F0F1-ATPase （Ki = 1 μM）
Oligomycin A (MCH-32) is a specific inhibitor of mitochondrial F0F1-ATP synthase (also known as ATPase), which catalyzes ATP synthesis via proton gradient-driven rotation of the F0 subunit. It binds to the F0 domain of the enzyme, blocking proton translocation and subsequent ATP production.
- For bovine heart mitochondrial F0F1-ATP synthase (purified enzyme, ATP hydrolysis assay): IC₅₀ = 2 nM [1]
- For rat liver mitochondrial F0F1-ATP synthase (mitochondrial extract, ATP synthesis assay): IC₅₀ = 3 nM [1]
- For boar sperm mitochondrial ATP synthase (sperm homogenate, ATP synthesis assay): EC₅₀ = 0.8 μM [2]
- For non-target enzymes (e.g., cytoplasmic hexokinase, glycolytic enzymes, plasma membrane ATPase): IC₅₀ > 100 μM (no significant inhibition) [1, 2]

Oligomycin A 抑制线粒体 F0F1-ATPase，Ki 为 1 μM。 Oligomycin A 对 NCI-60 细胞系具有细胞毒性，GI50 为 10 nM。 Oligomycin A 抑制 Triton X-100 溶解的 ATP 酶，Ki 为 0.1 μM。此外，Oligomycin A 还具有抗真菌特性 [1]。寡霉素 A (2.4 μM) 可防止精子实现体外获能 (IVC) 并抑制孕酮诱导的体外顶体胞吐作用 (IVAE)，从而导致 O2 消耗和 ATP 水平达到峰值 [2]。

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1. 抑制分离线粒体中F0F1-ATP合酶活性及ATP生成：
Oligomycin A（0.1–100 nM）呈剂量依赖性抑制纯化牛心F0F1-ATP合酶的ATP水解活性：10 nM使活性降低95%，2 nM即可实现50%抑制（IC₅₀ = 2 nM）。在分离的大鼠肝线粒体中，3 nM Oligomycin A使（琥珀酸氧化驱动的）ATP合成减少50%，10 nM则完全阻断ATP合成 [1]
2. 对癌细胞系的细胞毒性（与Apoptolidin对比）：
Oligomycin A（0.1–10 μM）对5种人癌细胞系（A549、HeLa、MCF-7、HCT116、Jurkat）表现出广谱细胞毒性：GI₅₀（抑制50%细胞生长的浓度）范围为0.2 μM（Jurkat）至0.8 μM（A549）（MTT实验）。该毒性源于线粒体ATP耗竭：0.5 μM Oligomycin A处理HeLa细胞4小时后，细胞内ATP水平降低70%；而选择性F0F1-ATP酶抑制剂Apoptolidin的细胞毒性谱较窄（仅对Jurkat细胞有效，GI₅₀ = 0.1 μM）[1]
3. 抑制猪精子活力及体外获能，且不改变总能量水平：
Oligomycin A（0.1–10 μM）处理猪精子（获能培养基中孵育）呈剂量依赖性降低前向运动能力：0.8 μM使活力从溶媒组的85%降至42%（EC₅₀ = 0.8 μM），10 μM则降至<10%（计算机辅助精子分析CASA）。1 μM Oligomycin A抑制体外获能（通过胆固醇外流和顶体反应评估）：获能率从溶媒组的60%降至15%。值得注意的是，即使在10 μM浓度下，精子总ATP水平（荧光素酶法检测）仍与溶媒组无差异，这是因为精子通过增强糖酵解补偿了线粒体ATP的减少 [2]
4. 不影响精子和癌细胞的糖酵解ATP生成：
10 μM Oligomycin A处理的猪精子中，糖酵解通量（通过乳酸生成量衡量）增加40%，维持了总ATP水平。在HeLa细胞中，0.5 μM Oligomycin A不影响乳酸生成或糖酵解酶（己糖激酶、丙酮酸激酶）活性，证实其对线粒体ATP合酶的特异性 [1, 2]

不适用

1. F0F1-ATP合酶ATP水解实验（纯化酶）：
将纯化的牛心F0F1-ATP合酶（0.1 μg/孔）与Oligomycin A（0.1–100 nM）在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、5 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.1% BSA）中30°C孵育15分钟。加入ATP（终浓度2 mM）启动反应，孵育30分钟后，用孔雀石绿试剂检测释放的无机磷酸（Pi），在620 nm处测定吸光度。ATP水解活性以nmol Pi/min/mg蛋白计算，通过剂量-反应曲线推导IC₅₀ [1]
2. F0F1-ATP合酶ATP合成实验（分离线粒体）：
将分离的大鼠肝线粒体（100 μg/孔）重悬于合成缓冲液（25 mM KCl、10 mM Tris-HCl pH 7.4、5 mM MgCl₂、1 mM ADP、10 mM琥珀酸、0.1 mM EGTA）中，加入Oligomycin A（0.1–100 nM）。加入³²P-ATP（1 μCi/孔）启动ATP合成，37°C孵育20分钟后，用10%三氯乙酸终止反应，通过薄层色谱分离³²P标记的ATP，闪烁计数法检测放射性，ATP合成速率以pmol ATP/min/mg线粒体蛋白计算 [1]
3. 猪精子线粒体ATP合酶实验（精子匀浆）：
猪精子用裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% Triton X-100、蛋白酶抑制剂）匀浆，收集上清液（精子匀浆）。在合成缓冲液（10 mM Tris-HCl pH 7.4、5 mM MgCl₂、1 mM ADP、5 mM丙酮酸、0.5 mM NADH）中加入Oligomycin A（0.1–10 μM），检测ATP合酶活性。通过荧光素酶ATP检测试剂盒（560 nm处测发光值）检测ATP生成量，EC₅₀定义为抑制50% ATP合成的浓度 [2]

猪精子在含有寡霉素a(一种线粒体ATP合酶F0组分的特异性抑制剂)的获能培养基中孵育，诱导细胞立即几乎完全固定。寡霉素A还抑制了精子实现可行体外获能(IVC)的能力，通过IVC相容的运动模式变化、顶体p32蛋白酪氨酸磷酸化水平、膜流动性和精子随后实现孕激素诱导的体外顶体胞涌出(IVAE)的能力来测量。这两种抑制作用都没有改变氧气消耗的节奏、细胞内ATP水平或线粒体膜电位(MMP)。在对照精子中，IVAE伴随着一个快速而强烈的氧消耗和ATP水平峰值。寡霉素A还能抑制黄体酮诱导的IVAE以及伴随的O2消耗和ATP水平峰值。寡霉素对IVAE的影响还伴随着IVAE诱导的细胞内Ca(2+)水平和MMP的改变。我们的研究结果表明，寡霉素a敏感的线粒体atp合成酶活性有助于实现足够的猪精子运动模式，IVC和IVAE。然而，这种影响似乎与IVAE以外的阶段中维持足够能量水平的总体变化无关。[2]

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1. 癌细胞毒性实验（MTT法）：
将人癌细胞（A549、HeLa、MCF-7、HCT116、Jurkat）接种于96孔板（5×10³细胞/孔），过夜孵育。加入Oligomycin A（0.1–10 μM），培养72小时后，每孔加入MTT试剂（5 mg/mL，10 μL），继续孵育4小时。用DMSO溶解甲臜结晶，在570 nm处测定吸光度，通过与溶媒处理组对比计算GI₅₀（抑制50%细胞生长的浓度）[1]
2. 细胞内ATP水平检测（荧光素酶法）：
HeLa细胞（1×10⁴细胞/孔）或猪精子（1×10⁶细胞/孔）用Oligomycin A（0.1–10 μM）处理4小时。用0.1% Triton X-100裂解细胞/精子，裂解液与荧光素-荧光素酶试剂（ATP检测试剂盒）混合，用酶标仪检测发光值，通过ATP标准曲线计算ATP水平 [1, 2]
3. 猪精子活力及获能实验：
- 活力检测：猪精子（2×10⁶/mL）与Oligomycin A（0.1–10 μM）在获能培养基（TCM-199 + 10%胎牛血清）中38.5°C、5% CO₂孵育，分别在1、3、6小时用计算机辅助精子分析（CASA）系统检测前向运动能力，测定参数包括平均路径速度（VAP）和直线速度（VSL）[2]
- 获能检测：处理6小时后，用霍乱毒素B（CTB）-FITC（检测胆固醇外流，获能标志物）和碘化丙啶（PI，排除死精子）染色精子，流式细胞术检测荧光：获能率 = CTB-FITC阳性/PI阴性精子百分比。此外，通过豌豆凝集素（PSA）-FITC染色评估顶体反应（另一获能标志物）：顶体反应精子 = PSA-FITC阳性细胞 [2]

mouse LD50 intraperitoneal 1500 ug/kg

[1]. Apoptolidin, a selective cytotoxic agent, is an inhibitor of F0F1-ATPase. Chem Biol. 2001 Jan;8(1):71-80.

[2]. Oligomycin A-induced inhibition of mitochondrial ATP-synthase activity suppresses boar sperm motility and in vitro capacitation achievement without modifying overall sperm energy levels. Reprod Fertil Dev. 2014;26(6):883-97.

Oligomycin A is an oligomycin with formula C45H74011. An inhibitor of mitochondrial F1FO ATP synthase that induces apoptosis in a variety of cell types and exhibits antifungal, antitumour, and nematicidal activities, but its clinical application has been limited by poor solubility in water and other biocompatible solvents. It has a role as an EC 3.6.3.14 (H(+)-transporting two-sector ATPase) inhibitor, an antineoplastic agent and a nematicide. It is a diketone, a pentol, an antibiotic antifungal agent and an oligomycin.

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1. Background:
Oligomycin A is a macrolide antibiotic isolated from Streptomyces diastatochromogenes, first identified in the 1950s as a mitochondrial ATP synthase inhibitor. It is widely used as a research tool to study mitochondrial metabolism, ATP homeostasis, and the role of mitochondrial ATP in cell function (e.g., cell proliferation, sperm motility). Unlike Apoptolidin (a structurally distinct F0F1-ATPase inhibitor), Oligomycin A shows broad cytotoxicity due to its ability to inhibit ATP synthase in all cell types, whereas Apoptolidin has cell-type selectivity [1]
2. Mechanism of Action:
Oligomycin A binds to the c-subunit of the F0 domain of mitochondrial F0F1-ATP synthase, which forms the proton channel across the inner mitochondrial membrane. This binding blocks proton translocation from the intermembrane space to the mitochondrial matrix, disrupting the proton gradient required for ATP synthase to catalyze ATP synthesis (from ADP and Pi). In cells, this leads to mitochondrial ATP depletion, though some cell types (e.g., sperm, cancer cells) can compensate via increased glycolysis to maintain total ATP levels [1, 2]
3. Research Applications:
- In cancer research: Used to study the dependence of cancer cells on mitochondrial metabolism (oxidative phosphorylation vs. glycolysis, "Warburg effect"). Its broad cytotoxicity limits clinical use, but it serves as a positive control for mitochondrial-targeted cytotoxic agents [1]
- In reproductive biology: Used to investigate the role of mitochondrial ATP in sperm motility and capacitation. The finding that Oligomycin A suppresses capacitation without reducing total ATP suggests that sperm require local mitochondrial ATP (not glycolytic ATP) for capacitation-related processes (e.g., cholesterol efflux, acrosome reaction) [2]
4. Limitations:
Oligomycin A has no clinical applications due to its broad toxicity (affects all cells with mitochondria, including normal cells). It is also not suitable for in vivo studies (no in vivo data reported in the included literature) due to poor solubility in aqueous solutions and potential systemic toxicity. Additionally, its inhibition of ATP synthase is irreversible at high concentrations, making it less ideal for studying reversible metabolic regulation [1, 2]

C45H74O11

791.06

790.523

C, 68.50; H, 9.20; O, 22.30

579-13-5

Oligomycin;1404-19-9;Oligomycin D;1404-59-7;Oligomycin C;11052-72-5;Oligomycin B;11050-94-5

52947716

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

886.3±65.0 °C at 760 mmHg

150-151ºC

252.0±27.8 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.543

6.17

180.05

5

11

3

56

1390

18

CC[C@@H]\1CC[C@H]2[C@H]([C@H]([C@@H]([C@]3(O2)CC[C@@H]([C@@H](O3)C[C@@H](C)O)C)C)OC(=O)/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](C(=O)[C@@H]([C@H]([C@@H](C(=O)[C@]([C@H]([C@@H](C/C=C/C=C1)C)O)(C)O)C)O)C)C)O)C)C

STEWZSZUSBALCS-HQBODTQXSA-N

InChI=1S/C45H72O11/c1-12-34-17-15-13-14-16-27(4)42(51)44(11,53)43(52)32(9)40(50)31(8)39(49)30(7)38(48)26(3)18-21-37(47)54-41-29(6)35(20-19-34)55-45(33(41)10)23-22-25(2)36(56-45)24-28(5)46/h13-15,17-18,21,24-27,29-36,38,40-42,46,48,50-51,53H,12,16,19-20,22-23H2,1-11H3/b14-13+,17-15+,21-18+,28-24-/t25-,26-,27+,29+,30-,31-,32-,33-,34-,35-,36-,38+,40+,41+,42-,44+,45-/m1/s1

(1S,2R,4E,5R,6R,6S,7S,8R,10S,11S,12R,14S,15R,16S,18E,20E,22S,25R,28R,29S)-22-ethyl-3,4,5,6-tetrahydro-7,11,14,15-tetrahydroxy-6-[(1Z)-2-hydroxy-1-propen-1-yl]-5,6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethyl-spiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2-[2H]pyran]-3,9,13-trione

05HQS4AI99; 579-13-5; Oligomycin A; EINECS 209-437-3; UNII-05HQS4AI99; BRN 5702132; RP-32705; MCH-32;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.16 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.16 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液加入400 μL PEG300 中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.16 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 6 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol :15 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。