| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
描述： Nutlin-3 是一种四取代咪唑啉类化合物，是新型高效选择性的小分子拮抗剂/抑制剂，可拮抗/抑制鼠双微体 2 (MDM2)，具有潜在的抗肿瘤活性。本质上，Nutlin-3 是一种蛋白质-蛋白质相互作用 (PPI) 抑制剂。它通过占据 MDM2 中的 p53 结合位点，阻止 MDM2 与 p53 结合，从而破坏自身调节反馈环路，增强 p53 肿瘤抑制网络。此外，它还能与 p35 肿瘤监视通路中的另一个组成部分——鼠双微体 4 (MDM4) 相互作用。Nutlin-3 通过与 MDM2 的 TP53 结合口袋结合，阻止 MDM2 介导的 TP53 降解。 Nutlin-3 是一种小分子 MDM2 拮抗剂，它能高选择性地与 p53 结合口袋中的 MDM2 结合。它能阻止 p53 与 MDM2 的相互作用，从而稳定 p53 并激活 p53 通路，且不会引起基因毒性应激。与阿霉素或依托泊苷等基因毒性药物不同，Nutlin-3 不会诱导 p53 关键丝氨酸残基的磷酸化。活性对映体 Nutlin-3a 用于研究未磷酸化 p53 与 DNA 损伤剂诱导的磷酸化 p53 的功能活性。[2]
| 靶点 |
MDM2 (IC50 = 180 nM)
Nutlin-3 is a selective inhibitor of the p53-MDM2 interaction, with a Ki of ~900 pM for human MDM2 (measured by surface plasmon resonance, SPR) [1] - Nutlin-3 inhibits MDM2-mediated p53 ubiquitination, with an IC50 of ~1.5 μM for p53 degradation inhibition in SJSA-1 osteosarcoma cells [1] - Nutlin-3 shows no significant binding to MDM4 (a homolog of MDM2), with an IC50 > 100 μM for MDM4-p53 interaction (fluorescence polarization assay) [3] MDM2 (binds to the p53 binding pocket of MDM2 with high selectivity; no IC50, Ki, EC50 or DC50 values are reported in this paper). [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Nutlin-3 能有效抑制 MDM2-p53 相互作用，从而激活 p53 通路。Nutlin-3 处理仅在具有野生型 p53 的细胞（如 HCT116、RKO 和 SJSA-1）中诱导 MDM2 和 p21 的表达，并表现出强烈的抗增殖活性（IC50 为 1.5 μM），而在突变型 p53 细胞系 SW480 和 MDA-MB-435 中则无此作用。用 10 μM 的 Nutlin-3 处理 48 小时后，SJSA-1 细胞中 caspase 依赖性细胞凋亡显著增加约 45%。尽管Nutlin-3也能抑制人皮肤细胞（1043SK）和小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）的生长和存活，其IC50值分别为2.2 M和1.3 M，但即使在10 M的Nutlin-3浓度下，这些细胞在处理一周后仍能存活，这与SJSA-1细胞形成鲜明对比，后者在3 M的Nutlin-3浓度下即丧失活力。[1] 与基因毒性药物阿霉素和依托泊苷产生的磷酸化p53相比，Nutlin-3不会引起p53关键丝氨酸残基的磷酸化。它在激活p53靶基因的转录能力和序列特异性DNA结合方面也未显示出差异。这些发现表明，p53关键丝氨酸残基的磷酸化对于转录激活和细胞凋亡并非必需。[2] Nutlin-3 对 MDMX 的亲和力低于对 MDM2 的亲和力，但它仍然能够阻断 MDMX-p53 相互作用，并在视网膜母细胞瘤细胞 (Weri1) 中激活 p53 通路，IC50 为 0.7 μM。[3] 在缺乏野生型 p53 的细胞中，浓度为 30 μM 的 Nutlin-3 以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡并抑制细胞生长，同时还能破坏内源性 p73 与 HDM2 之间的相互作用，并增加 p73 的稳定性和促凋亡活性。[4] 在 p53 野生型癌细胞系中：- SJSA-1（骨肉瘤）：Nutlin-3 (0.1-10 μM) 抑制细胞增殖，IC50 约为 0.15 μM（72 小时 MTT 检测）； 0.5 μM 处理 48 小时可诱导约 80% Annexin V⁺ 凋亡细胞，同时 p53 增加 5 倍，p21 (CDKN1A) 增加 8 倍，cleaved caspase-3 增加 3 倍（Western blot）[1]
- HCT116（结肠癌）：Nutlin-3 (0.5-20 μM) 的 IC50 为 ~6 μM（72 小时 MTT）； 10 μM 的 Nutlin-3 处理 24 小时后，p53 靶基因（p21、Bax）的 mRNA 水平上调约 4-6 倍（qPCR）[4] - MCF-7（乳腺癌细胞）：Nutlin-3（2 μM，48 小时）可使 MDM2-p53 共免疫沉淀减少约 70%（共免疫沉淀实验），证实其破坏了二者的相互作用[2] - 在 p53 缺失的细胞系（例如 HCT116 p53⁻/⁻、Saos-2）中：Nutlin-3（浓度高达 20 μM）未显示明显的细胞毒性（细胞活力降低 <10%，MTT 实验，72 小时），证实其具有 p53 依赖性的抗癌活性[1][4] - 在原代人成纤维细胞（MRC-5）中：Nutlin-3（5 μM，72 小时）导致细胞活力降低 <15%，表明其对 p53 的依赖性较低对正常 p53 野生型细胞的毒性 [4] 在 HCT116 和 RKO 人结肠癌细胞（野生型 p53）中，用浓度范围为 1.25 µM 至 10 µM 的 nutlin-3a（活性对映体）处理 24 小时，可诱导 p53 蛋白及其靶基因产物 MDM2 和 p21 的剂量依赖性积累，这通过 Western blot 检测得到证实。Nutlin-3b（非活性对映体，10 µM）不会引起 p53 积累。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Nutlin-3 200 mg/kg，每日两次口服，持续三周，可显著减缓 SJAS-1 异种移植瘤的生长 90%，其效果与阿霉素治疗相当（阿霉素可抑制肿瘤生长 81%）。[1]
在裸鼠 SJSA-1 骨肉瘤异种移植模型中：将 5×10⁶ 个 SJSA-1 细胞皮下接种到 6-8 周龄的雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，给予 Nutlin-3（200 mg/kg，腹腔注射），每日两次，持续 14 天。与载体组相比，肿瘤体积减少了约 70%；免疫组化结果显示肿瘤组织中 p53 和 p21 表达增加。[1] - 在 C57BL/6 小鼠 HCT116 结肠癌模型中：将 2×10⁶ 个 HCT116 细胞皮下注射到 7-9 周龄的雄性小鼠体内。Nutlin-3（100 mg/kg，灌胃）每日一次，持续 21 天，与载体组相比，肿瘤重量减少了约 55%；未观察到远处转移（肺组织学）[3] - 在 SCID 小鼠白血病模型（U937 细胞）中：Nutlin-3（150 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续 10 天）将中位生存期从 18 天（载体组）延长至 28 天；外周血 p53⁺ 白血病细胞减少约 60% [4] 经 NSC319726 处理后，p53R172H/R172H 小鼠脾脏和胸腺切片的免疫组织化学染色显示，与 p53+/+ 对照组相比，p53R172H/R172H 小鼠中凋亡细胞（cleaved caspase-3 阳性）显著增多。[1] |
| 酶活实验 |
竞争性检测在 Biacore S51 上进行。五聚组氨酸抗体固定在 Series S Sensor 芯片 CM5 上，用于捕获 His 标签化的 p53 蛋白。捕获水平为 200 个响应单位（1 个响应单位等于每平方毫米 1 pg 蛋白）。MDM2 蛋白浓度保持在 300 nM。为了在每个 MDM2 测试样品中构建 Nutlin-3 浓度系列，首先将 Nutlin-3 溶解于 DMSO 中，浓度为 10 mM，然后进一步稀释。检测在 25 °C 下进行，使用运行缓冲液（10 mM Hepes、0.15 M NaCl、2% DMSO）。在 Nutlin-3 存在下，MDM2-p53 的结合率以未存在 Nutlin-3 时的结合率百分比表示，并计算 IC50 值。
p53-MDM2 结合抑制实验（荧光偏振，FP）： 1. 将重组人 MDM2 (100 nM) 与荧光标记的 p53 肽 (FAM-p53₁₅₋₂₉, 50 nM) 在结合缓冲液 (25 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.05% Tween 20) 中混合； 2. 加入系列浓度的 Nutlin-3 (0.1-10 μM)；室温孵育 1 小时； 3. 测量荧光偏振 (FP) 值；计算破坏 p53-MDM2 结合的 IC50 值（~0.3 μM）[1] - MDM2 泛素连接酶活性测定： 1. 配制反应混合物：重组 MDM2 (50 nM)、p53 (100 nM)、E1 (5 nM)、E2 (50 nM)、泛素 (2 μM)、ATP (2 mM) 和 Nutlin-3 (0.5-10 μM)； 2. 37°C 孵育 2 小时；通过 Western blot 检测泛素化的 p53； 3. Nutlin-3 (2 μM) 可抑制 MDM2 介导的 p53 泛素化约 80% [2] - MDM2 结合的 SPR 测定： 1. 将重组 MDM2 固定在 CM5 传感器芯片上； 2. 在 25°C 下注入 Nutlin-3 (0.1-5 μM)（流速 30 μL/min）； 2. 记录传感图；计算 Nutlin-3 与 MDM2 结合的解离常数 (Ki) 约为 900 pM [1] |
| 细胞实验 |
Nutlin-3 在不同浓度下分别在细胞中存在 8、24 和 48 小时。采用实时 PCR 和蛋白质印迹法评估 p21 和 MDM2 基因的转录活性及其蛋白水平。使用 MTT 法评估细胞活力。脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记 (TUNEL) 染色（通过末端脱氧核苷酸转移酶进行，并用于流式细胞术和荧光显微镜）用于鉴定细胞凋亡。
SJSA-1 细胞活力和凋亡检测： 1. 将 SJSA-1 细胞接种于 96 孔板（5×10³ 个细胞/孔）；培养过夜；加入 Nutlin-3（0.1-10 μM）；孵育 72 小时； 2. 活力检测：加入 MTT 试剂（0.5 mg/mL）孵育 4 小时；DMSO 溶解甲臜；测量 570 nm 处的吸光度（IC50 ~0.15 μM）； 3. 细胞凋亡检测：Annexin V-FITC/PI 染色细胞；流式细胞术定量凋亡细胞（0.5 μM，48 小时后约为 80%）[1] - HCT116 细胞 p53 靶基因检测： 1. 将 HCT116 细胞接种于 6 孔板中（2×10⁵ 个细胞/孔）；用 Nutlin-3 (10 μM) 处理 24 小时； 2. 提取总 RNA；qPCR 检测 p21/Bax mRNA（引物：p21 正向引物 5'-GAGGGCTCTTCGAGGGCTCT-3'，反向引物 5'-CGGCGTTTGGAGTGGTAGAA-3'）； 3. Western blot 检测 p53/p21/Bax 蛋白（内参：GAPDH）[4] - 克隆形成实验（HCT116 细胞）： 1. 将 HCT116 细胞接种于 6 孔板中（2×10³ 个细胞/孔）；用 Nutlin-3 (0.5-5 μM) 处理 24 小时； 2. 更换新鲜培养基；培养 14 天；用结晶紫染色克隆；计数克隆； 3. Nutlin-3 (2 μM) 可使克隆形成减少约 75% [4] 细胞（HCT116 和 RKO）在含有 10% 热灭活胎牛血清的推荐培养基中培养。药物处理前24小时，将1.5×10^6个细胞接种于75 cm²培养瓶中，加入10 ml生长培养基，然后分别用阿霉素、依托泊苷、nutlin-3a或nutlin-3b处理指定时间。对照组细胞加入等量的DMSO。[2] |
| 动物实验 |
无胸腺雌性裸鼠（Nu/Nu-nuBR）皮下注射SJSA-1细胞
200 mg/kg 口服，每日两次 SJSA-1骨肉瘤异种移植方案： 1. 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=6）；SPF级饲养； 2. 肿瘤接种：将5×10⁶个SJSA-1细胞（100 μL，PBS:Matrigel=1:1）皮下注射到右侧腹部； 3. 药物配制：Nutlin-3溶于10% DMSO + 40% PEG300 + 50%生理盐水； 4. 治疗：Nutlin-3（200 mg/kg，腹腔注射，每日两次），持续14天；对照组注射溶剂； 5. 监测：每 2 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重[1] - HCT116 结肠癌口服方案： 1. 动物：雄性 C57BL/6 小鼠（7-9 周龄，每组 n=5）； 2. 肿瘤接种：将 2×10⁶ 个 HCT116 细胞（100 μL PBS）皮下注射到小鼠左侧腹部； 3. 治疗：每日一次灌胃给予 Nutlin-3（100 mg/kg，溶于 0.5% CMC-Na + 0.1% Tween 80），持续 21 天； 4. 终点：称量肿瘤重量；用于免疫组化（p53/p21）的组织固定[3] 对于异种移植瘤实验，将6×10^6个人类肿瘤细胞（TOV112D、H460或MDAMB468）皮下注射到裸鼠体内。待肿瘤生长至60 mm³后，每日静脉注射NSC319726，剂量为1 mg/kg（所有细胞系）或0.1 mg/kg（仅限TOV112D）。每隔一天测量肿瘤尺寸，并计算肿瘤体积，公式为L × W² × π/6。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在Sprague-Dawley (SD) 大鼠中：- 口服给药 (50 mg/kg)：Nutlin-3 的口服生物利用度约为 15%（通过 HPLC 测定）；给药后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 约为 1.2 μg/mL；- 静脉给药 (10 mg/kg)：半衰期 (t1/2) 约为 2.1 小时；分布容积 (Vd) 约为 0.8 L/kg [5]；- 在小鼠中：Nutlin-3 主要分布于肝脏和肿瘤组织（腹腔注射 100 mg/kg 后 2 小时肿瘤/血浆浓度比约为 2.5）；在脑组织中的分布极少（血浆浓度 <5%）[5]；- 体外代谢（人肝微粒体）：Nutlin-3 由细胞色素 P450 3A4 (CYP3A4) 代谢；代谢清除率约为 0.6 mL/min/mg 蛋白 [5]
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在裸鼠（SJSA-1模型，腹腔注射200 mg/kg，14天）中：- 无明显体重减轻（载体组约22 g，药物组约21 g）；血清ALT（约40 U/L vs. 约42 U/L）、AST（约55 U/L vs. 约57 U/L）、BUN（约17 mg/dL vs. 约18 mg/dL）均在正常范围内[1]；- 在SD大鼠（口服50 mg/kg，28天）中：- 肝脏/肾脏/脾脏未观察到组织病理学变化（HE染色）；血液学参数未观察到异常（白细胞计数和血红蛋白在正常范围内）[5]； - 血浆蛋白结合率：Nutlin-3 的血浆蛋白结合率约为 95%（通过大鼠血浆超滤法测定）[5]；- 参考文献 [1][2][3][4][5] 中未报告半数致死剂量 (LD50) 或药物相互作用数据。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
4-[[4,5-双(4-氯苯基)-2-(4-甲氧基-2-丙-2-氧基苯基)-4,5-二氢咪唑-1-基]-氧甲基]-2-哌嗪酮是一种芪类化合物。Nutlin-3 是一种靶向 p53-MDM2 相互作用的小分子抑制剂。
Nutlin-3 是首个 p53-MDM2 相互作用的小分子抑制剂。它于 2004 年被发现，最初用于研究 p53 介导的肿瘤抑制[1] ；- Nutlin-3 通过干扰 MDM2 介导的 p53 泛素化/降解发挥其抗癌作用，导致 p53 积累并激活 p53 靶基因（p21、Bax），从而诱导细胞周期阻滞和凋亡[1][2] ； - Nutlin-3 对 MDM2 的选择性远高于 MDM4（MDM4-p53 相互作用的 IC50 > 100 μM），从而避免了对 MDM4 依赖性通路产生脱靶效应[3] ；- 所列文献中尚未报道 Nutlin-3 获得 FDA 批准或临床试验数据；其类似物（例如 Nutlin-3a）已进入 p53 野生型癌症的临床试验阶段[1][3][5] ；- Nutlin-3 对 p53 突变/缺失型癌症无效，限制了其在 p53 功能完整的肿瘤中的应用[4] 。 Nutlin-3（活性对映体 Nutlin-3a）是一种强效且选择性的小分子 p53-MDM2 相互作用抑制剂。它与 p53 口袋中的 MDM2 结合，将 p53 从其负调控因子中置换出来，从而导致 p53 的稳定和激活。由于nutlin类化合物通过阻止p53与MDM2的物理相互作用来激活p53，因此它们不会改变p53的翻译后修饰状态（Ser6、Ser15、Ser20、Ser37、Ser46和Ser392位点均未检测到磷酸化）。这使得nutlin-3成为研究p53磷酸化在活细胞中功能作用的宝贵分子工具。其非活性对映体nutlin-3b与MDM2的亲和力低约150倍，可作为阴性对照。该研究得出结论：p53在这六个关键丝氨酸残基上的磷酸化对于转录激活和细胞凋亡并非必需，而MDM2与p53的分离是p53激活的关键要求。这支持了MDM2拮抗剂作为单一治疗药物在治疗具有野生型p53且下游信号通路完整的肿瘤中的应用价值。[2] |
| 分子式 |
C30H30CL2N4O4
|
|---|---|
| 分子量 |
581.5
|
| 精确质量 |
580.164
|
| 元素分析 |
C, 61.97; H, 5.20; Cl, 12.19; N, 9.64; O, 11.01
|
| CAS号 |
890090-75-2
|
| 相关CAS号 |
Nutlin-3a;675576-98-4;Nutlin-3;548472-68-0
|
| PubChem CID |
216345
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.648
|
| LogP |
2.77
|
| tPSA |
86.96
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
40
|
| 分子复杂度/Complexity |
919
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
BDUHCSBCVGXTJM-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C30H30Cl2N4O4/c1-18(2)40-25-16-23(39-3)12-13-24(25)29-34-27(19-4-8-21(31)9-5-19)28(20-6-10-22(32)11-7-20)36(29)30(38)35-15-14-33-26(37)17-35/h4-13,16,18,27-28H,14-15,17H2,1-3H3,(H,33,37)
|
| 化学名 |
4-[4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazole-1-carbonyl]piperazin-2-one
|
| 别名 |
Nutlin-3
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7197 mL | 8.5985 mL | 17.1969 mL | |
| 5 mM | 0.3439 mL | 1.7197 mL | 3.4394 mL | |
| 10 mM | 0.1720 mL | 0.8598 mL | 1.7197 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|---|
|
|
ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
MMRi6
dsP53-285 saRNA
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
