mAChR3/muscarinic acetylcholine receptor
Muscarinic acetylcholine receptors (mAChRs) [1,2]

分别使用光学显微镜和 MTT 测定评估人角膜基质 (HCS) 细胞的形态和活力，以评估毛果芸香碱的细胞毒性。根据形态学数据，暴露于浓度在 0.625 至 20 g/L 之间的毛果芸香碱的 HCS 细胞表现出形态学异常，例如细胞收缩、细胞质空泡化、从培养基质脱离，最终死亡，以及剂量和时间依赖性增殖迟缓。观察。然而，对照组和暴露于低于 0.625 g/L 浓度的毛果芸香碱的对照组之间没有明显差异。 MTT法结果显示，浓度高于0.625 g/L的毛果芸香碱处理后，HCS细胞的细胞活力随着时间和浓度的增加而降低（P<0.01或0.05），而浓度低于0.625 g/L的毛果芸香碱处理的HCS细胞则随时间和浓度的增加而降低（P<0.01或0.05）。 g/L 与对照没有显着差异[2]。部分毒蕈碱激动剂毛果芸香碱的 EC50 为 2.4 mM，可在已用 Penylephrine（10 至 200 nM）收缩的离体大鼠尾动脉段中诱导浓度依赖性松弛[3]。

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分离大鼠尾动脉环（去除内皮）并悬挂于器官浴中。加入盐酸毛果芸香碱（Pilocarpine HCl）（1 μM-1 mM）可浓度依赖性舒张去氧肾上腺素预收缩的动脉环。这种舒张作用不受毒蕈碱受体拮抗剂或一氧化氮合酶抑制剂阻断，表明其为非胆碱能、非内皮依赖机制[2]
- 人角膜基质细胞（HCSCs）经盐酸毛果芸香碱（Pilocarpine HCl）（10 μM、50 μM、100 μM、200 μM）处理24小时后，细胞活力呈浓度依赖性下降（100 μM时存活率降至62.3%，200 μM时降至41.5%，均相较于对照组）。该药物可诱导细胞凋亡（100 μM时凋亡率升至28.7%），升高细胞内活性氧（ROS）水平（100 μM时增加1.8倍），降低线粒体膜电位。Western blot结果显示Bax和剪切型caspase-3表达上调，Bcl-2表达下调；PCR结果显示促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）mRNA水平升高[3]

检查的是运动大鼠（EX）和对照大鼠（CN）响应毛果芸香碱而分泌的唾液。毛果芸香碱在 EX 大鼠中诱导的唾液量显着高于 CN 大鼠（P<0.01）。另一方面，EX大鼠唾液中的Na+浓度明显低于CN大鼠（P<0.05）[1]。

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雄性Wistar大鼠分为久坐组和自愿运动组（给予跑步轮，干预4周）。腹腔注射盐酸毛果芸香碱（Pilocarpine HCl）（5 mg/kg）可诱导唾液分泌，运动组的唾液分泌量比久坐组高32%。免疫组织化学和Western blot分析显示，盐酸毛果芸香碱（Pilocarpine HCl）可上调颌下腺中水通道蛋白1（AQP1）的表达，运动+毛果芸香碱组的AQP1蛋白水平是久坐+溶媒组的2.1倍[1]

用浓度为0.15625g/L至20.0g/L的毛果芸香碱处理HCS细胞后，通过光学显微镜和MTT法检测其形态和存活率。通过吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）双重染色检测膜通透性、DNA断裂和超微结构。通过流式细胞术（FCM）测定DNA电泳和透射电子显微镜（TEM）、细胞周期、磷脂酰丝氨酸（PS）取向和线粒体跨膜电位（MTP）。ELISA检测胱天蛋白酶的激活[3]。

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从供体角膜分离人角膜基质细胞（HCSCs），在完全培养基中培养至融合。将细胞接种于96孔板（1×104个/孔）用于活力检测，接种于6孔板用于凋亡及分子实验。细胞贴壁24小时后，用不同浓度的盐酸毛果芸香碱（Pilocarpine HCl）（10-200 μM）处理24小时。通过CCK-8法检测细胞活力； Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术分析凋亡情况；DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平；JC-1染色评估线粒体膜电位；Western blot检测Bax、Bcl-2、剪切型caspase-3蛋白表达；RT-PCR定量TNF-α和IL-6的mRNA水平[3]

0.5 mg/kg；腹腔注射
大鼠：10周龄雄性Wistar大鼠随机分为两组，运动组（EX，n=6）和对照组（CN，n=6）。运动组大鼠饲养于带有跑轮（SN-451）的笼子中40天，允许其进行自主运动；对照组大鼠饲养于跑轮锁定的笼子中。第40天，按以下方法测量毛果芸香碱诱导的唾液分泌。简而言之，将大鼠麻醉，将预先称重的棉球置于其舌下，然后腹腔注射毛果芸香碱（0.5 mg/kg）以诱导唾液分泌。之后每10分钟更换一次棉球，持续1小时。再次称量收集到的棉球，用最终重量减去初始重量计算唾液分泌量。

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唾液分泌和AQP1表达实验：将雄性Wistar大鼠（200-250 g）随机分为久坐组和自愿运动组。运动组大鼠可自由使用跑轮4周，每日记录跑步距离。运动干预结束后，将盐酸毛果芸香碱溶于生理盐水中，以5 mg/kg的剂量腹腔注射给药。注射后收集15分钟的唾液以测量其体积。处死大鼠，解剖颌下腺进行免疫组织化学染色、Western blot和RT-PCR分析[1]
-大鼠尾动脉舒张实验：采用颈椎脱臼法处死雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）。尾动脉被迅速解剖，去除结缔组织，并切成 2-3 mm 的环状组织。部分环状组织通过轻轻摩擦内膜表面进行机械性内皮剥脱。动脉环被置于含有 Krebs-Henseleit 溶液（37°C，95% O2/5% CO2）的器官浴槽中，并平衡 60 分钟。在用去氧肾上腺素（1 μM）预收缩后，累积加入盐酸毛果芸香碱（1 μM-1 mM）以记录张力变化[2]

吸收、分布和排泄
健康男性受试者口服毛果芸香碱5mg，每日三次，1.25小时后血浆药物峰浓度达到15μg/L。每日三次口服毛果芸香碱10mg，0.85小时后血浆药物峰浓度达到41μg/L。与食物同服可加快吸收。健康受试者眼部给药后，总体中位达峰时间（Tmax）为2.2小时。平均（标准差）Cmax和AUC0-t分别为897.2 (287.2) pg/mL和2699 (741.4) hr × pg/mL。老花眼患者的平均Cmax和AUC0-t,ss值分别为1.95 ng/mL和4.14 ng × hr/mL。给药后中位达峰时间 (Tmax) 为 0.3 小时，范围为 0.2 至 0.5 小时。
毛果芸香碱及其降解产物主要经尿液排泄。
暂无相关信息。
暂无相关信息。
关于毛果芸香碱的代谢和排泄，目前尚无确切信息。它在体内部分被破坏，但大部分以结合形式经尿液排出。
毛果芸香碱能很好地渗透眼睛；局部滴眼后……
曾有因皮肤吸收而导致中毒的案例。

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代谢/代谢物
关于毛果芸香碱在人体内的代谢信息有限。毛果芸香碱的失活可能发生在神经元突触处，也可能发生在血浆中。据报道，毛果芸香碱经CYP2A6介导的3-羟基化反应生成3-羟基毛果芸香碱的立体异构体。毛果芸香碱还可在血浆和人肝脏中经对氧磷酶1（一种钙依赖性酯酶）水解。毛果芸香酸可能是水解的代谢产物。据报道，毛果芸香碱的代谢产物几乎没有或完全没有药理活性。
毛果芸香碱已知的代谢产物包括3-羟基毛果芸香碱。
可能发生在神经元突触处和血浆中。
半衰期：0.76小时

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生物半衰期
每日3次分别服用5mg或10mg剂量后，消除半衰期分别为0.76小时和1.35小时。在健康受试者眼部给药后，半衰期为 3.96 小时。

肝毒性
在毛果芸香碱的临床试验中，血清酶升高并不常见，且发生率与安慰剂组无显著差异。尽管毛果芸香碱被广泛使用，但尚未有已发表的关于毛果芸香碱引起急性肝损伤的报告。

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妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
有限的信息表明，母亲使用眼用毛果芸香碱不会对母乳喂养的婴儿产生不良影响。如果在哺乳期使用眼用毛果芸香碱，应监测婴儿胆碱能过量的迹象（腹泻、流泪、唾液分泌过多或尿量过多），尤其是在年龄较小的纯母乳喂养婴儿中。为了大幅减少使用眼药水后进入母乳的药物量，请按压眼角泪管至少 1 分钟，然后用吸水纸巾吸去多余的药液。
由于目前尚无关于哺乳期口服毛果芸香碱的信息，因此建议选择其他药物，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
一位患有青光眼的妇女在哺乳（哺乳时间未说明）9 周期间，在其一只眼睛中使用了毛果芸香碱植入剂（Ocusert；未说明浓度）。婴儿未出现不良反应。[1]
一位母亲每天两次使用毛果芸香碱眼药水（未说明浓度），同时每天两次使用 2 滴 0.5% 噻吗洛尔眼药水，并每天两次口服 250 毫克乙酰唑胺，并在妊娠 36 周时分娩了一名早产儿。婴儿出生6小时后开始纯母乳喂养，持续5个月。出生第2天，婴儿出现电解质紊乱，表现为低钙血症、低镁血症和代谢性酸中毒。婴儿接受了口服葡萄糖酸钙和单次肌注硫酸镁治疗。尽管继续母乳喂养且母亲接受药物治疗，婴儿的轻度代谢性酸中毒在出生第4天消失，并在1、3和8个月时体重增长正常，但存在轻度肌张力低下。作者认为代谢紊乱是由乙酰唑胺经胎盘转运引起的，尽管婴儿继续母乳喂养，但该代谢紊乱仍已消退。婴儿在母乳喂养期间体重增长良好，但下肢存在轻度残余肌张力增高，需要进行物理治疗。[2]
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到有关哺乳期母亲的相关已发表信息。在动物中，胆碱能药物可增加催产素的释放[3]，并且对血清催乳素的影响各不相同[4]。其他中枢作用的胆碱能药物可增加人类的血清催乳素水平[5][6]。已建立泌乳的母亲的催乳素水平可能不会影响其哺乳能力。

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蛋白结合
毛果芸香碱在 5 至 25,000 ng/mL 的浓度范围内不与人或大鼠血浆蛋白结合。尚未评估毛果芸香碱对其他药物血浆蛋白结合的影响。

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体外细胞毒性：盐酸毛果芸香碱对人角膜基质细胞表现出浓度依赖性毒性，在浓度≥50 μM 时观察到显著的细胞毒性。它诱导氧化应激、线粒体功能障碍和细胞凋亡，这些都与促炎细胞因子的上调和凋亡调节蛋白表达的改变有关[3]

[1]. Daily voluntary exercise enhances pilocarpine-induced saliva secretion and aquaporin 1 expression in rat submandibular glands. FEBS Open Bio. 2017 Dec 7;8(1):85-93.

[2]. Pilocarpine-induced relaxation of rat tail artery by a non-cholinergic mechanism and in the absence of an intact endothelium. Br J Pharmacol. 1994 Jun;112(2):525-32.

[3]. Cytotoxicity of pilocarpine to human corneal stromal cells and its underlying cytotoxic mechanisms. Int J Ophthalmol. 2016 Apr 18;9(4):505-11.

[4]. Post-treatment with the GLP-1 analogue liraglutide alleviate chronic inflammation and mitochondrial stress induced by Status epilepticus. Epilepsy Res. 2018 Mar 9;142:45-52.

盐酸毛果芸香碱是(+)-毛果芸香碱的盐酸盐，用于治疗眼压升高和口干。它含有(+)-毛果芸香碱。
盐酸毛果芸香碱是从毛果芸香属植物中提取的一种天然生物碱的盐酸盐，具有胆碱能激动剂活性。作为一种胆碱能拟副交感神经药，毛果芸香碱主要与毒蕈碱受体结合，从而诱导外分泌腺分泌，并刺激支气管、泌尿道、胆道和肠道的平滑肌。局部应用于眼部时，该药可刺激瞳孔括约肌收缩，导致瞳孔缩小；刺激睫状肌收缩，导致调节痉挛；可能导致眼内压短暂升高，随后由于小梁网开放和房水流出增加而出现更持久的眼内压下降。
毛果芸香碱是一种缓慢水解的毒蕈碱受体激动剂，无尼古丁样作用。毛果芸香碱用作缩瞳剂，也用于治疗青光眼。
另见：毛果芸香碱（含有活性成分）；盐酸倍他洛尔；盐酸毛果芸香碱（成分）。

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(+)-毛果芸香碱是毛果芸香碱的(+)-对映异构体。它是一种抗青光眼药物。它是(-)-毛果芸香碱的对映异构体。
毛果芸香碱是一种天然存在的生物碱，来源于毛果芸香属植物，是一种毒蕈碱型乙酰胆碱激动剂。毛果芸香碱通过选择性作用于毒蕈碱受体而产生拟副交感神经作用。毛果芸香碱用于治疗口干症和多种眼科疾病，包括眼压升高和青光眼。毛果芸香碱用于治疗青光眼的历史可以追溯到1875年。
毛果芸香碱是一种胆碱能受体激动剂。其作用机制是作为胆碱能激动剂和胆碱能毒蕈碱受体激动剂。
毛果芸香碱是一种口服胆碱能激动剂，用于治疗干性角结膜炎（干燥综合征）患者的口干症状，或局部放射治疗引起的口干症。毛果芸香碱在治疗期间未见与血清酶升高或临床上明显的肝损伤病例相关。
据报道，毛果芸香碱存在于小叶毛果芸香（Pilocarpus microphyllus）、穗状毛果芸香（Pilocarpus racemosus）和其他有相关数据的生物体中。
毛果芸香碱是一种从毛果芸香属植物中提取的天然生物碱，具有胆碱能激动剂活性。作为一种胆碱能拟副交感神经药，毛果芸香碱主要与毒蕈碱受体结合，从而诱导外分泌腺分泌，并刺激支气管、泌尿道、胆道和肠道的平滑肌。局部应用于眼部时，该药可刺激瞳孔括约肌收缩，导致瞳孔缩小；刺激睫状肌收缩，导致调节痉挛；可能导致眼压短暂升高，随后由于小梁网开放和房水流出增加而出现更持久的眼压下降。
毛果芸香碱仅在使用或服用过该药物的个体中发现。它是一种缓慢水解的毒蕈碱受体激动剂，不具有尼古丁样作用。毛果芸香碱用作缩瞳剂，也用于治疗青光眼。[PubChem]毛果芸香碱是一种胆碱能拟副交感神经药。它主要通过刺激毒蕈碱受体，增加外分泌腺的分泌，并引起虹膜括约肌和睫状肌收缩（局部用药时）。
一种缓慢水解的毒蕈碱受体激动剂，不具有尼古丁样作用。毛果芸香碱用作缩瞳剂，也用于治疗青光眼。
另见：盐酸毛果芸香碱（有盐形式）。

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药物适应症
毛果芸香碱口服片适用于治疗干燥综合征或头颈部肿瘤放疗引起的口干。毛果芸香碱滴眼液用于治疗成人老花眼，降低开角型青光眼或高眼压患者的眼压，控制急性闭角型青光眼，预防激光手术后眼压升高，以及诱导瞳孔缩小。

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作用机制
毒蕈碱M3受体表达于多种内分泌和外分泌腺，包括胃腺和唾液腺。它也存在于瞳孔括约肌和睫状体的平滑肌细胞中。 M3受体是一种Gq蛋白偶联受体，可激活磷脂酶C并上调肌醇三磷酸和细胞内钙离子水平。M3受体的激活与平滑肌收缩和唾液腺刺激有关。毛果芸香碱是M1和M2受体的激动剂，也是M3受体的完全激动剂和部分激动剂。
……主要作用于自主效应细胞的毒蕈碱受体，也可观察到神经节效应。这一点在毛果芸香碱中尤为明显，尽管其神经节作用也涉及对毒蕈碱受体的刺激……
……局部滴眼后，瞳孔缩小在 15 至 30 分钟内开始，持续 4 至 8 小时。眼内压下降在 2 至 4 小时内达到最大值，这与房水流出阻力最大程度下降相关。对眼内压的影响持续时间长于对房水流出的影响……毛果芸香碱……可能减少房水生成。
……毛果芸香碱的主要作用是刺激与胆碱能节后神经冲动作用于的自主效应细胞相同的细胞。
……毛果芸香碱……的主要作用是刺激与胆碱能节后神经冲动作用于的自主效应细胞相同的细胞。在这方面……类似于胆碱酯……

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盐酸毛果芸香碱是一种毒蕈碱型乙酰胆碱受体激动剂，其刺激唾液分泌是通过上调颌下腺中AQP1的表达介导的[1]
盐酸毛果芸香碱对大鼠尾动脉的舒张作用与毒蕈碱受体和内皮功能无关，提示可能存在其他非胆碱能信号通路[2]
盐酸毛果芸香碱对人角膜基质细胞的细胞毒性机制与氧化应激诱导的线粒体损伤和凋亡途径的激活有关[3]

C11H16N2O2.HCL

244.72

208.121

C, 53.99; H, 7.00; Cl, 14.49; N, 11.45; O, 13.08

54-71-7

Pilocarpine;92-13-7;Pilocarpine nitrate;148-72-1;Pilocarpine-d3 hydrochloride;1217838-88-4

5909

Typically exists as white to off-white solids at room temperature

1.2±0.1 g/cm3

431.8±18.0 °C at 760 mmHg

202-205 °C(lit.)

215.0±21.2 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.585

-0.09

44.12

1

3

3

16

245

2

Cl[H].O1C([C@@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])[C@]([H])(C1([H])[H])C([H])([H])C1=C([H])N=C([H])N1C([H])([H])[H])=O

RNAICSBVACLLGM-GNAZCLTHSA-N

InChI=1S/C11H16N2O2.ClH/c1-3-10-8(6-15-11(10)14)4-9-5-12-7-13(9)2;/h5,7-8,10H,3-4,6H2,1-2H3;1H/t8-,10-;/m0./s1

(3S,4R)-3-ethyl-4-[(3-methylimidazol-4-yl)methyl]oxolan-2-one;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 130 mg/mL (531.22 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。