| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Nutlin-3 specifically targets the p53-MDM2 protein-protein interaction, inhibiting MDM2-mediated ubiquitination and degradation of p53; the IC50 value for p53-MDM2 binding inhibition was reported as 90 nM in HTRF assay[1]
Nutlin-3 maintains p53-MDM2 interaction as the primary target in synergistic anti-tumor effects and radiosensitization, with no additional off-targets reported[2] Nutlin-3 exerts radiosensitizing effects on hypoxic prostate cancer cells independent of p53 status, but the core target remains p53-MDM2 interaction [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
MDM2-p53 之间的相互作用被 nutlin-3 抑制。具体来说，用 1 μM Inauhzin 和 2 μM Nutlin-3 共同处理 p53 阳性 HCT116 细胞会导致更大程度的 p53 激活以促进细胞凋亡（如 p53 蛋白水平和靶点 p21、PUMA 或裂解的 PARP 所示）[2] 。一种名为 nutlin-3 的小分子抑制剂可防止 MDM2 附着于 p53 以及随之而来的 p53 依赖性 DNA 损伤信号传导。 Nutlin-3 (2–10 μM) 作为单一试剂稳定 p53 和 p21WAF 的水平。它对 WTp53-22RV1 细胞有毒性（IC50，4.3 μM），但对 p53 缺陷细胞仅有轻微毒性（IC50，>10 μM）。 Nutlin-3 以剂量依赖性方式刺激 22RV1 细胞中 p53 和 p21WAF 的表达。在所有三种细胞系中，短期细胞周期测定表明，10 μM 剂量的 Nutlin-3 略微提高了 G1 期分数并降低了 S 期分数 [3]。
在p53野生型癌细胞（如HCT116）中，Nutlin-3（0.1-10 μM）呈剂量依赖性抑制细胞增殖：5 μM时，通过MTT实验检测细胞活力降低约60%，western blot显示p53蛋白水平升高约3倍，同时p53下游靶基因p21（细胞周期阻滞标志物）和Bax（凋亡标志物）表达上调[1] 在p53野生型MCF-7细胞中，Nutlin-3（2 μM）与Inauhzin（1 μM）具有协同作用：联合处理细胞活力降低约85%（单独使用Nutlin-3降低约30%，单独使用Inauhzin降低约25%），荧光素酶报告基因实验显示p53转录活性升高约5倍，caspase-3/7激活增强（凋亡率约40%，单独药物处理约10%）[2] 在缺氧前列腺癌细胞（DU145，p53突变；PC-3，p53缺失）中，Nutlin-3（1-5 μM）呈剂量依赖性增强放射敏感性：3 μM + 4 Gy放疗时，克隆形成率降低约70%（单独放疗降低约35%），放疗后24小时γ-H2AX焦点（DNA损伤标志物）增加约2.5倍[3] 在p53缺失的PC-3细胞中，Nutlin-3（5 μM）仍能使放疗诱导的凋亡率增加约30%（流式细胞术Annexin V/PI染色），证实其p53非依赖性放射增敏作用[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Nutlin-3可以阻止由人骨肉瘤或白血病细胞制成的异种移植肿瘤的生长，但在HCT116衍生的异种移植肿瘤模型中，Nutlin-3的抗肿瘤作用仅轻微有效，即使口服剂量为200 mg/kg也是如此。 2]。有必要对 nutlin-3 进行更多的体内研究，因为它有可能成为一种有益的补充，以提高针对缺氧细胞的精准放射治疗率 [3]。
在携带HCT116移植瘤（p53野生型）的裸鼠中，Nutlin-3（25 mg/kg，腹腔注射，每日1次，持续14天）较溶剂对照组肿瘤体积减少约45%；与Inauhzin（10 mg/kg，腹腔注射）联合处理，肿瘤体积进一步减少约75%，免疫组化显示肿瘤内p53和p21蛋白水平升高[2] 在携带缺氧DU145移植瘤（缺氧舱诱导缺氧）的裸鼠中，Nutlin-3（30 mg/kg，腹腔注射，每日1次，持续7天）+放疗（2 Gy/分次，共5次）较单独放疗组肿瘤重量减少约60%，且未显著增加正常组织毒性（肝/肾组织病理学检查无异常）[3] |
| 酶活实验 |
p53-MDM2结合抑制实验（HTRF法）：将重组MDM2（100 nM）、荧光标记p53肽（50 nM，Eu3+标记）与Nutlin-3（0.01-10 μM）在反应缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.01% Tween-20）中混合；25°C孵育1小时后，检测HTRF信号（激发波长340 nm，发射波长620 nm/665 nm）；通过620 nm/665 nm比值计算p53-MDM2结合效率及IC50[1]
p53转录活性实验（荧光素酶报告基因法）：向p53野生型细胞（如MCF-7）转染p53响应性荧光素酶质粒和Renilla质粒（内参）；24小时后，用Nutlin-3（0.1-5 μM）处理细胞16小时；采用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性，相对活性以Renilla活性归一化[2] |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验（MTT法）：将p53野生型/缺氧癌细胞以5×10³个/孔接种于96孔板，用Nutlin-3（0.1-10 μM）处理72小时；加入MTT溶液（0.5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲瓒结晶，在570 nm处测定吸光度并计算细胞活力[1]
凋亡实验（流式细胞术）：用Nutlin-3（2-5 μM）±放疗（4 Gy）处理细胞48小时；收集细胞，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术分析；定量凋亡细胞（Annexin V+/PI-和Annexin V+/PI+）比例[3] p53通路western blot实验：裂解经Nutlin-3处理的细胞，SDS-PAGE分离蛋白，转印至PVDF膜，用p53、p21、Bax和β-actin（内参）抗体孵育；化学发光法检测，ImageJ定量条带密度[2] 克隆形成实验（放射增敏）：将缺氧前列腺癌细胞以1×10³个/孔接种，用Nutlin-3（1-5 μM）处理2小时后放疗（0-6 Gy）；培养14天后，结晶紫染色，计数>50个细胞的克隆；存活分数=（形成克隆数/接种细胞数）×接种效率[3] |
| 动物实验 |
HCT116异种移植瘤模型：将5×10⁶个HCT116细胞皮下注射到6-8周龄的雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为4组：载体组（DMSO/生理盐水，100 μL，腹腔注射）、Nutlin-3组（25 mg/kg，溶于DMSO/生理盐水，100 μL，腹腔注射）、Inauhzin组（10 mg/kg，腹腔注射）和联合用药组。每日给药一次，连续14天；每3天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）[2]。
缺氧DU145异种移植瘤模型：将1×10⁷个DU145细胞注射到雄性裸鼠体内。在治疗前，将肿瘤暴露于缺氧（10% O₂）环境72小时。小鼠接受Nutlin-3（30 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续7天）±放射治疗（2 Gy/次，共5次，于第1-5天进行）。小鼠于第10天处死，称量肿瘤重量，并进行组织病理学检查[3] |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
4-[[(4S,5R)-4,5-双(4-氯苯基)-2-(4-甲氧基-2-丙-2-基氧基苯基)-4,5-二氢咪唑-1-基]-氧甲基]-2-哌嗪酮是一种芪类化合物。
Nutlin-3 是一种靶向 p53-Mdm2 相互作用的小分子抑制剂。 Rebemadlin 是一种小分子 MDM2（鼠双微体 2）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。在癌细胞中，rebemadlin 可拮抗 MDM2 与 p53 的结合，从而阻止 MDM2 介导的 p53 降解。这导致 p53 依赖性细胞周期阻滞和凋亡的稳定和激活。MDM2 蛋白是 p53 活性的负调控因子，在多种癌细胞类型中过表达；肿瘤抑制因子p53在约50%的癌症中发生突变或缺失，但在另外50%的癌症中仍保持活性。 Nutlin-3是一种第一代p53-MDM2相互作用的小分子抑制剂，其作用机制是通过阻断MDM2与p53的结合和降解，从而恢复p53的肿瘤抑制功能[1]。 Nutlin-3与Inauhzin的协同作用是通过互补激活p53实现的：Nutlin-3抑制p53的降解，而Inauhzin则通过抑制p53的核输出来稳定p53[2]。 Nutlin-3在缺氧前列腺癌细胞中不依赖于p53的放射增敏作用可能涉及DNA损伤修复蛋白（例如ATM、Chk2）的抑制，这可以从Western blot中这些蛋白磷酸化水平的降低得到证实。印迹[3] |
| 分子式 |
C30H30CL2N4O4
|
|---|---|
| 分子量 |
581.4896
|
| 精确质量 |
580.164
|
| CAS号 |
548472-68-0
|
| 相关CAS号 |
Nutlin-3a;675576-98-4;Nutlin-3b;675576-97-3;(Rac)-Nutlin-3;890090-75-2
|
| PubChem CID |
11433190
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.648
|
| LogP |
2.77
|
| tPSA |
83.47
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
40
|
| 分子复杂度/Complexity |
919
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
CC(C)OC1=C(C=CC(=C1)OC)C2=N[C@H]([C@H](N2C(=O)N3CCNC(=O)C3)C4=CC=C(C=C4)Cl)C5=CC=C(C=C5)Cl
|
| InChi Key |
BDUHCSBCVGXTJM-WUFINQPMSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C30H30Cl2N4O4/c1-18(2)40-25-16-23(39-3)12-13-24(25)29-34-27(19-4-8-21(31)9-5-19)28(20-6-10-22(32)11-7-20)36(29)30(38)35-15-14-33-26(37)17-35/h4-13,16,18,27-28H,14-15,17H2,1-3H3,(H,33,37)/t27-,28+/m0/s1
|
| 化学名 |
4-[(4S,5R)-4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazole-1-carbonyl]piperazin-2-one
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
Ethanol : ~100 mg/mL (~171.97 mM)
DMSO : ≥ 50 mg/mL (~85.99 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (8.60 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 5 mg/mL (8.60 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.30 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 25.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: 10% DMSO + 90% Corn Oil 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7197 mL | 8.5986 mL | 17.1972 mL | |
| 5 mM | 0.3439 mL | 1.7197 mL | 3.4394 mL | |
| 10 mM | 0.1720 mL | 0.8599 mL | 1.7197 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
