PKA (Ki = 48 nM); S6K1 (IC50 = 80 nM); PKG (Ki = 0.48 μM)

当使用 ATP 时，H-89 会竞争性抑制蛋白激酶 A。在 PC12D 细胞中，H-89 以剂量依赖性方式抑制毛喉素诱导的蛋白质磷酸化，而不降低细胞内环 AMP 水平。在 PC12D 细胞中，H-89 强烈抑制毛喉素引起的神经突发育。在 PC12D 细胞裂解物中，H-89 (30 μM) 显着降低 cAMP 依赖性组蛋白 IIb 磷酸化活性 [1]。 H-89 (1-2 μM) 显着延迟了大鼠皮质纤维的重新启动，这很可能是由于它对 T 系统电位产生了负面影响。 H-89 (10-100 μM) 改变大鼠皮肤纤维收缩装置的 Ca32 敏感性，并抑制 SR 的净 Ca2+ 吸收 [2]。

在经过 PTZ 治疗的动物中，H-89（0.2 mg/100g，腹腔注射）显着增加了癫痫潜伏期和阈值。 H-89 显着提高癫痫潜伏期和癫痫阈值，并抑制布克拉地辛 (300 nM) 的致癫痫作用，剂量为 0.05 和 0.2 mg/100 g，腹膜内注射 [3]。

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H-89预处理对PTZ诱发癫痫的影响[3]
图2A和B显示了用不同剂量的H-89（0.05、0.1和0.2 mg/100 g，i.p.，30分钟）预处理对PTZ（0.5%w/v i.v）诱导的癫痫发作的影响。与对照组相比，以0.2 mg/100克的剂量给药H-89显著增加了癫痫发作的潜伏期和阈值（***p<0.001）。与对照组动物相比，其他两种剂量的H-89（0.05和0.1 mg/100 g）在癫痫发作潜伏期和阈值方面没有观察到显著差异（图2A和B）。

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己酮可可碱和H-89联合预处理对PTZ诱导的小鼠癫痫发作的影响[3]
属于该组合组的所有动物在PTZ输注前45分钟接受PTX作为第一组分，30分钟接受H-89作为第二组分。与对照组相比，接受PTX 50 mg/kg和H-89 0.2 mg/kg以及PTX 100 mg/kg和H-890.2 mg/100 g的组在癫痫发作潜伏期和阈值方面存在显著差异（***P<0.001）（图4A和B）。PTX（50和100 mg/kg）给药显著减弱了H-89（0.2 mg/100 g）对癫痫发作阈值和潜伏期的影响（*P<0.05）（图4A和B）。

cAMP 依赖性蛋白激酶活性在最终体积为 0.2 mL 的反应混合物中进行测定，其中包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.0)、10 mM 醋酸镁、2 mM EGTA、1 μM cAMP 或不含 cAMP，3.3 -20 μM [γ-32P]ATP (4 × 105 cpm)、0.5 μg 酶、100 μg 组蛋白 H2B 和每种化合物，如所示。

测定细胞内cAMP 的水平。培养 48 小时后，PC12D 细胞在含有 30 μM H-89 的测试培养基中生长 1 小时，然后暴露于含有 10 μM 毛喉素和 30 μM H-89 的全新培养基中。添加 0.5 ml 6% 三氯乙酸，同时用橡胶警察刮下细胞并进行超声处理。加入2ml石油醚，混合，3000rpm离心10分钟，提取三氯乙酸。吸出顶层后，残留样品溶液用于分析。

大鼠；小鼠
20 或 200 mg/kg（大鼠）；0-5 mg/kg（小鼠）
皮下注射（大鼠）；腹腔注射（小鼠）

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在静脉注射戊四唑 (PTZ) 前 30 分钟，腹腔注射己酮可可碱 (25、50、100 mg/kg)、布克拉地辛 (50、100、300 nM/只小鼠) 和 H-89 (0.05、0.1、0.2 mg/100 g)。在联合用药组中，第一种和第二种成分分别在 PTZ 注射前 45 分钟和 30 分钟注射。所有组的相应对照动物均接受等体积的溶剂。对于静脉输注，将针头插入尾侧静脉，用一小段胶带固定在尾静脉上，并允许动物自由活动（Gholipour et al., 2008, 2009）。PTZ溶液以1 ml/min的浓度速率输注。[3]

[1]. Inhibition of forskolin-induced neurite outgrowth and protein phosphorylation by a newly synthesized selective inhibitor of cyclic AMP-dependent protein kinase, N-[2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H-89), of PC12D pheochromocytoma cells. J Biol Chem. 1990 Mar 25;265(9):5267-72.

[2]. Effects of the PKA inhibitor H-89 on excitation-contraction coupling in skinned and intact skeletal muscle fibres. J Muscle Res Cell Motil. 2001;22(3):277-86.

[3]. Effects of pentoxifylline and H-89 on epileptogenic activity of bucladesine in pentylenetetrazol-treated mice. Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.

N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺属于异喹啉类化合物，是由异喹啉-5-磺酸的磺酸基与N(1)-[3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]乙烷-1,2-二胺的伯氨基缩合而成的磺酰胺。它是一种蛋白激酶A抑制剂，属于EC 2.7.11.11（cAMP依赖性蛋白激酶）抑制剂。它属于异喹啉类化合物、磺酰胺类化合物、溴苯类化合物、烯烃类化合物和仲氨基化合物。它是N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺(2+)的共轭碱。

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新合成的异喹啉磺酰胺 H-89 (N-[2-(对溴肉桂酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺) 被证明对环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 A）具有强效和选择性的抑制作用，抑制常数为 0.048 +/- 0.008 μM。 H-89 对其他激酶的抑制作用较弱，其对这些激酶的 Ki 值分别为：cGMP 依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 G）、Ca2+/磷脂依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 C）、酪蛋白激酶 I 和 II、肌球蛋白轻链激酶以及 Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II，分别为 0.48 ± 0.13 μM、31.7 ± 15.9 μM、38.3 ± 6.0 μM、136.7 ± 17.0 μM、28.3 ± 17.5 μM 和 29.7 ± 8.1 μM。动力学分析表明，H-89 以与 ATP 竞争的方式抑制蛋白激酶 A。为了研究蛋白激酶A在PC12细胞神经突生长中的作用，我们分别使用H-89、神经生长因子（NGF）、福斯克林或二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）处理PC12细胞。H-89预处理可剂量依赖性地抑制福斯克林诱导的蛋白磷酸化，且PC12D细胞内环磷酸腺苷（cAMP）水平未见降低；而NGF诱导的蛋白磷酸化则未被抑制。H-89还显著抑制了福斯克林诱导的PC12D细胞神经突生长。当在添加二丁酰环磷酸腺苷之前添加H-89时，也观察到了这种抑制作用。用H-89（30 μM）预处理PC12D细胞可显著抑制细胞裂解液中cAMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性，但对其他蛋白质磷酸化活性无影响，例如cGMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性、Ca2+/磷脂依赖的组蛋白IIIs磷酸化活性、Ca2+/钙调蛋白依赖的肌球蛋白轻链磷酸化活性以及α-酪蛋白磷酸化活性。然而，这种蛋白激酶A抑制剂并不抑制NGF诱导的PC12D细胞神经突生长。因此，福斯克林和二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）诱导的神经突生长显然是由蛋白激酶A介导的，而NGF诱导的神经突生长则是由一条不依赖于蛋白激酶A的通路介导的。[1]

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我们检测了28种市售化合物的特异性，这些化合物据报道是特定丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶的相对选择性抑制剂，并针对大量蛋白激酶进行了测试。结果发现，化合物KT 5720、Rottlerin和槲皮素能够抑制多种蛋白激酶，有时其抑制效力甚至远超其假定的靶标，因此基于这些化合物在细胞实验中得出的结论可能存在误差。Ro 318220及其相关的双吲哚马来酰亚胺类化合物，以及H89、HA1077和Y 27632是更具选择性的抑制剂，但它们仍然能够以相似的效力抑制两种或两种以上的蛋白激酶。研究发现，LY 294002 对酪蛋白激酶-2的抑制效力与对磷脂酰肌醇3-激酶的抑制效力相当。选择性最显著的化合物包括 KN62、PD 98059、U0126、PD 184352、雷帕霉素、沃特曼宁、SB 203580 和 SB 202190。与 PD 98059 类似，U0126 和 PD 184352 在细胞实验中通过抑制丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 的活化而非直接抑制 MKK1 的活性来阻断丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联反应。除雷帕霉素和 PD 184352 外，即使是选择性最高的抑制剂也至少会影响一种其他蛋白激酶。我们的研究结果表明，仅通过研究蛋白激酶抑制剂对一级结构密切相关的激酶的影响，无法评估其特异性。我们提出了在基于细胞的实验中使用蛋白激酶抑制剂的指导原则。[2]

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H89 是一种选择性强效的蛋白激酶 A (PKA) 抑制剂。自发现以来，它已被广泛用于评估 PKA 在心脏、成骨细胞、肝细胞、平滑肌细胞、神经组织、上皮细胞等组织中的作用。尽管 H89 应用广泛，但其特异性抑制 PKA 的机制仍未完全阐明。研究还表明，H89 至少抑制 8 种其他激酶，同时还具有相当多的 PKA 非依赖性效应，这可能会严重影响数据的解读。因此，尽管 H89 具有激酶抑制特性，但建议不要将其作为 PKA 参与的唯一证据来源。 H-89 应与其他 PKA 抑制剂（如 Rp-cAMPS 或 PKA 类似物）一起使用。[3]

C20H20BRN3O2S

446.363

445.045

C, 53.82; H, 4.52; Br, 17.90; N, 9.41; O, 7.17; S, 7.18

127243-85-0

H-89 dihydrochloride;130964-39-5; 127243-85-0 ; 1000995-75-4; 1049740-55-7 (2HCl hydrate)

449241

Typically exists as off-white to light brown solids at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

639.7±65.0 °C at 760 mmHg

195-200°C

340.7±34.3 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.653

3.03

79.47

2

5

8

27

570

0

BrC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])/C(/[H])=C(\[H])/C([H])([H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])S(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C([H])=NC([H])=C([H])C1=2)(=O)=O

N-[2-[[3-(4-Bromophenyl)-2-propen-1-yl]amino]ethyl]-5-Isoquinolinesulfonamide

ZKZXNDJNWUTGDK-NSCUHMNNSA-N

H-89 free base H-89 free base H 89 H89.

h-89; 127243-85-0; H 89; N-(2-(4-Bromocinnamylamino)ethyl)-5-isoquinolinesulfonamide; H-89 DIHYDROCHLORIDE; N-[2-[[(E)-3-(4-bromophenyl)prop-2-enyl]amino]ethyl]isoquinoline-5-sulfonamide; Protein kinase inhibitor H-89; N-[2-(P-BROMOCINNAMYLAMINO)ETHYL]-5-ISOQUINOLINE SULFONAMIDE;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~224.03 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.60 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。