而，这种蛋白激酶A抑制剂并不抑制NGF诱导的PC12D细胞神经突生长。因此，福斯克林和二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）诱导的神经突生长显然是由蛋白激酶A介导的，而NGF诱导的神经突生长则是由一条不依赖于蛋白激酶A的通路介导的。[1]

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我们检测了28种市售化合物的特异性，这些化合物据报道是特定丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶的相对选择性抑制剂，并针对大量蛋白激酶进行了测试。结果发现，化合物KT 5720、Rottlerin和槲皮素能够抑制多种蛋白激酶，有时其抑制效力甚至远超其假定的靶标，因此基于这些化合物在细胞实验中得出的结论可能存在误差。Ro 318220及其相关的双吲哚马来酰亚胺类化合物，以及H89、HA1077和Y 27632是更具选择性的抑制剂，但它们仍然能够以相似的效力抑制两种或两种以上的蛋白激酶。研究发现，LY 294002 对酪蛋白激酶-2的抑制效力与对磷脂酰肌醇3-激酶的抑制效力相当。选择性最显著的化合物包括 KN62、PD 98059、U0126、PD 184352、雷帕霉素、沃特曼宁、SB 203580 和 SB 202190。与 PD 98059 类似，U0126 和 PD 184352 在细胞实验中通过抑制丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 的活化而非直接抑制 MKK1 的活性来阻断丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联反应。除雷帕霉素和 PD 184352 外，即使是选择性最高的抑制剂也至少会影响一种其他蛋白激酶。我们的研究结果表明，仅通过研究蛋白激酶抑制剂对一级结构密切相关的激酶的影响，无法评估其特异性。我们提出了在基于细胞的实验中使用蛋白激酶抑制剂的指导原则。[2]

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H89 是一种选择性强效的蛋白激酶 A (PKA) 抑制剂。自发现以来，它已被广泛用于评估 PKA 在心脏、成骨细胞、肝细胞、平滑肌细胞、神经组织、上皮细胞等组织中的作用。尽管 H89 应用广泛，但其特异性抑制 PKA 的机制仍未完全阐明。研究还表明，H89 至少抑制 8 种其他激酶，同时还具有相当多的 PKA 非依赖性效应，这可能会严重影响数据的解读。因此，尽管 H89 具有激酶抑制特性，但建议不要将其作为 PKA 参与的唯一证据来源。 H-89 应与其他 PKA 抑制剂（如 Rp-cAMPS 或 PKA 类似物）一起使用。[3]

C20H20BRN3O2S

446.363

445.045

C, 53.82; H, 4.52; Br, 17.90; N, 9.41; O, 7.17; S, 7.18

127243-85-0

H-89 dihydrochloride;130964-39-5; 127243-85-0 ; 1000995-75-4; 1049740-55-7 (2HCl hydrate)

449241

Typically exists as off-white to light brown solids at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

639.7±65.0 °C at 760 mmHg

195-200°C

340.7±34.3 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.653

3.03

79.47

2

5

8

27

570

0

BrC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])/C(/[H])=C(\[H])/C([H])([H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])S(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C([H])=NC([H])=C([H])C1=2)(=O)=O

N-[2-[[3-(4-Bromophenyl)-2-propen-1-yl]amino]ethyl]-5-Isoquinolinesulfonamide

ZKZXNDJNWUTGDK-NSCUHMNNSA-N

H-89 free base H-89 free base H 89 H89.

h-89; 127243-85-0; H 89; N-(2-(4-Bromocinnamylamino)ethyl)-5-isoquinolinesulfonamide; H-89 DIHYDROCHLORIDE; N-[2-[[(E)-3-(4-bromophenyl)prop-2-enyl]amino]ethyl]isoquinoline-5-sulfonamide; Protein kinase inhibitor H-89; N-[2-(P-BROMOCINNAMYLAMINO)ETHYL]-5-ISOQUINOLINE SULFONAMIDE;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~224.03 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.60 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。