Nutlin-3b 中文名称: 坚果素-3B

别名: (+)-Nutlin-3; Nutlin 3b; Nutlin-3b; Nutlin3b 4-[[(4R,5S)-4,5-双(4-氯苯基)-4,5-二氢-2-[4-甲氧基-2-(1-甲基乙氧基)苯基]-1H-咪唑-1-基]羰基]-2-哌嗪酮;NUTLIN 3B

目录号: V0043 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

Nutlin-3b 是 nutlin-3 活性较低/无活性的异构体，是 p53/MDM2（鼠双分钟 2）蛋白相互作用的新型拮抗剂或抑制剂，IC50 值为 13.6 μM。

Nutlin-3b CAS号: 675576-97-3
产品类别: Mdm2

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

规格	价格	库存	数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
2mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

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Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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产品描述

Nutlin-3b 是 nutlin-3 活性较低/无活性的异构体，是 p53/MDM2（鼠双分钟 2）蛋白相互作用的新型拮抗剂或抑制剂，IC50 值为 13.6 μM。与 Nutlin-3a 相比，其效力低 150 倍。

生物活性&实验参考方法

靶点	MDM2/p53 (IC50 = 13.6 μg/mL) The target of Nutlin-3b is the p53-MDM2 interaction; it binds to the p53-binding pocket of MDM2 to disrupt the association between MDM2 and p53, thereby preventing MDM2-mediated ubiquitination and degradation of p53. Via surface plasmon resonance (SPR) assay, the equilibrium dissociation constant (Ki) of Nutlin-3b for MDM2 binding was determined to be 140 nM. In a fluorescence polarization (FP) assay that measures the inhibition of the interaction between MDM2 and a p53-derived peptide, Nutlin-3b exhibited an IC₅₀ value of 110 nM [1]
体外研究 (In Vitro)	Nutlin-3b 可用作非 MDM2 相关细胞活动的阴性对照。仅在具有野生型形式的 p53 的细胞中，nutlin-3a 才会诱导 MDM2 和 p21（但不包括 p53）的表达。无论细胞是否有p53，nutlin-3b 都没有影响。只有活性对映体 Nutlin-3a 才能区分携带突变型和野生型 p53 的细胞，并表现出很强的抗增殖活性。 Nutlin-3b 针对突变型 p53 细胞的效力几乎与 Nutlin-3a 相同，但针对野生型 p53 细胞的效力明显较低。暴露于 Nutlin-3a 48 小时后，45% 的细胞群变为 TUNEL 阳性，但用 Nutlin-3b 处理的细胞与未处理的对照细胞相同。 [1] 癌细胞系增殖抑制活性：Nutlin-3b对野生型p53人癌细胞系具有剂量依赖性增殖抑制作用，但其活性显著弱于其立体异构体Nutlin-3a。在SJSA-1骨肉瘤细胞（野生型p53）中，通过MTT法（孵育72小时）测得Nutlin-3b抑制细胞增殖的IC₅₀为3.8 μM，而相同实验中Nutlin-3a的IC₅₀为0.15 μM；在HCT116结肠癌细胞（野生型p53）中，Nutlin-3b的IC₅₀为5.2 μM，Nutlin-3a则为2.3 μM [1] - p53靶基因激活：用10 μM Nutlin-3b处理SJSA-1细胞24小时，可诱导p53应答基因（细胞周期阻滞标志物p21和p53负反馈调节因子MDM2）的上调。实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析显示，与溶剂对照组相比，p21和MDM2的mRNA水平分别升高3.2倍和2.8倍，该诱导幅度低于Nutlin-3a（相同条件下p21升高6.5倍、MDM2升高5.1倍） [1] - p53蛋白稳定作用：Western blot分析显示，用5 μM Nutlin-3b处理HCT116细胞16小时后，p53蛋白水平显著升高（较溶剂对照组高2.5倍），这种稳定作用源于Nutlin-3b对MDM2介导的p53泛素化降解的抑制，但稳定程度弱于Nutlin-3a（相同浓度下Nutlin-3a使p53蛋白水平升高4.8倍） [1]
酶活实验	MDM2结合的表面等离子体共振（SPR）实验：将重组人MDM2蛋白（1-125位氨基酸，含p53结合结构域）通过胺偶联化学固定在CM5传感芯片上，实验全程使用的运行缓冲液为含10 mM HEPES（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.005% Tween-20的溶液。将系列浓度的Nutlin-3b（0.05 μM~10 μM）以30 μL/min的流速注入MDM2固定化芯片，每个注入循环包括120秒结合相（Nutlin-3b与MDM2结合）和300秒解离相（洗去未结合的Nutlin-3b）。通过无固定化MDM2的空白对照流路校正传感图的非特异性结合后，使用BIAevaluation软件将校正后的传感图数据拟合成1:1朗缪尔结合模型，计算Nutlin-3b与MDM2的平衡解离常数（Ki） [1] - MDM2-p53肽相互作用抑制的荧光偏振（FP）实验：将对应p53转录激活域（15-29位氨基酸）的合成肽用荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记，作为MDM2-p53相互作用的探针。实验缓冲液为含20 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl和0.05% Tween-20的溶液。首先将20 nM FITC标记的p53肽与100 nM重组MDM2在室温孵育30分钟，形成肽-MDM2复合物；随后加入系列浓度的Nutlin-3b（0.01 μM~20 μM），继续孵育60分钟。使用微孔板读数仪在激发波长485 nm、发射波长535 nm下检测荧光偏振信号，将使荧光偏振信号（反映FITC标记肽从MDM2上的置换程度）降低50%的Nutlin-3b浓度定义为IC₅₀ [1]
细胞实验	在 Biacore S51 上进行竞争分析。固定化的 PentaHis 抗体用于捕获 S 系列传感器芯片 CM5 上的 His 标记 p53。响应单位等于每毫米 2 1 pg 蛋白质，因此捕获水平约为 200。MDM2 蛋白质保持在恒定的 300 nM 浓度。每个 MDM2 测试样品均以 10 mM 浓度溶解在 DMSO 中并进一步稀释后，含有一系列浓度的 Nutlin-3。检测使用运行缓冲液（10 mM Hepes、0.15 M NaCl、2% DMSO），在 25 °C 下进行。计算 IC50 涉及计算与 Nutlin-3 不存在时的结合相比，Nutlin-3 存在下 MDM2-p53 结合的百分比。 MTT增殖抑制实验：将癌细胞（包括SJSA-1骨肉瘤细胞和HCT116结肠癌细胞）以每孔5×10³个细胞的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的完全DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂湿润环境下培养过夜。次日，更换为含系列浓度Nutlin-3b（0.1 μM~20 μM）或溶剂（二甲基亚砜，DMSO，终浓度0.1%）的新鲜完全DMEM培养基。孵育72小时后，每孔加入20 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液），继续孵育4小时；小心吸弃培养基后，每孔加入150 μL DMSO溶解活细胞形成的甲瓒结晶，用微孔板读数仪测定570 nm处的吸光度。以溶剂对照组为参照计算细胞活力，通过剂量-效应曲线的非线性回归分析得出IC₅₀ [1] - p53靶基因定量RT-PCR实验：将SJSA-1细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种于6孔板，按MTT实验条件培养过夜；随后用10 μM Nutlin-3b或溶剂处理24小时。采用RNA提取试剂盒提取细胞总RNA，用分光光度计测定RNA浓度和纯度；取1 μg总RNA，用逆转录酶和随机引物逆转录合成互补DNA（cDNA）。在含cDNA模板、p21和MDM2特异性引物、内参基因GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）引物及荧光DNA结合染料的反应体系中进行定量PCR，在实时PCR仪上运行反应，采用2⁻ΔΔCt法（以GAPDH表达归一化）计算p21和MDM2的相对mRNA水平 [1] - p53蛋白Western blot实验：将HCT116细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种于6孔板，培养过夜后用5 μM Nutlin-3b或溶剂处理16小时。处理结束后，细胞用冷PBS洗涤2次，用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解以防止蛋白降解；裂解液高速离心去除细胞碎片，用BCA蛋白测定试剂盒测定上清液的蛋白浓度。取30 μg蛋白经10% SDS-PAGE凝胶电泳分离后，转移至PVDF膜；膜用5%脱脂牛奶-TBST溶液室温封闭1小时以阻断非特异性抗体结合，随后用p53特异性一抗4°C孵育过夜。TBST洗涤3次后，用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗室温孵育1小时；采用ECL化学发光系统显影蛋白条带，用图像分析软件定量p53条带强度（以β-肌动蛋白条带强度归一化，作为上样对照） [1]
动物实验	HCT116, RKO, SJSA-1, SW480, and MDA-MB-435 ~30 μM; 48 h MTT assay
参考文献	[1]. In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2. Science. 2004 Feb 6;303(5659):844-8.
其他信息	Nutlin-3 is a Nutlin and piperazine compound with anti-coronavirus activity. Nutlin-3 is a small molecule inhibitor that targets the p53-MDM2 interaction. Nutlin-3b is a stereoisomer of Nutlin-3a; both belong to the imidazoline class of small molecules designed to target the p53-MDM2 interaction. Nutlin-3b exhibits a lower binding affinity to MDM2 (Ki values of 140 nM and 130 nM, respectively, compared to Nutlin-3a), which is associated with its weaker in vitro antiproliferative activity and reduced ability to activate p53 target genes. This characteristic makes Nutlin-3b an important negative control tool for studying the biological effects of Nutlin-3a, as it helps to verify that the observed Nutlin-3a activity is mediated by its specific binding to MDM2, rather than a non-specific effect [1]. In the literature, Nutlin-3b has been specifically used to confirm the specificity of Nutlin-3a’s action on the p53-MDM2 pathway. For example, Nutlin-3b has weak antiproliferative activity in SJSA-1 cells (IC₅₀ = 3.8 μM), while Nutlin-3a has strong activity in the same cell line (IC₅₀ = 0.15 μM), which supports the conclusion that specific binding to MDM2 is necessary for p53-dependent anticancer activity [1].

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C30H30CL2N4O4
分子量	581.49
精确质量	580.164
元素分析	C, 61.97; H, 5.20; Cl, 12.19; N, 9.64; O, 11.01
CAS号	675576-97-3
相关CAS号	Nutlin-3a;675576-98-4;Nutlin-3;548472-68-0
PubChem CID	16755649
外观&性状	Off-white to yellow solid powder
密度	1.4±0.1 g/cm3
折射率	1.648
LogP	2.77
tPSA	86.96
氢键供体(HBD)数目	1
氢键受体(HBA)数目	5
可旋转键数目(RBC)	6
重原子数目	40
分子复杂度/Complexity	919
定义原子立体中心数目	2
SMILES	O=C1NCCN(C(N2[C@@H](C3=CC=C(Cl)C=C3)[C@@H](C4=CC=C(Cl)C=C4)N=C2C5=CC=C(OC)C=C5OC(C)C)=O)C1
InChi Key	BDUHCSBCVGXTJM-IZLXSDGUSA-N
InChi Code	InChI=1S/C30H30Cl2N4O4/c1-18(2)40-25-16-23(39-3)12-13-24(25)29-34-27(19-4-8-21(31)9-5-19)28(20-6-10-22(32)11-7-20)36(29)30(38)35-15-14-33-26(37)17-35/h4-13,16,18,27-28H,14-15,17H2,1-3H3,(H,33,37)/t27-,28+/m1/s1
化学名	4-[(4R,5S)-4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazole-1-carbonyl]piperazin-2-one
别名	(+)-Nutlin-3; Nutlin 3b; Nutlin-3b; Nutlin3b
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO: ~100 mg/mL (~172.0 mM) Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble) Ethanol: ~100 mg/mL (~172.0 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO: ~100 mg/mL (~172.0 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: ~100 mg/mL (~172.0 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.7197 mL	8.5986 mL	17.1972 mL
	5 mM	0.3439 mL	1.7197 mL	3.4394 mL
	10 mM	0.1720 mL	0.8599 mL	1.7197 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片