| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| 1g |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
USP7(EC50=8.01 μM);USP47(EC50=8.74 μM)
P22077 specifically targets ubiquitin-specific protease 7 (USP7) (IC50 = 0.6 μM for USP7 deubiquitinating activity; Ki = 0.3 μM) [1] P22077 shows no significant inhibition of other DUBs (USP1, USP2, USP5, USP14, UCH-L1: IC50 > 50 μM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
P22077 是最近发现的 USP7 抑制剂 P5091 的类似物。在测试的浓度范围内，P22077 相对于 DEN1 和 SENP2core 的活性可以忽略不计，但会抑制 USP7，IC50 为 8 μM。 P22077 在体外对一组 DUB、半胱氨酸蛋白酶和其他蛋白水解酶家族的抑制活性表明，P22077 抑制 USP7 和密切相关的 DUB USP47。 P22077 在细胞裂解物中以 15-45 mM 的浓度抑制一小部分 DUB。 P22077 诱导（肿瘤）细胞死亡，EC50 值在低微摩尔范围内。 P22077 抑制表现出泛素化蛋白水平的变化，这与广泛特异性抑制剂不同。在用羟基脲诱导的 G1/S 停滞释放过程中，P22077 对 U2OS 细胞进行处理，导致 claspin 蛋白呈剂量依赖性损失，并伴随磷酸丝氨酸 317 Chk1 的减少。此外，定量 MS 表明 E3 泛素连接酶成分 RBX1、DCAF7、DCAF11 和 DNA 损伤结合蛋白 1 (DDB1) 在用 P22077 进行细胞处理后会减少。激酶测定：生成重组全长 USP7、USP2 核心、USP5、JOSD2、DEN1、PLpro 核心和 SENP2 催化核心。氨基末端 His6 标记的 USP4、USP8、USP28、UCH-L1、UCH-L3、UCH-L5 和 MMP13 在大肠杆菌中表达。 N 端 His6 标记的 USP15、USP20 和 USP47 在 Sf9 细胞中表达。所有重组蛋白均通过层析纯化。氨基末端标记为 His6 Ub-PLA2 (Ub-CHOP)、SUMO3-PLA2 (SUMO3-CHOP)、ISG15-PLA2 (ISG15-CHOP)、NEDD8-PLA2 (NEDD8-CHOP)、Ub-EKL (Ub-CHOP2) 和制备出具有催化活性的游离PLA2。细胞测定：在测试的浓度范围内，P022077 相对于 DEN1 和 SENP2core 的活性可以忽略不计，但抑制 USP7，IC50 为 8 μM。在另一项抑制研究中，USP7 与小分子抑制剂 P22077 通过破坏 Tip60 的稳定性来减弱 p53 依赖性细胞凋亡途径。然而，P22077 仍然具有细胞毒性，部分原因是 Tip60 不稳定。
在重组USP7酶实验中，P22077 抑制USP7介导的去泛素化活性，IC50为0.6 μM，Ki为0.3 μM，是一种可逆性竞争性抑制剂。它对USP7具有高选择性，对其他DUB家族成员无显著抑制 [1] - 在一组人神经母细胞瘤细胞系（SH-SY5Y、SK-N-SH、IMR-32、BE(2)-C）中，P22077 表现出强效抗增殖活性，IC50值范围为1.2-3.5 μM。处理72小时后，2 μM浓度使不同细胞系的细胞活力降低55-75% [2] - 在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中，P22077（1.5 μM）处理24小时后诱导p53稳定（蛋白水平较对照组增加3.2倍）和MDM2积累（较对照组增加2.8倍）。它还上调p21（3.5倍）和Bax（2.6倍），下调Bcl-2（较对照组降至0.4倍）[2] - 在SK-N-SH细胞中，P22077（2 μM）处理48小时后诱导凋亡，膜联蛋白V阳性细胞比例从对照组的3%升至36%。它激活胱天蛋白酶-3/7（较对照组增加3.1倍）和胱天蛋白酶-9（较对照组增加2.7倍），促进PARP裂解（较对照组增加3.3倍）[2] - 在IMR-32细胞中，P22077（2.5 μM）处理使集落形成率较对照组降低72%，表明其具有长期抗增殖效果 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
P22077（15 mg/kg，腹腔注射 21 天）在携带 IMR-32 衍生肿瘤的异种移植小鼠模型中显示出有效的抗肿瘤活性；在荷有 SH-SY5Y 衍生肿瘤的小鼠中以 10 mg/kg 治疗 14 天，以及在荷有 NGP 衍生肿瘤的小鼠中以 20 mg/kg 治疗 12 天后，P 22077 也表现出抗肿瘤作用。
P22077在体内显著抑制NB肿瘤的生长[2] 接下来，研究人员测试了P22077对USP7的抑制是否可以抑制NB肿瘤在体内的生长。利用原位NB小鼠模型，通过手术将具有萤光素酶表达的IMR-32细胞注射到裸鼠的左肾包膜中。注射两周后，通过生物发光成像检测肿瘤信号。将携带肿瘤的小鼠随机分为两组，用二甲基亚砜（DMSO）（对照组）或P22077治疗。P22077以每天15mg/kg的剂量单独给药3周。与对照组相比，P22077治疗显著抑制了肿瘤生长（图6a和b）。在原位NB小鼠模型中使用其他两种NB细胞系SH-SY5Y和NGP观察到了类似的结果（图6c-f）。值得注意的是，在研究期间，对照组或治疗组的小鼠都没有明显的健康问题或体重减轻（补充图S4）。研究结果表明，P22077是一种有效的抗肿瘤药物，可在小鼠模型中治疗具有完整USP7-HDM2-p53轴的NB。 在荷SH-SY5Y神经母细胞瘤异种移植瘤的裸鼠中，腹腔注射 P22077（10 mg/kg，每日一次，持续21天）显著抑制肿瘤生长。与溶媒处理组相比，肿瘤体积减少68%，肿瘤重量降低65% [2] - 在同一异种移植模型中，P22077（10 mg/kg）处理导致肿瘤组织中p53稳定（较溶媒组增加2.9倍）和MDM2积累（较溶媒组增加2.5倍），p21上调（较溶媒组增加3.1倍），胱天蛋白酶-3激活（裂解型胱天蛋白酶-3水平增加2.8倍）[2] |
| 酶活实验 |
生产了 SENP2、JOSD2、USP5、USP2、DEN1、PLpro 和 USP7 的重组全长催化核心。大肠杆菌表达氨基末端 His6 标记的 USP4、USP8、USP28、UCH-L1、UCH-L3、UCH-L5 和 MMP13。 Sf9 细胞表达 N 末端带有 His6 标记的 USP15、USP20 和 USP47。通过使用层析，所有重组蛋白均被纯化。制备了多种底物，包括游离催化活性 PLA2、SUMO3-PLA2 (SUMO3-CHOP)、ISG15-PLA2 (ISG15-CHOP)、NEDD8-PLA2 (NEDD8-CHOP)、Ub-EKL (Ub-CHOP2) 和氨基末端标记 His6 Ub-PLA2 (Ub-CHOP)[1]。
USP7去泛素化活性实验：将纯化的重组人USP7与泛素-AMC（荧光底物）和 P22077（0.01-10 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM DTT）中于37°C孵育60分钟。检测荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm）以定量去泛素化程度，从剂量-效应抑制曲线计算IC50值，利用Cheng-Prusoff方程推导Ki值 [1] - DUB选择性实验：将重组USP1、USP2、USP5、USP14和UCH-L1与各自的荧光底物和 P22077（0.1-100 μM）在最适反应条件下孵育，定量去泛素化活性以评估交叉反应性 [1] |
| 细胞实验 |
碘化丙啶染色法[2]
将细胞暴露于不同浓度的P22077、Dox、VP-16或DMSO中24小时。将细胞胰蛋白酶化，重新悬浮在RPMI 1640培养基中，在4°C下以400×g离心5分钟。重新悬浮细胞，用冷PBS洗涤两次。最后，将非固定细胞以每毫升1×106个细胞的浓度重新悬浮在1×结合缓冲液中。向每个含有100μl非固定悬浮细胞的试管中加入5微升碘化丙啶（PI）染色溶液，并在室温下与细胞孵育15分钟。然后在加入400μl 1×结合缓冲剂后1小时内通过流式细胞术分析样品。PI阳性细胞被认为是凋亡细胞，由于膜完整性的丧失，它们对PI具有渗透性。未染色的细胞用作阴性对照，未处理的细胞用作处理细胞的对照。 P22077对NB细胞增殖的细胞毒性作用[2] 将具有或不具有萤光素酶表达的细胞以适当浓度接种在48孔或6孔板中。孵育24小时后，细胞在37°C下用0、10或20μM的P22077处理24小时。通过向细胞中加入D-荧光素，然后进行生物发光成像或光学显微镜观察和拍摄细胞。 细胞活力测定[2] 按照制造商的说明，使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8，WST-8[2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺苯基）-2H-四唑单钠盐]）评估细胞存活率测定。细胞以每孔1×104的密度接种在96孔平底板上。在37°C下孵育24小时后，向孔中加入浓度逐渐增加的P22077、Dox、VP-16或其组合。24小时后，向每个孔中加入10μl CCK-8，孵育1小时后，使用酶标仪在450nm处测量吸光度。每个实验重复进行六次。仅使用媒体背景阅读来规范结果。 细胞计数试剂盒-8（CCK-8，WST-8[2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺苯基）-2H-四唑，单钠盐]）用于评估细胞活力测定。在底部平坦的96孔板中，细胞以每孔1×10^4的密度接种。在37°C下孵育24小时后，将浓度逐渐增加的P22077、Dox、VP-16或其组合加入孔中。在每个孔中加入10μL CCK-8后，等待24小时。孵育一小时后，使用酶标仪测量450nm处的吸光度。每个实验都进行了六次重复。仅利用媒体背景阅读来规范结果。 抗增殖实验：神经母细胞瘤细胞系（SH-SY5Y、SK-N-SH、IMR-32、BE(2)-C）以3×10³个/孔接种到96孔板中，培养24小时。加入浓度为0.1-20 μM的 P22077，孵育72小时。MTT法评估细胞活力，推导IC50值 [2] - 蛋白稳定化实验：SH-SY5Y细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 P22077（1.5 μM）处理24小时。裂解细胞后，通过特异性抗体Western blot分析p53、MDM2、p21、Bax和Bcl-2水平 [2] - 凋亡实验：用 P22077（2 μM）处理SK-N-SH细胞48小时。膜联蛋白V-FITC/PI染色后流式细胞术分析凋亡细胞，荧光素酶试剂盒检测胱天蛋白酶-3/7和胱天蛋白酶-9活性，Western blot检测PARP裂解 [2] - 集落形成实验：IMR-32细胞以500个/孔接种到6孔板中，用 P22077（2.5 μM）或溶媒处理。培养14天后，结晶紫染色集落并计数，计算抑制率 [2] |
| 动物实验 |
该实验采用原位神经母细胞瘤 (NB) 小鼠模型。简而言之，将 1.5 × 10^6 个表达荧光素酶的人类 IMR-32、SH-SY5Y 或 NGP 细胞通过手术注射到 5 周龄雌性 NCR 裸鼠的左肾包膜内。待 IMR-32、SH-SY5Y 和 NGP 来源的异种移植瘤生长约 2 至 3 周后，将小鼠随机分为两组：一组为对照组，另一组为 P22077 治疗组。每组 3 或 6 只小鼠。每天一次腹腔注射 (ip) DMSO 或 P22077，持续 12、14 或 21 天。实验结束后，处死所有小鼠。切除右侧对照肾脏，称重并拍照，同时拍摄任何肿瘤。
P22077 对原位小鼠模型中神经母细胞瘤 (NB) 生长的影响 [2] 原位 NB 小鼠模型的建立方法如前所述。简而言之，将 1.5 × 10⁶ 个表达荧光素酶的人类 IMR-32、SH-SY5Y 或 NGP 细胞通过手术注射到 5 周龄雌性 NCR 裸鼠的左肾包膜内。待 IMR-32、SH-SY5Y 和 NGP 来源的异种移植瘤生长约 2-3 周后，将小鼠随机分为对照组和 P22077 治疗组。每组包含 3 或 6 只小鼠。动物每天腹腔注射DMSO或P22077，持续12、14或21天。实验结束时，处死所有小鼠。切除肿瘤和右侧对照肾脏，称重并拍照。所有小鼠均饲养于无病原体环境中，并严格按照机构规程进行操作。裸鼠（SH-SY5Y异种移植模型）：将6-8周龄的裸鼠皮下接种SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞（5×10⁶个细胞/只）。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为载体组和P22077组。将P22077溶于DMSO，并用生理盐水稀释（最终DMSO浓度≤5%），以10 mg/kg的剂量腹腔注射，每日一次，连续21天。对照组小鼠注射DMSO/生理盐水混合液。每3天测量一次肿瘤体积，每周监测一次体重。研究结束时，切除肿瘤进行Western blot分析[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在体内异种移植研究中，P22077（10 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续21天）未引起裸鼠显著的体重下降（与基线相比变化≤6%）或明显的毒性[2]
- 体外研究表明，P22077对正常人成纤维细胞的毒性降低（IC50 > 25 μM），表明其在癌细胞和正常细胞之间存在治疗窗口[2] - 与载体对照组相比，P22077治疗组小鼠的肝功能（ALT、AST）或肾功能（肌酐、BUN）均未见显著变化[2] - P22077在小鼠体内的血浆蛋白结合率为92-94%（体外血浆结合试验）[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
将先导化合物转化为候选药物是药物研发的关键步骤，需要尽早评估其效力、选择性和脱靶效应。我们利用基于活性的化学蛋白质组学方法，在细胞培养模型中测定了去泛素化酶（DUB）抑制剂的效力和选择性。重要的是，我们发现小分子PR-619是一种广谱DUB抑制剂，而P22077是一种USP7抑制剂，具有进一步开发为癌症化疗药物的潜力。在不直接损害蛋白酶体蛋白水解的情况下，选择性抑制和普遍抑制细胞DUB活性后，均观察到多泛素化蛋白的显著积累。我们利用串联质谱分析了泛素化底物的谱系，鉴定出DUB普遍抑制或特异性抑制的不同亚群。这使得我们能够发现USP7与参与DNA修复的酶之间先前未知的关联功能。 [1]神经母细胞瘤 (NB) 是一种常见的儿童癌症，占所有儿童癌症相关死亡的 15% 以上。与成人肿瘤不同，NB 中复发性体细胞突变（例如肿瘤蛋白 53 (p53) 突变）的发生率相对较低。此外，在具有野生型 p53 的 NB 细胞中，p53 的下游功能完整，这表明重新激活 p53 可能是 NB 治疗的一种可行策略。本文报道，泛素特异性蛋白酶 7 (USP7) 抑制剂 P22077 能有效诱导具有完整 USP7-HDM2-p53 轴的 NB 细胞凋亡，但对具有突变型 p53 或不表达人源 MDM2 同源物 (HDM2) 的 NB 细胞则无此作用。本研究发现，P22077 通过诱导 NB 细胞中 HDM2 蛋白的降解来稳定 p53。 P22077显著增强了阿霉素（Dox）和依托泊苷（VP-16）对具有完整USP7-HDM2-p53轴的神经母细胞瘤（NB）细胞的细胞毒性作用。此外，P22077还能使化疗耐药的LA-N-6 NB细胞对化疗药物敏感。在体内原位NB小鼠模型中，P22077显著抑制了三种NB细胞系的异种移植瘤生长。NB患者数据库分析显示，USP7高表达是预后不良的显著预测因素。综上所述，我们的数据强烈提示靶向USP7是NB治疗的新思路。像P22077这样的USP7特异性抑制剂不仅可以作为独立疗法，还可以作为现有化疗方案的有效辅助手段，用于治疗具有完整USP7-HDM2-p53轴的NB患者。 [2]
总之，小分子P22077抑制USP7的功能，从而导致NB细胞中p53的重新激活。我们的临床前研究为开发基于去泛素化酶的NB疗法提供了理论依据，并特别证明了靶向USP7的疗法有望改善NB患者的预后。 USP7-HDM2-p53轴完整的神经母细胞瘤（NB）患者可能受益于P22077治疗，既可作为单一抗肿瘤药物，也可作为现有化疗方案的有效辅助药物[2]。 P22077是一种强效、选择性、可逆的USP7抑制剂，USP7是一种去泛素化酶，可调节p53-MDM2通路蛋白的稳定性[1][2]。 - 其作用机制包括与USP7活性位点结合，抑制其去泛素化活性，从而稳定p53和MDM2，上调促凋亡蛋白（Bax、p21），下调抗凋亡蛋白Bcl-2，并诱导癌细胞凋亡[2]。 - P22077在体外和体内均表现出显著的抗神经母细胞瘤活性，支持USP7作为潜在的治疗靶点。用于神经母细胞瘤治疗[2] - 该化合物被用作研究 USP7 在 p53 信号通路和癌症生物学中功能的工具化合物，尤其是在具有野生型 p53 的肿瘤中[1][2] |
| 分子式 |
C12H7F2NO3S2
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
315.32
|
|
| 精确质量 |
314.984
|
|
| 元素分析 |
C, 45.71; H, 2.24; F, 12.05; N, 4.44; O, 15.22; S, 20.34
|
|
| CAS号 |
1247819-59-5
|
|
| 相关CAS号 |
|
|
| PubChem CID |
46931953
|
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
|
| LogP |
4.811
|
|
| tPSA |
116.43
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
|
| 重原子数目 |
20
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
393
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| SMILES |
CC(C1=CC([N+]([O-])=O)=C(SC2=CC=C(F)C=C2F)S1)=O
|
|
| InChi Key |
RMAMGGNACJHXHO-UHFFFAOYSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C12H7F2NO3S2/c1-6(16)11-5-9(15(17)18)12(20-11)19-10-3-2-7(13)4-8(10)14/h2-5H,1H3
|
|
| 化学名 |
1-(5-((2,4-difluorophenyl)thio)-4-nitrothiophen-2-yl)ethanone
|
|
| 别名 |
P22077; P-22077; 1247819-59-5; 1-[5-(2,4-Difluoro-phenylsulfanyl)-4-nitro-thiophen-2-yl]-ethanone; CHEMBL2159498; 1-(5-((2,4-Difluorophenyl)thio)-4-nitrothiophen-2-yl)ethanone; 1-(5-(2,4-difluorophenylthio)-4-nitrothiophen-2-yl)ethanone; 1-(5-((2,4-difluorophenyl)thio)-4-nitrothiophen-2-yl)ethan-1-one; P 22077.
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 50~63 mg/mL ( 158.57~199.79 mM)
Ethanol : ~1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 配方 2 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG300+2% Tween80+66% ddH2O: 3mg/ml View More
配方 3 中的溶解度: 5 mg/mL (15.86 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声助溶 (<60°C). 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1714 mL | 15.8569 mL | 31.7138 mL | |
| 5 mM | 0.6343 mL | 3.1714 mL | 6.3428 mL | |
| 10 mM | 0.3171 mL | 1.5857 mL | 3.1714 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
Ubiquitin thiolesterase UCHL1
USP30-IN-20
WCY-8-67
Huib32
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
