Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)   中文名称: 伏波酯

PKC ( EC50 = 11.7 nM ); NF-κB; SphK; protein kinase C (PKC)

为了检查 PKC 在 p38MAPK 磷酸化中的作用，使用 PKC 激活剂 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) (100 nM) 刺激细胞，该激活剂模拟 PKC 的天然激活剂 DAG 与 PKC 的 C1 区域的结合。在两种细胞类型中观察到PMA对p38MAPK的磷酸化，类似在αT3-1细胞中观察到的GnRH，即缓慢持续激活（30分钟时分别为3.2倍和3.6倍）。PKCs的不同定位可以解释 GnRH 和 PMA 激活的 PKCs 对 p38MAPK 磷酸化中发挥不同作用。一般来说，αT3-1 细胞中 GnRH 和 PMA 刺激 p38MAPK 磷酸化是由电压门控 Ca2+ 通道和 Ca2+ 激发介导的，而在正极化的LβT2 促进性腺激素细胞中，它仅由 Ca2+ 激励诱导[2]。 THP-1 细胞通过 PMA (200 ng/mL；1-5 天) 存在下脓液形成巨噬细胞样细胞 (THP-1巨噬细胞），从而导致形态变化和细胞表面表达增加为特征的巨噬细胞样表型 CD11 和 CD14[3]。 在单核细胞系 THP-1 中，根据死亡、增殖消失、乳胶珠的吞噬作用，PMA 导致比 VD3 更分泌的表型，以及 CD11b 和 CD14 的表达[5]。

诱发耳部水肿模型描述（PMA诱导法）
1. 致病机制：
该模型通过佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA）激活蛋白激酶C（PKC）信号通路，进而：
• 刺激磷脂酶A2（PLA2）活化
• 促进前列腺素等炎症介质释放
• 引起局部血管扩张和通透性增加
• 导致炎性细胞浸润和组织水肿

2. 标准造模方案：
实验动物：Swiss品系雌性小鼠
体重范围：25-30克
实验分组：需设立溶剂对照组
给药参数：
• 药物浓度：100 μg/mL PMA（溶于适当溶剂）
• 给药体积：20 μL
• 给药部位：单侧耳廓（左耳或右耳）
• 给药方式：局部均匀涂抹于耳廓内外表面
• 观察时程：通常给药后4-6小时达峰效应

3. 模型验证指标：
3.1 主要评判标准：
• 耳厚度差异：游标卡尺测量，造模耳较对照耳增厚≥50%
• 血管通透性：伊文思蓝渗出量显著增加（定量检测）
3.2 辅助评判指标（可选）：
• 组织学检查：炎性细胞浸润程度
• 炎性因子检测：TNF-α、IL-1β等促炎因子水平
• 髓过氧化物酶（MPO）活性测定

4. 注意事项：
• 需严格控制环境温度（22±2℃）和湿度
• 建议在固定时间段进行实验以减少昼夜节律影响
• 溶剂对照组应使用相同体积的PMA溶解溶剂
• 动物需提前适应环境至少3天
• 操作时避免机械刺激影响耳部状态

5. 模型特点：
• 造模成功率：＞90%
• 炎症峰值时间：给药后4-6小时
• 持续时间：24-48小时内可观察到明显炎症反应
• 适用研究：抗炎药物筛选、炎症机制研究等
注：具体实验参数可根据研究目的进行调整，但需在文献中明确说明修改依据。建议初次建立模型时进行预实验确定最佳条件。

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诱发足部水肿模型（PMA诱导法）研究方案
致病机制
PMA通过激活蛋白激酶C（PKC）信号通路，刺激磷脂酶A2（PLA2）活化，促进前列腺素等炎症介质释放，引起局部血管扩张和通透性增加，最终导致炎性细胞浸润和组织水肿。该机制与肾病综合征等病理状态下的水肿形成具有相似性。

实验动物选择
• 大鼠模型：Wistar品系雄性成年大鼠，体重200-220g
• 小鼠模型：Swiss白化病雄性小鼠，体重25-30g

造模方法
1. 给药参数：
o 药物浓度：2.5μg PMA溶于20μL溶剂
o 给药部位：单侧耳廓局部涂抹
o 给药方式：单剂量给药

2. 实验设计要点：
o 需设立溶剂对照组
o 其他抑制性产品应在处死前4小时处理

模型验证指标
主要评判标准
• 外观监测：左右耳质量差异显著增大（游标卡尺测量）
• 生化指标：刺激巨噬细胞产生超氧阴离子（定量检测）

辅助评判指标（可选）
• 血管通透性变化（伊文思蓝渗出法）
• 炎性因子水平检测（TNF-α、IL-1β等）
• 髓过氧化物酶（MPO）活性测定

模型特点
• 炎症峰值时间：给药后4-6小时
• 持续时间：24-48小时内可观察到明显炎症反应
• 适用研究：抗炎药物筛选、炎症机制研究等

注意事项
1. 严格控制环境温湿度（22±2℃）
2. 动物需提前适应环境至少3天
3. 操作时避免机械刺激影响耳部状态
4. 溶剂对照组应使用相同体积的PMA溶解溶剂
注：具体实验参数可根据研究目的调整，但需在文献中明确说明修改依据。建议初次建立模型时进行预实验确定最佳条件。

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Phorbol 12-myristate 13-acetate 可用于动物建模，构建湿疹样模型。 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一种 PKC 激动剂，可恢复 5-癸酸 (5-HD) 引起的损伤因此，mitoKATP 的激活通过 PKC 保护了 SOD 和 MDA 中的线粒体功能[4]。

研究人员先前表明，过表达Thy-1抑制和敲低Thy-1增强内皮细胞迁移。在这里，研究人员使用phorpol -12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA）作为Thy-1表达的诱诱剂来研究Thy-1上调的分子机制。数据显示，PMA处理后14-18小时和20-28小时内皮细胞中Thy-1 mRNA和蛋白水平分别升高。PMA处理32小时诱导Thy-1表达上调，抑制毛细血管样管形成和内皮细胞迁移。这些效应被Röttlerin （PKC-δ抑制剂）所消除，而Gö6976 （PKC-α/β抑制剂）则没有。此外，用Syk抑制剂Bay 61-3606或NF-κB抑制剂Bay 11-7082预处理可消除pma诱导的内皮细胞Thy-1上调和迁移抑制。通过斑马鱼模型，研究人员发现PMA通过PKC-δ介导的途径上调Thy-1并抑制血管生成。令人惊讶的是，他们发现短期（8-10小时）PMA治疗增强了内皮细胞的迁移。然而，在pma处理过表达thy -1的内皮细胞中没有观察到这种作用。综上所述，我们的研究结果表明，PMA最初增强了内皮细胞的迁移，随后激活PKC-δ/Syk/NF-κ b介导的通路，上调Thy-1，从而抑制内皮细胞的迁移。我们的结果也提示他们-1可能在终止血管生成中起作用。

单层培养的 αT3-1 和 LβT-2 细胞在 37°C、5% CO2 的加湿培养箱中的 DMEM 中生长。当向同一培养基中添加 0.1% FCS 时，血清饥饿持续 16 小时。然后，在指定的时间内，添加 GnRH 和 PMA。 αT3-1 细胞可以使用 jetPRIME 或 ExGen 500 暂时转染，而 LβT2 细胞只能使用 jetPRIME 转染试剂转染。在涉及显性失活 (DN) PKC 的实验中，将 1.5 μg p38α-GFP 或 3 μg DN-PKC 构建体与对照载体 pCDNA3 一起转染至 αT3-1 细胞（在 6 cm 平板中）。使用 4 μg p38α-GFP 与 9 μg DN-PKCs 构建体或对照载体 pCDNA3 组合进行 LβT2 细胞转染（在 10 cm 板中）。转染后约30小时，细胞血清饥饿（0.1% FCS）16小时。然后用 GnRH 或 PMA 刺激，用冰冷的 PBS 洗涤两次，用裂解缓冲液处理，然后进行一个冻融循环。收获细胞后，取上清液进行免疫沉淀实验，并在 4°C 下以 15,000 xg 离心 15 分钟。

实验动物：所有实验均使用体重在250至280克之间的雄性Wistar大鼠。将35只Wistar大鼠随机分为7组。(1) 假手术组（n = 21）大鼠注射0.9%生理盐水；(2) 缺血再灌注组（n = 21）大鼠在进行大脑中动脉闭塞（MCAO）前30分钟注射0.9%生理盐水；(3) 卡贝诺酮（CBX）组（n = 21）大鼠在进行MCAO前30分钟经侧脑室注射CBX（5 μg/mL×10 μL）。 （4）Sch-6783组（n = 21）大鼠在MCAO前30分钟接受侧脑室注射DZX（2 mM×30 μL）；（5）5-HD组（n = 21）大鼠接受侧脑室注射5-HD（100 mM×10 μL）；（6）DZX + Ro组（n = 15）大鼠接受侧脑室注射DZX，10分钟后，在MCAO前15分钟注射Ro-31-8425（400 μg/kg）；（7）5-HD+PMA组（n = 15）大鼠在注射5-HD和DZX后，接受腹腔注射PMA（200 μg/kg）。

吸收、分布和排泄
……小鼠皮肤定位实验……确定在皮肤涂抹氚标记的PMA后3-6小时，基底细胞上方的角质层被高度标记，皮脂腺和毛囊被中度标记。48小时后，皮脂腺和毛囊中仍有部分标记。……促进剂的半衰期接近24小时。

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代谢/代谢物
……TPA代谢的主要途径是两个酯基的水解，……在啮齿动物皮肤模型中，所有水解产物均缺乏促肿瘤活性，而促肿瘤活性是TPA的主要毒理学效应。代谢水解需要酯酶的活性，酯酶的活性因组织和物种而异。 TPA的两个酯基均可在小鼠皮肤和培养细胞中水解，生成单酯12-十四烷酰佛波醇和佛波醇-13-乙酸酯，以及完全水解产物佛波醇。在小鼠皮肤中，C-3位酮基的还原被确定为另一条代谢途径。值得注意的是，在微粒体孵育中未检测到其他代谢物，表明细胞色素450介导的氧化代谢不参与TPA的代谢。酯基水解也是在各种培养细胞中观察到的唯一代谢反应。TPA的水解与鸟氨酸脱羧酶（ODC）诱导活性的丧失平行。由于ODC是肿瘤促进的标志物，这些发现表明TPA的三种水解代谢物（两种单酯和佛波醇）均不具有促肿瘤活性。在不同动物物种的培养成纤维细胞中，TPA及其结构类似物佛波醇-12,13-二癸酸酯（PDD）的水解速率存在显著差异，这表明佛波醇二酯的水解代谢取决于细胞类型和二酯的化学结构……
……在小鼠背部皮肤中，对放射性标记的TPA的代谢进行了体内研究。除水解代谢物外，还检测到几种新的亲脂性代谢物，并鉴定为TPA在C-20羟基上与长链脂肪酸酯化而成。这些TPA-20酰化物似乎不具有促肿瘤活性，但在小鼠皮肤中部分水解回TPA……。
少数涉及人细胞的TPA体外代谢研究表明，许多培养的人类细胞系对TPA的代谢程度并不高……。

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生物半衰期
……在小鼠皮肤上应用氚标记的PMA后…………启动子的半衰期接近24小时。
计算得出末端半衰期为11±3.9小时（来自四名患者的五次输注）……。

毒性概述
识别和用途：TPA是一种无色粉末。它用于癌症研究，以研究肿瘤促进机制、筛选潜在的抑制剂以及作为肿瘤促进剂的阳性对照。它曾作为实验药物用于治疗白血病、淋巴瘤和其他类型的癌症。人体暴露和毒性：TPA是一种人血小板聚集剂。TPA曾用于复发性恶性肿瘤（特别是血液系统恶性肿瘤，包括重症白血病）患者的临床试验。该试验的目的是使用TPA作为诱导剂，在低剂量下诱导细胞凋亡和分化。TPA的应用基于现有的细胞抑制剂方案，共有35名患者在特定时间内接受了低剂量恒速输注。治疗后，部分患者出现严重副作用，例如短暂性疲劳、贫血、中性粒细胞减少症和血小板减少症、轻度呼吸困难、恶心、发热、寒战以及伴有晕厥和低血压的心血管反应，但仅有一例患者出现肿瘤反应，表现为肿瘤体积缩小。TPA 常规用于体外人细胞研究。动物研究：TPA 在小鼠皮肤生物测定、小鼠前胃以及体外细胞增殖试验中均被证实具有促肿瘤作用。然而，尚无证据表明 TPA 具有肿瘤起始特性。本研究在小鼠前胃上皮中探讨了肿瘤起始和促进作用。小鼠经胃内灌注单剂量 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA)（剂量为 50 mg/kg 体重）后，再以 10 mg/kg 体重的剂量重复给药（每周两次），持续 35 周。接受此治疗的50只小鼠中有45只在前胃出现肿瘤（乳头状瘤）。未治疗的对照组和仅接受TPA治疗的小鼠均未观察到前胃肿瘤，而仅接受DMBA治疗的小鼠中有10只在前胃观察到乳头状瘤。TPA未被证实具有遗传毒性。TPA在某些实验系统中显示出致染色体断裂、致突变和诱导姐妹染色单体交换的作用，但这些作用是由细胞在培养基和血清中抗氧化剂含量低的培养条件下，响应肿瘤促进剂而产生的次级产物（可能来自花生四烯酸）介导的。在大鼠胚胎全胚培养中，TPA暴露导致前脑缩小、生长迟缓和身体轴向旋转不全。培养后发现胚胎E-钙黏蛋白mRNA含量丰富。 TPA 常用于体外动物细胞研究。

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相互作用
为了确定启动和促进之间的时间间隔以及小鼠年龄对两阶段致癌作用的影响，将 20 μg 7,12-二甲基苯并[a]蒽（启动剂）单次涂抹于 5 组雌性 ICR/ha 瑞士小鼠背部皮肤，并将 2.5 μg PMA 每周涂抹 3 次。第 1、2、3、4 和 5 组小鼠在首次处理（启动剂）时的年龄（以周为单位）分别为 6、44、56、6 和 6 周；至二次处理（促进剂）的间隔时间（以周为单位）分别为 2、2、2、36 和 56 周；每组小鼠数量分别为 120、20、50、35 和 35 只；各组小鼠乳头状瘤发生率分别为100%、100%、56%、90%和57%；各组小鼠鳞状细胞癌发生率分别为50%、30%、6%、25%和11%。相应的对照组仅使用一种药物，且给药时间间隔各不相同。结果表明，无论启动和促进之间的时间间隔为2周、36周还是56周，均可诱发皮肤癌。在第3组和第5组中，癌症发生率显著降低，这两组小鼠分别在58周龄和62周龄时开始接受二次治疗。/摘自表格/
由于内源性蛋白酶可能在肿瘤促进剂的作用机制中发挥作用，因此测试了3种已知的蛋白酶抑制剂在两阶段致癌过程中的抑制作用。蛋白酶抑制剂……甲苯磺酰氯甲基酮、甲苯磺酰苯丙氨酸氯甲基酮和甲苯磺酰精氨酸甲酯……在小鼠耳部进行处理，处理前先用单剂量7,12-二甲基苯并蒽诱导，再用……PMA促进。抑制剂在促进剂处理后立即每周使用3次。蛋白酶抑制剂延缓了第一阶段肿瘤的出现，改变了肿瘤出现的总体速度模式，并导致肿瘤发生率有所下降。
低剂量的硫芥，即双（β-氯乙基）硫醚，完全抑制了小鼠皮肤的两阶段致癌过程。每组30只雌性ICR/ha小鼠接受对照处理或不同组合的诱导剂、促进剂和抑制剂测试化合物处理，持续400天。 7,12-二甲基苯并[a]蒽 (DMBA)，20 μg/0.1 mL 丙酮，仅使用一次，作为引发剂。PMA，作为促进剂，以 2.5 μg/0.1 mL 丙酮的浓度，每周使用 3 次。BCS，双(β-氯乙基)硫醚，以 20 μg/0.1 mL 丙酮的浓度，在引发剂使用 14 天后开始使用。DMBA + PMA + BCS（每周 2 次）在 1 只小鼠中诱发乳头状瘤，首发肿瘤出现在第 90 天；DMBA + PMA + BCS（每周 3 次）在 2 只小鼠中诱发乳头状瘤，肿瘤出现在第 209 天；仅 DMBA + PMA 在 27 只小鼠中诱发乳头状瘤，并在 16 只小鼠中诱发鳞状细胞癌，肿瘤出现在第 40 天；单独使用 PMA 在 4 只小鼠中诱发乳头状瘤，肿瘤出现在第 218 天。 DMBA + BCS（每周 2 次）在 385 天时使 1 只小鼠出现乳头状瘤；DMBA + BCS（每周 3 次）未使小鼠出现乳头状瘤；单独使用 BCS（每周 3 次）在 323 天时使 1 只小鼠出现乳头状瘤；DMBA + 丙酮仅在 219 天时使 1 只小鼠出现乳头状瘤；对照组（仅给予丙酮）或未接受任何测试化合物的组均未观察到乳头状瘤。/摘自表格/
本研究旨在确定 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA) 和二乙基二硫代氨基甲酸酯 (DDTC) 单独或联合使用对体外培养并在裸鼠体内形成异种移植瘤的人胰腺癌细胞的影响。将胰腺癌细胞分别用DDTC或TPA单独或联合处理，然后通过台盼蓝染色排除法测定活细胞数量，并通过碘化丙啶染色后在荧光显微镜下观察形态学特征来测定凋亡细胞数量。结果表明，DDTC或TPA单独处理均能以浓度依赖的方式抑制胰腺癌细胞的生长并促进其凋亡。在单层培养和三维（3D）培养的PANC-1细胞中，与单独使用DDTC或TPA相比，DDTC与TPA联合处理的效果更为显著。NF-κB依赖性报告基因表达分析和蛋白质印迹分析表明，联合治疗对PANC-1细胞的显著作用与DDTC诱导的核因子-κB（NF-κB）活化的抑制和Bcl-2表达的降低有关。此外，用DDTC + TPA治疗裸鼠可显著抑制PANC-1异种移植瘤的生长。本研究结果表明，TPA和DDTC联合用药可能是抑制胰腺癌生长的有效策略。
有关12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯（共16种）的更多相互作用（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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人体毒性值：小鼠静脉注射LD50为309 μg/kg。

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不良反应：生殖毒性——对生殖系统有毒性的化学物质，包括后代缺陷和对男性或女性生殖功能的损害。生殖毒性包括发育影响。请参阅《生殖毒性风险评估指南》。

[1]. Autocrine and paracrine roles of sphingosine-1-phosphate. TRENDS in Endocrinology and Metabolism. Volume 18, Issue 8, October 2007, Pages 300-307. https://doi.org/10.1016/j.tem.2007.07.005

[2]. MPTP-Induced Depletion in Basolateral Amygdala via Decrease of D2R Activation Suppresses GABAA Receptors Expression and LTD Induction Leading to Anxiety-Like Behaviors. Front Mol Neurosci. 2017 Aug 7;10:247.

[3]. Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Leukoc Biol. 1996;59(4):555-561.

[4]. Differential roles of PKC isoforms (PKCs) and Ca2+ in GnRH and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulation of p38MAPK phosphorylation in immortalized gonadotrope cells. Mol Cell Endocrinol. 2017 Jan 5;439:141-154.

[5]. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 2018;13(3):e0193601.

[6]. Mechanism of Mitochondrial Connexin43's Protection of the Neurovascular Unit under Acute Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury. Int J Mol Sci. 2016 May 5;17(5). pii: E679.

[7]. PMA inhibits endothelial cell migration through activating the PKC-δ/Syk/NF-κB-mediated up-regulation of Thy-1. Sci Rep. 2018 Nov 2;8(1):16247.

12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯呈白色晶体。(NTP, 1992)
佛波醇13-乙酸酯12-肉豆蔻酸酯是一种佛波醇酯，其结构为佛波醇环丙烷连接处（13位）和相邻碳原子（12位）上的羟基分别转化为相应的乙酸酯和肉豆蔻酸酯。它是巴豆（Croton tiglium）种子油的主要活性成分。它曾被用作啮齿动物皮肤癌的促肿瘤剂，并与恶性细胞增殖增加有关。然而，其功能存在争议，因为在几种癌细胞类型中也观察到了细胞增殖减少的现象。它具有多种功能，包括作为蛋白激酶C激动剂、抗肿瘤剂、活性氧生成剂、植物代谢物、促有丝分裂剂、致癌剂和细胞凋亡诱导剂。它是一种乙酸酯、十四烷酸酯、二酯、叔α-羟基酮和佛波醇酯。
佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯二酯是中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的诱导剂。
据报道，佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯存在于鸢尾（Iris tectorum）、细叶颤藻（Phormidium tenue）和其他有相关数据的生物体中。
十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）是一种具有潜在抗肿瘤作用的佛波醇酯。TPA可诱导造血细胞系（包括白血病细胞）的成熟和分化。该物质可能诱导基因表达和蛋白激酶C（PKC）活性。除潜在的抗肿瘤作用外，TPA还可能具有促肿瘤活性。 (NCI04)
佛波醇酯是从巴豆油中分离得到的多环化合物，其中相邻碳原子上的两个羟基与脂肪酸酯化。这些衍生物中最常见的是佛波醇肉豆蔻酰乙酸酯 (PMA)。它们是强效的共致癌物或肿瘤促进剂，是二酰甘油类似物，可不可逆地激活蛋白激酶C。
巴豆油中发现的一种佛波醇酯具有非常有效的肿瘤促进活性。它能刺激DNA和RNA的合成。

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作用机制
肿瘤促进剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA) 在多种肿瘤细胞的细胞周期调控中发挥着不同的作用。TPA与乳腺癌细胞周期之间的机制尚未完全阐明。因此，我们研究了TPA对乳腺癌细胞周期调控的机制。我们的结果表明，TPA以剂量依赖的方式增加野生型p53的MCF-7细胞和突变型p53的MDA-MB-231细胞中p21的表达水平。相反，TPA降低MCF-7细胞中p53的表达，但对MDA-MB-231细胞无影响。接下来，我们研究了TPA对p21和p53表达的调控机制。结果表明，TPA诱导的p21上调和p53下调可被MEK1/2抑制剂UO126逆转，但不能被JNK抑制剂SP600125或p38抑制剂SB203580逆转，尽管TPA增加了MCF-7细胞中ERK和JNK的磷酸化水平。此外，UO126处理也能恢复TPA诱导的G2/M期阻滞。为了验证p21通过MEK/ERK通路表达，我们用组成型活性（CA）-MEK腺病毒转染细胞。结果表明，CA-MEK过表达显著上调了p21的表达。综上所述，我们认为TPA通过MEK/ERK依赖性通路相互调节p21和p53的表达水平。在乳腺癌细胞中，TPA诱导的p21上调是通过p53非依赖性机制介导的。

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治疗用途
/临床试验/ ClinicalTrials.gov是一个注册库和结果数据库，收录了全球范围内由公共和私人资助的人体临床研究。该网站由美国国家医学图书馆（NLM）和美国国立卫生研究院（NIH）维护。ClinicalTrials.gov上的每条记录都提供了研究方案的概要信息，包括以下内容：疾病或病症；干预措施（例如，正在研究的医疗产品、行为或程序）；研究标题、描述和设计；参与要求（资格标准）；研究开展地点；研究地点的联系方式；以及其他健康网站相关信息的链接，例如美国国家医学图书馆 (NLM) 的 MedlinePlus（用于患者健康信息）和 PubMed（用于医学领域学术文章的引文和摘要）。数据库中包含 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯。佛波醇酯可激活蛋白激酶 C 并调节多种下游细胞信号通路。12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA) 是一种佛波醇酯，低浓度即可诱导多种细胞系分化或凋亡。一项针对复发或难治性恶性肿瘤患者的 TPA I 期剂量递增试验已开展。起始剂量为0.063 mg/m²，大多数患者在第1-5天和第8-12天接受静脉输注TPA治疗，随后休息2周后再次接受治疗。共35例患者接受了治疗。治疗后采用生物测定法监测血液中TPA样活性水平。严重不良事件包括个别患者出现肉眼血尿、癫痫大发作、晕厥和低血压。许多患者在输注后不久出现短暂疲乏、轻度呼吸困难、发热、寒战和肌肉酸痛。剂量限制性毒性包括0.188 mg/m²剂量下的晕厥和低血压。仅1例患者出现肿瘤反应。这些研究确定，当按照此给药方案使用TPA时，0.125 mg/m²是最大耐受剂量。我们研究了PKC和Ca2+在促性腺激素释放激素（GnRH）刺激的促性腺激素细胞系αT3-1和LβT2中p38MAPK磷酸化中的作用。GnRH分别诱导αT3-1和LβT2细胞中p38MAPK磷酸化的缓慢和快速增加，而PMA则引起缓慢反应。使用PKC显性负性抑制剂和活化蛋白C激酶受体（RACK）肽抑制剂，揭示了PKCα、PKCβII、PKCδ和PKCε在p38MAPK磷酸化中以配体和细胞环境依赖的方式发挥不同的作用。 GnRH 和 PMA 激活的 PKC 在 p38MAPK 磷酸化中发挥不同作用这一看似矛盾的发现，可能源于 PKC 定位的差异。在 αT3-1 细胞中，基础状态、GnRH 和 PMA 刺激引起的 p38MAPK 磷酸化均由电压门控 Ca2+ 通道介导的 Ca2+ 内流和 Ca2+ 动员所致；而在分化的 LβT2 促性腺激素细胞中，则仅由 Ca2+ 动员所致。p38MAPK 位于细胞膜上，并被 GnRH 诱导（约 5 分钟）转移至细胞核。因此，我们已鉴定出参与 GnRH 刺激的 p38MAPK 磷酸化的 PKC 和 Ca2+ 池。[4]

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用佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯 (PMA) 分化的 THP-1 细胞被广泛用作研究人巨噬细胞功能和生物学的模型。然而，分化所用的条件，特别是PMA的浓度和处理时间，差异很大。本文比较了几种分化条件，并比较了THP-1巨噬细胞与兼性胞内病原体鼠伤寒沙门氏菌相互作用的能力。结果表明，在高浓度PMA下分化的THP-1巨噬细胞在感染后迅速死亡，而在低浓度PMA下分化的THP-1巨噬细胞则存活下来，并能像原代人巨噬细胞一样控制胞内细菌。[5]

C36H56O8

616.8251

616.397

C, 70.10; H, 9.15; O, 20.75

16561-29-8

27924

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

698.1±55.0 °C at 760 mmHg

162 °F (NTP, 1992)
50-70 °C (melting pt-freezing pt)

208.1±25.0 °C

0.0±5.0 mmHg at 25°C

1.553

7.71

130.36

3

8

17

44

1150

8

O(C(C([H])([H])[H])=O)[C@@]12[C@@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@@]3([C@]4([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([C@]4(C([H])([H])C(C([H])([H])O[H])=C([H])[C@@]3([H])[C@]1([H])C2(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])O[H])=O)O[H])OC(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H])=O

PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N

InChI=1S/C36H56O8/c1-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-18-29(39)43-32-24(3)35(42)27(30-33(5,6)36(30,32)44-25(4)38)20-26(22-37)21-34(41)28(35)19-23(2)31(34)40/h19-20,24,27-28,30,32,37,41-42H,7-18,21-22H2,1-6H3/t24-,27+,28-,30-,32-,34-,35-,36-/m1/s1

[(1S,2S,6R,10S,11R,13S,14R,15R)-13-acetyloxy-1,6-dihydroxy-8-(hydroxymethyl)-4,12,12,15-tetramethyl-5-oxo-14-tetracyclo[8.5.0.02,6.011,13]pentadeca-3,8-dienyl] tetradecanoate

TPA; NSC262244; PD616; PMA; Phorbol myristate acetate; NSC 262244; Phorbol 12-myristate 13-acetate; 16561-29-8; phorbol-12-myristate-13-acetate; 12-O-Tetradecanoylphorbol-13-acetate; 12-O-Tetradecanoylphorbol 13-acetate; Tetradecanoylphorbol acetate; Phorbol ester; Factor A1; NSC-262244; PD-616; RP-323; PD 616; RP 323; PMA; RP323

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~162.1 mM)
Ethanol: ~100 mg/mL (~162.1 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.05 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液加入400 μL PEG300 中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.05 mM) in 10% EtOH + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 25.0mg/mL澄清EtOH储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 7 中的溶解度: 5%DMSO + Corn oil: 5.0mg/ml (8.11mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。