| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
TLR4-MD-2 heterodimer (competes with LPS for binding; hydrogen bonding sites: Tyr296 in TLR4 and Ser120 in MD-2) [1]
Caspase-3, caspase-8, caspase-9 (suppresses activation) [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
水果和果汁中含有多酚类黄酮原花青素B1，它具有抗炎特性，并能与TLR4/MD-2复合物结合。当原花青素B1浓度超过100 μg/mL时，会发生细胞毒性。在THP1细胞中，原花青素B1（100 μg/mL）可抑制MD-2、TRAF6、NF-κB mRNA、磷酸化p38 MAPK和NF-κB蛋白的表达，以及LPS诱导的TNF-α的生成[1]。原花青素B1（50-100 µM）可抑制Aβ寡聚体引起的神经元死亡。据观察，原花青素 B1 在 100 µM 时能有效抑制 caspase-3，在 30、50 和 100 µM 时能有效抑制 caspase-8，在 10、30、50 和 100 µM 时能有效抑制 caspase-9。[2]原花青素B1（10、20、30 μM）可显著且呈剂量依赖性地提高ACO和CPT1的表达，但PPARα mRNA的表达未见明显变化[3]。在THP1细胞（人单核细胞系）中，100 μg/mL的原花青素B1与LPS（1 μg/mL）共同处理18小时后，显著抑制了LPS诱导的TNF-α产生（p<0.05）[1]。100 μg/mL的原花青素B1与LPS共同处理18小时后，显著抑制了THP1细胞中磷酸化p38 MAPK和NF-κB蛋白的水平（p<0.05）[1]。100 μg/mL的原花青素B1与LPS共同处理18小时后，显著降低了LPS诱导的TNF-α产生。在THP1细胞中，MD-2（增加60-75%）、TRAF-6和NF-κB的mRNA表达均显著升高（p<0.05），但对TLR4 mRNA表达无显著影响[1]。
在大鼠原代培养皮层神经元中，30 μM、50 μM和100 μM的原花青素B1均显著抑制了Aβ寡聚体（3 μM）诱导的神经元死亡，MTT法检测结果显示（p<0.01或p<0.001）[2]。 100 μM的原花青素B1显著抑制了Aβ寡聚体诱导的caspase-3活化（p<0.001）[2]。 30 μM、50 μM和100 μM的原花青素B1均显著抑制了Aβ寡聚体诱导的caspase-3活化。 caspase-8 (p<0.001)，并且在 10、30、50 和 100 μM 时抑制 caspase-9 的活化（10 μM 时 p<0.01，其他浓度时 p<0.001）[2]。 在用 0.5 mM 棕榈酸处理 48 小时的 HepG2 细胞中，10、20 和 30 μM 的原花青素 B1 以剂量依赖的方式显著抑制细胞内三酰甘油的积累；在 30 μM 浓度下，三酰甘油水平降低至对照组的约 50% (p<0.05) [3]。 在棕榈酸处理的 HepG2 细胞中，原花青素 B1 (10、20、30 μM) 以剂量依赖的方式显著诱导 ACO（酰基辅酶 A 氧化酶）和 CPT1（肉碱棕榈酰转移酶）的 mRNA 表达 (p<0.01)，但对 PPARα mRNA 表达无显著影响 [3]。 |
| 酶活实验 |
分子对接研究：TLR4/MD-2复合物的X射线晶体结构来自蛋白质数据库（PDB）。利用软件生成了原花青素B1和LPS的三维结构。对接过程包括去除配体和水分子、添加氢原子以及校正蛋白质化学性质。采用Dreiding力场和Gasteiger电荷。分子建模使用LigandFit模块。研究发现，原花青素B1与TLR4中的Tyr296以及MD-2中的Ser120之间存在氢键。共识评分：ligScore1 6.31-6.37，ligScore2 7.32-7.40，DockScore 85.124-85.145 [1]。
半胱天冬酶活性测定：使用含有四肽序列（DEVD 用于半胱天冬酶 3/7，IETD 用于半胱天冬酶 8，LEHD 用于半胱天冬酶 9）的发光检测试剂盒测定半胱天冬酶 3/7、8 和 9 的活性。活性半胱天冬酶切割后，释放出氨基荧光素，氨基荧光素与荧光素酶反应产生发光。用 Aβ 寡聚体和测试物质处理后，将试剂加入培养基中，室温孵育 1 小时，然后测量化学发光强度 [2]。 |
| 细胞实验 |
THP1细胞培养：人急性单核细胞白血病THP1细胞在含10%热灭活胎牛血清和抗生素的RPMI 1640培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。将细胞以4×10⁵个/孔的密度接种于96孔板中，并在处理前预培养24小时。细胞毒性试验中，细胞用50-200 μg/mL的原花青素B1处理18小时，然后加入CCK8溶液孵育4小时，并在450 nm处测定吸光度值[1]。
TNF-α测定：THP1细胞用1 μg/mL的LPS处理18小时，处理组加入或不加入100 μg/mL的原花青素B1。收集培养上清液，采用 ELISA 法测定 TNF-α 水平，450 nm 波长处测定吸光度值 [1]。 实时定量 PCR：使用 RNAiso Plus 试剂盒从 THP1 细胞中提取总 RNA，反转录为 cDNA。使用 MD-2、TLR4、TRAF6、NF-κB 和 GAPDH 的特异性引物进行实时定量 PCR。采用 2-ΔΔCt 法计算 mRNA 的相对表达量。细胞用 LPS (1 μg/mL) 处理 18 小时，处理过程中加入或不加入原花青素 B1 (100 μg/mL) [1]。 Western blot：使用裂解缓冲液从 THP1 细胞中提取蛋白质。将蛋白质样品 (30 μg/泳道) 在 15% 聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离，然后转移至硝酸纤维素膜。膜用5%脱脂牛奶封闭，与一抗（兔抗NF-κB或抗p38 MAPK，鼠抗GAPDH）于4℃孵育过夜，再与HRP标记的二抗孵育40分钟。用ECL试剂检测。细胞用LPS（1 μg/mL）处理，并加入或不加入原花青素B1（100 μg/mL）处理18小时[1]。 原代皮层神经元培养：取18日龄大鼠胚胎的皮层神经元。解剖组织，用木瓜蛋白酶/DNase I消化，将细胞重悬于含B27补充剂的Neurobasal培养基中，以1×10⁵个细胞/cm²的密度接种于聚赖氨酸包被的培养板上。培养条件为37℃、5% CO₂。每3天更换一次培养基。接种14天后进行实验。由 Aβ1-42 肽制备的 Aβ 寡聚体（在 4°C 下用 200 μM 无菌水孵育 30 分钟，然后用 PBS 稀释至 100 μM，并在 37°C 下旋转孵育 7 天）。用 3 μM Aβ 寡聚体和原花青素 B1（3-100 μM）处理细胞 48 小时。 MTT 法：加入 MTT 至终浓度为 1 mg/mL，孵育 1 小时，将甲臜溶解于 0.1 N HCl 中的 10% SDS 溶液中，于 570 nm 处测定吸光度 [2]。 神经元中半胱天冬酶活性：用 Aβ 寡聚体 (3 μM) 和原花青素 B1 处理 24 小时（半胱天冬酶-8、-9）或 48 小时（半胱天冬酶-3）后，加入 Caspase-Glo 试剂，孵育 1 小时，测定发光值 [2]。 HepG2 细胞培养：HepG2 细胞在含 10% FBS 和青霉素-链霉素的 DMEM 培养基（5.5 mM 葡萄糖）中，于 37°C、5% CO2 条件下培养。棕榈酸-BSA 复合物的制备方法为：将棕榈酸溶解于 10% 无脂肪酸 BSA 溶液中，于 55°C 过夜，配制成 5 mM 储备液。将亚融合细胞用 0.5 mM 棕榈酸和 1.0% 无脂肪酸 BSA 处理 48 小时，并分别加入或不加入原花青素 B1（10、20、30 μM）。细胞裂解后，采用比色法测定三酰甘油含量，并以蛋白质含量进行标准化。采用实时 RT-PCR 检测 PPARα、ACO、CPT1 和 β-actin 的 mRNA 表达水平 [3]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在THP1细胞中，浓度高于100 μg/mL的原花青素B1可诱导细胞毒性（CCK8法检测）；因此，后续实验中采用100 μg/mL作为安全浓度[1]。
在大鼠原代皮层神经元中，100 μM的原花青素B1未显示毒性，反而表现出神经保护作用。然而，需要注意的是，另一种化合物（甘氨酸香豆素）在100 μM浓度下会增加神经毒性[2]。 |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
原花青素B1是由(-)-表儿茶素和(+)-儿茶素单元通过β构型分别在4位和8'位连接而成的原花青素。原花青素B1存在于锡兰肉桂（Cinnamomum verum，存在于其果皮、树皮或表皮中）、钩藤（Uncaria guianensis，存在于其根部）、葡萄（Vitis vinifera，存在于其叶部）和桃子中。它是一种代谢产物，也是一种EC 3.4.21.5（凝血酶）抑制剂和抗炎剂。它是一种羟基黄烷醇、原花青素、双黄酮和多酚类化合物。在功能上，它与(-)-表儿茶素和(+)-儿茶素相关。据报道，原花青素B1存在于茶叶（Camellia sinensis）、杜鹃花（Rhododendron dauricum）以及其他具有相关数据的生物体中。另见：松树（部分）；山竹果皮（部分）。
原花青素B1是一种多酚类黄酮（原花青素二聚体），存在于水果和果汁中。它可以与LPS竞争结合TLR4-MD-2异二聚体，并抑制下游p38 MAPK和NF-κB信号通路的激活，从而发挥抗炎作用[1]。 原花青素B1是钩藤（一种日本传统药物成分）的成分之一，它通过抑制caspase-3的激活（可能通过抑制上游caspase-8和-9）来发挥抑肝散对抗Aβ寡聚体诱导的细胞凋亡的神经保护作用[2]。 原花青素B1是黄酮醇（一种松树皮提取物，含有5%的原花青素B1）的主要成分。它通过诱导ACO和CPT1的表达来增强肝细胞中的脂肪酸氧化，从而减少脂肪堆积[3]。 |
| 分子式 |
C30H26O12
|
|---|---|
| 分子量 |
578.53
|
| 精确质量 |
578.142
|
| CAS号 |
20315-25-7
|
| 相关CAS号 |
Cyanidin Chloride;528-58-5;Procyanidin B2;29106-49-8;Procyanidin C1;37064-30-5;Procyanidin A2;41743-41-3;Procyanidin A1;103883-03-0;Procyanidin B3;23567-23-9
|
| PubChem CID |
11250133
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.7±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
955.3±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
231～232℃
|
| 闪点 |
531.6±34.3 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.803
|
| LogP |
0.3
|
| tPSA |
220.76
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
10
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
12
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
42
|
| 分子复杂度/Complexity |
925
|
| 定义原子立体中心数目 |
5
|
| SMILES |
C1[C@@H]([C@H](OC2=C1C(=CC(=C2[C@@H]3[C@H]([C@H](OC4=CC(=CC(=C34)O)O)C5=CC(=C(C=C5)O)O)O)O)O)C6=CC(=C(C=C6)O)O)O
|
| InChi Key |
XFZJEEAOWLFHDH-UKWJTHFESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C30H26O12/c31-13-7-20(37)24-23(8-13)41-29(12-2-4-16(33)19(36)6-12)27(40)26(24)25-21(38)10-17(34)14-9-22(39)28(42-30(14)25)11-1-3-15(32)18(35)5-11/h1-8,10,22,26-29,31-40H,9H2/t22-,26+,27+,28+,29+/m0/s1
|
| 化学名 |
(2R,3S)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-8-[(2R,3R,4R)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-3,4-dihydro-2H-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2H-chromene-3,5,7-triol
|
| 别名 |
Epicatechin-(4beta->8)-ent-epicatechin Procyanidin B1Proanthocyanidin B1
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~43.21 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7285 mL | 8.6426 mL | 17.2852 mL | |
| 5 mM | 0.3457 mL | 1.7285 mL | 3.4570 mL | |
| 10 mM | 0.1729 mL | 0.8643 mL | 1.7285 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
