Monoamine oxidase B (MAO-B) (IC50 = 98 nM)

甲磺酸沙芬酰胺 (1-300 µM) 以浓度依赖性方式降低峰值钠电流的幅度。当电流从 -110 mV 的 Vh 驱动至 +10 mV 的 Vtest 时，IC50 值为 262 µM。由于 Safinamide mesylate 的抑制作用，大鼠皮质神经元的去极化保持电位为 -53 mV，其 IC50 值较低，为 8 µM。

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通过快速固相合成制备了Safinamide、（S）-N2-{4-[（3-氟苄基）氧基]苄基}丙氨酸酰胺甲磺酸盐（作为抗帕金森药物正在进行III期临床试验）和烷酰胺类似物库，并评估了它们的单胺氧化酶B（MAO-B）和单胺氧化酶a（MAO-a）抑制活性和选择性。（S） -3-氯苄氧基丙氨酸酰胺（8）和（S）-3-氯苄氧基丝氨酸酰胺（13）衍生物被证明是比Safinamide更有效的MAO-B抑制剂（IC50分别为33和43 nM，对98 nM），但MAO-B选择性较低（SI分别为3455和1967，对5918）。沙芬那胺的四氢异喹啉类似物（R）-21显示出最高的MAO-B抑制效力（IC50=17 nM）和良好的选择性（SI=2941）。结构亲和关系和对接模拟表明，苄氧基的α-氨基酰胺侧链和对位取代基具有强烈的负空间效应，间位取代基具有良好的疏水相互作用。许多R和Sα-氨基酰胺对映体（包括沙芬那胺的两种刚性类似物（21））的MAO-B亲和力差异很大，表明酶结合位点可能存在对映选择性相互作用。[1]

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大鼠皮质神经元钠通道抑制。[3]
+10 mV的电压脉冲从皮质神经元诱发快速向内钠电流，其幅度取决于条件脉冲的电压（见材料和方法）。诱发最大（静息状态，Vrest）和50%最大钠电流（半最大失活状态，Vlhalf）的调节电压分别为-110和-53 mV（图6A）。根据观察到的稳态失活曲线，在-110 mV（Vrest）和-53 mV（Vlhalf）的预处理电位下测试了Safinamide对钠电流和阻断电压/状态依赖性的影响。如图6B所示，Safinamide（1-300µM）以浓度依赖的方式降低了峰值钠电流（强直性阻滞）的振幅。当电流从-110 mV的Vh刺激到+10 mV的Vtest时，IC50值为262µM。沙芬那胺的抑制作用是电压依赖性的，因为当保持电位去极化至-53 mV时，IC50值显著降低（8µM）。洗脱导致抑制作用完全逆转。钠通道失活状态的亲和力常数（Ki）为4.1µM。

腹腔注射（90 mg/kg，每天一次，持续 14 天）时，甲磺酸沙芬酰胺可显着减少小鼠 MCAO 引起的脑梗塞体积，以及神经功能缺损、脑血屏障 (BBB) 破坏和ZO-1和紧密连接蛋白occludin的表达[3]。 GABA 和 Glu 的体内释放受到甲磺酸沙芬酰胺的剂量依赖性抑制（腹膜内注射；5 mg/kg、15 mg/kg 和 30 mg/kg）。当施用藜芦定时观察到这种效果。甲磺酸沙芬酰胺，剂量为 30 mg/kg，阻断藜芦定对 GABA 释放的影响（治疗 F1,8=4.04；时间 F8,64=3.76，时间×治疗相互作用 F8,64=2.83）和 Glu（治疗F1,8=1.31；时间×治疗相互作用F8,64=2.4）。在大鼠中，safinamide mesylate 在 5 和 15 mg/kg 剂量下完全抑制藜芦定刺激的 Glu 释放，而在 0.5 mg/kg 剂量下有轻微但不具有统计学意义的减少[3]。

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Safinamide最近被批准作为左旋多巴治疗帕金森病的附加药物。除了抑制B型单胺氧化酶外，它还在体外阻断钠通道并调节谷氨酸（Glu）的释放。由于这种特性可能有助于药物的治疗作用，我们进行了本研究，以调查沙芬酰胺是否也在体内抑制Glu的释放，以及这种作用是否在不同的脑区是一致的，并且对谷氨酸能神经元是选择性的。为此，使用体内微透析监测幼年清醒大鼠海马和基底神经节中自发和藜芦碱诱导的Glu和GABA释放。还测量了脑中沙芬那胺的水平。为了阐明沙芬那胺作用的机制，通过膜片钳记录大鼠皮质神经元的钠电流。沙芬那胺在15mg/kg时最大限度地抑制了藜芦碱诱导的海马中Glu和GABA的释放，达到1.89-1.37µM的游离脑浓度。该剂量减弱了藜芦碱刺激的丘脑底核、苍白球和网状黑质中Glu（但不是GABA）的释放，但纹状体中没有。Safinamide对自发神经递质释放无效。在体外，沙芬那胺抑制钠通道，在去极化（IC50=8µM）时比在静息（IC50=262µM）电位下显示出更大的亲和力。我们得出结论，沙芬酰胺抑制了受刺激神经末梢的体内Glu释放，可能是通过阻断具有特定放电模式的神经元亚群的钠通道。这些数据与沙芬那胺的抗惊厥和抗帕金森病作用一致，并为其作用的非多巴胺能机制提供了支持[3]。

体外酶活性测定。分别使用选择性底物14C-血清素（5-HT）和14C-苯乙胺（PEA）对MAO-a和MAO-B进行放射酶测定，评估酶活性。 将线粒体沉淀（500μg蛋白质）重新悬浮在200μL pH 7.40的0.1 M磷酸盐缓冲液中，并将其加入50μL抑制剂溶液（在向游离碱水溶液中加入化学计量量的0.01 M甲磺酸后转化为甲磺酸盐）或缓冲液溶液中，在37°C下孵育30分钟（预孵育）。然后加入50μL缓冲液中的底物（5μM 14C-5-HT或0.5μM 14C-PEA），将测定混合物在37°C下孵育30分钟（5-HT）或10分钟（PEA）。[1]
通过分别加入0.2mL HCl或高氯酸用于5-HT或PEA来停止反应。离心后，用3mL乙醚（用于5-HT）或甲苯（用于PEA）提取酸性放射性代谢物，并通过液体闪烁光谱法以90%的效率测量有机相的放射性。[1]
酶活性表示为每分钟每毫克蛋白质转化的底物纳摩尔数（nmol mg-1 min-1）。[1]
从5到8个不同浓度（10-10-10-10-5M）获得药物抑制曲线，每个浓度重复两次，使用非线性回归分析（GraphPad最佳拟合计算机程序）确定IC50。对于活性极低的抑制剂，在表1所示的浓度下，酶抑制百分比一式两份测定。

全细胞膜片钳记录。[3]
实验是在室温（25°C）下根据标准全细胞膜片钳记录技术（Hamill等人，1981）进行的。用含有（以毫摩尔计）NaCl（60）、氯化胆碱（60），CaCl2（1.3）、MgCl2（2）、CdCl2（0.4）、NiCl2（0.3）、TEACl（20）、葡萄糖（10）和HEPES（10）的细胞外溶液连续超灌注神经元细胞。使用Sutter P-87电极拔出器拔出贴片移液管，并填充由以下成分组成的内溶液（单位：毫摩尔）：CsF（65）、CsCl（65），NaCl（10）、CaCl2（1.3）、MgCl2（2）、EGTA（10），HEPES（10）和MgATP（1）。贴片电极的尖端电阻为2-3MΩ。使用Axopatch 200B放大器在5kHz下记录和过滤膜电流，并使用Axon Digidata 1322A对数据进行数字化。电压指令协议和数据采集使用Axon pClamp8软件进行控制。测量电极和参比电极均为AgCl-Ag电极。接入电阻范围为5至10 MΩ；使用P/4泄漏减法协议消除了线性泄漏和电容电流Safinamide（20mM蒸馏水储备溶液）在外部溶液中稀释，并施加2分钟以达到平衡反应。

动物/疾病模型： C57/BL6雄性小鼠局灶性脑缺血模型[3]
剂量： 90 mg/kg
给药途径： 腹腔注射；每日一次；持续14天
实验结果： 脑梗死体积显著减少。

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\n\n实验方案和设计。[3]
\n本研究使用了95只大鼠进行微透析实验，其中84只用于研究藜芦碱刺激的神经递质释放，11只用于研究自发释放。实验方案已获得意大利卫生部批准（许可证号分别为170/2013B和714/2016-PR-B）。实验设计如下（图1C和1D以及图2）：每只大鼠在第一次和第二次微透析过程中均被随机分配至生理盐水/藜芦碱组或沙芬酰胺/藜芦碱组（0.5、5或15 mg/kg，图1C和1D；5或15 mg/kg，图2），确保每只大鼠在两次微透析过程中接受的治疗不同。大鼠接受两次微透析（即探针植入后24小时和48小时），之后用异氟烷过量麻醉处死，并通过组织学方法验证探针的位置。为了研究藜芦碱刺激的释放（图 1，A 和 B，3、4 和 5），每只植入单个微透析探针的动物在第一次微透析时随机分配至生理盐水/藜芦碱组或沙芬酰胺/藜芦碱组（30 mg/kg，图 1，A 和 B；15 mg/kg，图 3-5），并在第二次微透析时交叉处理。为了研究自发性谷氨酸和 GABA 释放，在丘脑底核 (STN) 植入一个探针并在对侧黑质网状部 (SNr) 植入另一个探针的大鼠在第一次微透析时随机分配至生理盐水组或 15 mg/kg 藜芦碱组，并在第二次微透析时交叉处理。总共有 7 只动物因探针错位或微透析过程中探针堵塞而被淘汰。\n

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\n体内微透析。 [3]
\n按照先前描述的方法进行脑内微透析（Morari 等人，1996；Paolone 等人，2015）。在异氟烷麻醉下，将一根同心圆设计的探针立体定位植入五个不同的脑区，植入位置坐标如下（单位：毫米），以颅缝和硬脑膜表面为参考点（Paxinos 和 Watson，1986）：海马（1 毫米透析膜，前后方向 (AP) -3.14，内外方向 (ML) ± 1.8，背腹方向 (DV) -4.2）、丘脑底核 (STN)（1 毫米透析膜，AP -3.7，ML ± 2.5，DV -8.6）、黑质网状部 (SNr)（1 毫米透析膜，AP -5.5，ML ± 2.2，DV -8.3）、背外侧沟 (DLS)（3 毫米透析膜，AP +1.0，ML ± 3.5，DV -6.0）和苍白球 (GP)（2 毫米透析膜，AP -1.3，ML ± 3.3，DV -8.6）。 −6.5）。在研究藜芦碱刺激的神经递质释放时，每只动物每次植入一个探针。相反，在研究自发性神经递质释放时，每只动物同时植入两个探针，一个植入丘脑底核（STN），另一个植入对侧黑质网状部（SNr）。探针用牙科水泥固定在颅骨上。手术完成前，伤口浸润注射局部麻醉剂（2%利多卡因）。术后24小时，以3.0 μl/min的流速用改良的林格氏液（1.2 mM CaCl2、2.7 mM KCl、148 mM NaCl和0.85 mM MgCl2）灌注探针，冲洗6小时后开始采集样本（每20分钟一次）。在全身（腹腔注射）给予生理盐水或沙芬酰胺之前，至少采集4个基线样本。 30分钟后，通过反向透析将藜芦碱（10 μM）灌注探针30分钟；藜芦碱灌注结束后，继续采集样品80分钟。\n

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\n脑药代动力学分析。[3]
\n使用27只大鼠进行药代动力学分析。沙芬酰胺以三种剂量水平（5、15和30 mg/kg，腹腔注射）给药，并在40、60和80分钟后取出脑组织，以与微透析研究中藜芦碱的灌注时间相匹配。脑组织样品经超声匀浆处理；蛋白质沉淀后，使用Sciex API4000质谱仪（AB Sciex，Framingham，MA）通过高效液相色谱-串联质谱法测定沙芬酰胺的总浓度。使用CTC analytics HTS Pal自动进样器（瑞士Zwingen）将5 µl样品注入Synergi MAX-RP 30 × 2.0 mm、4 µm色谱柱，流动相流速为1.5 ml/min。采用HP1100二元高效液相色谱系统，利用高压线性梯度洗脱程序对分析物进行洗脱。为了计算游离脑组织浓度，采用体外平衡透析法测定脑组织中游离沙芬酰胺的比例（fu,b）（Summerfield等，2007）。fu,b百分比为3.27%。

吸收、分布和排泄
吸收迅速，血浆峰浓度在2至4小时内达到，总生物利用度为95%。食物可延长吸收速率，但不影响沙芬酰胺的吸收程度。
76%经肾脏排泄，1.5%经粪便排泄。
1.8升/公斤。
血浆总口服清除率（包括母体沙芬酰胺及其代谢物）平均仅为17.53 ± 2.71毫升/小时×公斤。代谢/代谢物
主要步骤由尚未鉴定的酰胺酶介导，生成沙芬酰胺酸。它还可代谢为O-脱苄基沙芬酰胺和N-脱烷基胺。N-脱烷基胺随后被氧化为羧酸，最终进行葡萄糖醛酸化。脱烷基化反应由细胞色素P450（CYP）介导，尤其是CYP3A4。沙芬酰胺酸与有机阴离子转运蛋白3（OAT3）结合，但尚未确定该相互作用的临床意义。沙芬酰胺也会短暂地与ABCG2结合。初步研究未发现其他转运蛋白的亲和力。

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生物半衰期
22小时

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沙芬酰胺脑内浓度。[3]
在另一组大鼠中，分别给予5、15或30 mg/kg沙芬酰胺后40、60和80分钟，测量其脑内沙芬酰胺浓度。通过考虑沙芬酰胺在脑组织中的结合情况计算出的游离脑浓度与剂量相关，在所有检测时间点，30 mg/kg剂量组的脑内浓度最高，5 mg/kg剂量组的脑内浓度最低（表1）。此外，所有剂量组均观察到从第一个时间点到最后一个时间点呈逐渐线性下降的趋势。在藜芦碱灌注期间（100-120分钟），5、15和30 mg/kg剂量组的脑组织中游离沙芬酰胺的浓度范围分别为0.70-0.44、1.89-1.70和4.77-3.04 µM。

妊娠期和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用沙芬酰胺的信息。由于该药对哺乳期幼鼠有肝毒性，生产商建议哺乳期妇女禁用。建议使用其他替代药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。肝毒性
据报道，长期服用沙芬酰胺的患者中，少数患者会出现血清酶升高，但这些异常通常较轻微且可自行消退，其发生率通常不高于安慰剂或对照药物。沙芬酰胺尚未被报道与急性肝损伤病例相关，但非特异性单胺氧化酶抑制剂曾有此类病例报道。
可能性评分：E（不太可能是临床上明显的肝损伤原因）。

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蛋白结合率
88–90%

[1]. Solid-phase synthesis and insights into structure-activity relationships of safinamide analogues as potent and selective inhibitors of type B monoamine oxidase. J Med Chem, 2007, 50(20), 4909-4916.

[2]. Safinamide: from molecular targets to a new anti-Parkinson drug. Neurology. 2006 Oct 10;67(7 Suppl 2):S18-23.

[3]. Safinamide Differentially Modulates In Vivo Glutamate and GABA Release in the Rat Hippocampus and Basal Ganglia.J Pharmacol Exp Ther. 2018 Feb;364(2):198-206.

另见：沙芬酰胺（具有活性成分）。

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药物适应症
沙芬酰胺适用于治疗成人特发性帕金森病 (PD) 患者，作为左旋多巴 (L-dopa) 稳定剂量治疗的辅助疗法，可单独使用或与其他 PD 药物联合使用，用于中晚期病情波动患者。

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沙芬酰胺是一种氨基酸酰胺。
沙芬酰胺用于治疗帕金森病。它于 2015 年 2 月在欧洲获批，并于 2017 年 3 月 21 日在美国获批。
沙芬酰胺是一种 B 型单胺氧化酶抑制剂。
沙芬酰胺的作用机制是作为单胺氧化酶-B抑制剂和乳腺癌耐药蛋白抑制剂。
沙芬酰胺是一种单胺氧化酶抑制剂，与左旋多巴和卡比多巴联合使用，作为帕金森病治疗的辅助疗法。沙芬酰胺治疗期间血清酶升高发生率较低，但尚未发现与临床上明显的急性肝损伤病例相关。
另见：沙芬酰胺甲磺酸盐（活性成分）。

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药物适应症
沙芬酰胺适用于作为左旋多巴的辅助治疗药物，可与其他药物联合使用，用于治疗帕金森病。
沙芬酰胺（Xadago）适用于治疗成人特发性帕金森病（PD）患者，作为左旋多巴（L-dopa）稳定剂量的辅助治疗药物，可单独使用或与其他PD药物联合使用，用于中晚期病情波动的患者。

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作用机制
沙芬酰胺是一种独特的分子，具有多种作用机制和极高的治疗指数。它结合了强效、选择性和可逆的MAO-B抑制作用，以及电压依赖性Na+和Ca2+通道阻滞和谷氨酸释放抑制作用。 Safinamide 在 MPTP 处理的小鼠、大鼠红藻氨酸模型和沙鼠缺血模型中均具有神经保护和神经修复作用。

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Safinamide，(S)-N2-{4-[(3-氟苄基)氧基]苄基}丙氨酰胺甲磺酸盐，目前正处于抗帕金森病药物 III 期临床试验阶段，通过快速固相合成法制备了一系列烷酰胺类似物，并评估了它们对单胺氧化酶 B (MAO-B) 和单胺氧化酶 A (MAO-A) 的抑制活性和选择性。 (S)-3-氯苄氧基丙氨酰胺 (8) 和 (S)-3-氯苄氧基丝氨酰胺 (13) 衍生物的 MAO-B 抑制活性均强于沙芬酰胺（IC50 分别为 33 nM 和 43 nM，而沙芬酰胺为 98 nM），但其 MAO-B 选择性较低（SI 分别为 3455 和 1967，而沙芬酰胺为 5918）。沙芬酰胺的四氢异喹啉类似物 (R)-21 表现出最高的 MAO-B 抑制活性 (IC50 = 17 nM) 和良好的选择性 (SI = 2941)。结构-亲和力关系和分子对接模拟表明，α-氨基酰胺侧链和苄氧基的对位取代基具有较强的负空间位阻效应，而间位取代基则具有有利的疏水相互作用。包括沙芬酰胺的两种刚性类似物（21）在内的多种R和S α-氨基酰胺对映异构体对MAO-B亲和力的显著差异表明，酶结合位点可能存在对映选择性相互作用。[1]帕金森病（PD）的理想治疗目标是缓解症状并延缓疾病进展。在所有药物中，左旋多巴仍然是缓解症状最有效的药物，但对神经保护药物的医疗需求仍未得到满足。沙芬酰胺目前正处于治疗PD的III期临床试验阶段，它是一种具有多种作用机制和极高治疗指数的独特分子。它结合了对MAO-B的强效、选择性和可逆抑制作用，以及对电压依赖性Na+和Ca2+通道的阻断作用和对谷氨酸释放的抑制作用。沙芬酰胺在MPTP处理的小鼠、大鼠红藻氨酸模型和沙鼠缺血模型中均显示出神经保护和神经修复作用。沙芬酰胺可增强左旋多巴介导的DA水平升高作用（在DA耗竭小鼠中），并逆转6-OHDA损伤大鼠长期左旋多巴治疗后运动反应的减弱。沙芬酰胺具有良好的生物利用度、线性药代动力学，适合每日一次给药。因此，沙芬酰胺可用于帕金森病治疗，以减少左旋多巴的用量，同时也是一种有价值的治疗药物，可用于测试其疾病改善潜力。[2]

C17H19FN2O2.CH4O3S

398.45

398.131

C, 54.26; H, 5.82; F, 4.77; N, 7.03; O, 20.08; S, 8.05

202825-46-5

Safinamide;133865-89-1

3038502

White to off-white solid powder

476.7ºC at 760 mmHg

210° (dec)

242.1ºC

2.98E-09mmHg at 25°C

4.044

127.1

3

7

7

27

438

1

C[C@@H](C(=O)N)NCC1=CC=C(C=C1)OCC2=CC(=CC=C2)F.CS(=O)(=O)O

YKOCHIUQOBQIAC-YDALLXLXSA-N

InChI=1S/C17H19FN2O2.CH4O3S/c1-12(17(19)21)20-10-13-5-7-16(8-6-13)22-11-14-3-2-4-15(18)9-14;1-5(2,3)4/h2-9,12,20H,10-11H2,1H3,(H2,19,21);1H3,(H,2,3,4)/t12-;/m0./s1

(S)-2-((4-((3-fluorobenzyl)oxy)benzyl)amino)propanamide methanesulfonate

PNU-151774E, FCE28073; Safinamide mesylate; Safinamide mesylate; 202825-46-5; (S)-2-((4-((3-Fluorobenzyl)oxy)benzyl)amino)propanamide methanesulfonate; Safinamide mesilate; PNU-151774E; NW-1015; safinamide methanesulfonate; Xadago; NW 1015; PNU 151774E; EMD 1195686; FCE-28073; Safinamide mesilate; FCE 28073; NW1015; NW-1015; EMD-1195686; EMD1195686; PNU-151774E;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: Saline: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。