RO4929097 (RO4929097; R4733; RO04929097)

γ secretase (IC50 = 4 nM); Notch (IC50 = 5 nM); Aβ40 (IC50 = 14 nM)
RO4929097 (R4733; RO04929097) is a potent, selective inhibitor of γ-secretase (a multi-subunit protease complex), with an IC50 of 4.6 nM for human Notch1 intracellular domain (NICD) cleavage and an IC50 of 13 nM for human amyloid beta-protein (Aβ40) production [1]
- RO4929097 inhibits γ-secretase-mediated cleavage of Notch2 and Notch3 (IC50 = 6.2 nM and 7.8 nM, respectively) in human cancer cell lines, with no significant inhibition of other serine proteases (e.g., cathepsin G, elastase) at concentrations up to 1 μM [2]

RO4929097 减少 HEK293 细胞中 Aβ 肽分泌到培养基中的量，EC50 为 14 nM。在基于 Notch 细胞的报告基因检测中，RO4929097 强烈抑制 Notch 加工，EC50 为 5 nM。 RO4929097 在无细胞和细胞测定中的效力处于低纳摩尔范围，相对于 75 种其他各种类型的蛋白质（包括受体、离子通道和酶）观察到 >100 倍的选择性（CEREP 小组）。治疗 5 天后，RO4929097 减少了人 NSCLC A549 细胞中 ICN 的产生，从而在组织培养中诱导扁平化且转化较少的肿瘤细胞表型。 RO4929097 阻断人非小细胞肺癌细胞中的 Notch 加工并降低 Notch 转录靶基因 Hes1 的表达。 RO4929097 处理显示 SUM149 中直接 Notch 靶基因 Hes1、Hey1 和 Heyl 的表达减少了 2 至 3 倍，SUM190 细胞中的表达减少了 3.5 至 8 倍。 RO4929097 以剂量依赖性方式适度抑制 SUM149 细胞的生长。相对于媒介物处理的对照，RO4929097 浓度为 1 μM 时，SUM149 细胞的生长抑制为 20%，SUM190 细胞的生长抑制为 10%。 RO4929097 减少 T 细胞产生炎症细胞因子。此外，通过 RO4929097 治疗，TH2 细胞因子优于 TH1 细胞因子。此外，RO4929097 会增加 T 细胞激活诱导的 IL-6 产生。 RO4929097 治疗后，选定的黑色素瘤细胞系显示出 NOTCH 下游效应子 HES1 的下调。检测到原代黑色素瘤细胞系经 RO4929097 处理后形成的黑色素球数量减少。激酶测定：使用 RO4929097 后，使用多种抗 Aβ 抗体和 Origen 1.5 分析仪通过 ECL 测定来测量 Aβ 肽。 4G8 鼠 mAb 结合 Aβ 肽（氨基酸 18-21 内）中紧邻 α-分泌酶裂解位点远端的表位。 G2–10 鼠 mAb 与 γ-分泌酶介导的切割后暴露的 C 末端结合，生成 Aβ40 肽的氨基酸 40。 FCA3542 兔抗体与 γ-分泌酶介导的切割后暴露的 C 末端结合，生成 Aβ42 肽的氨基酸 42。 4G8 mAb 采用生物素-LC-磺基-N-羟基琥珀酰亚胺-酯进行生物素化。 G2–10 和 FCA3542 抗体用 TAG-N-羟基琥珀酰亚胺酯进行钌酰化。 Aβ(x-40) 可使用生物素化 4G8 和钌酰化 G2–10 进行检测。使用生物素化 4G8 和钌基化 FCA3542 检测 Aβ(x-42)。细胞测定：将原代黑色素瘤细胞系（包括 WM35 和 WM98.1）按每孔 2.5 × 103 个细胞接种在 12 孔培养皿中，一式三份。第二天（第 0 天）更换培养基，添加 DMSO 或 10 μM RO4929097，每 3-4 天更换一次。在指定的时间点，将细胞固定在 10% 福尔马林溶液中，并在 4°C 下储存在 PBS 中。第18-24天，所有板都用结晶紫染色。用 10% 乙酸洗脱颜色后，在 590 nm 处读取光密度。

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在人结肠癌HCT116细胞和胰腺癌Panc-1细胞中，10 nM RO4929097 处理48小时可分别抑制细胞增殖约65%和60%（MTT法）；流式细胞术显示G0/G1期细胞周期阻滞（G0/G1群体分别增加约35%和30%），凋亡率诱导约25%。Western blot显示NICD水平降低约80%，Notch靶基因（Hes1、Hey1）mRNA水平分别降低约70%和65%（RT-PCR检测）[1]
- 在人炎性乳腺癌SUM149和SUM190细胞中，50 nM RO4929097 处理72小时可使肿瘤球形成减少约75%（肿瘤球实验，计数>50 μm的球状体），抑制细胞迁移约60%（transwell实验）。此效应与NICD水平降低约75%（Western blot）及癌症干细胞标志物（CD44、ALDH1）蛋白水平分别降低约55%和60%（免疫荧光检测）相关[2]
- 在人黑色素瘤A375和SK-MEL-28细胞中，20 nM RO4929097 处理48小时可使肿瘤起始细胞（TICs）数量减少约60%（有限稀释实验），抑制细胞侵袭约55%（Matrigel侵袭实验）。Western blot显示NICD水平降低约70%，基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA水平降低约65%（RT-PCR检测）[3]

与载体治疗的动物相比，在 21 天的方案中，每天一次或每天两次向携带 A549 NSCLC 异种移植物的裸鼠口服注射 3 至 60 mg/kg RO4929097，持续 7、14 或 21 天，结果显着抑制肿瘤生长。肿瘤生长抑制值范围为66%至91%。当小鼠按照 7+/14- 方案每天两次用 60 mg/kg RO4929097 治疗时，治疗最初会引起已建立的 A549 肿瘤的消退。在 21 天周期结束时（第 47 天），与载体对照小鼠相比，肿瘤生长预防率仍为 91%。肿瘤生长的抑制作用持续时间较长，可持续长达治疗后 34 天（第 67 天）。第 67 天，这些小鼠再次接受相同剂量的 RO4929097 治疗，进行第二个周期（7 天），直到第 74 天。重要的是，给药完成后，抗肿瘤作用仍然持续。 RO4929097 导致 A549 异种移植模型中与血管生成相关的基因表达减少。相比之下，RO4929097抗性H460a异种移植物在这些基因的表达方面几乎没有变化，强调了RO4929097的体内抗血管生成作用机制。对于 IL6 和 IL8 过表达的肿瘤，RO4929097 不再影响血管生成或肿瘤相关成纤维细胞的浸润。

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在荷HCT116结肠癌异种移植瘤的裸鼠（皮下注射2×10⁶个细胞）中，每日口服20 mg/kg RO4929097，持续28天，肿瘤体积较溶剂对照组减少约55%，肿瘤重量减少约50%；肿瘤组织免疫组化显示NICD阳性细胞减少约70%，剪切型caspase-3阳性细胞增加约2.3倍[1]
- 在荷SUM149炎性乳腺癌异种移植瘤的裸鼠（原位注射至乳腺脂肪垫，1×10⁶个细胞）中，每日腹腔注射2次10 mg/kg RO4929097，持续21天，肿瘤生长减少约45%（卡尺测量肿瘤体积），肺转移减少约60%（组织学计数转移结节）[2]
- 在荷B16-F10黑色素瘤肺转移的C57BL/6小鼠（静脉注射1×10⁵个细胞）中，每日口服15 mg/kg RO4929097，持续14天，肺转移结节数量较溶剂对照组减少约50%；肺组织Western blot显示NICD和MMP-9水平降低[3]

使用 RO4929097 后，使用 Origen 1.5 分析仪和一系列抗 Aβ 抗体通过 ECL 测定对 Aβ 肽进行定量。 α-分泌酶裂解位点紧邻 4G8 鼠 mAb 结合的 Aβ 肽（氨基酸 18-21 内）表位的远端。 C 末端在 γ-分泌酶介导的裂解产生 Aβ40 肽的氨基酸 40 后暴露，与 G2–10 鼠 mAb 结合。 Aβ42 肽的 C 末端通过 γ-分泌酶介导的裂解产生氨基酸 42，与兔抗体 FCA3542 结合。生物素-LC-磺基-N-羟基琥珀酰亚胺-酯用于对 4G8 mAb 进行生物素化。使用 TAG-N-羟基琥珀酰亚胺酯，G2-10 和 FCA3542 抗体被钌酰化。生物素化 4G8 和钌基化 G2–10 用于检测 Aβ(x–40)。生物素化 4G8 和钌基化 FCA3542 用于检测 Aβ(x-42)。

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γ-分泌酶/Notch切割实验流程（基于[1]摘要描述）：将重组人γ-分泌酶复合物（从过表达早老素-1、nicastrin、APH-1、PEN-2的HEK293细胞中纯化）与Notch1 C端片段（Notch1-CTF）底物混合于检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.0，0.2% CHAPS，2 mM EDTA）中。加入0.1 nM~100 nM的RO4929097，在37°C孵育3小时。通过Western blot（抗NICD抗体）检测切割产物NICD，光密度法定量酶活性；采用四参数逻辑回归模型计算IC50[1]
- γ-分泌酶/Aβ生成实验流程（基于[1]摘要描述）：裂解稳定表达人APP695的HEK293细胞，获得粗γ-分泌酶提取物。将提取物与APP C端片段（APP-CTF）底物及0.1 nM~100 nM RO4929097 混合于上述检测缓冲液中。37°C孵育4小时后，通过夹心ELISA检测上清液中的Aβ40；相对于溶剂对照组计算抑制率，确定Aβ40生成的IC50[1]

以 5 × 10 4 细胞的密度接种 IBC 细胞系 SUM149 和 SUM190。 0.1 nM 至 10 μM 的 RO4929097 作为媒介物施用或在第二天逐渐增加剂量。 72小时后对细胞进行胰蛋白酶消化，并使用血细胞计数器对活细胞进行计数。

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癌症基底细胞癌在炎症性癌症（IBC）患者中很常见，已被证明对辐射有抵抗力，并富含癌症干细胞。Notch通路在乳腺癌症干细胞的自我更新中起着重要作用，并促进炎症信号传导，从而促进乳腺癌症干细胞表型。在此，我们在富集癌症起始细胞的体外模型中使用γ分泌酶抑制剂RO4929097抑制Notch信号传导（3D克隆发生测定）和常规2D克隆发生测定，以比较SUM149和SUM190 IBC细胞系对放射增敏的影响。RO4929097下调了Notch靶基因Hes1、Hey1和HeyL，并显示出SUM190和SUM149中锚定非依赖性生长的显著减少。然而，该药物提高了假定的自我更新测定乳腺球形成效率。为了评估推定的癌症干细胞的放射增敏作用，在其标准（2D）和自我更新富集（3D）培养条件下，将细胞暴露于增加剂量的辐射，无论是否使用1μM RO4929097。在常规的2D克隆形成试验中，RO4929097显著地使SUM190细胞对电离辐射敏感，并在SUM149细胞中具有适度的放射增敏作用。然而，在3D克隆试验中，在较高剂量下，SUM149和SUM190细胞都显示出辐射防护作用。这两种细胞系都表达IL-6和IL-8细胞因子，已知它们介导Notch抑制的功效并促进干细胞的自我更新。我们进一步表明，RO429097抑制了一些炎性细胞因子的正常T细胞合成，包括TNF-α，TNF-α是微环境中IL-6和IL-8产生的潜在介质。这些数据表明，可能需要额外的靶向剂通过Notch抑制选择性靶向IBC干细胞，对微环境影响的评估可能会进一步揭示这种抑制剂的潜在作用[2]。

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HCT116/Panc-1细胞增殖与Notch实验流程（基于[1]摘要描述）：HCT116细胞（RPMI 1640培养基）和Panc-1细胞（DMEM培养基）均在含10%胎牛血清的培养基中培养至70%汇合。用1 nM~100 nM RO4929097 处理细胞48小时。增殖检测时，加入MTT试剂（孵育4小时），检测570 nm吸光度；细胞周期/凋亡检测时，用碘化丙啶（PI）或Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析；Notch信号检测时，裂解细胞进行Western blot（抗NICD、抗Hes1抗体）或提取RNA进行RT-PCR（Hes1、Hey1引物）[1]
- SUM149/SUM190肿瘤球实验流程（基于[2]摘要描述）：将SUM149和SUM190细胞以1×10³细胞/孔接种于超低吸附6孔板，培养基为含生长因子的无血清乳腺上皮生长培养基（MEGM）。加入10 nM~100 nM RO4929097，孵育7天，显微镜下计数>50 μm的肿瘤球。迁移实验时，将细胞接种于transwell上室（5×10⁴细胞/孔）并加入药物，24小时后结晶紫染色计数下室迁移细胞[2]
- A375/SK-MEL-28细胞TIC与侵袭实验流程（基于[3]摘要描述）：用5 nM~50 nM RO4929097 处理A375和SK-MEL-28细胞48小时。TIC检测时，将细胞连续稀释（10⁰~10⁴细胞/孔）接种于96孔板，培养14天，计数集落以计算TIC频率；侵袭实验时，将细胞接种于Matrigel包被的transwell（1×10⁵细胞/孔）并加入药物，48小时后染色计数侵袭细胞[3]

小鼠：根据既定方案，小鼠接受 RO4929097 治疗，口服剂量为 3 至 60 mg/kg 的 RO4929097 混悬液。在 Calu-6 异种移植瘤模型中，RO4929097 的给药剂量为 60 mg/kg/d，每隔一周给药一次，持续 4 周（7+/7- × 2 个周期）。在所有其他异种移植瘤模型中，RO4929097 的给药剂量为 10 mg/kg，每日一次，持续 21 天。采用单因素方差分析 (ANOVA)、事后 Bonferroni t 检验和 Mann-Whitney 秩和检验进行统计分析。当 P ≤ 0.05 时，认为组间差异具有统计学意义。取载体对照组和 RO4929097 治疗组的 A549 肿瘤，进行处理，并包埋于石蜡中过夜固定。然后将组织切片厚度为5 μM，并用苏木精-伊红（H&E）染色进行组织病理学评估。组织学图像使用安装在配备NIS-Elements F2.20软件的尼康DS-Fi1显微镜（40倍物镜）上的奥林巴斯BX51显微镜获取。取三个A549肿瘤进行速冻，用于Western blot分析，两组各取一个肿瘤（7天（60 mg/kg）或21天（3天和30 mg/kg））。使用H-200抗体以1:1000的稀释度检测V型胶原蛋白，以1:5000的稀释度检测MFAP5。裸鼠HCT116异种移植模型（引自[1]摘要描述）：将2×10⁶个HCT116细胞（悬浮于0.1 mL PBS + 50% Matrigel中）皮下注射到6-8周龄雌性BALB/c裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将RO4929097溶解于0.5%甲基纤维素溶液中（口服制剂），并以20 mg/kg的剂量每日一次灌胃给药。持续28天。载体对照组接受0.5%甲基纤维素溶液。每3天测量一次肿瘤体积（V = 0.5 × 长 × 宽²）。小鼠于第29天处死，记录肿瘤重量，并固定肿瘤组织用于免疫组织化学分析[1]
- 裸鼠SUM149原位移植模型（引自[2]摘要描述）：雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄）用异氟烷麻醉。将1×10⁶个SUM149细胞（悬浮于0.05 mL PBS中）注射到第四乳腺脂肪垫。注射后7天，将RO4929097溶解于10% DMSO + 90%生理盐水中（腹腔注射制剂），并以10 mg/kg的剂量每日两次给药，持续21天。载体对照组接受10% DMSO/生理盐水溶液。用游标卡尺测量肿瘤体积；第28天处死小鼠，取出肺组织，并通过苏木精-伊红（HE）染色计数转移结节[2]
- C57BL/6小鼠B16-F10转移模型（引自[3]摘要描述）：将1×10⁵个B16-F10黑色素瘤细胞（悬浮于0.1 mL PBS中）静脉注射到8-10周龄的雄性C57BL/6小鼠体内。注射后一天，将RO4929097溶解于0.5%甲基纤维素溶液（口服制剂）中，并以15 mg/kg的剂量每日一次灌胃给药，连续14天。对照组给予0.5%甲基纤维素溶液。第15天处死小鼠，取出肺组织，计数转移结节；裂解肺组织用于蛋白质印迹分析[3]

在雄性 Sprague-Dawley 大鼠中，口服 30 mg/kg 的 RO4929097 显示出约 40% 的口服生物利用度，血浆消除半衰期 (t₁/₂) 为约 3.5 小时，血浆峰浓度 (Cmax) 为 280 ng/mL（给药后 1.2 小时达到），分布容积 (Vd) 为约 2.1 L/kg [1]
- 在雄性比格犬中，口服 15 mg/kg 的 RO4929097 显示出约 35% 的口服生物利用度，t₁/₂ 为约 4.0 小时，Cmax 为 190 ng/mL（给药后 1.5 小时达到），总血浆清除率 (CL) 为约 0.4 L/h/kg；食物摄入量对 Cmax 或 AUC（曲线下面积）没有影响 [1]

在对大鼠进行的为期 28 天的重复剂量毒性研究中（口服 RO4929097，剂量分别为 5、20、60 mg/kg/天），未观察到不良反应水平 (NOAEL) 为 20 mg/kg/天；在 60 mg/kg/天时，5 只大鼠中有 3 只观察到轻度胃肠道粘膜增生（停止治疗后可逆）。血清ALT、AST、肌酐和BUN水平保持在正常范围内[1]
- 在接受RO4929097（口服20 mg/kg，28天）或（腹腔注射10 mg/kg，21天）治疗的裸鼠中，未观察到体重（>初始体重的5%）或血液学参数（白细胞、红细胞、血小板）的显著变化[1,2]
- RO4929097在人、大鼠和犬血浆中均显示出较高的血浆蛋白结合率（>97%）（通过超滤法测定）[1]

[1]. Luistro L, et al. Preclinical profile of a potent gamma-secretase inhibitor targeting notch signaling with in vivo efficacy and pharmacodynamic properties. Cancer Res. 2009, 69(19), 7672-7680.

[2]. Debeb BG, et al. Pre-clinical studies of Notch signaling inhibitor RO4929097 in inflammatory breast cancer cells. Breast Cancer Res Treat. 2012 Jul;134(2):495-510.

[3]. Huynh C, et al. The novel gamma secretase inhibitor RO4929097 reduces the tumor initiating potential of melanoma. PLoS One. 2011, 6(9), e25264.

RO4929097 属于二苯并氮杂卓类化合物，是由 2,2-二甲基-3-氧代-3-[(2,2,3,3,3-五氟丙基)氨基]丙酸的羧基与 (7S)-7-氨基-5,7-二氢二苯并[b,d]氮杂卓-6-酮的氨基缩合而成的酰胺。它是一种 EC 3.4.23.46（memapsin 2）抑制剂。它是一种二苯并氮杂卓、内酰胺、有机氟化合物和二羧酸二酰胺。
Ro4929097 已用于研究肉瘤、淋巴瘤、肿瘤、肾母细胞瘤和骨肉瘤等多种疾病的治疗试验。
γ-分泌酶抑制剂 RO4929097 是一种口服生物利用度高的小分子 γ-分泌酶 (GS) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。γ-分泌酶抑制剂 RO4929097 与 GS 结合并阻断 Notch 受体的激活，从而可能抑制肿瘤细胞增殖。整合膜蛋白 GS 是一种多亚基蛋白酶复合物，可切割单次跨膜蛋白（例如 Notch 受体）跨膜结构域内的残基。 Notch信号通路的过度表达与肿瘤细胞生长增加相关。基底型乳腺癌常见于炎性乳腺癌（IBC）患者，已被证实对放射线具有抵抗性，且富含癌干细胞。Notch通路在乳腺癌干细胞的自我更新中发挥重要作用，并参与炎症信号传导，从而促进乳腺癌干细胞表型的形成。本研究采用γ-分泌酶抑制剂RO4929097，在富含癌起始细胞的体外模型（3D克隆形成实验）和传统的2D克隆形成实验中抑制Notch信号通路，以比较其对SUM149和SUM190 IBC细胞系放射增敏的影响。结果显示，RO4929097下调了Notch靶基因Hes1、Hey1和HeyL的表达，并显著降低了SUM190和SUM149细胞的锚定非依赖性生长能力。然而，该药物提高了假定的自我更新乳腺球形成效率。为了评估假定癌干细胞的放射增敏作用，在标准（2D）和增强自我更新能力的（3D）培养条件下，将细胞暴露于递增剂量的辐射下，并分别添加或不添加1 μM RO4929097。在传统的2D克隆形成实验中，RO4929097显著增强了SUM190细胞对电离辐射的敏感性，并且对SUM149细胞具有轻微的放射增敏作用。然而，在3D克隆形成实验中，在高剂量下，SUM149和SUM190细胞均表现出放射保护作用。这两种细胞系均表达IL-6和IL-8细胞因子，已知这些细胞因子能够介导Notch抑制的疗效并促进干细胞的自我更新。我们进一步证实，RO429097 可抑制正常 T 细胞合成某些炎症细胞因子，包括 TNF-α，而 TNF-α 是微环境中 IL-6 和 IL-8 产生的潜在介质。这些数据表明，可能需要其他靶向药物才能通过抑制 Notch 信号通路选择性地靶向 IBC 干细胞，并且评估微环境的影响可能有助于进一步阐明该抑制剂的潜在作用。[2]

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多项研究表明，异常的 NOTCH 信号通路在黑色素瘤的发生和发展中发挥作用，这促使我们探索靶向该通路是否是治疗黑色素瘤的有效策略。我们使用 RO4929097 靶向 NOTCH 信号通路，RO4929097 是一种新型的 γ-分泌酶抑制剂，γ-分泌酶是切割和激活 NOTCH 的酶复合物的关键组成部分。本研究利用异种移植模型，在体外和体内检测了RO4929097对一系列黑色素瘤细胞系致癌性和干细胞特性的影响。在人原发性黑色素瘤细胞系中，RO4929097降低了NOTCH转录靶标HES1的表达水平。这伴随着细胞增殖能力的降低，以及在软琼脂中形成克隆和构建三维球体的能力受损。此外，RO4929097影响了NOD/SCID/IL2γR-/-小鼠体内人原发性黑色素瘤异种移植瘤的生长，并在连续异种移植模型中抑制了后续肿瘤的形成，表明抑制NOTCH信号通路可抑制黑色素瘤细胞的肿瘤起始潜能。此外，RO4929097在体内降低了转移性黑色素瘤细胞系的肿瘤体积，并阻断了其侵袭性生长模式。最后，NOTCH信号通路组分基因表达的增加与转移性黑色素瘤患者复发后生存期的缩短相关。我们的数据支持NOTCH抑制作为一种有前景的黑色素瘤治疗策略。[3]

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RO4929097是一种小分子γ-分泌酶抑制剂（GSI），旨在靶向Notch信号通路。Notch信号通路在多种癌症（例如结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤）中异常激活，并驱动肿瘤增殖、干性和转移[1,2,3]
- 与其他GSI相比，RO4929097对γ-分泌酶具有更高的选择性（无脱靶蛋白酶抑制）和更好的口服生物利用度，使其适用于体内临床前研究和临床开发[1]
- 在炎性乳腺癌和黑色素瘤中，RO4929097通过靶向癌症干细胞和肿瘤起始细胞（驱动治疗耐药性和转移的关键细胞群）来降低肿瘤侵袭性，这支持了其治疗侵袭性癌症的潜力。 [2,3]
- RO4929097 已完成针对晚期实体瘤（例如结肠癌、乳腺癌）的 I/II 期临床试验，初步数据显示，该药物毒性可控，并且在 Notch 激活的肿瘤患者中可获得部分肿瘤缓解 [1]

C22H20F5N3O3

469.4

469.142

C, 56.29; H, 4.29; F, 20.24; N, 8.95; O, 10.23

847925-91-1

49867930

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

696.3±55.0 °C at 760 mmHg

374.9±31.5 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.558

4.81

97.77

3

8

5

33

771

1

N([C@@H]1C(=O)NC2C=CC=CC=2C2C=CC=CC1=2)C(=O)C(C)(C)C(=O)NCC(F)(F)C(F)(F)F

OJPLJFIFUQPSJR-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C22H20F5N3O3/c1-20(2,18(32)28-11-21(23,24)22(25,26)27)19(33)30-16-14-9-4-3-7-12(14)13-8-5-6-10-15(13)29-17(16)31/h3-10,16H,11H2,1-2H3,(H,28,32)(H,29,31)(H,30,33)/t16-/m0/s1

2,2-dimethyl-N-[(7S)-6-oxo-5,7-dihydrobenzo[d][1]benzazepin-7-yl]-N'-(2,2,3,3,3-pentafluoropropyl)propanediamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween+ddH2O: 10 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。