| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
p53-MDM2 (IC50 = 90 nM)
The target of Nutlin-3a is the p53-MDM2 interaction; it binds to the p53-binding pocket of MDM2 to disrupt MDM2-mediated ubiquitination and degradation of p53. Via surface plasmon resonance (SPR) assay, the equilibrium dissociation constant (Ki) of Nutlin-3a for MDM2 binding was 130 nM. In a fluorescence polarization (FP) assay measuring the inhibition of MDM2-p53 peptide interaction, Nutlin-3a exhibited an IC₅₀ of 90 nM [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Nutlin-3a 取代 MDM2 结合袋中的 p53，使其免受抑制和蛋白酶体降解。这会导致 p53 下游靶标的诱导、细胞周期停滞和细胞凋亡。用 10 μM nutlin-3a 孵育 7 天后，超过 90% 的 NIH3T3 细胞生长被抑制[1]。 Nutlin-3a 以剂量依赖性方式诱导 p21 表达，同时 Nutlin-3a 还可稳定并激活 p53[1]。 nutlin-3a 可有效将 S 期间隔降低至 0.2–2%，同时增强 G1 和 G2/M 期间隔[1]。 40 小时后，nutlin-3a 导致约 60% 的 SJSA-1 和 MHM 细胞凋亡，60 小时后这一数字分别升至 85% 和 65% [1]。
结肠癌细胞增殖抑制活性：在野生型p53的HCT116（p53⁺/⁺）细胞中，Nutlin-3a呈剂量依赖性抑制增殖（MTT法，孵育72小时），IC₅₀为2.3 μM；而在p53敲除的HCT116（p53⁻/⁻）细胞中，药物无明显敏感性，IC₅₀ > 20 μM。Western blot分析显示，用10 μM Nutlin-3a处理24小时后，p53蛋白水平升高约4.5倍；实时定量RT-PCR进一步证实，p53靶基因p21（细胞周期阻滞相关）和Bax（凋亡相关）的mRNA水平分别较溶剂对照组上调3.8倍和2.9倍 [1] - 多种癌细胞的增殖抑制与凋亡诱导作用：在野生型p53癌细胞系（如SJSA-1骨肉瘤细胞、MCF-7乳腺癌细胞）中，Nutlin-3a表现出强效活性。其中，SJSA-1细胞的增殖抑制IC₅₀（MTT法，72小时）为0.15 μM；用1 μM Nutlin-3a处理48小时，可诱导52%的细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI染色法）。在突变型p53癌细胞系（如SK-OV-3卵巢癌细胞、HT-29结肠癌细胞）中，Nutlin-3a活性微弱，IC₅₀均 > 10 μM [2] - 靶点特异性与作用机制验证：即使在10 μM浓度下，Nutlin-3a也未检测到与MDM2同源蛋白MDMX的结合（SPR实验）。竞争性FP实验证实，Nutlin-3a可将荧光标记的p53肽从MDM2上置换下来（IC₅₀ 90 nM），但无法置换MDMX结合的p53肽。在SJSA-1细胞中，用5 μM Nutlin-3a处理16小时，MDM2与p53的共免疫沉淀水平降低65%，证实二者相互作用被破坏 [3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Nutlin-3a 以剂量依赖性方式抑制异种移植物生长，最高剂量 (200 mg/kg) 显示肿瘤显着缩小 [1]。在体内，nutlin-3 选择性激活 p53 通路，对 SJSA-1 骨肉瘤肿瘤极为有效[1]。 Nutlin-3a 疗法对具有野生型 p53 和 mdm2 基因扩增的肿瘤最有效。
HCT116结肠癌异种移植模型：将携带皮下HCT116 p53⁺/⁻肿瘤（体积100 mm³）的裸鼠随机分为三组（n=6/组）：溶剂对照组（0.5%甲基纤维素+0.2%吐温80）、Nutlin-3a 25 mg/kg组、Nutlin-3a 50 mg/kg组，药物通过灌胃每日给药两次，持续21天。50 mg/kg组肿瘤体积较对照组减少68%（p < 0.01）；肿瘤组织中p53蛋白水平升高3.2倍、p21蛋白水平升高2.8倍（免疫组化检测），凋亡细胞数量增加4.5倍（TUNEL染色）。在HCT116 p53⁻/⁻异种移植模型中，Nutlin-3a未表现出肿瘤抑制作用 [1] - SJSA-1骨肉瘤异种移植模型：将携带SJSA-1肿瘤（体积约150 mm³）的裸鼠分为两组（n=5/组）：溶剂对照组（DMSO:PEG400:生理盐水=10:40:50）、Nutlin-3a 40 mg/kg组，药物通过腹腔注射每日给药一次，持续14天。Nutlin-3a使肿瘤重量较对照组减少75%；肿瘤组织裂解液的Western blot显示，p53蛋白水平升高3.5倍、p21升高2.6倍、Bax升高2.3倍，且实验期间未观察到明显体重下降或器官损伤 [2] - 转基因肺癌模型：对经Ad-Cre诱导产生肺癌的转基因小鼠（LSL-KrasG12D/+; Trp53fl/fl），分为两组（n=8/组）：溶剂对照组（0.5%羧甲基纤维素）、Nutlin-3a 30 mg/kg组，药物通过灌胃每日给药两次，持续4周。Nutlin-3a使肺肿瘤数量较对照组减少42%，肿瘤细胞中p53核染色（激活标志）增加，Ki-67（增殖标志）阳性率降低38% [3] |
| 酶活实验 |
在 Biacore S51 上进行竞争分析。 PentaHis 抗体固定在 S 系列传感器芯片 CM5 上，以捕获带有 His 标签的 p53。捕获水平约为 200 个响应单位或更少（1 个响应单位对应于每 mm 2 1 pg 蛋白质）。 MDM2 蛋白维持在 300 nM 的恒定浓度。每个 MDM2 测试样品包含一系列浓度的测试化合物，这些测试化合物首先以 10 mM 的浓度溶解在 DMSO 中，然后进一步稀释。测试在 25 °C 运行缓冲液（10 mM Hepes、0.15 M NaCl、2% DMSO）中进行。 Microsoft Excel 用于计算 IC50 以及抑制剂存在的 MDM2-p53 结合与不存在的结合的百分比。
MDM2结合的SPR实验：将重组人MDM2蛋白（1-125位氨基酸）通过胺偶联法固定在CM5传感芯片上，运行缓冲液为含10 mM HEPES（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.005% Tween-20的溶液。将系列浓度的Nutlin-3a（0.01~5 μM）以30 μL/min的流速注入芯片，每个循环包括120秒结合相和300秒解离相。传感图通过无MDM2的空白对照流路校正非特异性结合后，使用BIAevaluation软件按1:1朗缪尔结合模型计算Ki值 [3] - MDM2-p53相互作用抑制的FP实验：将FITC标记的p53肽（15-29位氨基酸）与重组MDM2（100 nM）在缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.05% Tween-20）中室温孵育30分钟，形成复合物。加入系列浓度的Nutlin-3a（0.1 nM~10 μM），继续孵育60分钟后，在激发波长485 nm、发射波长535 nm下检测FP信号；将信号降低50%的Nutlin-3a浓度定义为IC₅₀ [3] |
| 细胞实验 |
将所有 15 个细胞系以每孔 1×103 个细胞的密度接种在 96 孔板中。更换培养基后和 24 小时后，向细胞施用增量剂量的 Nutlin 3a（1 μM、5 μM、10 μM、25 μM、50 μM 和 70 μM）。孵育 72 小时后，将 WST-1 添加到每个孔中，并使用设置为 450 nm 吸光度的酶标仪计算活细胞的数量。为了精确确定细胞系的 IC50，根据需要使用较小的 Nutlin 3a 滴定重复实验。 IC50 成立。以与之前相同的方式，再次铺板细胞系，用 Nutlin 3a 以各自的 IC50 处理，添加 WST-1，并在 24、48 和 72 小时测量细胞活力。
MTT增殖抑制实验：将细胞（HCT116、SJSA-1、MCF-7）以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的完全DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂条件下培养过夜。次日更换为含Nutlin-3a（0.1 μM~20 μM）或溶剂（0.1% DMSO）的新鲜培养基，孵育72小时后，每孔加入20 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液）；4小时后吸弃培养基，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，测定570 nm处吸光度。以溶剂对照组为参照计算细胞活力，通过非线性回归分析得出IC₅₀ [1,2] - p53及靶蛋白Western blot实验：用Nutlin-3a（1~10 μM）或溶剂处理细胞16~24小时，冷PBS洗涤后，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞，BCA法测定蛋白浓度。取30 μg蛋白经10% SDS-PAGE电泳分离后，转移至PVDF膜；用5%脱脂牛奶-TBST溶液封闭1小时（室温），加入p53、p21、Bax、β-actin一抗4°C孵育过夜；TBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗室温孵育1小时，ECL化学发光显影，ImageJ软件定量条带强度（以β-actin归一化） [1,3] - 凋亡检测（Annexin V-FITC/PI染色）：用Nutlin-3a（1~5 μM）或溶剂处理SJSA-1细胞48小时，胰酶消化后冷PBS洗涤，用结合缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl₂）重悬细胞（1×10⁶个/mL）。加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟后，加入400 μL结合缓冲液，流式细胞仪分析；凋亡细胞包括Annexin V⁺/PI⁻（早期凋亡）和Annexin V⁺/PI⁺（晚期凋亡） [2] |
| 动物实验 |
1% Klucel，0.1% Tween 80；100、200 mg/kg；口服；每日两次。裸鼠皮下移植人源肿瘤异种移植瘤。HCT116异种移植瘤研究：将5×10⁶个HCT116 p53⁺/⁺或p53⁻/⁻细胞（1:1 PBS:Matrigel，100 μL）皮下注射到6-8周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠分组（每组n=6）：载体组（0.5%甲基纤维素+0.2% Tween-80）、Nutlin-3a 25 mg/kg组或Nutlin-3a 50 mg/kg组。Nutlin-3a每日两次灌胃给药，持续21天。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；每周记录一次体重。处死小鼠，切除肿瘤（称重，用4%多聚甲醛固定用于免疫组化，或冷冻用于蛋白质印迹分析）[1]
- SJSA-1异种移植研究：将2×10⁶个SJSA-1细胞（1:1 PBS:Matrigel，100 μL）皮下注射到6-8周龄雄性裸鼠的左侧腹部。当肿瘤体积达到150 mm³时，将小鼠分组（每组n=5）：载体组（DMSO:PEG400:生理盐水=10:40:50）或Nutlin-3a组（40 mg/kg）。Nutlin-3a每日腹腔注射一次，连续14天。每隔2天测量肿瘤体积和体重；收集肿瘤组织进行蛋白质提取和Western blot分析[2] - 转基因肺癌研究：将转基因小鼠（LSL-KrasG12D/+；Trp53fl/fl）经鼻内给予Ad-Cre以诱导肺肿瘤。4周后，小鼠（每组n=8）分别接受载体（0.5%羧甲基纤维素）或Nutlin-3a 30 mg/kg（灌胃，每日两次，持续4周）。处死小鼠；将肺组织固定于Bouin氏液中（通过解剖显微镜计数/测量肿瘤大小）或进行石蜡包埋（用于p53和Ki-67的免疫组化染色）[3] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠口服药代动力学：小鼠口服 50 mg/kg Nutlin-3a 后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.8 μM（达峰时间为 1 小时，Tmax），24 小时药时曲线下面积 (AUC₀-24h) 为 12.6 μM·h，消除半衰期 (t₁/₂) 为 3.2 小时。口服生物利用度约为 35%（通过比较相同剂量静脉给药的 AUC 计算得出）[1]
- 小鼠组织分布：小鼠口服 50 mg/kg Nutlin-3a 后，给药 2 小时肿瘤（HCT116 异种移植瘤）与血浆浓度比为 3.2。肝脏和肾脏中检测到高浓度；在脑组织中检测到低浓度的Nutlin-3a（与血脑屏障穿透性有限相符）[1] - 体外代谢：将Nutlin-3a (1 μM) 与人肝微粒体（加NADPH）孵育，结果显示其半衰期为45分钟。生成两种主要代谢物，主要通过CYP3A4途径（用CYP3A4抑制剂酮康唑预处理可使代谢物生成减少70%以上）[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
小鼠重复给药毒性：小鼠每日两次口服Nutlin-3a 25、50 或 100 mg/kg，持续 21 天。100 mg/kg 组小鼠出现轻度体重下降（初始体重的 8%），血清 ALT（肝毒性标志物）水平较对照组升高 2.1 倍。25 或 50 mg/kg 组未观察到毒性（体重、血清生化指标和组织病理学检查均正常）[1]
- 血浆蛋白结合率：体外平衡透析显示，Nutlin-3a 在人、小鼠和大鼠血浆中均具有较高的血浆蛋白结合率（>95%）。人血浆中游离分数为 2.3% [3] - 异种移植模型中的毒性：在用 Nutlin-3a 40 mg/kg（腹腔注射，14 天）治疗的 SJSA-1 异种移植小鼠中，与载体组相比，未观察到血液学参数（白细胞计数、红细胞计数、血小板计数）或血清肌酐（肾功能标志物）的显著变化 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
机制和类别背景：Nutlin-3a是一种咪唑啉类小分子，可特异性靶向p53-MDM2相互作用。在具有野生型p53的癌症中，MDM2过表达会促进p53降解； Nutlin-3a通过结合MDM2逆转这一过程，恢复p53介导的细胞周期阻滞和凋亡[3]
- 化疗增敏：在HCT116 p53⁺/⁺细胞中，Nutlin-3a（1 μM）与顺铂（5 μM）联合治疗可产生协同凋亡效应（72%的细胞凋亡），而单药治疗的凋亡率为28%（Nutlin-3a），顺铂为35%（Nutlin-3a），表明Nutlin-3a可增强化疗敏感性[1] - 对突变型p53无反应：Nutlin-3a不与突变型p53蛋白结合或稳定突变型p53蛋白，这解释了其在具有突变型p53的癌细胞（例如SK-OV-3、 HT-29），这支持了其对野生型p53肿瘤的特异性[2] |
| 分子式 |
C30H30CL2N4O4
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|---|---|
| 分子量 |
581.49
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| 精确质量 |
580.164
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| 元素分析 |
C, 61.97; H, 5.20; Cl, 12.19; N, 9.64; O, 11.01
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| CAS号 |
675576-98-4
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| 相关CAS号 |
Nutlin-3b;675576-97-3;Nutlin-3;548472-68-0;(Rac)-Nutlin-3;890090-75-2
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| PubChem CID |
11433190
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.648
|
| LogP |
2.77
|
| tPSA |
83.47
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
40
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| 分子复杂度/Complexity |
919
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])[C@]1([H])[C@]([H])(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])Cl)N=C(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])N1C(N1C([H])([H])C(N([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)=O
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| InChi Key |
BDUHCSBCVGXTJM-WUFINQPMSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H30Cl2N4O4/c1-18(2)40-25-16-23(39-3)12-13-24(25)29-34-27(19-4-8-21(31)9-5-19)28(20-6-10-22(32)11-7-20)36(29)30(38)35-15-14-33-26(37)17-35/h4-13,16,18,27-28H,14-15,17H2,1-3H3,(H,33,37)/t27-,28+/m0/s1
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| 化学名 |
4-[(4S,5R)-4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazole-1-carbonyl]piperazin-2-one
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| 别名 |
Nutlin3a; Nutlin-3a; Nutlin 3a; SML 0580; SML-0580; SML0580; (-)-Nutlin-3; (-)-Nutlin 3
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.30 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 5% DMSO +55% PEG 300 +ddH2O: 8 mg/mL 配方 5 中的溶解度: 8 mg/mL (13.76 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7197 mL | 8.5986 mL | 17.1972 mL | |
| 5 mM | 0.3439 mL | 1.7197 mL | 3.4394 mL | |
| 10 mM | 0.1720 mL | 0.8599 mL | 1.7197 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
MMRi6
dsP53-285 saRNA
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