| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
EGFR(L858R/T790M) (IC50 = 0.26 nM)
JBJ-04-125-02 targets the mutant forms of EGFR, specifically the L858R/T790M and L858R/T790M/C797S mutants. It is an allosteric inhibitor, binding to a site distinct from the ATP-binding pocket. This unique binding mode allows it to be combined with ATP-competitive inhibitors like osimertinib for enhanced efficacy against resistant mutants. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
JBJ-04-125-02 对 EGFRL858R/T790M 的 IC50 为 0.26 nM，是一种具有突变体结构和 EGFR 活性的强效 EGFR 抑制剂 [1]。
体外实验表明，JBJ-04-125-02 是 EGFR L858R/T790M 突变体的强效抑制剂，IC50 为 0.26 nM。该化合物可抑制细胞增殖，并能阻断 EGFR L858R/T790M/C797S 信号通路。体外实验表明，该化合物对携带这些耐药突变的癌细胞具有单药活性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
基于体外单药活性，我们试图确定 JBJ-04-125-02 是否也具有体内疗效。静脉注射 3 mg/kg 剂量后，JBJ-04-125-02 的半衰期为 3 小时，曲线下面积 (AUClast) 为 728577 min·ng/mL，属于中等水平。口服 20 mg/kg 剂量的 JBJ-04-125-02 后，平均最大血浆浓度为 1.1 μM，但口服生物利用度仅为 3%（表 S3A）。基于这些发现，我们进行了一项药效学研究。在EGFR L858R/T790M/C797S基因工程小鼠（GEM）肿瘤形成后，分别给予3个剂量的载体、100 mg/kg的JBJ-02-112-05、50 mg/kg或100 mg/kg的JBJ-04-125-02，每日一次灌胃给药，并评估其对EGFR磷酸化及其下游信号通路的影响（图2C）。结果显示，50 mg/kg和100 mg/kg剂量均能有效抑制EGFR、AKT和ERK1/2的磷酸化（图2C）。 JBJ-02-112-05（100 mg/kg）也能抑制 EGFR 的磷酸化及其下游信号通路，但其抑制作用不如 JBJ-04-125-02 强（图 2C）。在随后的疗效研究中，我们用载体、100 mg/kg 的 JBJ-02-112-05 或 50 mg/kg 的 JBJ-04-125-02 处理 EGFR L858R/T790M/C797S GEM 小鼠，并通过连续 MRI 成像追踪肿瘤体积的变化。尽管 JBJ-02-112-05 的药代动力学特征优于 JBJ-04-125-02（表 S3A），但在疗效研究中，其疗效不佳，肿瘤生长情况与载体对照组相似。相比之下，JBJ-04-125-02 治疗在 4 周内即可显著缩小肿瘤体积（图 2D），且疗效可持续 15 周（图 2E）。尽管 JBJ-04-125-02 的口服生物利用度较低，但长期治疗可导致药物在血浆和肿瘤中蓄积，这可能是其疗效的原因（表 S3B）。值得注意的是，JBJ-04-125-02 治疗未引起体重减轻或明显的毒性反应（图 S2A 及未显示数据）[1]。体内实验表明，JBJ-04-125-02 具有抗肿瘤活性。在一项使用EGFR L858R/T790M/C797S基因工程小鼠（GEM）模型的药效学研究中，口服50 mg/kg或100 mg/kg该化合物可有效抑制EGFR、AKT和ERK1/2的磷酸化。在一项疗效研究中，评估了50 mg/kg剂量的JBJ-04-125-02对GEM小鼠肿瘤体积的影响。
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| 酶活实验 |
基于 HTRF 的 EGFR 生化分析[1]
使用均相时间分辨荧光 (HTRF) KinEASE-TK 分析法对 L858R/T790M EGFR 进行生化分析，具体方法如前所述，在哈佛医学院 ICCB Longwood 筛选中心进行。分析中酶浓度为 20 pM，ATP 浓度为 100 µM。将溶于 DMSO 的抑制剂化合物直接用 D300 数字分液器分装到 384 孔板中，随后立即使用 Multidrop Combi 试剂分液器加入水性缓冲溶液。 IC50 值采用 11 点或 23 点抑制曲线进行测定，每个样品重复三次。 EGFR 蛋白表达和纯化[1] 构建了包含人 EGFR 696–1022 位氨基酸残基（包括野生型、L858R/T790M、L858R/T790M/C797S 和 T790M/V948R 突变序列）的载体，并使用 pTriEX 系统以 His6 和 GST 融合双标签形式在 Sf9 昆虫细胞中表达，具体方法基本如前所述。EGFR 激酶蛋白经 Ni-NTA 和谷胱甘肽亲和层析纯化，然后用 TEV 酶切去除 His6-GST 融合蛋白，最后进行尺寸排阻层析，具体步骤按照既定程序进行。 JBJ-04-125-02 的体外酶活性测定为激酶抑制测定。测定了该化合物抑制各种 EGFR 突变体酶活性的能力。使用纯化的酶和肽底物，通过标准生化激酶测定方法，测得该化合物对 EGFR L858R/T790M 突变体的 IC50 值为 0.26 nM。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
Ba/F3、H1975、H3255GR 和 H3255DR 细胞用递增浓度的抑制剂处理 72 小时，并根据先前建立的方法通过 MTS 测定评估生长或生长抑制情况。在研究 JBJ-04-125-02 在 EGF 或西妥昔单抗存在下的作用的实验中，在用抑制剂处理细胞的同时，加入 10 ng/ml 的 EGF、1 μg/ml 或 10 μg/ml 的西妥昔单抗。 生物素标记药物下拉实验[1] 在生化下拉实验中，将 10 μg 游离的 EGFR-L858R/T790M 或奥希替尼标记的 EGFR-L858R/T790M 与链霉亲和素偶联的琼脂糖珠和 4 倍摩尔过量的生物素标记的 JBJ-04-125-02 化合物在 4°C 下孵育 1 小时。通过离心回收链霉亲和素珠，用 10 倍床体积的 TBS 缓冲液洗涤三次，并通过 SDS-PAGE 分析结合的蛋白质。奥希替尼标记的EGFR-L858R/T790M的制备方法如下：在奥希替尼存在下纯化EGFR-L858R/T790M；向昆虫细胞裂解液中加入100 μM奥希替尼，并在最终的尺寸排阻步骤之前，在纯化缓冲液中保持2 μM奥希替尼的浓度。通过质谱分析确认了奥希替尼的化学计量标记。 对于体外下拉实验，细胞在裂解和蛋白质定量之前，先用剂量递增的WZ-4002、奥希替尼或阿法替尼处理两小时。将 500 μg 蛋白质与生物素标记的连接子（对照）或生物素标记的 JBJ-04-125-02 孵育 2 小时，然后加入 50% NeutrAvidin 琼脂糖珠浆液，孵育 1 小时以沉淀与生物素标记的变构抑制剂结合的 EGFR，并逐步增加抑制剂的剂量。用含 1% IGEPAL 的 PBS 洗涤珠子，去除多余的缓冲液，然后将样品悬浮于 2× SDS 样品制备缓冲液中，用于 Western 印迹分析。 交联实验[1] 将 H1975 和 H3255GR 细胞用冰冷的 PBS 洗涤两次，然后在 1 mM BS3 的 PBS 溶液中孵育 30 分钟，最后用 20 mM Tris-HCl (pH 7.4) 终止反应 15 分钟。细胞用冰冷的PBS缓冲液再次洗涤两次，然后在NP40裂解缓冲液中裂解，并进行Western blotting分析。 体外细胞研究采用表达EGFR突变体（例如L858R/T790M/C797S三突变体）的癌细胞系进行。用JBJ-04-125-02处理细胞，以评估其对细胞增殖和信号传导的影响。通过Western blot分析检测EGFR、AKT和ERK1/2的磷酸化水平，评估下游信号传导的抑制情况。 |
| 动物实验 |
药代动力学研究[1]
所有描述的步骤均符合现有方案，并已获得斯克里普斯佛罗里达动物实验伦理委员会（IACUC）的批准，可在斯克里普斯动物房内进行，该动物房已获得AAALAC认证。药代动力学研究在3只雄性C57Bl/6小鼠中进行。化合物的给药方式如正文所述，通过尾静脉注射或灌胃给药。采用最小采样技术采集血液，即在小鼠尾部做一个小切口，使用肝素锂涂层血细胞比容管，分别在5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时和8小时采集约25 µL血液。使用血细胞比容转子离心制备血浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆浓度，方法是使用在小鼠血浆中制备的浓度范围为0.4 ng/mL至2000 ng/mL的九点标准曲线，比较分析物/内标峰面积。药代动力学分析采用WinNonlin软件（Centara公司），并使用非房室模型。 体内研究[1] EGFR L858R/T790M/C797S突变小鼠队列已建立并报道，此前已有相关研究。这些小鼠在分配到不同的治疗研究队列之前，均通过磁共振成像（MRI）监测肺部肿瘤负荷。所有治疗组小鼠在开始治疗前均具有相同的初始肿瘤负荷。H1975和DFCI282细胞皮下接种于购自Charles River Laboratories International Inc.的Nu/Nu小鼠体内。小鼠随机分组，当肿瘤体积达到100至200 mm³时开始治疗。每个队列至少包含5只小鼠。在药效学 (PD) 研究中，于末次给药后 3 小时采集肿瘤组织。在单药疗效研究中，分别对吉西他滨 (GEM) 和 H1975 异种移植小鼠进行每日治疗，疗程分别长达 15 周和 30 天，并每日监测。在联合用药疗效研究中，对 H1975 和 DFCI282 异种移植小鼠进行 28 天的治疗。随后停药，并分别对小鼠进行每日监测，疗程分别长达 101 天和 31 天。监测所有小鼠的肿瘤大小，并使用以下公式计算肿瘤体积：(mm³) = 长 × 宽 × 宽 × 0.5。当肿瘤体积达到约 2000mm³ 时，处死所有小鼠。[1] JBJ-02-112-05 和 JBJ-04-125-02 均溶解于 5% NMP（5% 1-甲基-2-吡咯烷酮：95% PEG-300）。奥希替尼溶于 0.5% 羟丙基甲基纤维素 (HMPC) 溶液（0.5% 羟丙基甲基纤维素：99.5% 0.05N 盐酸）。小鼠每日口服一次奥希替尼，剂量为 2.5 mg/kg 或 25 mg/kg。 体内动物实验采用 EGFR 突变型肺癌的基因工程小鼠 (GEM) 模型进行。荷瘤小鼠每日灌胃一次，以 50 mg/kg 或 100 mg/kg 的剂量给予 JBJ-04-125-02 治疗。通过检测肿瘤组织中 EGFR 及其下游信号蛋白的磷酸化水平来评估药效学效应。肿瘤体积变化通过连续 MRI 成像进行监测。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
JBJ-04-125-02 的分子量为 543.61 g/mol，分子式为 C29H26FN5O3S。它可溶于 DMSO（100 mg/mL），但不溶于水和乙醇。在临床前模型中，静脉给药后，其口服生物利用度仅为 3%，半衰期为 3 小时。对于体内口服给药，可在 CMC-Na 中制备浓度 ≥5 mg/mL 的均质混悬液。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
JBJ-04-125-02 的毒理学数据仅限于临床前研究。作为一种强效且特异性的激酶抑制剂，它仅供研究使用，不得用于人体。虽然现有文献中尚未报道其具有显著毒性，但仍需监测该化合物在动物模型中的作用，例如对体重的影响。使用时应遵循标准安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
由于靶点结合位点不同，变构激酶抑制剂可作为ATP竞争性激酶抑制剂的潜在补充治疗策略。本研究鉴定并研究了一种突变选择性EGFR变构抑制剂JBJ-04-125-02，该抑制剂作为单药治疗，在体外和体内均能抑制细胞增殖和EGFR L858R/T790M/C797S信号通路。然而，EGFR二聚体形成增加限制了其治疗效果并导致耐药性。值得注意的是，ATP竞争性共价EGFR抑制剂奥希替尼显著增强了JBJ-04-125-02与突变型EGFR的结合。与单独使用奥希替尼或JBJ-04-125-02相比，联合治疗可增加细胞凋亡，更有效地抑制细胞生长，并在体外和体内均表现出更高的疗效。我们的研究结果共同表明，联合使用共价突变选择性ATP竞争性抑制剂和变构EGFR抑制剂可能是治疗EGFR突变型肺癌患者的有效方法。意义：EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）在EGFR突变型肺癌中的临床疗效受限于获得性耐药，因此迫切需要开发抑制EGFR的替代策略。我们发现了一种突变型EGFR变构抑制剂，它可作为单药治疗或与EGFR TKI奥希替尼联合使用。[1]
JBJ-04-125-02也称为(Rac)-JBJ-04-125-02，是该化合物的外消旋体。它是一种突变选择性变构EGFR抑制剂。它与奥希替尼联合使用，以克服EGFR突变型非小细胞肺癌（NSCLC）的耐药性。该化合物以粉末形式供应，纯度≥98%，仅供研究用途。 |
| 分子式 |
C29H26FN5O3S
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|---|---|
| 分子量 |
543.61184835434
|
| 精确质量 |
543.17
|
| 元素分析 |
C, 64.07; H, 4.82; F, 3.49; N, 12.88; O, 8.83; S, 5.90
|
| CAS号 |
2140807-05-0
|
| 相关CAS号 |
JBJ-04-125-02;2060610-53-7; 2140807-05-0 (racemic) ; 2060610-53-7 (R-isomer)
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| PubChem CID |
132020316
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
3.8
|
| tPSA |
126Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
39
|
| 分子复杂度/Complexity |
870
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1CN(CCN1)C2=CC=C(C=C2)C3=CC4=C(CN(C4=O)C(C5=C(C=CC(=C5)F)O)C(=O)NC6=NC=CS6)C=C3
|
| InChi Key |
VHQVOTINPRYDAO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H26FN5O3S/c30-21-5-8-25(36)24(16-21)26(27(37)33-29-32-11-14-39-29)35-17-20-2-1-19(15-23(20)28(35)38)18-3-6-22(7-4-18)34-12-9-31-10-13-34/h1-8,11,14-16,26,31,36H,9-10,12-13,17H2,(H,32,33,37)
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| 化学名 |
2-(5-fluoro-2-hydroxyphenyl)-2-[3-oxo-5-(4-piperazin-1-ylphenyl)-1H-isoindol-2-yl]-N-(1,3-thiazol-2-yl)acetamide
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| 别名 |
JBJ-04-125-02 racemate; JBJ0412502; JBJ-04-125-02; JBJ04-125-02; JBJ 0412502; JBJ 04-125-02; JBJ-0412502
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100~250 mg/mL (184.0~459.9 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.83 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.83 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8396 mL | 9.1978 mL | 18.3955 mL | |
| 5 mM | 0.3679 mL | 1.8396 mL | 3.6791 mL | |
| 10 mM | 0.1840 mL | 0.9198 mL | 1.8396 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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