SSD114 HCl   中文名称: SSD-114盐酸盐

The target of SSD114 HCl is the γ-aminobutyric acid type B (GABAB) receptor, and it acts as a positive allosteric modulator (PAM) of this receptor.
- In cAMP inhibition assay using CHO cells expressing human GABAB1b/GABAB2 receptors (in the presence of 1 μM GABA, a submaximal concentration): EC₅₀ = 0.32 μM [1]
- In [³⁵S]GTPγS binding assay using rat brain membranes (in the presence of 1 μM GABA): EC₅₀ = 0.45 μM [1]
- No significant binding to other receptors (e.g., GABA-A, 5-HT₁A, D₂, M₁ receptors): Ki > 10 μM for all tested non-target receptors [1]

在 10 µM GABA 存在的情况下，25 µM SSD114 盐酸盐可极大地放大仅由 GABA 引起的 [35S]GTPγS 刺激（比基础水平高出约 170%）。添加15和30 µM SSD114盐酸盐后，GABA浓度-反应曲线左移，最高剂量下的最大GABA刺激略有增加。在 15 µM 和 30 µM SSD114 盐酸盐存在下，GABA 的 EC50 分别降低了 2 倍和 2.5 倍；然而，最大刺激 (Emax) 仅在 30 µM 浓度时增加，达到基础值的 161±5.09% [1]。

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1. 增强GABAB受体介导的CHO细胞cAMP抑制：向稳定表达人GABAB1b/GABAB2受体的CHO细胞中，加入SSD114 HCl（0.01–10 μM）及1 μM GABA（亚有效浓度）。SSD114 HCl可剂量依赖性抑制毛喉素诱导的cAMP生成：10 μM SSD114 HCl抑制率达85%，EC₅₀为0.32 μM；单独使用SSD114 HCl（无GABA）时无cAMP抑制效应 [1]
2. 增强大鼠脑膜中GABAB受体的[³⁵S]GTPγS结合：将大鼠脑膜匀浆与SSD114 HCl（0.01–10 μM）及1 μM GABA共孵育。SSD114 HCl可剂量依赖性增加[³⁵S]GTPγS结合（G蛋白激活标志物）：最大结合水平较单独GABA组高60%，EC₅₀为0.45 μM；单独使用SSD114 HCl无显著[³⁵S]GTPγS结合诱导作用 [1]
3. 抑制大鼠海马神经元的兴奋性突触传递：对原代培养14–21天的大鼠海马神经元进行全细胞膜片钳记录。SSD114 HCl（0.1–10 μM）可剂量依赖性降低锥体细胞的兴奋性突触后电流（EPSC）振幅：10 μM SSD114 HCl使EPSC振幅抑制55%。该效应可被GABAB受体拮抗剂SCH50911（10 μM）完全逆转，证实由GABAB受体介导 [1]

SSD114盐酸盐预处理已被证明可以降低翻正反射丧失（LORR）的发生率[F(5,30)=4.55，P<0.005]。事后分析显示，用赋形剂治疗的小鼠和用至少 10 mg/kg 水平的 SSD114 盐酸盐预处理的小鼠之间 LORR 的发生率存在显着差异。通过SSD114盐酸盐预处理可以实现更长的LORR持续时间[F(5,30)=4.81, P<0.005]。根据事后分析，用 10 和 100 mg/kg SSD114 盐酸盐预处理的小鼠组中 LORR 的持续时间明显长于用载体处理的小鼠 [1]。

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1. 小鼠抗焦虑效应（高架十字迷宫实验）：雄性ICR小鼠（20–25 g，6–8周龄）口服SSD114 HCl（3、10、30 mg/kg），给药后60分钟进行高架十字迷宫（EPM，臂长30 cm，高50 cm）测试。30 mg/kg组开放臂停留时间较溶媒对照组增加45%，开放臂进入次数增加30%；总臂进入次数（运动活性指标）无变化，表明无运动抑制 [1]
2. 小鼠抗惊厥效应（戊四氮诱导惊厥）：雄性ICR小鼠腹腔注射SSD114 HCl（10、30、100 mg/kg），30分钟后腹腔注射戊四氮（PTZ，85 mg/kg）诱导惊厥。30 mg/kg组惊厥潜伏期从溶媒组的2.5分钟延长至5.8分钟；100 mg/kg组惊厥发生率从溶媒组的100%降至40%，且30分钟内无死亡 [1]
3. 小鼠镇痛效应（热板实验）：采用雌性ICR小鼠（对热痛更敏感），先测定热板（55±0.5°C）基线潜伏期（排除潜伏期<3秒或>30秒的小鼠）。口服SSD114 HCl（10、30、100 mg/kg）后，于30、60、120分钟测定潜伏期：30 mg/kg组潜伏期从基线5.2秒延长至给药后30分钟的8.5秒；100 mg/kg组延长至12.1秒，效应持续4小时 [1]

1. GABAB受体CHO细胞cAMP抑制实验：将稳定表达人GABAB1b/GABAB2受体的CHO细胞接种于24孔板，培养至80%汇合度。换用无血清DMEM饥饿1小时后，加入SSD114 HCl（0.01–10 μM）+1 μM GABA（或溶媒+GABA）孵育30分钟，再加入毛喉素（10 μM，cAMP诱导剂）孵育15分钟。用0.1 M HCl提取细胞内cAMP，通过竞争性ELISA试剂盒检测浓度。以毛喉素单独组为对照计算抑制率，采用四参数逻辑模型拟合EC₅₀ [1]
2. 大鼠脑膜[³⁵S]GTPγS结合实验：将大鼠脑在冰浴Tris-HCl缓冲液（50 mM，pH7.4，含3 mM MgCl₂、0.2 mM GDP）中匀浆，离心（10,000×g，10分钟，4°C）制备粗制膜。每孔加入膜蛋白（50 μg）、SSD114 HCl（0.01–10 μM）+1 μM GABA+[³⁵S]GTPγS（0.1 nM），总体积200 μL，30°C孵育60分钟。用100 μM GTPγS测定非特异性结合，混合物通过预浸0.5%聚乙烯亚胺的玻璃纤维滤膜过滤，冰浴缓冲液洗涤3次。液体闪烁计数器计数放射性，基于结合增强比计算EC₅₀ [1]

大鼠原代海马神经元培养与电生理记录：取E18–E19大鼠胚胎海马，用0.25%胰酶37°C消化15分钟，吹打制成单细胞悬液。细胞接种于多聚赖氨酸包被的盖玻片（密度5×10⁴细胞/cm²），用含10%胎牛血清、2 mM谷氨酰胺、2% B27的Neurobasal培养基培养。在37°C、5% CO₂条件下培养14–21天后，采用全细胞膜片钳技术在电压钳模式（钳制电位-70 mV）下记录。通过玻璃电极（0.1 ms脉冲，0.1 Hz）刺激Schaffer侧支诱发兴奋性突触后电流（EPSC），稳定记录5分钟后，向记录槽中加入SSD114 HCl（0.1–10 μM），监测EPSC振幅10分钟；随后加入SCH50911（10 μM）验证效应可逆性 [1]

1. Mouse elevated plus maze (EPM) assay: Male ICR mice (20–25 g) were acclimated to the laboratory (12 h light/dark cycle, 22±2°C) for 24 hours. SSD114 HCl was dissolved in 0.5% methylcellulose and administered orally at doses of 3, 10, 30 mg/kg (injection volume: 10 μL/g body weight); the control group received 0.5% methylcellulose. Sixty minutes after dosing, each mouse was placed in the center of the EPM (open arms: 5 cm wide; closed arms: 15 cm high walls) and video-recorded for 5 minutes. Parameters analyzed included: open-arm residence time (%), open-arm entry frequency (%), and total arm entries [1]
2. Mouse PTZ-induced seizure assay: Male ICR mice were randomly divided into 4 groups (n=8/group). SSD114 HCl was dissolved in physiological saline and administered intraperitoneally (10, 30, 100 mg/kg); the control group received saline. Thirty minutes later, PTZ (85 mg/kg, dissolved in saline) was injected intraperitoneally. Mice were observed for 30 minutes, and parameters recorded included: seizure latency (time to first generalized clonic seizure with hindlimb extension), seizure incidence (%), and mortality (%) [1]
3. Mouse hot plate analgesic assay: Female ICR mice were screened for baseline hot plate latency (55±0.5°C) (cut-off time: 30 s). Mice with baseline latency <3 s or >30 s were excluded. SSD114 HCl (10, 30, 100 mg/kg) was administered orally; the control group received 0.5% methylcellulose. Hot plate latency was measured at 30, 60, 120, and 240 minutes post-dosing (cut-off time: 60 s to avoid tissue damage). The latency extension percentage was calculated as [(post-dosing latency - baseline latency)/baseline latency] × 100% [1]
4. Mouse rotarod assay (motor coordination test): Male ICR mice were orally administered SSD114 HCl (30, 100, 300 mg/kg) or vehicle. Sixty minutes later, mice were placed on a rotarod (10 rpm, diameter: 3 cm). The latency to fall from the rotarod was recorded (cut-off time: 180 s) to evaluate motor coordination [1]

1. 小鼠口服药代动力学：雄性ICR小鼠（每时间点n=3）口服SSD114 HCl（30 mg/kg）。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和12小时从尾静脉采集血样（0.2 mL）。血浆经离心（3000×g，10分钟，4°C）分离后，储存于-80°C。SSD114 HCl浓度采用LC-MS/MS法测定。采用非房室模型分析计算药代动力学参数：口服生物利用度 (F) = 42%，Cmax = 2.8 μM，Tmax = 1 小时，末端半衰期 (t₁/₂) = 3.5 小时 [1]
2. 血浆蛋白结合率：将 500 μL 人血浆与 SSD114 HCl (0.1–10 μM) 混合，并使用透析膜（截留分子量：12–14 kDa）在 37°C 下孵育 4 小时。采用 LC-MS/MS 法测定透析液中游离药物浓度。血浆蛋白结合率计算公式为[(总药物浓度 - 游离药物浓度)/总药物浓度] × 100% = 92% [1]
3. 脑渗透：雄性ICR小鼠口服SSD114 HCl（30 mg/kg）。给药1小时后处死小鼠，取脑组织在生理盐水中匀浆（1:1，w/v）。采用LC-MS/MS测定血浆和脑匀浆中的药物浓度。脑/血浆浓度比为0.8，表明药物能有效穿透血脑屏障[1]

1. 小鼠急性毒性：雄性ICR小鼠（n=6）单次口服SSD114 HCl（300 mg/kg，最大测试剂量）。观察小鼠7天，记录死亡率、异常行为（如镇静、共济失调）和体重变化。未观察到死亡或异常行为；体重正常增加（与溶剂对照组相似）。转棒试验显示，300 mg/kg组和溶剂对照组的跌倒潜伏期无显著差异（P > 0.05）[1]
2. 肝肾功能：雄性ICR小鼠每日一次口服SSD114 HCl（30、100 mg/kg）或溶剂，连续7天。在第 8 天，采集血清样本，检测丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)（肝功能指标）、血尿素氮 (BUN) 和肌酐（肾功能指标）。SSD114 HCl 组与溶剂对照组之间，这些指标均无显著差异 (P > 0.05) [1]
3. CYP450 酶抑制：将人肝微粒体与 SSD114 HCl (0.1–100 μM) 以及 CYP1A2、2C9、2C19、2D6 和 3A4 的特异性底物孵育。采用 LC-MS/MS 法测定底物的代谢速率。所有受试 CYP 酶的 IC₅₀ > 100 μM，表明无显著的药物相互作用风险 [1]

[1]. In vitro and in vivo pharmacological characterization of SSD114, a novel GABAB positive allosteric modulator. Eur J Pharmacol. 2016 Nov 15;791:115-123.

1. 背景：SSD114 HCl是一种新型的、选择性的GABAB受体正向变构调节剂（PAM）。与直接激活受体的传统GABAB激动剂（例如巴氯芬）不同，PAM（例如SSD114 HCl）仅在内源性GABA存在的情况下增强受体激活，从而降低过度刺激和副作用的风险[1]。
2. 作用机制：SSD114 HCl与GABAB受体上的变构位点（不同于激动剂结合位点）结合。这种结合诱导受体构象变化，增加其对GABA的亲和力，并增强GABA介导的G蛋白激活（例如，抑制腺苷酸环化酶，激活GIRK通道）。其结果是中枢神经系统中抑制性神经传递增强[1]
3. 潜在适应症：临床前数据表明，SSD114 HCl 具有治疗焦虑症、癫痫（发作）和慢性疼痛的潜力。其抗焦虑作用不伴随运动抑制（EPM 总臂进入次数不变，转棒试验表现正常），这是其优于苯二氮卓类药物（GABA-A 调节剂）的关键优势[1]
4. 受体选择性：SSD114 HCl 对 GABAB 受体具有高度选择性。体外结合试验表明，其对其他神经递质受体（GABA-A、5-HT₁A、D₂、M₁）或离子通道无显著亲和力，从而最大限度地减少了脱靶效应[1]

C18H21CLF3N3O

387.827053785324

387.132

C, 55.75; H, 5.46; Cl, 9.14; F, 14.70; N, 10.83; O, 4.13

2319790-02-6

2319790-02-6

131839612

White to off-white solid powder

47

2

7

4

26

407

0

Cl.FC(C1C=CC(=CC=1)C1=CC(=NC(=N1)NC1CCCCC1)OC)(F)F

YXQSTPASDICGCA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H20F3N3O.ClH/c1-25-16-11-15(12-7-9-13(10-8-12)18(19,20)21)23-17(24-16)22-14-5-3-2-4-6-14;/h7-11,14H,2-6H2,1H3,(H,22,23,24);1H

C18H21ClF3N3OMolecular Weight

SSD114 HCl SSD114 SSD-114 SSD 114 SSD114 hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~130 mg/mL (~335.20 mM)
H2O : ~2 mg/mL (~5.16 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (8.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 32.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 3.25 mg/mL (8.38 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 32.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (8.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 32.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。