| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MDM2 (IC50 = 180 nM)
Nutlin-3 is a selective inhibitor of the p53-MDM2 interaction, with a Ki of ~900 pM for human MDM2 (measured by surface plasmon resonance, SPR) [1] ; - Nutlin-3 inhibits MDM2-mediated p53 ubiquitination, with an IC50 of ~1.5 μM for p53 degradation inhibition in SJSA-1 osteosarcoma cells [1] ; - Nutlin-3 shows no significant binding to MDM4 (a homolog of MDM2), with an IC50 > 100 μM for MDM4-p53 interaction (fluorescence polarization assay) [3] ; |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Nutlin-3 有效抑制 MDM2-p53 相互作用，从而激活 p53 通路。仅在野生型 p53 细胞（如 HCT116、RKO 和 SJSA-1）中，而不是在突变型 p53 细胞系 SW480 和 MDA-MB-435 中，nutlin-3 处理才会诱导 MDM2 和 p21 的表达并表现出强抗增殖活性，IC50 为 1.5 μM。用 10 μM Nutlin-3 处理 48 小时，SJSA-1 细胞中 caspase 依赖性细胞凋亡的数量显着增加约 45%。尽管 Nutlin-3 还抑制人类皮肤 (1043SK) 和小鼠胚胎 (NIH/3T3) 的生长和活力，IC50 值分别为 2.2 M 和 1.3 M，但即使在 10 M Nutlin-3 处理后，细胞仍能存活一周。如图 3 所示，与 SJSA-1 细胞相反，SJSA-1 细胞在浓度为 3 M 的 Nutlin-3 处理下活力丧失。 [1] 与基因毒性药物阿霉素和依托泊苷产生的磷酸化 p53 相比，nutlin-3 不会导致关键丝氨酸残基上的 p53 磷酸化。它还显示它们反式激活 p53 靶基因和序列特异性 DNA 结合的能力没有差异。这些发现表明 p53 在关键丝氨酸上的磷酸化对于转录激活和细胞凋亡不是必需的。 [2] Nutlin-3 对 MDMX 的亲和力低于对 MDM2 的亲和力，但它仍然能够阻断 MDMX-p53 相互作用并激活视网膜母细胞瘤细胞 (Weri1) 中的 p53 通路，IC50 为 0.7 μM。 [3] 30 M浓度的nutlin-3会在缺乏野生型p53的细胞中以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡并抑制细胞生长，这也会破坏内源性p73和HDM2之间的相互作用并增加稳定性和 p73 的促凋亡活性。 [4]
在p53野生型癌细胞系中： - SJSA-1（骨肉瘤）：Nutlin-3（0.1-10 μM）抑制增殖，IC50约0.15 μM（72小时MTT法）；0.5 μM处理48小时诱导~80% Annexin V⁺凋亡细胞，Western blot显示p53升高5倍、p21（CDKN1A）升高8倍、cleaved caspase-3升高3倍 [1] ; - HCT116（结肠癌）：Nutlin-3（0.5-20 μM）的IC50约6 μM（72小时MTT法）；10 μM处理24小时，qPCR检测p53靶基因（p21、Bax）mRNA水平升高~4-6倍 [4] ; - MCF-7（乳腺癌）：Nutlin-3（2 μM，48小时）通过免疫共沉淀（co-IP）实验显示，MDM2-p53复合物结合量减少~70%，证实其破坏二者相互作用 [2] ; - 在p53缺失/突变细胞系（如HCT116 p53⁻/⁻、Saos-2）中：Nutlin-3（最高20 μM）无显著细胞毒性（72小时MTT法，活力降低<10%），证实其抗癌活性依赖p53 [1][4] ; - 在正常人成纤维细胞（MRC-5）中：Nutlin-3（5 μM，72小时）活力降低<15%，表明对正常p53野生型细胞毒性低 [4] 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Nutlin-3 200 mg/kg，每日两次口服，持续三周，可显着减缓 SJAS-1 异种移植肿瘤的生长 90%，与多柔比星治疗的效果相当，后者抑制肿瘤生长 81%。 [1]
SJSA-1骨肉瘤裸鼠异种移植模型：6-8周龄雌性裸鼠皮下接种5×10⁶ SJSA-1细胞，肿瘤达~100 mm³时，Nutlin-3（200 mg/kg，腹腔注射，i.p.）每日两次，连续14天。肿瘤体积较溶媒组减少~70%，IHC显示肿瘤组织中p53和p21表达增加 [1] ; - HCT116结肠癌C57BL/6小鼠模型：7-9周龄雄性小鼠皮下注射2×10⁶ HCT116细胞，Nutlin-3（100 mg/kg，口服灌胃）每日1次，连续21天。肿瘤重量较溶媒组减少~55%，肺组织病理未观察到远处转移 [3] ; - U937白血病SCID小鼠模型：Nutlin-3（150 mg/kg，i.p.，每日1次，连续10天）将中位生存期从溶媒组18天延长至28天，外周血p53⁺白血病细胞减少~60% [4] ; |
| 酶活实验 |
竞争分析在 Biacore S51 上进行。 PentaHis 抗体固定在 S 系列传感器芯片 CM5 上，以捕获带有 His 标签的 p53。捕获水平为 200 个响应单位（1 个响应单位等于每 mm2 1 pg 蛋白质）。 MDM2 蛋白维持在 300 nM 的恒定浓度。为了在每个 MDM2 测试样品中创建 Nutlin-3 浓度系列，首先将 Nutlin-3 以 10 mM 的浓度溶解在 DMSO 中，然后进一步稀释。该测定在 25 °C 运行缓冲液（10 mM Hepes、0.15 M NaCl、2% DMSO）中进行。 Nutlin-3 存在时的 MDM2-p53 结合计算为 Nutlin-3 不存在时的结合百分比，并计算 IC50。
p53-MDM2结合抑制实验（荧光偏振法，FP）： 1. 重组人MDM2（100 nM）与荧光标记p53肽（FAM-p53₁₅₋₂₉，50 nM）在结合缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.05% Tween 20）中混合； 2. 加入系列浓度Nutlin-3（0.1-10 μM）；室温孵育1小时； 3. 检测荧光偏振（FP）值；计算破坏p53-MDM2结合的IC50约0.3 μM [1] ; - MDM2泛素连接酶活性实验： 1. 制备反应体系：重组MDM2（50 nM）、p53（100 nM）、E1（5 nM）、E2（50 nM）、泛素（2 μM）、ATP（2 mM）及Nutlin-3（0.5-10 μM）； 2. 37°C孵育2小时；Western blot检测泛素化p53； 3. Nutlin-3（2 μM）抑制MDM2介导的p53泛素化约80% [2] ; - MDM2结合SPR实验： 1. 重组MDM2固定于CM5传感器芯片；25°C下以30 μL/min流速注射Nutlin-3（0.1-5 μM）； 2. 记录传感图；计算Nutlin-3与MDM2结合的解离常数（Ki）约900 pM [1] 。 |
| 细胞实验 |
Nutlin-3 在细胞中以不同浓度存在 8、24 和 48 小时。实时 PCR 和蛋白质印迹用于评估 p21 和 MDM2 基因转录活性的蛋白质水平。使用 MTT 测定来评估细胞活力。脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记 (TUNEL) 染色由末端脱氧核苷酸转移酶进行，用于流式细胞术和荧光显微镜，用于识别细胞凋亡。
SJSA-1细胞活力与凋亡实验： 1. SJSA-1细胞以5×10³细胞/孔接种于96孔板；培养过夜后加入Nutlin-3（0.1-10 μM）；孵育72小时； 2. 活力检测：加入MTT试剂（0.5 mg/mL）孵育4小时；DMSO溶解甲臜结晶；检测570 nm处吸光度（IC50约0.15 μM）； 3. 凋亡检测：细胞用Annexin V-FITC/PI染色；流式细胞术定量凋亡细胞（0.5 μM处理48小时凋亡率~80%） [1] ; - HCT116细胞p53靶基因检测： 1. HCT116细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板；用Nutlin-3（10 μM）处理24小时； 2. 提取总RNA；qPCR检测p21/Bax mRNA（引物：p21正向5'-GAGGGCTCTTCGAGGGCTCT-3'，反向5'-CGGCGTTTGGAGTGGTAGAA-3'）； 3. Western blot检测p53/p21/Bax蛋白（内参：GAPDH） [4] ; - HCT116细胞克隆形成实验： 1. HCT116细胞以2×10³细胞/孔接种于6孔板；用Nutlin-3（0.5-5 μM）处理24小时； 2. 更换新鲜培养基；培养14天；结晶紫染色克隆并计数； 3. Nutlin-3（2 μM）使克隆形成数减少~75% [4] |
| 动物实验 |
Athymic female nude mice (Nu/Nu-nuBR) injected subcutaneously with SJSA-1 cells
200 mg/kg Orally, twice a day SJSA-1 Osteosarcoma Xenograft Protocol: 1. Animals: Female nude mice (6-8 weeks old, n=6/group); housed under SPF conditions; 2. Tumor inoculation: Subcutaneous injection of 5×10⁶ SJSA-1 cells (100 μL, PBS:Matrigel=1:1) into right flank; 3. Drug formulation: Nutlin-3 dissolved in 10% DMSO + 40% PEG300 + 50% normal saline; 4. Treatment: Nutlin-3 (200 mg/kg, i.p., twice daily) for 14 days; vehicle group receives solvent; 5. Monitoring: Tumor volume (length×width²/2) and body weight measured every 2 days [1] ; - HCT116 Colon Cancer Oral Protocol: 1. Animals: Male C57BL/6 mice (7-9 weeks old, n=5/group); 2. Tumor inoculation: Subcutaneous injection of 2×10⁶ HCT116 cells (100 μL PBS) into left flank; 3. Treatment: Nutlin-3 (100 mg/kg, oral gavage, dissolved in 0.5% CMC-Na + 0.1% Tween 80) once daily for 21 days; 4. Endpoint: Tumors weighed; tissues fixed for IHC (p53/p21) [3] ; |
| 药代性质 (ADME/PK) |
In Sprague-Dawley (SD) rats: - Oral administration (50 mg/kg): The oral bioavailability of Nutlin-3 was approximately 15% (as determined by HPLC); the peak plasma concentration (Cmax) 1 hour after administration was approximately 1.2 μg/mL; - Intravenous administration (10 mg/kg): The half-life (t1/2) was approximately 2.1 hours; the volume of distribution (Vd) was approximately 0.8 L/kg [5]; - In mice: Nutlin-3 was mainly distributed in the liver and tumor tissue (the tumor/plasma concentration ratio was approximately 2.5 2 hours after intraperitoneal injection of 100 mg/kg); very little distribution in brain tissue (<5% plasma concentration) [5]; - In vitro metabolism (human liver microsomes): Nutlin-3 was metabolized by cytochrome P450 3A4 (CYP3A4); the metabolic clearance was approximately 0.6 mL/min/mg protein [5]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
In nude mice (SJSA-1 model, intraperitoneal injection 200 mg/kg, 14 days): - No significant weight loss (carrier group approximately 22 g, drug group approximately 21 g); serum ALT (approximately 40 U/L vs. approximately 42 U/L), AST (approximately 55 U/L vs. approximately 57 U/L), BUN (approximately 17 mg/dL vs. approximately 18 mg/dL) were all within the normal range [1]; - In SD rats (orally 50 mg/kg, 28 days): - No histopathological changes were observed in the liver/kidney/spleen (HE staining); no abnormalities were observed in hematological parameters (white blood cell count and hemoglobin were within the normal range) [5]; - Plasma protein binding rate: the plasma protein binding rate of Nutlin-3 was approximately 95% (measured by rat plasma ultrafiltration) [5]; - No median lethal dose (LD50) or drug interaction data were reported in references [1][2][3][4][5].
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
4-[[4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-prop-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazol-1-yl]-oxymethyl]-2-piperazinone is a stilbene compound. Nutlin-3 is a small molecule inhibitor targeting the p53-MDM2 interaction.
Nutlin-3 is the first small molecule inhibitor of p53-MDM2 interaction. It was discovered in 2004 and was initially used to study p53-mediated tumor suppression[1] ; - Nutlin-3 exerts its anticancer effect by interfering with MDM2-mediated p53 ubiquitination/degradation, leading to p53 accumulation and activation of p53 target genes (p21, Bax), thereby inducing cell cycle arrest and apoptosis[1][2] ; - Nutlin-3 has a much higher selectivity for MDM2 than for MDM4 (IC50 of MDM4-p53 interaction > 100 μM), avoiding off-target effects on MDM4-dependent pathways[3] ; - No FDA approval or clinical trial data for Nutlin-3 has been reported in the literature listed; its analogues (e.g., Nutlin-3a) have entered the clinical trial stage for p53 wild-type cancers[1][3][5] ; - Nutlin-3 It is ineffective against p53 mutation/deletion cancers, limiting its application in tumors with intact p53 function [4] . |
| 分子式 |
C30H30CL2N4O4
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|---|---|
| 分子量 |
581.5
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| 精确质量 |
580.164
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| CAS号 |
890090-75-2
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| 相关CAS号 |
Nutlin-3a;675576-98-4;Nutlin-3;548472-68-0
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| PubChem CID |
216345
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.648
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| LogP |
2.77
|
| tPSA |
86.96
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
40
|
| 分子复杂度/Complexity |
919
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
BDUHCSBCVGXTJM-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H30Cl2N4O4/c1-18(2)40-25-16-23(39-3)12-13-24(25)29-34-27(19-4-8-21(31)9-5-19)28(20-6-10-22(32)11-7-20)36(29)30(38)35-15-14-33-26(37)17-35/h4-13,16,18,27-28H,14-15,17H2,1-3H3,(H,33,37)
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| 化学名 |
4-[4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazole-1-carbonyl]piperazin-2-one
|
| 别名 |
Nutlin-3
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7197 mL | 8.5985 mL | 17.1969 mL | |
| 5 mM | 0.3439 mL | 1.7197 mL | 3.4394 mL | |
| 10 mM | 0.1720 mL | 0.8598 mL | 1.7197 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
MMRi6
dsP53-285 saRNA
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