Dehydrocorydaline is an effective acetylcholinesterase (AChE) inhibitor with an IC50 of 0.62 µM. [1]
p38 mitogen-activated protein kinases (MAPK) (activation)[2]

MTT实验表明，Dehydrocorydaline 能以剂量依赖方式显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖。使用200 µM浓度处理24小时后，细胞活力下降约40%。[1]
Dehydrocorydaline (200 µM) 诱导的细胞毒性作用可被caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK (10 µM) 共孵育所逆转。[1]
Dehydrocorydaline 诱导了MCF-7细胞凋亡，表现为DNA片段化随时间增加（在24、48和72小时观察到），尤其是在200 µM处理72小时后最为明显。[1]
Hoechst 33342染色显示，用200 µM Dehydrocorydaline 处理MCF-7细胞（24、48、72小时）后，细胞核荧光增强，并出现凋亡形态学变化（染色质浓缩、细胞核皱缩）。[1]
JC-1染色实验表明，用 Dehydrocorydaline (0-200 µM，处理1小时) 处理并未显著改变MCF-7细胞的线粒体膜电位 (ΔΨm)。[1]
蛋白质印迹分析表明，Dehydrocorydaline 处理（0-200 µM，24小时）能剂量依赖性地增加促凋亡蛋白Bax的表达，并降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。[1]
蛋白质印迹分析还显示，Dehydrocorydaline 处理诱导了caspase-7和caspase-8的活化（切割）以及PARP的切割，但不影响caspase-9的切割。[1]
Dehydrocorydaline 处理显著提高了切割型caspase-7与总caspase-7的比值。[1]
用脱氢紫堇碱 (125-500 nM) 处理 C2C12 成肌细胞，以剂量依赖的方式增加了肌肉特异性蛋白（包括 MyoD、肌细胞生成素和肌球蛋白重链 (MHC)）的表达水平。[2]
脱氢紫堇碱处理增强了 C2C12 细胞中多核肌管的形成，与对照组相比，含有 ≥10 个细胞核的肌管数量显著增加。[2]
脱氢紫堇碱 (500 nM) 提高了分化中 C2C12 成肌细胞的磷酸化 p38 MAPK (p-p38) 水平，表明 p38 MAPK 通路被激活。[2]
脱氢紫堇碱处理增强了 C2C12 成肌细胞、10T1/2 成纤维细胞和 293T 细胞中 MyoD 与 E 蛋白 E2A 的相互作用（异源二聚化），这通过免疫共沉淀实验证实。[2]
脱氢紫堇碱 (500 nM) 对 C2C12 成肌细胞的增殖没有显著影响，这是通过 BrdU 掺入实验评估的。[2]
在通过 shRNA 敲低促肌原性受体 Cdo 的 C2C12 细胞中，脱氢紫堇碱处理挽救了有缺陷的成肌细胞分化，表现为 MHC、MyoD、肌细胞生成素和 p-p38 的表达恢复，以及肌管形成的改善。[2]

MTT实验： 将MCF-7细胞以每孔1 x 10⁴个细胞的密度接种于96孔板中。用不同浓度的 Dehydrocorydaline (0至200 µM) 处理细胞24小时。处理后，使用MTT试剂测定细胞活力。为研究caspase-8的作用，细胞用 Dehydrocorydaline (200 µM) 和caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK (10 µM) 共处理。[1]
JC-1染色检测线粒体膜电位 (ΔΨm)： 用不同浓度的 Dehydrocorydaline (0, 50, 100, 200 µM) 处理MCF-7细胞1小时。处理后，用终浓度为2.5 µg/mL的荧光探针JC-1染色10分钟。使用荧光显微镜观察并拍摄荧光（红/绿）以评估ΔΨm。[1]
Hoechst 33342染色检测核形态： 用200 µM Dehydrocorydaline 处理MCF-7细胞24、48或72小时。处理后，移除培养基，用终浓度为1 µg/mL的Hoechst 33342染料染色20分钟。使用荧光显微镜拍摄染色细胞核的图像，以观察染色质浓缩和凋亡小体。[1]
DNA片段化（DNA Ladder）实验： 用不同浓度的 Dehydrocorydaline (0-200 µM) 处理后，收集MCF-7细胞 (1 x 10⁶个)。细胞沉淀在含有Tris-HCl、EDTA、Triton X-100和蛋白酶K的裂解液中于37°C裂解2小时。采用盐和异丙醇沉淀法提取DNA，于-20°C孵育过夜，离心，用乙醇洗涤，并溶解于缓冲液中。随后，DNA用RNase处理，通过1%琼脂糖凝胶电泳分离，并用溴化乙锭染色，以可视化指示凋亡的特征性DNA ladder条带。[1]
蛋白质印迹分析： 收集经 Dehydrocorydaline 处理的细胞，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解。离心裂解物并测定蛋白浓度。等量蛋白 (40 µg) 通过SDS-PAGE分离并转印至PVDF膜上。膜在4°C下与针对Bax、Bcl-2、总caspase-7、切割型caspase-7、切割型caspase-8、切割型caspase-9、PARP以及β-肌动蛋白（作为上样对照）的一抗孵育过夜。与适当的二抗孵育后，使用增强化学发光检测试剂盒显示蛋白条带。使用光密度分析软件对条带强度进行定量。[1]
肌源性分化与蛋白表达： C2C12 成肌细胞在生长培养基中培养，然后通过更换为含有 2% 马血清的分化培养基来诱导分化。在分化过程中（2 或 3 天），用不同浓度（125, 250, 500 nM）的脱氢紫堇碱或载体（DMSO）处理细胞。收集细胞裂解物，并使用针对 MHC、MyoD、肌细胞生成素、Cdo、磷酸化 p38 (p-p38)、总 p38 的抗体进行蛋白质印迹分析，以 pan-cadherin 作为上样对照。[2]
肌管形成的免疫细胞化学： 用脱氢紫堇碱 (125, 250, 500 nM) 或 DMSO 处理 C2C12 细胞，并诱导分化 3 天。细胞固定、透化后，用抗 MHC 抗体进行免疫染色，再用 Alexa Fluor 594 偶联的二抗孵育。细胞核用 DAPI 复染。通过计算每个 MHC 阳性细胞所含的细胞核数量来量化肌管形成，分类为单核、2-5 个核、6-9 个核或 ≥10 个核。[2]
p-p38 的免疫细胞化学： 用 500 nM 脱氢紫堇碱或 DMSO 处理 C2C12 细胞，并诱导分化 1 天。细胞固定、透化、封闭后，用抗 p-p38 抗体孵育，再用 Alexa Fluor 594 偶联的二抗孵育。细胞核用 DAPI 染色。通过共聚焦显微镜捕获荧光信号并进行定量。[2]
MyoD-E2A 相互作用的免疫共沉淀： 用 MyoD 表达载体转染 293T 或 10T1/2 细胞。24 小时后，用 500 nM 脱氢紫堇碱或 DMSO 再处理细胞 24 小时。制备全细胞提取物，使用结合在 protein G 琼脂糖珠上的抗 E2A 抗体进行免疫共沉淀。然后使用抗 MyoD 和抗 E2A 抗体对免疫沉淀物进行蛋白质印迹分析。[2]
增殖的 BrdU 掺入实验： C2C12 细胞在生长培养基中培养，并用 500 nM 脱氢紫堇碱或 DMSO 处理 24 小时。向培养基中加入 BrdU 孵育 30 分钟。然后固定细胞，用抗 BrdU 抗体进行免疫染色，再用 FITC 偶联的二抗孵育。细胞核用 DAPI 染色。量化 BrdU 阳性细胞的百分比。[2]
Cdo 敲低细胞中的挽救实验： 用对照 (pSuper) 或 Cdo 特异性 shRNA 载体转染 C2C12 细胞，建立 Cdo 表达降低的稳定细胞系。然后用 500 nM 脱氢紫堇碱或 DMSO 处理这些细胞，并诱导分化 2-3 天。通过肌肉标志物和 p-p38 的蛋白质印迹分析，以及 MHC 阳性肌管形成的免疫细胞化学来评估分化程度。[2]

[1]. Dehydrocorydaline inhibits breast cancer cells proliferation by inducing apoptosis in MCF-7 cells. Am J Chin Med. 2012;40(1):177-85.

[2]. Dehydrocorydaline promotes myogenic differentiation via p38 MAPK activation. Mol Med Rep. 2016 Oct;14(4):3029-36.

[3]. Screening of a library of traditional Chinese medicines to identify anti-malarial compounds and extracts. Malar J. 2018 Jun 25;17(1):244. doi: 10.1186/s12936-018-2392-4.

Dehydrocorydaline is an isoquinoline alkaloid isolated from the traditional Chinese herb Corydalis yanhusuo W.T. Wang. [1]
It has been reported to possess various bioactivities, including adrenergic neuron blocking action, anti-inflammatory effects, aldose reductase inhibitory activity, anthelmintic potential, and AChE inhibitory activity. [1]
This study is the first report on the anti-proliferative effect of Dehydrocorydaline on tumor cells (MCF-7 breast cancer cells). [1]
The proposed mechanism for its anti-proliferative effect involves the induction of apoptosis through the extrinsic pathway, characterized by regulation of Bax/Bcl-2 ratio, activation of caspase-7 and caspase-8, cleavage of PARP, and without affecting mitochondrial membrane potential or caspase-9. [1]
Dehydrocorydaline is an isoquinoline alkaloid isolated from the medicinal plant Corydalis tuber (Corydalis turtschaninovii).[2]
It was identified through a screening of natural compounds from Corydalis tuber for activators of MyoD-responsive reporters and inducers of MHC expression in myoblasts.[2]
The proposed mechanism of action is that dehydrocorydaline activates the p38 MAPK pathway. Activated p38 MAPK phosphorylates E proteins, enhancing their heterodimerization with the myogenic transcription factor MyoD. This active MyoD/E-protein complex then promotes the expression of muscle-specific genes, leading to enhanced myoblast differentiation and myotube formation.[2]
The study suggests that dehydrocorydaline may have potential therapeutic application in improving muscle regeneration for conditions involving muscle atrophy.[2]

C22H24NO4+.NO3-

428.43516

428.158

13005-09-9

Dehydrocorydaline;30045-16-0;Dehydrocorydaline chloride;10605-03-5

92043243

Yellow to orange solid powder

3.977

109.68

0

7

4

31

522

0

CZZFYGAXGATDNG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H24NO4.NO3/c1-13-15-6-7-18(24-2)22(27-5)17(15)12-23-9-8-14-10-19(25-3)20(26-4)11-16(14)21(13)23;2-1(3)4/h6-7,10-12H,8-9H2,1-5H3;/q+1;-1

2,3,9,10-tetramethoxy-13-methyl-5,6-dihydroisoquinolino[2,1-b]isoquinolin-7-ium;nitrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~116.70 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。