PKA (Ki = 48 nM); S6K1 (IC50 = 80 nM); PKG (Ki = 0.48 μM)
H-89 targets protein kinase A (PKA), a key enzyme in the cAMP signaling pathway. By competitively inhibiting the ATP-binding site of the PKA catalytic subunit, H-89 prevents the phosphorylation of PKA substrates. This inhibition blocks downstream signaling events mediated by cAMP, including gene transcription, cell metabolism, and ion channel regulation. H-89 shows selectivity for PKA over other kinases.

当使用ATP时，H-89可竞争性抑制蛋白激酶A。在PC12D细胞中，H-89以剂量依赖的方式抑制福斯克林诱导的蛋白质磷酸化，且不降低细胞内环磷酸腺苷（cAMP）水平。在PC12D细胞中，H-89强烈抑制福斯克林诱导的神经突发育。在PC12D细胞裂解液中，H-89（30 μM）显著降低cAMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性[1]。H-89（1-2 μM）显著延缓大鼠皮层纤维的重新启动，这很可能是由于其对T系统电位的负面影响。H-89（10-100 μM）改变大鼠皮肤纤维收缩装置的Ca32敏感性，并抑制肌浆网（SR）的净Ca2+吸收[2]。体外实验表明，H-89是一种强效的PKA抑制剂，其IC50约为48 nM。该化合物可透过细胞膜，用于细胞实验中抑制PKA活性。其对PKA的选择性高于其他激酶，包括PKC和PKG，且这种选择性具有浓度依赖性。H-89广泛用于研究PKA在各种细胞过程中的作用，包括细胞凋亡、增殖和分化。

在 PTZ 处理的动物中，H-89（0.2 mg/100g，腹腔注射）显著增加了癫痫发作潜伏期和阈值。 H-89 可显著延长癫痫潜伏期和癫痫阈值，并在腹腔注射 0.05 和 0.2 mg/100 g 的剂量下抑制布克拉地辛 (300 nM) 的致痫作用 [3]。

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H-89 预处理对戊四唑 (PTZ) 诱导癫痫发作的影响 [3]
图 2A 和 2B 显示了不同剂量 H-89 (0.05、0.1 和 0.2 mg/100 g，腹腔注射，30 分钟) 预处理对 PTZ (0.5% w/v，静脉注射) 诱导癫痫发作的影响。与对照组相比，0.2 mg/100 g 剂量的 H-89 显著延长了癫痫潜伏期和癫痫阈值 (***P < 0.001)。与对照组动物相比，另外两种剂量的H-89（0.05和0.1 mg/100 g）在癫痫发作潜伏期和阈值方面未观察到显著差异（图2A和B）。

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己酮可可碱和H-89联合预处理对小鼠戊四唑（PTZ）诱导癫痫的影响[3]
该联合用药组的所有动物均在PTZ输注前45分钟接受己酮可可碱（PTX）作为第一成分，并在PTZ输注前30分钟接受H-89作为第二成分。接受PTX 50 mg/kg和H-89 0.2 mg/100 g以及PTX 100 mg/kg和H-89 0.2 mg/100 g的组的数据表明，与对照组相比，癫痫发作潜伏期和阈值存在显著差异（***P < 0.001）（图4A和B）。 H-89 (0.2 mg/100 g) 对癫痫发作阈值和潜伏期的影响被 PTX (50 和 100 mg/kg) 给药显著减弱 (*P < 0.05)（图 4A 和 B）。
在体内，H-89 被用作研究动物模型中 PKA 功能的工具。该化合物通过抑制 PKA 来调节 cAMP 依赖性信号通路，从而影响记忆形成、心脏功能和代谢等过程。该化合物已被用于研究 PKA 在神经系统疾病和心血管疾病中的作用。其体内效应具有剂量依赖性和情境特异性。

cAMP依赖性蛋白激酶活性测定在反应体系中进行，该反应体系最终体积为0.2 mL，包含50 mM Tris-HCl（pH 7.0）、10 mM乙酸镁、2 mM EGTA、1 μM cAMP（或不含cAMP）、3.3-20 μM [γ-32P]ATP（4 × 10⁵ cpm）、0.5 μg酶、100 μg组蛋白H2B以及各化合物（如所示）。
H-89的体外酶活性测定用于测量其对PKA活性的抑制作用。将酶与其底物和ATP在不同浓度的化合物存在下孵育。使用放射性标记的ATP或荧光法测定磷酸盐掺入底物的量。IC50值由剂量-反应曲线计算得出。通过对一系列激酶进行测试来评估化合物的选择性。

测定细胞内 cAMP 水平。PC12D 细胞培养 48 小时后，先在含有 30 μM H-89 的测试培养基中培养 1 小时，然后转移至含有 10 μM 福斯克林和 30 μM H-89 的全新培养基中。加入 0.5 ml 6% 三氯乙酸，用细胞刮刀刮取细胞并进行超声处理。加入 2 ml 石油醚，混匀后以 3000 rpm 离心 10 分钟以提取三氯乙酸。吸取上层清液后，取残余样品溶液进行分析。
体外细胞实验利用多种细胞系研究 H-89 的 PKA 依赖性信号通路。用该化合物的系列稀释液处理细胞，并通过检测 PKA 底物的磷酸化水平来测定 PKA 活性。使用报告基因检测法评估 cAMP 反应基因的表达。通过评估细胞活力、细胞凋亡和其他细胞反应来确定 PKA 抑制的功能后果。

大鼠；小鼠
20 或 200 mg/kg（大鼠）；0-5 mg/kg（小鼠）
皮下注射（大鼠）；腹腔注射（小鼠）

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在静脉注射戊四唑 (PTZ) 前 30 分钟，腹腔注射己酮可可碱 (25、50、100 mg/kg)、布克拉地辛 (50、100、300 nM/只小鼠) 和 H-89 (0.05、0.1、0.2 mg/100 g)。在联合用药组中，第一种和第二种成分分别在 PTZ 注射前 45 分钟和 30 分钟注射。所有组的相应对照动物均接受等体积的溶剂。静脉输注时，将针头插入尾侧静脉，用一小段胶带固定于尾静脉，并允许动物自由活动（Gholipour 等，2008，2009）。戊四唑溶液以 1 ml/min 的浓度速率输注。[3]
H-89 的体内动物模型包括神经系统疾病和心血管疾病的小鼠和大鼠模型。该化合物可通过多种途径（腹腔注射、脑室内注射或口服）给药，并评估其对行为、心脏功能和代谢的影响。药效学研究测量靶组织中 PKA 的抑制情况。

H-89游离碱的分子式为C20H20BrN3O2S，分子量为446.36。该化合物可溶于DMSO，储存于-20℃。它具有细胞渗透性，广泛用于细胞研究。该化合物以粉末形式储存时稳定，应避光保存。

H-89 的毒性特征已在临床前研究中得到表征。作为一种激酶抑制剂，该化合物在高浓度下可能产生脱靶效应。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。操作过程中应采取适当的安全预防措施。安全范围由毒理学研究确定。

[1]. Inhibition of forskolin-induced neurite outgrowth and protein phosphorylation by a newly synthesized selective inhibitor of cyclic AMP-dependent protein kinase, N-[2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H-89), of PC12D pheochromocytoma cells. J Biol Chem. 1990 Mar 25;265(9):5267-72.

[2]. Effects of the PKA inhibitor H-89 on excitation-contraction coupling in skinned and intact skeletal muscle fibres. J Muscle Res Cell Motil. 2001;22(3):277-86.

[3]. Effects of pentoxifylline and H-89 on epileptogenic activity of bucladesine in pentylenetetrazol-treated mice. Eur J Pharmacol. 2011 Nov 30;670(2-3):464-70.

N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺属于异喹啉类化合物。它是由异喹啉-5-磺酸的磺酸基团与N(1)-[3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]乙烷-1,2-二胺的伯氨基缩合而成的磺酰胺。它是一种蛋白激酶A抑制剂，属于EC 2.7.11.11（cAMP依赖性蛋白激酶）抑制剂。它属于异喹啉类、磺酰胺类、溴苯类、烯烃类和仲氨基类化合物。它是N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]异喹啉-5-磺酰胺(2+)的共轭碱。新合成的异喹啉磺酰胺 H-89 (N-[2-(对溴肉桂基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺) 被证明对环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 A）具有强效和选择性的抑制活性，抑制常数为 0.048 ± 0.008 μM。 H-89 对其他激酶的抑制活性较弱，其对 cGMP 依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 G）、Ca2+/磷脂依赖性蛋白激酶（蛋白激酶 C）、酪蛋白激酶 I 和 II、肌球蛋白轻链激酶以及 Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 的 Ki 值分别为 0.48 ± 0.13 μM、31.7 ± 15.9 μM、38.3 ± 6.0 μM、136.7 ± 17.0 μM、28.3 ± 17.5 μM 和 29.7 ± 8.1 μM。动力学分析表明，H-89 与 ATP 竞争性抑制蛋白激酶 A。为了研究蛋白激酶A在PC12细胞神经突生长中的作用，我们分别用H-89、神经生长因子（NGF）、fosskine或二丁酰环磷酸腺苷（dibutyryl cAMP）处理PC12细胞。H-89预处理呈剂量依赖性地抑制了fosskine诱导的PC12D细胞蛋白磷酸化，且不降低细胞内cAMP水平；然而，NGF诱导的蛋白磷酸化并未受到抑制。H-89也显著抑制了fosskine诱导的PC12D细胞神经突生长。当在加入dibutyryl cAMP之前加入H-89时，也观察到了这种抑制作用。用H-89 (30 μM)预处理PC12D细胞可显著抑制细胞裂解液中cAMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性，但对其他蛋白质的磷酸化活性无影响，例如cGMP依赖的组蛋白IIb磷酸化活性、Ca2+/磷脂依赖的组蛋白IIIs磷酸化活性、Ca2+/钙调蛋白依赖的肌球蛋白轻链磷酸化活性以及α-酪蛋白磷酸化活性。然而，这种蛋白激酶A抑制剂并不抑制NGF诱导的PC12D细胞神经突生长。因此，fosskelin和二丁酰环磷酸腺苷(dibutyryl cAMP)诱导的神经突生长显然是由蛋白激酶A介导的，而NGF诱导的神经突生长则是由一条不依赖于蛋白激酶A的通路介导的。 [1]

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我们检测了28种市售化合物的特异性，这些化合物据报道是特定丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶的相对选择性抑制剂，并测试了它们对多种蛋白激酶的抑制作用。结果表明，化合物KT 5720、Rottlerin和槲皮素抑制多种蛋白激酶，有时其抑制效力远超其预期靶点。因此，基于这些化合物进行的细胞实验得出的结论可能存在误差。Ro 318220及其相关的双吲哚马来酰亚胺化合物，以及H89、HA1077和Y 27632是更具选择性的抑制剂，但它们仍然以相似的效力抑制两种或多种蛋白激酶。研究发现，LY 294002对酪蛋白激酶-2的抑制效力与其对磷脂酰肌醇3-激酶的抑制效力相当。选择性最高的化合物包括KN62、PD 98059、U0126、PD 184352、雷帕霉素、沃特曼宁、SB 203580和SB 202190。与PD 98059类似，U0126和PD 184352在细胞实验中通过抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的活化而非直接抑制MKK1的活性来阻断丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联反应。除雷帕霉素和PD 184352外，即使是选择性最高的抑制剂也至少会影响一种其他蛋白激酶。我们的结果表明，仅通过研究抑制剂对与其一级结构密切相关的激酶的影响来评估蛋白激酶抑制剂的特异性是不够的。我们提出了在基于细胞的实验中使用蛋白激酶抑制剂的指导原则。 [2]

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H89 是一种选择性强效的蛋白激酶 A (PKA) 抑制剂。自发现以来，它已被广泛用于评估 PKA 在心脏、成骨细胞、肝细胞、平滑肌细胞、神经组织和上皮细胞等组织中的作用。尽管 H89 应用广泛，但其特异性抑制 PKA 的机制尚未完全阐明。研究还表明，H89 至少抑制其他八种激酶，并具有相当数量的非 PKA 依赖性效应，这可能会严重影响数据的解读。因此，尽管 H89 具有激酶抑制特性，但不应将其作为 PKA 参与的唯一证据来源。H89 应与其他 PKA 抑制剂（例如 Rp-cAMPS 或 PKA 类似物）联合使用。 [3]
H-89 游离碱是一种强效且选择性的蛋白激酶 A (PKA) 抑制剂，广泛用作研究 PKA 介导的信号通路的科研工具。它也称为 N-[2-(对溴肉桂酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺。该化合物是 H-8 和 H-9 的类似物。H-89 通过与催化亚基的 ATP 结合位点竞争性结合来抑制 PKA。它仅用于科研用途。

C20H20BRN3O2S

446.363

445.045

C, 53.82; H, 4.52; Br, 17.90; N, 9.41; O, 7.17; S, 7.18

127243-85-0

H-89 dihydrochloride;130964-39-5; 127243-85-0 ; 1000995-75-4; 1049740-55-7 (2HCl hydrate)

449241

Typically exists as off-white to light brown solids at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

639.7±65.0 °C at 760 mmHg

195-200°C

340.7±34.3 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.653

3.03

79.47

2

5

8

27

570

0

BrC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])/C(/[H])=C(\[H])/C([H])([H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])S(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C([H])=NC([H])=C([H])C1=2)(=O)=O

N-[2-[[3-(4-Bromophenyl)-2-propen-1-yl]amino]ethyl]-5-Isoquinolinesulfonamide

ZKZXNDJNWUTGDK-NSCUHMNNSA-N

H-89 free base H-89 free base H 89 H89.

h-89; 127243-85-0; H 89; N-(2-(4-Bromocinnamylamino)ethyl)-5-isoquinolinesulfonamide; H-89 DIHYDROCHLORIDE; N-[2-[[(E)-3-(4-bromophenyl)prop-2-enyl]amino]ethyl]isoquinoline-5-sulfonamide; Protein kinase inhibitor H-89; N-[2-(P-BROMOCINNAMYLAMINO)ETHYL]-5-ISOQUINOLINE SULFONAMIDE;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~224.03 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.60 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。