S1PR1 ( EC50 = 0.39 nM ); S1PR5 ( EC50 = 0.98 nM ); S1PR4 ( EC50 = 750 nM ); S1PR3 ( EC50 > 1000 nM ); S1PR2 ( EC50 > 10000 nM )

体外活性：BAF312 (Siponimod) 是一种有效的选择性 S1P 受体激动剂，对 S1P1 和 S1P5 受体的 EC50 分别为 0.39 nM 和 0.98 nM，对 S1P2、S1P3 和 S1P4 受体的选择性超过 1000 倍。 BAF312（1 小时，1 μM）可显着促进 S1P1 受体内化 91%。激酶测定：将细胞匀浆并在 4°C 下以 26900 × g 离心 30 分钟。将膜以 2-3 mg 蛋白质/mL 重悬于 20 mM HEPES (pH 7.4)、100 mM NaCl、10 mM MgCl2、1 mM EDTA 和 0.1% 脱脂 BSA 中。使用膜进行 GTPγ[35S] 结合测定（75 mg 蛋白/mL，溶于 50 mM HEPES、100 mM NaCl、10 mM MgCl2、20 μg/mL 皂苷和 0.1% 脱脂 BSA (pH 7.4)，5 mg/mL mL 与小麦胚芽凝集素包被的闪烁邻近分析珠，和 10 μM GDP 10-15 分钟。通过添加 200 pM GTPγ[35S] 开始 GTPγ[35S] 结合反应。在室温下 120 分钟后细胞测定：通过流式细胞术分析 CHO 细胞中激动剂介导的 S1P1 受体内化 Myc-tag hS1P1 细胞与激动剂在 37°C 下孵育 1 小时标准培养基，然后用 PBS 洗涤。将等分试样在冰上保存 3 小时，而另一等分试样在 37°C 的培养基（无激动剂）中放置 3（或 12）小时。然后将细胞与4 μg/mL 单克隆小鼠抗 C-myc IgG1 抗体或与同型对照小鼠 IgG1 一起在 4°C 下孵育 60 分钟，然后与 1 μg/mL Alexa488 标记的山羊抗小鼠二抗缀合物一起孵育。每个样品使用 10000 个活细胞对细胞进行流式细胞术测量。

BAF312 通过内化 S1P1 受体，使它们对淋巴结的出口信号不敏感，有效抑制大鼠脑脊髓炎 (EAE)。当以 0.3 mg/kg 剂量对小鼠进行预防或治疗时，BAF312 显着降低临床评分。[1]
BAF312通过内化S1P（1）受体有效地抑制了大鼠的EAE，使其对淋巴结的出口信号不敏感。在健康志愿者中，BAF312在4-6小时内导致CD4（+）T细胞、T（幼稚）、T（中央记忆）和B细胞优先减少。停止治疗后一周内，细胞计数恢复正常范围，符合BAF312的消除半衰期。尽管保留了S1P（3）受体（与小鼠心动过缓有关），BAF312在人类中诱导了快速、短暂（仅第1天）的心动过缓。BAF312介导的人心房肌细胞GIRK通道的激活可以充分解释心动过缓。[1]

将细胞匀浆后，在 4°C、26900 × g 下离心 30 分钟。在 20 mM HEPES (pH 7.4)、100 mM NaCl、10 mM MgCl2、1 mM EDTA 和 0.1% 脱脂 BSA 中，膜以 2-3 mg/mL 的蛋白质浓度重悬。膜（75 mg 蛋白质/mL，溶于 50 mM HEPES、100 mM NaCl、10 mM MgCl2、20 μg/mL 皂苷和 0.1% 脱脂 BSA；pH 7.4），5 mg/mL，带有麦芽凝集素涂层闪烁GTPγ[35S] 结合技术中使用邻近分析珠和 10 μM GDP 10-15 分钟。添加 200 pM GTPγ[35S] 以启动 GTPγ[35S] 结合反应。在室温下放置 120 分钟后，将板进行 10 分钟 300 × g 离心，然后进行计数。

使用流式细胞术分析 CHO 细胞揭示了拮抗剂介导的 S1P1 受体内化。将激动剂添加到标准培养基中，并将 Myc-tag hS1P1 细胞在 37°C 下孵育 1 小时。然后用 PBS 洗涤细胞。将一份等分试样在 37°C 的培养基中（不含激动剂）放置三小时，另一份则在冰上保存三小时（或十二小时）。首先，将细胞与 4 μg/mL 单克隆小鼠抗 C-myc IgG1 抗体或同种型对照小鼠 IgG1 一起在 4°C 下孵育 60 分钟。接下来，将它们与 1 μg/mL 的山羊抗小鼠二级缀合物一起孵育，该缀合物已用 Alexa488（一种荧光染料）标记。每个样品使用 10,000 个活细胞，使用流式细胞术测量细胞。

BAF312 在大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 模型中进行了测试。在人房颤肌细胞中进行了 G 蛋白偶联内向整流钾 (GIRK) 通道的电生理记录。一项 I 期多剂量试验研究了 BAF312 在 48 名健康受试者中的药代动力学、药效学和安全性。[1]

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悬浮于 1% 羧甲基纤维素水溶液中；0.03、0.3 和 3 mg/kg；口服

border-color: rgb(238, 238, 238);">脑脊髓炎 (EAE) 模型大鼠

吸收、分布和排泄
口服速释西尼莫德后，达到最大血浆浓度 (Cmax) 的时间 (Tmax) 约为 4 小时（范围 3-8 小时）。西尼莫德吸收率很高（≥70%）。西尼莫德的绝对口服生物利用度约为 84%。每日单次服用西尼莫德约 6 天后达到稳态血药浓度。食物对吸收的影响 进食会导致西尼莫德吸收延迟（Tmax 中位数增加约 2-3 小时）。进食对西尼莫德的全身暴露量（Cmax 和 AUC）无影响。因此，服用西尼莫德不受进食影响。
西尼莫德主要通过代谢，随后经胆汁/粪便排泄而从体循环中清除。尿液中未检测到未代谢的西尼莫德。
西尼莫德分布于全身组织，平均分布容积为124升。在人体中，血浆中西尼莫德的浓度为68%。动物研究表明，西尼莫德易于穿过血脑屏障。
在多发性硬化症患者中，表观系统清除率估计为3.11升/小时。

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代谢/代谢物
西尼莫德主要通过CYP2C9酶（79.3%）代谢，其次通过CYP3A4酶（18.5%）代谢。主要代谢物 M3 和 M17 的药理活性预计不会影响西尼莫德在人体内的临床疗效和安全性。

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生物半衰期
表观消除半衰期约为 30 小时。

肝毒性
在针对多发性硬化症患者的西尼莫德大型对照试验中，血清ALT升高较为常见，通常出现在治疗的前3个月。这些升高通常较轻且无症状，即使继续治疗或停药后3个月内，ALT水平也常常恢复至基线值。6%至8%的西尼莫德治疗组患者报告转氨酶升高超过正常值上限（ULN）3倍，而安慰剂组患者的这一比例低于2%。在这些上市前临床试验中，未出现急性肝炎或临床上明显的肝损伤病例，但1%的受试者因肝功能检查异常而停止治疗。虽然西尼莫德与淋巴细胞减少症相关，且长期治疗与单纯疱疹和带状疱疹病毒感染复发的风险相关，但尚未发现其与乙型肝炎病毒复发病例相关，尽管芬戈莫德曾报道过一例乙型肝炎病毒复发病例。因此，治疗期间出现轻度至中度短暂的血清酶升高并不罕见，但尚未有因西尼莫德引起临床上明显的肝损伤伴黄疸的报道，尽管其临床应用经验有限。
可能性评分：E（疑似但未证实是临床上明显的肝损伤的原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
虽然西尼莫德在母体血浆中的结合率很高，不太可能大量进入母乳，但它对母乳喂养的婴儿仍有潜在毒性。由于目前尚无关于哺乳期使用西尼莫德的已发表经验，专家意见通常建议在哺乳期避免使用与其密切相关的药物芬戈莫德，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。然而，制造商的标签并未建议哺乳期妇女禁用西尼莫德。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◈ 什么是西尼莫德？
西尼莫德（Mayzent®）是一种获准用于治疗复发型多发性硬化症 (MS) 的药物，包括临床孤立综合征、复发缓解型多发性硬化症和活动性继发进展型多发性硬化症。有关多发性硬化症的信息，请参阅 MotherToBaby 的情况说明书：https://mothertobaby.org/fact-sheets/multiple-sclerosis/。有时，当人们发现自己怀孕时，她们会考虑改变服药方式，甚至完全停止服药。但是，在改变服用此药的方式之前，务必与您的医疗保健提供者沟通。您的医疗保健提供者可以与您讨论治疗您病情的益处以及怀孕期间未治疗疾病的风险。
◈ 我正在服用西尼莫德，但我想在怀孕前停止服用。这种药物会在我体内停留多久？
每个人清除药物的速度都不同。对于健康成年人来说，平均需要 10 天左右才能将大部分西尼莫德从体内清除。
◈ 我正在服用西尼莫德。它会使我更难怀孕吗？
目前尚不清楚西尼莫德是否会使怀孕更难。
◈ 服用西尼莫德会增加流产的风险吗？
流产很常见，任何妊娠都可能发生，原因有很多。根据产品标签，动物实验研究报告称，服用西尼莫德会增加妊娠丢失的风险。目前尚无针对人类孕妇的研究来确定西尼莫德是否会增加流产的风险。
◈ 服用西尼莫德会增加胎儿出生缺陷的风险吗？
每次怀孕都有3-5%的胎儿出生缺陷风险，这被称为背景风险。根据产品标签，动物实验研究报告称，服用西尼莫德会增加胎儿出生缺陷的风险。目前尚无针对人类孕妇的研究来确定西尼莫德是否会在背景风险的基础上进一步增加胎儿出生缺陷的风险。
◈ 怀孕期间服用西尼莫德会引起其他妊娠相关问题吗？
根据产品标签，动物实验研究报告称，服用西尼莫德可能会导致新生儿体重过低。目前尚无针对人类孕妇的研究，以确定西尼莫德是否会增加妊娠相关问题的风险，例如早产（妊娠37周前分娩）或低出生体重（出生时体重低于5磅8盎司[2500克]）。
◈ 孕期服用西尼莫德是否会影响孩子未来的行为或学习能力？
目前尚无研究确定西尼莫德是否会导致孩子出现行为或学习问题。
◈ 服用西尼莫德期间哺乳：
目前尚无关于哺乳期服用西尼莫德的研究。尚不清楚西尼莫德是否会进入母乳，以及会对哺乳婴儿产生何种影响。如果您在哺乳期间服用西尼莫德，并且怀疑婴儿出现任何症状，请联系孩子的医疗保健提供者。请务必就所有母乳喂养相关问题咨询您的医疗保健提供者。
◈ 如果男性服用西尼莫德，是否会影响生育能力（使伴侣怀孕的能力）或增加出生缺陷的风险？
目前尚无研究探讨西尼莫德是否会影响男性生育能力或增加出生缺陷的风险。一般来说，父亲或精子捐赠者接触西尼莫德不太可能增加怀孕的风险。更多信息，请参阅 MotherToBaby 网站上的“父亲接触西尼莫德”情况说明书：https://mothertobaby.org/fact-sheets/paternal-exposures-pregnancy/。

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蛋白质结合
在健康患者以及肝肾功能受损的患者中，西尼莫德的蛋白质结合率均高于 99.9%。由于西尼莫德与血浆蛋白的结合率很高，血液透析不太可能改变西尼莫德的总浓度和游离浓度，因此预计不会因此而调整剂量。

[1]. Br J Pharmacol . 2012 Nov;167(5):1035-47.

[2]. J Immunol . 2013 Apr 1;190(7):3533-40.

药效学
免疫系统效应 西尼莫德在首次给药后6小时内可导致外周血淋巴细胞计数呈剂量依赖性下降，这是由于淋巴细胞释放不足，导致淋巴细胞在淋巴组织中可逆性积聚所致。这可减轻多发性硬化症相关的炎症。90%的患者在停药后10天内淋巴细胞计数恢复正常。对心率和心律的影响 西尼莫德在开始治疗后可导致心率和房室传导暂时性下降。心率下降最显著的时间为服药后6小时内。西尼莫德治疗不会改变自主神经心脏反应，包括心率的昼夜节律变化和对运动的反应。 对肺功能的影响 在接受西尼莫德治疗的患者中，观察到 1 秒时间范围内绝对用力呼气容积的剂量依赖性下降，并且高于服用安慰剂的患者。

C62H74F6N4O10

632.68

1148.53

C, 64.80; H, 6.49; F, 9.92; N, 4.88; O, 13.92

1234627-85-0

Siponimod; 1230487-00-9

44599207

Solid powder

111-112

4.8

199Ų

1

8

9

37

777

0

FC(C1C=C(CO/N=C(/C)\C2C=CC(=C(C=2)CC)CN2CC(C(=O)O)C2)C=CC=1C1CCCCC1)(F)F.FC(C1C=C(CO/N=C(/C)\C2C=CC(=C(C=2)CC)CN2CC(C(=O)O)C2)C=CC=1C1CCCCC1)(F)F.OC(/C=C/C(=O)O)=O

JNLIKIBISICTMS-PEJBKAKVSA-N

InChI=1S/2C29H35F3N2O3.C4H4O4/c2*1-3-21-14-23(10-11-24(21)15-34-16-25(17-34)28(35)36)19(2)33-37-18-20-9-12-26(22-7-5-4-6-8-22)27(13-20)29(30,31)32;5-3(6)1-2-4(7)8/h2*9-14,22,25H,3-8,15-18H2,1-2H3,(H,35,36);1-2H,(H,5,6)(H,7,8)/b2*33-19+;2-1+

(E)-but-2-enedioic acid;1-[[4-[(E)-N-[[4-cyclohexyl-3-(trifluoromethyl)phenyl]methoxy]-C-methylcarbonimidoyl]-2-ethylphenyl]methyl]azetidine-3-carboxylic acid

NVP-BAF-312; NVP-BAF 312; NVP-BAF312-NX; NVP-BAF312; NVP-BAF312-AEA; Siponimod fumarate; Siponimod; Mayzent; WHO 9491; WHO-9491; WHO9491; BAF-312; BAF 312; Siponimod hemifumarate; NVP-BAF312-AEA; Siponimod hemifumaric acid; Z7G02XZ0M6; Siponimod fumarate (USAN); Siponimod fumarate [USAN];BAF312

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。