| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
p53-MDM2 (IC50 = 90 nM)
The target of Nutlin-3a is the p53-MDM2 interaction; it binds to the p53-binding pocket of MDM2 to disrupt MDM2-mediated ubiquitination and degradation of p53. Via surface plasmon resonance (SPR) assay, the equilibrium dissociation constant (Ki) of Nutlin-3a for MDM2 binding was 130 nM. In a fluorescence polarization (FP) assay measuring the inhibition of MDM2-p53 peptide interaction, Nutlin-3a exhibited an IC₅₀ of 90 nM [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Nutlin-3a 取代 MDM2 结合袋中的 p53，使其免受抑制和蛋白酶体降解。这会导致 p53 下游靶标的诱导、细胞周期停滞和细胞凋亡。用 10 μM nutlin-3a 孵育 7 天后，超过 90% 的 NIH3T3 细胞生长被抑制[1]。 Nutlin-3a 以剂量依赖性方式诱导 p21 表达，同时 Nutlin-3a 还可稳定并激活 p53[1]。 nutlin-3a 可有效将 S 期间隔降低至 0.2–2%，同时增强 G1 和 G2/M 期间隔[1]。 40 小时后，nutlin-3a 导致约 60% 的 SJSA-1 和 MHM 细胞凋亡，60 小时后这一数字分别升至 85% 和 65% [1]。
结肠癌细胞增殖抑制活性：在野生型p53的HCT116（p53⁺/⁺）细胞中，Nutlin-3a呈剂量依赖性抑制增殖（MTT法，孵育72小时），IC₅₀为2.3 μM；而在p53敲除的HCT116（p53⁻/⁻）细胞中，药物无明显敏感性，IC₅₀ > 20 μM。Western blot分析显示，用10 μM Nutlin-3a处理24小时后，p53蛋白水平升高约4.5倍；实时定量RT-PCR进一步证实，p53靶基因p21（细胞周期阻滞相关）和Bax（凋亡相关）的mRNA水平分别较溶剂对照组上调3.8倍和2.9倍 [1] - 多种癌细胞的增殖抑制与凋亡诱导作用：在野生型p53癌细胞系（如SJSA-1骨肉瘤细胞、MCF-7乳腺癌细胞）中，Nutlin-3a表现出强效活性。其中，SJSA-1细胞的增殖抑制IC₅₀（MTT法，72小时）为0.15 μM；用1 μM Nutlin-3a处理48小时，可诱导52%的细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI染色法）。在突变型p53癌细胞系（如SK-OV-3卵巢癌细胞、HT-29结肠癌细胞）中，Nutlin-3a活性微弱，IC₅₀均 > 10 μM [2] - 靶点特异性与作用机制验证：即使在10 μM浓度下，Nutlin-3a也未检测到与MDM2同源蛋白MDMX的结合（SPR实验）。竞争性FP实验证实，Nutlin-3a可将荧光标记的p53肽从MDM2上置换下来（IC₅₀ 90 nM），但无法置换MDMX结合的p53肽。在SJSA-1细胞中，用5 μM Nutlin-3a处理16小时，MDM2与p53的共免疫沉淀水平降低65%，证实二者相互作用被破坏 [3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Nutlin-3a 以剂量依赖性方式抑制异种移植物生长，最高剂量 (200 mg/kg) 显示肿瘤显着缩小 [1]。在体内，nutlin-3 选择性激活 p53 通路，对 SJSA-1 骨肉瘤肿瘤极为有效[1]。 Nutlin-3a 疗法对具有野生型 p53 和 mdm2 基因扩增的肿瘤最有效。
HCT116结肠癌异种移植模型：将携带皮下HCT116 p53⁺/⁻肿瘤（体积100 mm³）的裸鼠随机分为三组（n=6/组）：溶剂对照组（0.5%甲基纤维素+0.2%吐温80）、Nutlin-3a 25 mg/kg组、Nutlin-3a 50 mg/kg组，药物通过灌胃每日给药两次，持续21天。50 mg/kg组肿瘤体积较对照组减少68%（p < 0.01）；肿瘤组织中p53蛋白水平升高3.2倍、p21蛋白水平升高2.8倍（免疫组化检测），凋亡细胞数量增加4.5倍（TUNEL染色）。在HCT116 p53⁻/⁻异种移植模型中，Nutlin-3a未表现出肿瘤抑制作用 [1] - SJSA-1骨肉瘤异种移植模型：将携带SJSA-1肿瘤（体积约150 mm³）的裸鼠分为两组（n=5/组）：溶剂对照组（DMSO:PEG400:生理盐水=10:40:50）、Nutlin-3a 40 mg/kg组，药物通过腹腔注射每日给药一次，持续14天。Nutlin-3a使肿瘤重量较对照组减少75%；肿瘤组织裂解液的Western blot显示，p53蛋白水平升高3.5倍、p21升高2.6倍、Bax升高2.3倍，且实验期间未观察到明显体重下降或器官损伤 [2] - 转基因肺癌模型：对经Ad-Cre诱导产生肺癌的转基因小鼠（LSL-KrasG12D/+; Trp53fl/fl），分为两组（n=8/组）：溶剂对照组（0.5%羧甲基纤维素）、Nutlin-3a 30 mg/kg组，药物通过灌胃每日给药两次，持续4周。Nutlin-3a使肺肿瘤数量较对照组减少42%，肿瘤细胞中p53核染色（激活标志）增加，Ki-67（增殖标志）阳性率降低38% [3] |
| 酶活实验 |
在 Biacore S51 上进行竞争分析。 PentaHis 抗体固定在 S 系列传感器芯片 CM5 上，以捕获带有 His 标签的 p53。捕获水平约为 200 个响应单位或更少（1 个响应单位对应于每 mm 2 1 pg 蛋白质）。 MDM2 蛋白维持在 300 nM 的恒定浓度。每个 MDM2 测试样品包含一系列浓度的测试化合物，这些测试化合物首先以 10 mM 的浓度溶解在 DMSO 中，然后进一步稀释。测试在 25 °C 运行缓冲液（10 mM Hepes、0.15 M NaCl、2% DMSO）中进行。 Microsoft Excel 用于计算 IC50 以及抑制剂存在的 MDM2-p53 结合与不存在的结合的百分比。
MDM2结合的SPR实验：将重组人MDM2蛋白（1-125位氨基酸）通过胺偶联法固定在CM5传感芯片上，运行缓冲液为含10 mM HEPES（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.005% Tween-20的溶液。将系列浓度的Nutlin-3a（0.01~5 μM）以30 μL/min的流速注入芯片，每个循环包括120秒结合相和300秒解离相。传感图通过无MDM2的空白对照流路校正非特异性结合后，使用BIAevaluation软件按1:1朗缪尔结合模型计算Ki值 [3] - MDM2-p53相互作用抑制的FP实验：将FITC标记的p53肽（15-29位氨基酸）与重组MDM2（100 nM）在缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.05% Tween-20）中室温孵育30分钟，形成复合物。加入系列浓度的Nutlin-3a（0.1 nM~10 μM），继续孵育60分钟后，在激发波长485 nm、发射波长535 nm下检测FP信号；将信号降低50%的Nutlin-3a浓度定义为IC₅₀ [3] |
| 细胞实验 |
将所有 15 个细胞系以每孔 1×103 个细胞的密度接种在 96 孔板中。更换培养基后和 24 小时后，向细胞施用增量剂量的 Nutlin 3a（1 μM、5 μM、10 μM、25 μM、50 μM 和 70 μM）。孵育 72 小时后，将 WST-1 添加到每个孔中，并使用设置为 450 nm 吸光度的酶标仪计算活细胞的数量。为了精确确定细胞系的 IC50，根据需要使用较小的 Nutlin 3a 滴定重复实验。 IC50 成立。以与之前相同的方式，再次铺板细胞系，用 Nutlin 3a 以各自的 IC50 处理，添加 WST-1，并在 24、48 和 72 小时测量细胞活力。
MTT增殖抑制实验：将细胞（HCT116、SJSA-1、MCF-7）以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的完全DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂条件下培养过夜。次日更换为含Nutlin-3a（0.1 μM~20 μM）或溶剂（0.1% DMSO）的新鲜培养基，孵育72小时后，每孔加入20 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液）；4小时后吸弃培养基，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，测定570 nm处吸光度。以溶剂对照组为参照计算细胞活力，通过非线性回归分析得出IC₅₀ [1,2] - p53及靶蛋白Western blot实验：用Nutlin-3a（1~10 μM）或溶剂处理细胞16~24小时，冷PBS洗涤后，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞，BCA法测定蛋白浓度。取30 μg蛋白经10% SDS-PAGE电泳分离后，转移至PVDF膜；用5%脱脂牛奶-TBST溶液封闭1小时（室温），加入p53、p21、Bax、β-actin一抗4°C孵育过夜；TBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗室温孵育1小时，ECL化学发光显影，ImageJ软件定量条带强度（以β-actin归一化） [1,3] - 凋亡检测（Annexin V-FITC/PI染色）：用Nutlin-3a（1~5 μM）或溶剂处理SJSA-1细胞48小时，胰酶消化后冷PBS洗涤，用结合缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl₂）重悬细胞（1×10⁶个/mL）。加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟后，加入400 μL结合缓冲液，流式细胞仪分析；凋亡细胞包括Annexin V⁺/PI⁻（早期凋亡）和Annexin V⁺/PI⁺（晚期凋亡） [2] |
| 动物实验 |
1% Klucel, 0.1% Tween 80; 100, 200 mg/kg; p.o.; b.i.d Nude mice bearing subcutaneous human cancer xenografts
HCT116 Xenograft Study: Female nude mice (6–8 weeks old) were subcutaneously injected with 5×10⁶ HCT116 p53⁺/⁺ or p53⁻/⁻ cells (1:1 PBS:Matrigel, 100 μL) into the right flank. When tumors reached 100 mm³, mice were grouped (n=6/group): vehicle (0.5% methylcellulose + 0.2% Tween-80), Nutlin-3a 25 mg/kg, or 50 mg/kg. Nutlin-3a was administered via oral gavage twice daily for 21 days. Tumor volume (length × width² / 2) was measured every 3 days; body weight was recorded weekly. Mice were euthanized, tumors were excised (weighed, fixed in 4% paraformaldehyde for IHC, or frozen for Western blot) [1] - SJSA-1 Xenograft Study: Male nude mice (6–8 weeks old) received subcutaneous injections of 2×10⁶ SJSA-1 cells (1:1 PBS:Matrigel, 100 μL) into the left flank. When tumors reached 150 mm³, mice were grouped (n=5/group): vehicle (DMSO:PEG400:saline = 10:40:50) or Nutlin-3a 40 mg/kg. Nutlin-3a was given via intraperitoneal injection once daily for 14 days. Tumor volume and body weight were measured every 2 days; tumors were collected for protein extraction and Western blot [2] - Transgenic Lung Cancer Study: Transgenic mice (LSL-KrasG12D/+; Trp53fl/fl) were intranasally administered Ad-Cre to induce lung tumors. Four weeks later, mice (n=8/group) received vehicle (0.5% carboxymethylcellulose) or Nutlin-3a 30 mg/kg (oral gavage, twice daily for 4 weeks). Mice were sacrificed; lungs were fixed in Bouin’s solution (tumor count/size via dissecting microscope) or paraffin-embedded (IHC for p53 and Ki-67) [3] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
Pharmacokinetics of mice after oral administration: After oral administration of 50 mg/kg Nutlin-3a to mice, the peak plasma concentration (Cmax) was 2.8 μM (time to peak was 1 hour, Tmax), the area under the curve (AUC₀-24h) at 24 hours was 12.6 μM·h, and the elimination half-life (t₁/₂) was 3.2 hours. The oral bioavailability was approximately 35% (calculated by comparing the AUC of the same dose administered intravenously) [1]
- Tissue distribution in mice: After oral administration of 50 mg/kg Nutlin-3a to mice, the ratio of tumor (HCT116 xenograft tumor) to plasma concentration was 3.2 2 hours after administration. High concentrations were detected in the liver and kidneys; low concentrations of Nutlin-3a were detected in brain tissue (consistent with limited blood-brain barrier penetration) [1] - In vitro metabolism: Nutlin-3a (1 μM) was incubated with human liver microsomes (with NADPH) and the results showed that its half-life was 45 minutes. Two main metabolites were generated, mainly through the CYP3A4 pathway (pretreatment with the CYP3A4 inhibitor ketoconazole reduced metabolite generation by more than 70%) [3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Repeated-dose toxicity in mice: Mice were orally administered 25, 50, or 100 mg/kg of Nutlin-3a twice daily for 21 days. Mice in the 100 mg/kg group showed a slight decrease in body weight (8% of initial body weight) and a 2.1-fold increase in serum ALT (a marker of hepatotoxicity) compared to the control group. No toxicity was observed in the 25 or 50 mg/kg groups (body weight, serum biochemical indicators, and histopathological examination were all normal) [1] - Plasma protein binding rate: In vitro equilibrium dialysis showed that Nutlin-3a had a high plasma protein binding rate (>95%) in human, mouse, and rat plasma. The free fraction in human plasma was 2.3% [3]
- Toxicity in xenograft models: In SJSA-1 xenograft mice treated with Nutlin-3a 40 mg/kg (intraperitoneal injection, 14 days), no significant changes in hematological parameters (white blood cell count, red blood cell count, platelet count) or serum creatinine (renal function marker) were observed compared with the vector group [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Mechanism and Classification Background: Nutlin-3a is an imidazoline small molecule that specifically targets the p53-MDM2 interaction. In cancers with wild-type p53, MDM2 overexpression promotes p53 degradation; Nutlin-3a reverses this process by binding to MDM2, restoring p53-mediated cell cycle arrest and apoptosis [3]
- Chemosensitization: In HCT116 p53⁺/⁺ cells, combination therapy with Nutlin-3a (1 μM) and cisplatin (5 μM) produced a synergistic apoptotic effect (72% apoptosis), while the apoptosis rate of monotherapy was 28% (Nutlin-3a) and 35% (Ciplatin), indicating that Nutlin-3a can enhance chemosensitivity [1] - No response to mutant p53: Nutlin-3a does not bind to or stabilize mutant p53 protein, which explains its effectiveness in cancer cells with mutant p53 (e.g., SK-OV-3, HT-29), supporting its specificity for wild-type p53 tumors [2] |
| 分子式 |
C30H30CL2N4O4
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|---|---|
| 分子量 |
581.49
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| 精确质量 |
580.164
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| 元素分析 |
C, 61.97; H, 5.20; Cl, 12.19; N, 9.64; O, 11.01
|
| CAS号 |
675576-98-4
|
| 相关CAS号 |
Nutlin-3b;675576-97-3;Nutlin-3;548472-68-0;(Rac)-Nutlin-3;890090-75-2
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| PubChem CID |
11433190
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.648
|
| LogP |
2.77
|
| tPSA |
83.47
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
40
|
| 分子复杂度/Complexity |
919
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])[C@]1([H])[C@]([H])(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])Cl)N=C(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])N1C(N1C([H])([H])C(N([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)=O
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| InChi Key |
BDUHCSBCVGXTJM-WUFINQPMSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H30Cl2N4O4/c1-18(2)40-25-16-23(39-3)12-13-24(25)29-34-27(19-4-8-21(31)9-5-19)28(20-6-10-22(32)11-7-20)36(29)30(38)35-15-14-33-26(37)17-35/h4-13,16,18,27-28H,14-15,17H2,1-3H3,(H,33,37)/t27-,28+/m0/s1
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| 化学名 |
4-[(4S,5R)-4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazole-1-carbonyl]piperazin-2-one
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| 别名 |
Nutlin3a; Nutlin-3a; Nutlin 3a; SML 0580; SML-0580; SML0580; (-)-Nutlin-3; (-)-Nutlin 3
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.30 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 5% DMSO +55% PEG 300 +ddH2O: 8 mg/mL 配方 5 中的溶解度: 8 mg/mL (13.76 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7197 mL | 8.5986 mL | 17.1972 mL | |
| 5 mM | 0.3439 mL | 1.7197 mL | 3.4394 mL | |
| 10 mM | 0.1720 mL | 0.8599 mL | 1.7197 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
MMRi6
dsP53-285 saRNA
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