p70S6K (IC50 = 4 nM)

LY2584702 抑制 HCT116 结肠癌细胞中 S6 核糖体蛋白 (pS6) 的磷酸化，IC50 为 0.1-0.24 μM。 [1] LY2584702与mTOR抑制剂依维莫司或EGFR抑制剂厄洛替尼联合使用时，表现出显着的协同效应。 [2]

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RPS6KB1抑制剂LY2584702显著降低了非小细胞肺癌细胞系中RPS6KB1-rpS6的磷酸化[4]
LY2584702用于抑制肺腺癌细胞系A549和鳞状细胞癌细胞系SK-MES-1中RPS6KB1的磷酸化。正如预期的那样，处理24小时后，即使在0.1μM的浓度下，A549中RPS6KB1的磷酸化也显著降低（图4，P<0.001）；而SK-MES-1中p-RPS6KB1的表达似乎在0.2μM时开始下降，并随着药物浓度的增加而持续下调（图4，所有p<0.05）。RPS6KB1的公认靶点rpS6的磷酸化也同步下降（图4，所有P<0.05）。然而，无论药物浓度如何，RPS6KB1和S6的总蛋白水平都没有显著差异（图4，所有P>0.05）

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0.1μM的LY2584702处理24小时后，A549的增殖受到显著抑制（图5A，P<0.05）；随着治疗时间的延长和/或药物浓度的增加，下降趋势更加明显（图5A，均P<0.05）。在SK-MES-1中也观察到了类似的结果，尽管LY2584702在0.6μM时产生了明显的抑制作用（图5B，所有P<0.05），远高于A549。
基于上述结果，收集经0.2μM LY2584702处理72小时的A549进行细胞周期测定和凋亡分析。将仅用培养基或添加DMSO的培养基培养72小时的A549细胞系用作对照。毫不奇怪，更多经LY2584702处理的细胞被阻滞在G0-G1期（图6A，两者均P<0.05）；S期或G2-M期细胞相应减少（图6A，均P<0.05）。此外，通过Annexin V-APC/7-AAD凋亡检测，LY2584702诱导了更多的A549细胞凋亡（图7A，均P<0.05）

由于SK-MES-1对LY2584702的敏感性较低，因此采用1μM处理72小时的SK-MES.1进行细胞周期和凋亡分析。与对照组相比，LY2584702治疗还导致SK-MES-1 G0-G1期阻滞，S期和G2-M期同步减少（图6B，所有P<0.05）。然而，LY2584702对SK-MES-1细胞凋亡的影响有限，尽管有模糊的增加趋势（图7B，两者均P>0.05）。

在 U87MG 胶质母细胞瘤和 HCT116 结肠癌异种移植模型中，LY2584702（12.5 mg/kg BID）均表现出显着的抗肿瘤功效。 [1]

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34名患者参加了这项I期研究，并按照QD（每日一次）或BID（每日两次）的给药方案接受LY2584702治疗。A部分剂量递增（n=22）从300mg BID开始（n=2）。由于毒性，这被缩减为每天一次25mg（n=3）、50mg（n=8）、100mg（n=3，n=6）和200mg（n=6）的剂量。B部分剂量递增（n=12）包括50 mg（n=3）、75 mg（n=3）和100 mg（n=6）BID。7名患者出现了剂量限制性毒性（DLT）。所有DLT均为3级，包括呕吐、脂肪酶升高、恶心、低磷血症、疲劳和胰腺炎。 结论：MTD确定为75mg BID或100mg QD。在这些水平上没有观察到任何反应。药代动力学分析揭示了暴露的显著差异，并确定LY2584702治疗与剂量增加不成比例。[1]

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共招募了29名患者，其中17名在A组，12名在B组。在A组的4名患者中观察到第1周期的剂量限制性毒性（DLTs），包括3级呕吐、低磷血症、肺栓塞和凝血因子V降低。在第1周期，B组没有观察到DLTs，与研究药物相关的最常见的治疗不良事件是：疲劳、厌食、腹泻、恶心和呕吐。7名患者接受了≥4个周期的治疗（A组3例，B组4例）。最佳的总体反应是病情稳定。LY2584702的暴露累积发生在BID（每日两次）给药时。当厄洛替尼与LY2584702联合给药时，其暴露量增加。 结论：LY2584702与厄洛替尼联合用药时耐受性不佳，因此这种联合用药是不可行的。与依维莫司联合使用耐受性更好，但临床效益非常有限[2]。

RPS6KB1是核糖体蛋白S6的激酶，其分子量为70kDa，是蛋白质翻译所必需的。尽管RPS6KB1的异常激活已在多种疾病中发现，但其在非小细胞肺癌癌症中的作用和临床意义尚未得到充分研究。在这项研究中，我们发现RPS6KB1在非小细胞肺癌中过磷酸化（p-RPM6KB1），这是一个独立的不良预后标志物。尽管免疫组织化学染色（IHC）显示，非小细胞肺癌标本中总RPS6KB1和p-RPS6KB2的表达频繁，但只有p-RPS6KB1与非小细胞癌受试者的临床病理特征相关。Kaplan-Meier生存分析显示，p-RPS6KB1表达的增加表明非小细胞肺癌患者的5年总生存率（OS）较低，而RPM6KB1阳性或阴性组之间的差异并不显著。然后使用单变量和多变量Cox回归分析来确认p-RPS6KB1的独立预后价值。为了说明非小细胞肺癌中RPS6KB1磷酸化的潜在机制，我们使用LY2584702来抑制肺腺癌细胞系A549和鳞状细胞癌细胞系SK-MES-1中RPS6KB1的磷酸化。正如预期的那样，RPS6KB1去磷酸化在CCK-8试验中显著抑制了细胞增殖，并通过细胞周期分析促进了更多细胞停滞在G0-G1期。此外，RPS6KB1去磷酸化的凋亡A549细胞急剧增加，SK-MES-1呈上升趋势，表明RPS6KBl磷酸化可能参与诱导凋亡。总之，我们的数据表明，在非小细胞肺癌中，RPS6KB1与p-RPM6KB1一样被过度激活，而不仅仅是总蛋白的过度表达。RPS6KB1的磷酸化水平可作为NSCLC患者的一种新的预后标志[4]。

LY-2584702完全溶解在20 mL 10% DMSO中并储存在-80°C。在体外进行实验时，LY-2584702在0.5% Tween 80、5%丙二醇和30% PEG400中进一步稀释，以达到0.1 μM、0.2 μM、0.6 μM和1.0 μM的各种DMSO浓度。使用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8) 评估体外细胞增殖。将已暴露于不同浓度的 LY-2584702 24 小时的 A549 和 SK-MES-1 细胞系以每孔 5 103 个细胞的密度接种在 96 孔板中，重复六次。 LY-2584702 浓度为零时用作阴性对照，或用 DMSO 处理。接种后每 24 小时测量细胞在 450 nm 处的吸光度，以测定其增殖活性。

Mice; LY-2584702 is prepared in 0.25% Tween-80 and 0.05% antifoam, and administered orally to mice (12.5 mg/kg twice daily). Injections of EOMA cells (0.3×106) are made subcutaneously into nu/nu female mice aged 6 to 8 weeks (2 sites/mouse, 4-5 mice/group). Every day, the tumor's size is determined. Animals are either given a vehicle control or the drug LY-2584702 (12.5 mg/kg twice daily, oral dosing) for treatment when tumors grow to a size of 0.01 cm3. Every 3–4 days, tumor size is determined.[3]

药代动力学[1]
对A部分和B部分均进行了药代动力学分析，数据汇总于表4。最初的方案起始剂量为每日两次，每次300 mg，但两名服用300 mg BID的患者出现了严重的恶心和呕吐。对血浆中LY2584702暴露水平的分析表明，我们已超过了有效靶点抑制的预测范围。此外，代谢清除率为10 L/h，而预测值为26 L/h。因此，我们实施了新的每日一次给药方案，剂量范围为25至200 mg。在分析了每日一次给药方案的暴露量后，我们设立了一个每日两次给药组，以确定每日两次给药是否能提高每日总暴露量。在每日两次给药组中，最大耐受剂量（MTD）确定为75 mg。每日一次给药组的最大耐受剂量为100 mg。各组间半衰期均稳定在 5.96 小时，但暴露量（AUC）和 Cmax 存在差异。LY2584702 的暴露量并非与剂量成正比，而是随剂量增加而增加。每日一次给药方案下，LY2584702 的暴露量未出现累积，中位累积比率 [第 8 天 AUC(0–24)/第 1 天 AUC(0–24)] 为 0.61（范围：0.52–1.7）。每日两次给药方案存在药物蓄积，中位蓄积比为 1.98（范围：1.1–2.69），但没有证据表明暴露量与时间相关，每日一次给药方案的中位时间依赖性（AUC(0–24)/AUC(0–∞)）为 0.45（范围：0.41–1.03），每日两次给药方案的中位时间依赖性（AUC(0–24)/AUC(0–∞)）为 1.12（范围：0.61–1.34）。

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药代动力学 [2]
对 LY2584702 的药代动力学参数进行了分析，结果汇总于（表 4）。 LY2584702 与厄洛替尼联用时，其暴露量呈剂量比例增加，每日一次 50 mg 和每日两次 50 mg 的剂量标准化 AUC 分别为 88.73 ng·h/mL/mg 和 86.16 ng·h/mL/mg。每日两次 75 mg 时 AUC 略有增加（107.89 ng·h/mL/mg），但在每日两次 100 mg 时 AUC 下降（86.11 ng·h/mL/mg）。LY2584702 与依维莫司联用时，其暴露量也呈剂量比例增加。每日两次 50 mg、每日一次 50 mg 和每日一次 100 mg 的剂量标准化 AUC 值分别为 121.95、114.00 和 114.10 ng·h/mL/mg。对于厄洛替尼和依维莫司的给药方案，每日一次给药方案的中位累积比分别为 1.09 和 1.07（范围 0.98–1.16），每日两次给药方案的中位累积比分别为 2.16 和 1.98（范围 1.85–3.41）。每日一次和每日两次给药方案的 LY2584702 暴露量存在显著差异（p = 0.0145，t 检验），累积比分别为 1.08 和 2.46。在所有剂量组中，V/F 均表现出较高的变异性，为 34.52 L（变异系数为 47%）。

毒性[1]
34 例患者至少接受了一剂 LY2584702，其中 13 例 (38%) 在治疗期间发生严重不良事件 (SAE)。在 13 例发生 SAE 的患者中，3 例与研究药物相关。1 例患者出现 3 级低磷血症，1 例患者出现 3 级呕吐和 3 级胰腺炎，另 1 例患者出现 3 级胰腺炎。3 例患者 (9%) 因不良事件而停止治疗。1 例患者在停止研究药物（根据医生决定）后的 30 天随访期内因疾病进展而死亡。该患者接受了一剂 100 mg 每日两次的研究药物，但在死亡前因疾病进展而退出研究。A 部分有 5 例患者，B 部分有 2 例患者出现剂量限制性毒性 (DLT)。所有 DLT 均为 3 级，包括呕吐、脂肪酶升高、恶心、低磷血症、疲乏和胰腺炎（表 2）。 34 例患者中有 31 例报告了至少 1 例治疗期间出现的不良事件 (TEAE)，其中 21 例 (62%) 报告的 TEAE 可能与研究药物相关。最常见的可能与研究药物相关的 TEAE 为恶心 (26%)、疲乏 (18%) 和呕吐 (15%)（表 3）。55 例与研究药物相关的不良事件中有 22 例为 ≥ 3 级。

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毒性[2]
29 例患者入组，其中 4 例出现 ≥ 3 级剂量限制性毒性 (DLT)：分别为 1 例低磷血症、1 例呕吐、1 例血栓栓塞事件和 1 例凝血因子 V 水平降低（表 2）。 A组中有8例患者（47%）发生严重不良事件（SAE），B组中有6例患者（50%）发生SAE。可能与研究药物相关的SAE包括：3级恶心、3级呕吐、3级厌食、3级胃炎、3级肺栓塞、3级国际标准化比值（INR）升高、2级间质性肺病和2级深静脉血栓形成。A组中有3例患者（17.6%，n = 17）和B组中有2例患者（16.7%，n = 12）因不良事件而停止治疗。A组中最常见的与药物相关的治疗期间出现的不良事件（TEAE）为疲乏（88%）、厌食（71%）、腹泻（65%）、恶心（53%）、痤疮样皮疹（53%）和呕吐（41%）； B组（表3）中，疲劳（83%）、厌食（67%）、恶心（58%）、腹泻（50%）和口腔黏膜炎（50%）的发生率较高。A组（n=17）有11例患者，B组（n=12）有8例患者发生3/4级治疗期间出现的不良事件（TEAE）。A组有3例患者，B组有1例患者出现凝血功能异常。A组有1例患者发生血栓栓塞事件（肺栓塞），B组有1例患者发生可能相关的严重不良事件（SAE）——深静脉血栓形成。第三例患者在第一个治疗周期内出现凝血因子V水平下降，从第1天的60%降至第8天的24%，随后恢复至第15天的85%，之后再次下降至第22天的35%。内源性凝血途径因子IX、XI、XII和凝血活酶（TP）均未出现具有临床意义的变化。A组的第四例患者出现剂量限制性毒性（DLT），表现为低磷血症，伴INR升高以及凝血因子II、V、VII和X水平下降（图1）。这些变化由治疗引起，并在停药后得到改善。两组均有数例患者在治疗期间出现体重下降，A组下降幅度为3%至10%，B组为4%至11%。A组有3例患者（18%），B组有6例患者（50%）体重下降幅度≥10%（图2）。在 A 组和 B 组出现血栓栓塞事件以及观察到其他毒性（疲劳和体重减轻）后，B 组的剂量递增停止。

[1]. Eur J Cancer. 2014 Mar;50(5):867-75.

[2]. Eur J Cancer. 2014 Mar;50(5):876-84.

[3]. Cancer Res. 2015 Jan 1;75(1):40-50.

[4]. PLoS One. 2017 Aug 9;12(8):e0182891.

背景：LY2584702 甲苯磺酸盐（以下简称 LY2584702）是一种强效、高选择性的腺苷三磷酸 (ATP) 竞争性抑制剂，可抑制 p70 S6 激酶。p70 S6 激酶是磷脂酰肌醇-3-激酶信号通路下游的组成部分，该通路调控细胞增殖和存活。LY2584702 在临床前分析中显示出抗肿瘤活性。[1]
方法：晚期实体瘤患者接受 LY2584702 口服治疗，疗程为 28 天，直至达到最大耐受剂量 (MTD)。采集皮肤活检样本进行药效学分析，并检测磷酸化 S6 蛋白水平。主要目的是确定 II 期临床试验的剂量和给药方案，次要目的是观察安全性和耐受性。剂量递增方案基于不良事件通用术语标准3.0版[1]。
结果：本I期研究共纳入34例患者，采用LY2584702治疗，给药方案为每日一次（QD）或每日两次（BID）。A部分剂量递增（n=22）起始剂量为300 mg，每日两次（n=2）。由于出现毒性反应，剂量调整为每日一次（QD）25 mg（n=3）、50 mg（n=8）、100 mg（n=3）和200 mg（n=6）。B部分剂量递增（n=12）包括每日两次（BID）50 mg（n=3）、75 mg（n=3）和100 mg（n=6）。7例患者出现剂量限制性毒性（DLT）。所有剂量限制性毒性（DLT）均为3级，包括呕吐、脂肪酶升高、恶心、低磷血症、疲乏和胰腺炎。[1]
结论：最大耐受剂量（MTD）确定为每日两次75 mg或每日一次100 mg。在这些剂量水平下未观察到疗效。药代动力学分析显示暴露量存在显著差异，并确定LY2584702的治疗效果与剂量增加不呈剂量比例关系。试验注册号：ClinicalTrials.gov NCT01394003。[1]

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背景：LY2584702甲苯磺酸盐（以下简称LY2584702）是一种口服的选择性ATP竞争性p70 S6激酶抑制剂。LY2584702的临床前研究表明其与厄洛替尼和依维莫司具有显著的协同作用。主要目的是确定II期临床试验的剂量和给药方案。次要目标包括评估 LY2584702 与厄洛替尼或依维莫司联合用药的安全性、毒性和药代动力学。[2]
方法：晚期实体瘤患者接受每日总剂量为 50-200mg 的 LY2584702 联合厄洛替尼 150mg 每日一次（A 组）或依维莫司 10mg 每日一次（B 组）的治疗。剂量递增采用 3+3 设计，并使用不良事件通用术语标准 4.0 版。[2]
结果：共入组 29 例患者，A 组 17 例，B 组 12 例。A 组 4 例患者在第 1 个治疗周期出现剂量限制性毒性 (DLT)，包括 3 级呕吐、低磷血症、肺栓塞和凝血因子 V 降低。B 组在第 1 个治疗周期未观察到 DLT，与研究药物相关的最常见治疗期间出现的不良事件为：疲乏、厌食、腹泻、恶心和呕吐。7 例患者接受了 ≥4 个治疗周期（A 组 3 例，B 组 4 例）。最佳总体疗效为疾病稳定。LY2584702 的暴露量在每日两次 (BID) 给药方案下出现累积。厄洛替尼与LY2584702联合用药时，厄洛替尼的暴露量增加。[2]
结论：LY2584702与厄洛替尼联合用药耐受性差，因此该联合用药方案不可行。与依维莫司联合用药耐受性较好，但临床获益非常有限。[2]
试验注册号：ClinicalTrials.gov NCT01115803。[2]

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血管肿瘤是内皮细胞肿瘤，其肿瘤发生机制尚不清楚。此外，目前的治疗方法，特别是针对恶性病变的治疗方法，对临床疗效甚微。本研究表明，内皮细胞激活Akt1激酶足以驱动肿瘤的新生。机制研究揭示了不同Akt亚型在此调控中发挥相反的作用，其中Akt1促进血管肿瘤生长，而Akt3抑制血管肿瘤生长。 Akt3通过调节Rictor的表达，抑制翻译调控激酶S6激酶（S6K）的激活，从而对肿瘤内皮细胞的生长和迁移产生负面影响。S6K反过来又通过负反馈环路抑制Akt3的表达。相反，在Akt3被沉默的血管肿瘤细胞中，S6K信号通路增强，而新型S6K抑制剂则抑制了这些肿瘤细胞的生长。总而言之，我们的研究结果为使用S6K抑制剂治疗血管肿瘤（例如血管肉瘤）的临床前概念验证提供了依据。[3]

C28H27F4N7O3S

617.62

617.183

C, 54.45; H, 4.41; F, 12.30; N, 15.88; O, 7.77; S, 5.19

1082949-68-5

LY-2584702 free base;1082949-67-4;LY-2584702 hydrochloride;1082948-81-9

46205871

White to off-white solid powder

6.682

138.27

2

12

4

43

851

0

S(C1C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C([H])C=1[H])(=O)(=O)O[H].FC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1C(F)(F)F)C1=C([H])N(C([H])([H])[H])C(C2([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C3C4C([H])=NN([H])C=4N=C([H])N=3)C([H])([H])C2([H])[H])=N1

HDYUXDNMHBQKAU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H19F4N7.C7H8O3S/c1-31-10-17(13-2-3-16(22)15(8-13)21(23,24)25)29-19(31)12-4-6-32(7-5-12)20-14-9-28-30-18(14)26-11-27-20;1-6-2-4-7(5-3-6)11(8,9)10/h2-3,8-12H,4-7H2,1H3,(H,26,27,28,30);2-5H,1H3,(H,8,9,10)

4-[4-[4-[4-fluoro-3-(trifluoromethyl)phenyl]-1-methylimidazol-2-yl]piperidin-1-yl]-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine;4-methylbenzenesulfonic acid

LYS6K2 tosylate; LY2584702; LY 2584702; 1082949-68-5; LY2584702 tosylate; LY-2584702 (tosylate salt); LY-2584702 tosylate salt; LY 2584702 tosylate; 4-(4-(4-(4-fluoro-3-(trifluoromethyl)phenyl)-1-methyl-1H-imidazol-2-yl)piperidin-1-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine 4-methylbenzenesulfonate; 4-[4-[4-[4-fluoro-3-(trifluoromethyl)phenyl]-1-methylimidazol-2-yl]piperidin-1-yl]-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine;4-methylbenzenesulfonic acid; 4-{4-[4-(4-fluoro-3-trifluoromethyl-phenyl)-1-methyl-1H-imidazol-2-yl]-piperidin-1-yl}-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine p-toluenesulfonate; LY-2584702; LYS-6K2; LYS 6K2; LY2584702 tosylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~7 mg/mL (~11.3 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 1 mg/mL (1.62 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。