Afatinib (BIBW2992) 中文名称: 阿法替尼

别名: BIBW2992; Afatinib free base; BIBW 2992; BIBW 2992; Afatinib; trade name: Gilotrif, Tomtovok and Tovok 阿法替尼; 阿法替尼杂质; 阿法替尼 BIBW2992; 阿法替尼-D4;阿法替尼标准品; 马来酸阿法替尼;N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺

目录号: V0536 纯度: ≥98%

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阿法替尼（原 BIBW 2992；BIBW-2992；商品名：Gilotrif）是一种有效的、共价/不可逆的、口服生物利用的双 (EGFR/ErbB) 受体酪氨酸激酶 (RTK) 抑制剂，具有抗癌活性。

Afatinib (BIBW2992) CAS号: 850140-72-6
产品类别: EGFR

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

规格	价格	库存	数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
50mg
100mg
250mg
500mg
1g
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Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

顾客使用InvivoChem 产品Afatinib (BIBW2992)发表1篇科研文献

[1] Clin Exp Metastasis. 2024 Feb 17.

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产品描述

阿法替尼（原 BIBW 2992；BIBW-2992；商品名：Gilotrif）是一种有效的、共价/不可逆的、口服生物利用的双 (EGFR/ErbB) 受体酪氨酸激酶 (RTK) 抑制剂，具有抗癌活性。阿法替尼是 FDA 批准的用于治疗非小细胞肺癌 (NSCLC) 的抗癌药物。它在美国以 Gilotrif 品牌销售。它不可逆地结合并抑制 EGFR/HER2，包括 EGFR(wt)、EGFR(L858R)、EGFR(L858R/T790M) 和 HER2，在无细胞测定中 IC50 分别为 0.5 nM、0.4 nM、10 nM 和 14 nM；对吉非替尼耐药的 L858R-T790M EGFR 突变体的活性高 100 倍。

生物活性&实验参考方法

靶点	EGFR_L858R (IC50 = 0.4 nM); EGFR (wt) (IC50 = 0.5 nM); ErbB4 (IC50 = 1 nM); EGFR_L858R/T790M (IC50 = 10 nM); HER2 (IC50 = 14 nM)
体外研究 (In Vitro)	体外活性：BIBW2992 对野生型和突变型 EGFR 和 HER2 均显示出有效的活性。它针对 L858R EGFR 的效力与吉非替尼相似，但针对吉非替尼耐药的 L858R-T790M EGFR 双突变体的活性高出约 100 倍。 BIBW2992 对体内 EGFR 和 HER2 磷酸化表现出有效的作用。在所有测试的细胞类型中，例如表达 wt EGFR 的人表皮样癌细胞系 A431、转染 wt HER2 的鼠 NIH-3T3 细胞以及乳腺癌细胞系 BT，其与参考化合物（例如 Lapatinib 等）相比均具有优势-474和胃癌细胞系NCI-N87，表达内源性HER2。激酶测定：将人 EGFR 的野生型酪氨酸激酶结构域以及 EGFR L858R/T790M 双突变体的酪氨酸激酶结构域与谷胱甘肽-S-转移酶 (GST) 融合并提取。然后在抑制剂 BIBW2992（在 50% DMSO 中连续稀释）存在的情况下测定酶活性。使用随机聚合物 pEY (4:1) 作为底物，并添加生物素化 pEY (bio-pEY) 作为示踪底物。使用杆状病毒系统克隆 HER2 的激酶结构域，并以与 EGFR 激酶类似的方式进行提取。补充信息中提供了 EGFR、HER2、SRC、BIRK 和 VEGFR2 激酶活性测定的详细信息。细胞测定：将 1 × 104 个 NSCLC 细胞转移至 96 孔板的每个孔中，并在无血清培养基中培养过夜，用于 EGFR 磷酸化测定。第二天添加 BIBW2992 后，将板在 37°C 下孵育 1 小时。 EGF 刺激使用 100 ng/mL 在室温下进行 10 分钟。用冰冷的 PBS 洗涤细胞，每孔用 120 μL HEPEX 缓冲液提取，并在室温下摇动 1 小时。每孔全部 2 × 104 个细胞用于 HER2 磷酸化测定。链霉亲和素预包被板用封闭缓冲液中 1:100 稀释的抗 EGFR-生物素和 c-erb2/HER2 癌蛋白 Ab-5（克隆 N24）-生物素包被。然后将细胞提取物转移至抗体包被的孔中并在室温下孵育1小时。消光在 450 nm 处测量。
体内研究 (In Vivo)	每日口服 20 mg/kg 的 BIBW2992 持续 25 天可导致肿瘤显着消退，累积治疗/对照肿瘤体积比（T/C 比）为 2%。通过组织切片的免疫组织化学染色证实 EGFR 和 AKT 磷酸化的减少。因此，与拉帕替尼和来那替尼一样，BIBW2992是下一代酪氨酸激酶抑制剂（TKI），可不可逆地抑制人表皮生长因子受体2（Her2）和表皮生长因子受体（EGFR）激酶。 BIBW2992 不仅能有效对抗厄洛替尼或吉非替尼等第一代 TKI 靶向的 EGFR 突变，还能对抗那些对这些标准疗法不敏感的患者。
酶活实验	将人 EGFR 野生型和 EGFR L858R/T790M 双突变酪氨酸激酶结构域与 GST 融合并提取。接下来，在使用和不使用抑制剂 BIBW2992 的情况下测量酶活性，BIBW2992 在 50% DMSO 中连续稀释。添加生物素化 pEY (bio-pEY) 作为示踪底物，并使用随机聚合物 pEY (4:1) 作为底物。利用杆状病毒系统，以类似于 EGFR 激酶的方式克隆和提取 HER2 激酶结构域。补充信息包含有关 EGFR、HER2、SRC、BIRK 和 VEGFR2 激酶活性检测的具体信息。
细胞实验	对于 EGFR 磷酸化测试，将 1 × 10⁴ NSCLC 细胞接种到 96 孔板的每个孔中，并在无血清培养基中生长整夜。第二天，添加 BIBW2992 后，将板在 37°C 下孵育一小时。 EGF 刺激在室温下使用 100 ng/mL 进行 10 分钟。在室温下振荡一小时并使用每孔 120 μL HEPEX 缓冲液提取后，用冰冷的 PBS 清洗细胞。 HER2 磷酸化检测每孔总共使用 2 × 10⁴ 细胞。 c-erb2/HER2 癌蛋白 Ab-5（克隆 N24）-生物素和抗 EGFR-生物素以 1:100 稀释在封闭缓冲液中包被在链霉亲和素预包被板上。一旦进入抗体包被的孔中，细胞提取物就可以在室温下静置一小时。消光测量发生在 450 nm 处。
动物实验	Athymic NMRI-nu/nu female mice 20 mg/kg Oral administration
参考文献	[1]. Oncogene . 2008 Aug 7;27(34):4702-11. [2]. Expert Opin Investig Drugs . 2014 Jan;23(1):135-43.

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C24H25CLFN5O3
分子量	485.94
精确质量	485.16
元素分析	C, 59.32; H, 5.19; Cl, 7.30; F, 3.91; N, 14.41; O, 9.88
CAS号	850140-72-6
相关CAS号	Afatinib dimaleate;850140-73-7;Afatinib-d6;1313874-96-2;Afatinib oxalate;1398312-64-5;(R)-Afatinib;439081-17-1;Afatinib-d4
外观&性状	White to light yellow solid powder
SMILES	CN(C)C/C=C/C(=O)NC1=C(C=C2C(=C1)C(=NC=N2)NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)O[C@H]4CCOC4
InChi Key	ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N
InChi Code	InChI=1S/C24H25ClFN5O3/c1-31(2)8-3-4-23(32)30-21-11-17-20(12-22(21)34-16-7-9-33-13-16)27-14-28-24(17)29-15-5-6-19(26)18(25)10-15/h3-6,10-12,14,16H,7-9,13H2,1-2H3,(H,30,32)(H,27,28,29)/b4-3+/t16-/m0/s1
化学名	(E)-N-[4-(3-chloro-4-fluoroanilino)-7-[(3S)-oxolan-3-yl]oxyquinazolin-6-yl]-4-(dimethylamino)but-2-enamide
别名	BIBW2992; Afatinib free base; BIBW 2992; BIBW 2992; Afatinib; trade name: Gilotrif, Tomtovok and Tovok
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外)

DMSO: ~97 mg/mL (~199.6 mM)

Water: <1 mg/mL

Ethanol: ~15 mg/mL (~30.9 mM)

溶解度 (体内)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 10 mg/mL

配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (10.29 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.0579 mL	10.2893 mL	20.5787 mL
	5 mM	0.4116 mL	2.0579 mL	4.1157 mL
	10 mM	0.2058 mL	1.0289 mL	2.0579 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息

NCT Number	Recruitment	interventions	Conditions	Sponsor/Collaborators	Start Date	Phases
NCT05154396	Active Recruiting	Drug: Afatinib	Chordoma	Leiden University Medical Center	June 21, 2018	Phase 2
NCT03827070	Active Recruiting	Drug: Afatinib Drug: Talcum powder	Non Small Cell Lung Cancer	Center Trials & Treatment Europe	March 5, 2019	Phase 1
NCT04413201	Active Recruiting	Drug: Afatinib Drug: Osimertinib	Non-squamous NSCLC	Michael Hopp	September 11, 2020	Phase 4
NCT05267288	Recruiting	Drug: afatinib	PFS	Qingdao Central Hospital	February 1, 2021	Phase 2
NCT05519917	Not yet recruiting	Drug: Afatinib	Chordoma of Clivus	Huashan Hospital	October 1, 2022	Phase 2

生物数据图片

Afatinib (BIBW2992)

Afatinib covalently binds to cysteine number 797 of the epidermal growth factor receptor (EGFR) via a Michael addition (IC50 = 0.5 nM).Schubert-Zsilavecz, M, Wurglics, M,Neue Arzneimittel Frühjahr 2013.(in German)