Siponimod fumarate (BAF312)   中文名称: 辛波莫德富马酸盐

S1PR1 ( EC50 = 0.39 nM ); S1PR5 ( EC50 = 0.98 nM ); S1PR4 ( EC50 = 750 nM ); S1PR3 ( EC50 > 1000 nM ); S1PR2 ( EC50 > 10000 nM )
Sphingosine-1-phosphate (S1P) receptors, specifically S1P1 and S1P5. Siponimod fumarate is a potent and selective S1P receptor modulator. It is selective for S1P1 (EC50 = 0.39 nM) and S1P5 (EC50 = 0.98 nM) receptors over S1P2 (EC50 > 10000 nM), S1P3 (EC50 > 1000 nM), and S1P4 (EC50 = 750 nM).

西尼莫德（Siponimod），又名 BAF312，是一种强效且选择性的 S1P 受体激动剂，对 S1P2、S1P3 和 S1P4 受体的选择性超过 1000 倍。其对 S1P1 和 S1P5 受体的 EC50 值分别为 0.39 nM 和 0.98 nM。BAF312（1 μM，1 小时）可促进 91% 的 S1P1 受体显著内化。
富马酸西尼莫德是 S1P1 和 S1P5 受体的强效激动剂，EC50 值分别为 0.39 nM 和 0.98 nM。它对 S1P2、S1P3 和 S1P4 受体的选择性超过 1000 倍。该化合物可调节 S1P 受体信号传导，从而产生免疫调节和潜在的神经保护作用。西尼莫德用于治疗多发性硬化症。

BAF312 通过内化 S1P1 受体并使其对淋巴结输出信号免疫，有效抑制大鼠的脑脊髓炎 (EAE)。在小鼠中，以 0.3 mg/kg 的剂量进行预防或治疗给药时，BAF312 可显著降低临床评分。

细胞匀浆后，于4°C下以26900 × g离心30分钟。将膜重悬于含20 mM HEPES（pH 7.4）、100 mM NaCl、10 mM MgCl₂、1 mM EDTA和0.1%脱脂BSA的缓冲液中，蛋白浓度为2-3 mg/mL。将膜（75 mg蛋白/mL，溶于含50 mM HEPES、100 mM NaCl、10 mM MgCl₂、20 μg/mL皂苷和0.1%脱脂BSA的缓冲液中；pH 7.4），加入5 mg/mL的麦胚凝集素包被的闪烁邻近分析微珠，并加入10 μM GDP孵育10-15分钟，用于GTPγ[35S]结合实验。加入 200 pM GTPγ[35S] 以启动 GTPγ[35S] 结合反应。室温孵育 120 分钟后，将反应板以 300 × g 离心 10 分钟，然后进行计数。
体外受体结合试验测定富马酸西尼莫德与 S1P 受体的亲和力，采用放射性配体结合技术。将表达 S1P1、S1P2、S1P3、S1P4 或 S1P5 受体的细胞膜与放射性标记的 S1P 和递增浓度的西尼莫德孵育。通过过滤分离结合的配体和游离的配体，并测量放射性。EC50 值由浓度-反应曲线确定。

利用流式细胞术分析CHO细胞，发现拮抗剂介导了S1P1受体的内吞作用。将激动剂加入标准培养基中，并将Myc标签的hS1P1细胞在37°C下孵育1小时。然后用PBS洗涤细胞。取一份细胞悬液（不含激动剂）在37°C下培养3小时，另一份细胞悬液置于冰上培养3小时（或12小时）。首先，将细胞与4 μg/mL的小鼠抗C-myc IgG1单克隆抗体或同型对照小鼠IgG1抗体在4°C下孵育60分钟。然后，将细胞与1 μg/mL的Alexa488标记的山羊抗小鼠二抗（Alexa488是一种荧光染料）孵育。每个样本使用 10,000 个活细胞，并通过流式细胞术进行细胞计数。
体外细胞分析中，富马酸西尼莫德的活性测定包括用该化合物处理表达 S1P 受体的细胞，并检测 S1P 受体介导的信号通路，例如 GTPγS 结合、钙动员或 ERK 磷酸化。西尼莫德激活 S1P1 和 S1P5 受体的 EC50 值分别为 0.39 nM 和 0.98 nM。这些测定证实了该化合物的选择性。

悬浮于 1% 羧甲基纤维素水溶液中；剂量分别为 0.03、0.3 和 3 mg/kg；口服给药于脑脊髓炎 (EAE) 模型大鼠。
BAF312 在大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 模型中进行了测试。在人房颤肌细胞中进行了 G 蛋白偶联内向整流钾 (GIRK) 通道的电生理记录。一项 I 期多剂量试验研究了 BAF312 在 48 名健康受试者中的药代动力学、药效学和安全性。[1]

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富马酸西尼莫德的体内动物研究通常涉及对多发性硬化症或其他自身免疫性疾病的啮齿动物模型进行给药。该化合物口服给药，并通过测量疾病严重程度、中枢神经系统免疫细胞群和神经炎症来评估疗效。西尼莫德已在多种临床前模型中进行研究，并已进入多发性硬化症的临床应用。

吸收、分布和排泄
口服速释西尼莫德后，达到最大血浆浓度 (Cmax) 的时间 (Tmax) 约为 4 小时（范围 3-8 小时）。西尼莫德吸收率高 (≥70%)。西尼莫德的绝对口服生物利用度约为 84%。每日单次服用西尼莫德后，约 6 天达到稳态血浆浓度。食物对吸收的影响 进食会延迟西尼莫德的吸收（中位 Tmax 增加约 2-3 小时）。进食对西尼莫德的全身暴露量（Cmax 和 AUC）无影响。因此，食物摄入不影响西尼莫德的给药。西尼莫德主要经代谢，随后通过胆汁/粪便从体循环中清除。尿液中检测不到未代谢的西尼莫德。西尼莫德分布于全身，平均分布容积为 124 升。在人体中，西尼莫德的血浆浓度为 68%。动物研究表明，西尼莫德易于穿过血脑屏障。在多发性硬化症患者中，估计的表观遗传系统清除率为 3.11 L/h。代谢物：西尼莫德主要由 CYP2C9 酶代谢 (79.3%)，其次是 CYP3A4 酶 (18.5%)。主要代谢物 M3 和 M17 的药理活性预计不会影响西尼莫德在人体中的临床疗效和安全性。生物半衰期：表观遗传消除半衰期约为 30 小时。
富马酸西尼莫德的药代动力学研究表明，该化合物具有口服生物利用度。它是一种强效且选择性的 S1P 受体调节剂，对 S1P1 和 S1P5 的 EC50 值分别为 0.39 nM 和 0.98 nM。该化合物对S1P2、S1P3和S1P4受体的选择性超过1000倍。西尼莫德在临床上用于治疗多发性硬化症。

肝毒性
在针对多发性硬化症患者的西尼莫德大型对照试验中，血清ALT水平升高较为常见，通常发生在治疗的前3个月内。这些升高通常较轻且无症状，ALT水平通常在继续治疗或停药后3个月内恢复至基线水平。西尼莫德治疗组中有6%至8%的患者报告转氨酶升高超过正常值上限（ULN）的三倍，而安慰剂组的这一比例不到2%。在这些上市前临床试验中，未发生急性肝炎或具有临床意义的肝损伤病例，但1%的受试者因肝功能检查异常而停止治疗。虽然西尼莫德与淋巴细胞减少症相关，且长期治疗与单纯疱疹病毒和带状疱疹病毒感染复发的风险相关，但尚未发现其与乙型肝炎病毒复发相关，尽管曾有芬戈莫德治疗后出现乙型肝炎病毒复发的病例报告。因此，治疗期间出现轻度至中度的短暂性血清酶升高并不罕见，但尽管临床经验有限，尚未有因西尼莫德引起具有临床意义的肝损伤伴黄疸的报道。
概率评分：E（疑似但未确诊为具有临床意义的肝损伤的原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
虽然西尼莫德在母体血浆中的结合率很高，不太可能大量进入母乳，但仍可能对哺乳婴儿造成毒性。由于目前尚无关于哺乳期使用西尼莫德的已发表经验，专家意见通常建议在哺乳期避免使用与其密切相关的药物芬戈莫德，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。然而，制造商的说明书并未建议哺乳期妇女禁用西尼莫德。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◈ 什么是西尼莫德？
西尼莫德（Mayzent®）是一种获准用于治疗复发缓解型多发性硬化症 (MS) 的药物，包括临床孤立综合征、复发缓解型多发性硬化症和活动性继发进展型多发性硬化症。有关多发性硬化症的信息，请参阅 MotherToBaby 的病例资料：https://mothertobaby.org/fact-sheets/multiple-sclerosis/。有时，当人们发现自己怀孕时，可能会考虑改变服用药物的方式，甚至完全停止服用。但是，在改变服用此药的方式之前，务必咨询您的医疗保健提供者。您的医疗保健提供者可以与您讨论治疗您病情的益处以及在怀孕期间不治疗的风险。
◈ 我正在服用西尼莫德，但我想在怀孕前停药。这种药物会在我体内停留多久？
每个人清除药物的速度都不一样。对于健康的成年人来说，平均需要大约 10 天才能将大部分西尼莫德从体内清除。
◈ 我正在服用西尼莫德。它会影响我怀孕吗？
目前尚不清楚西尼莫德是否会影响怀孕。
◈ 服用西尼莫德会增加流产的风险吗？
流产很常见，任何妊娠都可能发生，原因有很多。根据产品标签，动物研究报告称，服用西尼莫德会增加流产的风险。目前尚无针对孕妇的人体研究来确定西尼莫德是否会增加流产的风险。
◈ 服用西尼莫德会增加胎儿畸形的风险吗？
每次妊娠都有3-5%的出生缺陷风险，称为背景风险。根据产品标签，动物研究报告称服用西尼莫德会增加出生缺陷的风险。目前尚无针对孕妇的人体研究来确定西尼莫德是否会在背景风险的基础上进一步增加出生缺陷的风险。
◈ 孕期服用西尼莫德会引起其他妊娠相关问题吗？
根据产品标签，动物研究报告称服用西尼莫德可能会导致新生儿出生体重过低。目前尚无针对孕妇的人体研究来确定西尼莫德是否会增加妊娠相关问题的风险，例如早产（妊娠37周前分娩）或低出生体重（出生体重低于5磅8盎司[2500克]）。
◈ 孕期服用西尼莫德会影响孩子未来的行为或学习能力吗？
目前尚无研究确定西尼莫德是否会导致儿童出现行为或学习问题。
◈ 服用西尼莫德期间哺乳：
目前尚无关于哺乳期间服用西尼莫德的研究。尚不清楚西尼莫德是否会进入母乳，以及对母乳喂养的婴儿有何影响。如果您在哺乳期间服用西尼莫德，并怀疑您的婴儿出现任何症状，请联系您孩子的医疗保健提供者。请务必就所有与母乳喂养相关的问题咨询您的医疗保健提供者。
◈ 男性服用西尼莫德是否会影响生育能力（使伴侣怀孕的能力）或增加出生缺陷的风险？
目前尚无研究探讨西尼莫德是否会影响男性生育能力或增加出生缺陷的风险。通常，父亲或精子捐赠者接触西尼莫德不太可能增加怀孕的风险。更多信息，请参阅 MotherToBaby 网站上的“父亲接触西尼莫德”情况说明书：https://mothertobaby.org/fact-sheets/paternal-exposures-pregnancy/。

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蛋白结合
在健康患者以及肝肾功能受损的患者中，西尼莫德的蛋白结合率大于 99.9%。由于西尼莫德与血浆蛋白的结合率很高，血液透析不太可能改变西尼莫德的总浓度和游离浓度，因此预计无需调整剂量。
富马酸西尼莫德的临床前毒性研究已证实其具有临床应用安全性。该化合物已获准用于治疗多发性硬化症。常见不良反应可能包括心动过缓、高血压、肝酶升高和黄斑水肿。由于该化合物会影响心率和免疫功能，因此应在医生的指导下使用。

[1]. Br J Pharmacol . 2012 Nov;167(5):1035-47.

[2]. J Immunol . 2013 Apr 1;190(7):3533-40.

药效学
免疫系统效应：西尼莫德在首次给药后6小时内可导致外周血淋巴细胞计数呈剂量依赖性下降，这是由于淋巴细胞释放不足，导致淋巴细胞在淋巴组织中可逆性积聚。这可以减轻多发性硬化症相关的炎症。90%的患者在停药后10天内淋巴细胞计数恢复正常。对心率和心律的影响：西尼莫德在治疗开始时会导致心率和房室传导短暂下降。心率下降最显著发生在给药后6小时内。西尼莫德治疗不会改变自主神经心脏反应，包括心率的昼夜节律变化和运动反应。对肺功能的影响：接受西尼莫德治疗的患者在1秒内绝对用力呼气容积（FEV1）呈剂量依赖性下降，且下降幅度高于接受安慰剂的患者。
富马酸西尼莫德（BAF312）是一种强效、选择性高且口服生物利用度高的鞘氨醇-1-磷酸（S1P）受体调节剂，用于治疗多发性硬化症。它对S1P1（EC50 = 0.39 nM）和S1P5（EC50 = 0.98 nM）受体具有选择性，对S1P2、S1P3和S1P4受体的选择性超过1000倍。该化合物可调节S1P受体信号传导，影响淋巴细胞迁移并发挥神经保护作用。

C62H74F6N4O10

632.68

1148.53

C, 64.80; H, 6.49; F, 9.92; N, 4.88; O, 13.92

1234627-85-0

Siponimod; 1230487-00-9

44599207

Solid powder

111-112

4.8

199Ų

1

8

9

37

777

0

FC(C1C=C(CO/N=C(/C)\C2C=CC(=C(C=2)CC)CN2CC(C(=O)O)C2)C=CC=1C1CCCCC1)(F)F.FC(C1C=C(CO/N=C(/C)\C2C=CC(=C(C=2)CC)CN2CC(C(=O)O)C2)C=CC=1C1CCCCC1)(F)F.OC(/C=C/C(=O)O)=O

JNLIKIBISICTMS-PEJBKAKVSA-N

InChI=1S/2C29H35F3N2O3.C4H4O4/c2*1-3-21-14-23(10-11-24(21)15-34-16-25(17-34)28(35)36)19(2)33-37-18-20-9-12-26(22-7-5-4-6-8-22)27(13-20)29(30,31)32;5-3(6)1-2-4(7)8/h2*9-14,22,25H,3-8,15-18H2,1-2H3,(H,35,36);1-2H,(H,5,6)(H,7,8)/b2*33-19+;2-1+

(E)-but-2-enedioic acid;1-[[4-[(E)-N-[[4-cyclohexyl-3-(trifluoromethyl)phenyl]methoxy]-C-methylcarbonimidoyl]-2-ethylphenyl]methyl]azetidine-3-carboxylic acid

NVP-BAF-312; NVP-BAF 312; NVP-BAF312-NX; NVP-BAF312; NVP-BAF312-AEA; Siponimod fumarate; Siponimod; Mayzent; WHO 9491; WHO-9491; WHO9491; BAF-312; BAF 312; Siponimod hemifumarate; NVP-BAF312-AEA; Siponimod hemifumaric acid; Z7G02XZ0M6; Siponimod fumarate (USAN); Siponimod fumarate [USAN];BAF312

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。