Vodobatinib (SCO-088, SUN-K706; K-0706)

别名: Vodobatinib; K-0706; K0706; SCO-088; K0706; Vodobatinib [USAN]; K-0706; N8Q12KU2SW; 2-Chloro-6-methyl-N'-(4-methyl-3-(quinolin-3-ylethynyl)benzoyl)benzohydrazide; K0706; 沃多巴替尼
目录号: V41836 纯度: ≥98%
Vodobatinib (K0706) 是一种有效的第三代口服生物活性 Bcr-Abl1 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)(拮抗剂),IC50 为 7 nM。
Vodobatinib (SCO-088, SUN-K706; K-0706) CAS号: 1388803-90-4
产品类别: Bcr-Abl
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
Vodobatinib (K0706) 是一种有效的第三代口服生物活性 Bcr-Abl1 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)(拮抗剂),IC50 为 7 nM。 Vodobatinib 对大多数 BCR-ABL1 点突变体具有活性,但对 BCR-ABL1T315I 无活性。沃多巴替尼可用于慢性粒细胞白血病 (CML) 研究。沃多巴替尼是一种点击化学剂。它具有炔基,可以与带有叠氮基的化合物发生CuAAc(铜催化叠氮-炔环加成反应)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Bcr-Abl1 tyrosine kinase (IC50 = 7 nM)
体外研究 (In Vitro)
在表达 BCR-ABL1、BCR-ABL1L248V、BCR-ABL1Y253H 或 BCR-ABL1E255V 的 Ba/F3 细胞中,经沃多巴替尼 (K0706;0-2000 nM) 治疗后,BCR-ABL1 酪氨酸自磷酸化受到有效抑制 [1]。
体内研究 (In Vivo)
截至2020年7月15日,31名CP-CML患者接受了剂量为12至240毫克的沃他替尼治疗;波那替尼治疗(PT)队列中有16名患者(9名男性)[7名(44%)波那替尼是TKI的前一名患者],波那替尼初治(PN)队列中则有15名患者(7名男性)。基线人口统计和疾病史如表1所示。[2]
疗效:波那替尼治疗组和初治组的中位治疗时间分别为17.3(0.6-36)个月和14.8(0.5-42)个月;PT组有11名患者[深部分子反应(DMR)2名,MMR 3名;MCyR 5名(CCyR 2名,PCyR 3名);疾病稳定组有1名],PN组有10名患者(DMR 2名,MM 4名,CCyR 3名,疾病稳定组1名)仍在继续治疗。总体疗效结果见表2和表3。[2]
在16名PT患者中,2名(13%)患者(均为双突变)出现了疾病进展。在15名PN患者中,4名(26%)患者(基线突变T315I为48 mg,Y253H为66 mg,F317L和E255V为174 mg)出现进展。
酶活实验
BCR-ABL1激酶结构域的Sanger测序[1]
从表达Ba/F3 BCR-ABL1的裂解物中分离的DNA被用作扩增BCR-ABL 1激酶结构域的模板。使用两步PCR进行扩增(Phusion高保真DNA聚合酶),以排除内源性ABL1。PCR产物在1%琼脂糖凝胶上电泳以确认扩增、纯化和Sanger测序。
细胞实验
细胞增殖IC50测定[1]
用表达p210 BCR-ABL1(MSCV-IRES-GFP)的逆转录病毒感染在RPMI-1640完全培养基 中培养的IL-3依赖性小鼠Ba/F3细胞,该培养基补充了10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素、1%L-谷氨酰胺和WEHI条件培养基中的IL-3。通过提取IL-3进行感染细胞的选择。使用定点突变(QuikChange II XL定点突变试剂盒)引入临床相关的BCR-ABL1点突变。使用磷酸钙转染293FT细胞并收获上清液产生逆转录病毒。Ba/F3 BCR-ABL1和BCR-ABL1-突变体被放置在96孔板(2x103个细胞/孔)中,并与指定的抑制剂一起孵育72小时。抑制剂浓度:K0706、尼罗替尼、达沙替尼、博舒替尼和波那替尼(0、4.9、9.8、19.5、39.1、78.1、156.3、315.5、625、1250、2500和5000 nmol/L);在(0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.1、6.3、12.5、25、50、10和200 nmol/L)下重新测试原始筛选的敏感细胞系(IC50≤3)。使用基于甲硫磺酸(MTS)的存活率测定法(CellTiter 96 AQueous One Solution,Promega)测量增殖。IC50值为四次独立实验的平均值。
BCR-ABL1酪氨酸磷酸化免疫印迹分析[1]
将表达天然和突变BCR-ABL1的Ba/F3细胞铺在24孔板(2x106个细胞/孔)中,并在1 mL RPMI完全培养基中培养4小时,其中TKI的滴定浓度为(0、15.6、32.3、62.5、125、250、500、1000和2000 nmol/L)。用冷PBS洗涤细胞,并在冰上含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物的M-PER(哺乳动物蛋白质提取试剂)中裂解10分钟。样品在补充有2-巯基乙醇的SDS-Page加载缓冲液(2x Laemmli样品缓冲液)中以1:1稀释,并在95°C下煮沸10分钟变性。裂解物在4-20%Tris-Glycine(Mini-PROTEAN TGX)梯度凝胶上分离,转移并用抗c-Abl(Ab-3)小鼠单克隆抗体(24-21)、抗磷酸化c-Abl(Tyr204)(C42B5)兔单克隆抗体和抗β-肌动蛋白(D6A8)兔mAb进行免疫印迹。
基于细胞的耐药性测定[1]
用N-乙基-N-亚硝基脲(ENU,50μg/mL)处理天然表达BCR-ABL1的Ba/F3细胞过夜,造粒,重新悬浮在新鲜RPMI完全培养基中,并在96孔板(1.25x105个细胞/孔)中铺板,补充五倍的分级浓度K0706(400、800、1600和3200 nmol/L)。ENU用硫代硫酸钠(20%w/v)和氢氧化钠(100mmol/L)灭活过夜,并按照方案安全处置。在30天内,每两天使用显微镜目视监测井的生长情况。从每个处理组中随机选择50个生长菌落,并在含有与原始96孔板相同浓度K0706的24孔板中扩增。通过离心收集24孔板中的扩增细胞,并将其储存在-80°C下。
动物实验
本研究采用3+3设计,评估了沃多巴替尼(每日一次)在28天周期内多次递增剂量的疗效。主要目标是确定最大耐受剂量(MTD)或II期推荐剂量(RP2D)以及安全性,次要目标是评估其抗白血病活性。剂量递增方案为剂量加倍,直至某一队列中有2例患者出现2级毒性反应,或1例患者出现3级或4级毒性反应,之后剂量递增幅度减至40%。治疗持续至出现不可接受的毒性反应、疾病进展(PD)、患者撤回知情同意或死亡。[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在接受帕纳替尼治疗的患者中,最常见的治疗期间出现的不良事件(TEAE)(所有级别)包括恶心(4例,25%)和腹泻(3例,25%)。其他常见的TEAE包括血小板减少症(3例,19%)、皮疹(3例,19%)、非心脏性胸痛(3例,19%)、淀粉酶升高(3例,19%)和跌倒(3例,19%)。10例(63%)患者报告了≥3级的TEAE,包括贫血、淋巴细胞减少症、跌倒、颅骨骨折、脊柱骨折、脂肪酶升高、体液超负荷、晕厥、呼吸困难和高血压各1例。沃多巴替尼相关不良事件包括淀粉酶升高、脂肪酶升高、呼吸困难、体液超负荷、血小板减少症和中性粒细胞减少症。在超过一名患者中报告的≥3级治疗期间出现的不良事件包括中性粒细胞减少症(2例,13%)、淀粉酶升高(2例,13%)和血小板减少症(2例,13%)。[2]
在PN患者中,最常报告的治疗期间出现的不良事件(所有级别)包括肌痛(5例,33%)和背痛(4例,27%)。其他常见的治疗期间出现的不良事件包括血小板减少症(4例,27%)和鼻咽炎(3例,20%)。 7 例(47%)患者报告了 ≥ 3 级治疗期间出现的不良事件 (TEAE)(1 例贫血,1 例肺炎,1 例中性粒细胞减少症,1 例痛风,1 例低钾血症,1 例血小板减少症,1 例肝酶和胰酶升高,以及各 1 例痴呆和 1 例遗忘症)。与沃多巴替尼相关的 AE 包括丙氨酸氨基转移酶升高、血胆红素升高、遗忘症、中性粒细胞减少症和血小板减少症。没有 ≥ 3 级事件在超过 1 例患者中报告。[2]
总体而言,2 例患者(PT 组和 PN 组各 1 例)报告了 3 例心血管 TEAE,均被认为与沃多巴替尼无关。研究期间有 3 例患者死亡:PT 组 1 例死于疾病进展;1 例死于肺炎(疑似 COVID-19);1 例死于…… PN组出现颅内出血。该颅内出血事件(5级不良事件)被认为可能与疾病进展至髓外急变期有关,并受到疾病进展至髓外病灶的影响。在最高剂量240 mg下,报告了两例剂量限制性毒性。下一个较低剂量水平204 mg被确定为最大耐受剂量(MTD),在既往接受过大量治疗的慢性期慢性粒细胞白血病(CP-CML)患者中具有良好的安全性。[2]
参考文献

[1]. BCR-ABL1 tyrosine kinase inhibitor K0706 exhibits preclinical activity in Philadelphia chromosome-positive leukemia. Exp Hematol. 2019 Sep;77:36-40.e2.

[2]. Phase 1 Trial of Vodobatinib, a Novel Oral BCR-ABL1 Tyrosine Kinase Inhibitor (TKI): Activity in CML Chronic Phase Patients Failing TKI Therapies Including Ponatinib. Session: 632: Chronic Myeloid Leukemia: Therapy: CML: New and Beyond.

其他信息
沃多巴替尼是一种口服生物利用度高的Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂(TKI),具有潜在的抗肿瘤活性。给药后,沃多巴替尼选择性地靶向并结合Bcr-Abl融合癌蛋白,包括各种Bcr-Abl突变体,例如携带“守门员”耐药突变T315I的突变体。这抑制了表达Bcr-Abl的肿瘤细胞的增殖。Bcr-Abl融合蛋白是由某些白血病细胞产生的一种异常激活的酪氨酸激酶。T315I是Bcr-Abl融合蛋白酪氨酸蛋白激酶ABL1部分第315位氨基酸由苏氨酸(T)突变为异亮氨酸(I)的氨基酸替换,在对某些化疗药物的耐药性中起关键作用,其表达与不良预后相关。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C27H20CLN3O2
分子量
453.919605255127
精确质量
453.124
元素分析
C, 71.44; H, 4.44; Cl, 7.81; N, 9.26; O, 7.05
CAS号
1388803-90-4
PubChem CID
89884852
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
748.6±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
406.5±32.9 °C
蒸汽压
0.0±2.5 mmHg at 25°C
折射率
1.701
LogP
5.73
tPSA
71.1
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
33
分子复杂度/Complexity
774
定义原子立体中心数目
0
SMILES
ClC1=CC=CC(C)=C1C(NNC(C1C=CC(C)=C(C#CC2=CN=C3C=CC=CC3=C2)C=1)=O)=O
InChi Key
ZQOBVMHBVWNVBG-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C27H20ClN3O2/c1-17-10-12-22(26(32)30-31-27(33)25-18(2)6-5-8-23(25)28)15-20(17)13-11-19-14-21-7-3-4-9-24(21)29-16-19/h3-10,12,14-16H,1-2H3,(H,30,32)(H,31,33)
化学名
2-chloro-6-methyl-N'-[4-methyl-3-(2-quinolin-3-ylethynyl)benzoyl]benzohydrazide
别名
Vodobatinib; K-0706; K0706; SCO-088; K0706; Vodobatinib [USAN]; K-0706; N8Q12KU2SW; 2-Chloro-6-methyl-N'-(4-methyl-3-(quinolin-3-ylethynyl)benzoyl)benzohydrazide; K0706;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~125 mg/mL (~275.38 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.58 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.2030 mL 11.0152 mL 22.0303 mL
5 mM 0.4406 mL 2.2030 mL 4.4061 mL
10 mM 0.2203 mL 1.1015 mL 2.2030 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
PROSEEK: A Phase 2 Study In Early Parkinson's Disease Patients Evaluating The Safety And Efficacy Of Abl Tyrosine Kinase Inhibition Using K0706
CTID: NCT03655236
Phase: Phase 2
Status: Terminated
Date: 2024-07-18
Safety and Tolerability Study of K0706 in Subjects With Parkinson's Disease
CTID: NCT02970019
Phase: Phase 1
Status: Completed
Date: 2020-03-31
To Evaluate the Safety, Tolerability and Pharmacokinetics of K0706 in Plasma and Cerebrospinal Fluid in Healthy Volunteers
CTID: NCT03445338
Phase: Phase 1
Status: Completed
Date: 2020-01-14
Bioavailability Study of K0706 in Healthy Subjects
CTID: NCT03316820
Phase: Phase 1
Status: Completed
Date: 2019-05-03
A Phase 2, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Study of K0706 in Subjects With Early Parkinson’s Disease
EudraCT: 2018-003337-15
Phase: Phase 2
Status: Ongoing, Prematurely Ended
Date: 2019-06-18
A Two-Part Phase 1/2 Study to Determine Safety, Tolerability, Pharmacokinetics, and Activity of K0706, a Novel Tyrosine Kinase Inhibitor (TKI), in Healthy Subjects and in Subjects with Chronic Myeloid Leukemia (CML) or Philadelphia Chromosome Positive Acute Lymphoblastic Leukemia (Ph+ ALL)
EudraCT: 2016-001754-18
Phase: Phase 1, Phase 2
Status: GB - no longer in EU/EEA, Ongoing, Temporarily Halted, Completed, Prematurely Ended
Date: 2017-06-07
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