Sp-8-Br-cAMPS

PKA (EC50 = 360 nM); cAMP analog

Sp-8-Br-cAMPS (0-100 nM) 可抑制嗜线虫病菌 (X. nematophila) 和枯草芽孢杆菌 (B. subtilis) 的吞噬作用，但不影响每种血细胞类型的细菌数量[1]。Sp-8-Br-cAMPS (0-1000 μM) 剂量依赖性地通过激活 PKA 抑制葡萄球菌肠毒素 B (SEB) 诱导的 T 细胞活化和细胞因子 IFN-γ、TNF-α、IL-2 和 IL-4 的表达[2]。

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PKA激活剂以浓度依赖的方式严重损害了嗜线虫X.的吞噬作用（图3a），而枯草芽孢杆菌的抑制作用仅在高浓度下发生（图3b）。附着任何一种细菌的颗粒细胞水平也降低了。尽管嗜线虫X.的浆细胞水平下降，但枯草芽孢杆菌的水平没有变化。酶激活剂不影响每种血细胞类型的细菌数量（X.嗜线虫：对照，1.7±0.3个细菌/浆细胞，2.1±0.3个菌/颗粒细胞；100 nmol/LSp-8-Br-cAMPS，1.3±0.2个细菌/血浆细胞，1.9±0.3个杆菌/颗粒细胞[P>0.05]；枯草芽孢杆菌：对照，2.0±0.4个细菌/血细胞，1.7±0.3/颗粒细胞，100 nmol/L Sp-8-Br cAMPS，1.4±0.3个菌株/浆细胞、1.2±0.2个菌/粒细胞[P>0.05]）。然而，检测到每种血细胞类型的细菌数量持续下降。将血细胞与50 nmol/L PKA激活剂和越来越多的PKA抑制剂共同孵育，可以提高两种细菌的颗粒细胞和浆细胞水平（图4）。[1]

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PKA调节剂本身会影响血细胞蛋白的释放。酶抑制剂浓度的增加会增加蛋白质的释放，而激活剂浓度的增加则会损害蛋白质的释放（图5b）。Rp-8-Br-cAMPS抵消了PKA激活剂Sp-8-Br-McAMPS对蛋白质释放的抑制。[1]

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cAMP和PKA I型抑制SEB诱导的T细胞活化和IFN-γ的表达[2]
为了探索cAMP和PKA I型对免疫激活早期功能事件的可能影响，我们在用超抗原SEB激活PBMC 6小时后测量了激活标志物CD69的表达和IFN-γ的产生。在PKA激动剂单独存在或不存在的情况下，通过流式细胞术测量CD69和IFN-α的表达。将细胞与cAMP类似物预孵育1小时，以使化合物扩散，然后用SEB激活。然后在用SEB激活后1小时加入布雷菲尔丁A，并将培养物孵育5小时以积累细胞因子。 与对照组相比，CD3+T细胞中CD69和IFN-γ的表达在与250μMSp-8-Br-cAMPS（激动剂）预孵育后显著降低（图1，a和b）。为了阐明这种抑制的细胞因子产生是通过与TCR/CD3和脂筏相关的PKA I型还是PKA II型介导的，PKA II的定位主要局限于淋巴细胞的核周和高尔基中心体区域（17），我们用250μM Sp-8-Br-cAMPS与1000μM PKA I类选择性拮抗剂Rp-8-Br-cAMPS联合预孵育细胞（图1，c）。拮抗剂几乎完全逆转了激动剂的抑制作用，表明cAMP在早期T细胞活化中的抑制作用主要是由于PKA I型的活化。拮抗剂单独对CD69和IFN-γ的表达没有影响（图1d）。

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cAMP和PKA I型的抑制作用不是由于细胞凋亡[2]
为了研究cAMP和PKA I型的抑制作用是否是由于诱导凋亡引起的，我们通过流式细胞术在正向和侧向散射上评估了未刺激和SEB刺激的PBMC在与1000μM Sp-8-Br-cAMPS预孵育和未与布雷菲丁A预孵育的最后5小时的形态。将培养物孵育6至48小时的不同时间段，在cAMP类似物存在的情况下，没有表现出凋亡的形态学变化特征，前向散射减少，侧向散射增加（数据未显示）。此外，在相同的实验条件下，还通过Annexin VFITC标记评估了细胞凋亡（图2显示了培养24小时）。cAMP激动剂在静息（图2，a和b）或活化培养物（图2、c和d）中没有诱导膜联蛋白V结合作为凋亡细胞标志的任何显著增加。相比之下，用作对照的茴香霉素（图2，e和f）在未刺激和活化的培养物中诱导了细胞凋亡并增加了膜联蛋白V的结合。通过碘化丙啶排除法获得了类似的数据（数据未显示）。

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cAMP和PKA I型抑制SEB诱导的IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4[2] 为了检查cAMP和PKA I型对IFN-γ表达的影响是否是特异性的，我们测量了在SEB激活PBMC后，随着Sp-8-Br-cAMPS浓度的增加，各种细胞因子的表达。我们发现，cAMP类似物以浓度依赖的方式降低了所有检测到的细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4）的表达（图3a），尽管cAMP类似物对抑制的敏感性因细胞因子而异。在所有情况下，cAMP介导的抑制作用可被PKA I型选择性拮抗剂Rp-8-Br-cAMPS逆转。接下来，我们测量了细胞因子积累期较长时细胞因子表达的抑制水平，以观察这种作用是否是短暂的。进行了5、15和25小时的累积期，在所有这些时间点，抑制水平都是持续的，并且具有浓度依赖性（数据未显示）。

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cAMP和PKA I型独立于APC抑制CD4和CD8 T细胞活化[2]
为了进一步解决cAMP在抑制免疫激活中影响哪个T细胞室的问题，我们研究了cAMP和PKA I型对CD4和CD8 T细胞的影响。如图5、a和b所示，IFN-γ和TNF-α的表达均以浓度依赖的方式受到抑制。然而，该实验是在含有APC的PBMC的SEB刺激下进行的。为了消除观察到的效应可能是由于cAMP对APC功能的抑制作用造成的可能性，我们通过粘附分离APC，用SEB装载细胞，然后用多聚甲醛固定。然后，我们以1:10的比例建立了与固定的载银APC和APC耗竭的PBMC群体的自体共培养。在加入布雷菲尔丁A之前，将共培养物孵育6小时。允许细胞因子积累14小时。通过细胞内流式细胞术评估CD4和CD8 T细胞中IFN-γ的表达，观察到细胞因子表达的浓度依赖性抑制，随着Sp-8-Br-cAMPS浓度的增加，这表明抑制作用与APC无关（图5c）。

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细胞因子表达和增殖的联合抑制[2]
为了进一步确定cAMP介导的免疫功能抑制的程度，我们通过CFSE稀释试验研究了对CD3、CD4和CD8 T细胞增殖的影响。如图6a所示，在所有三个细胞群中，随着Sp-8-Br-cAMPS浓度的增加，SEB诱导的增殖呈浓度依赖性下降。PKA I型选择性拮抗剂Rp-8-Br-cAMPS的抑制是可逆的（数据未显示）。 通过将CFSE稀释试验与细胞内流式细胞术相结合，我们同时测量了cAMP对两种免疫功能的影响。如图6b所示，每个细胞分裂的CFSE荧光强度依次降低，表达IFN-γ的T细胞比例最高的是后代细胞。随着Sp-8-Br-cAMPS浓度的增加，IFN-γ表达显著降低，增殖受到明显抑制，表现为1000μM Sp-8-Br cAMPS的最后两次细胞分裂消失。

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cAMP和PKA I型抑制Ag特异性免疫反应[2]
接下来，我们研究了cAMP和PKA I型对Ag特异性免疫反应的影响（图7a）。如SEB诱导的免疫反应所示，我们观察到，通过增加CD4和CD8 T细胞群中Sp-8-Br-cAMPS的浓度，CMV诱导的IFN-γ表达受到浓度依赖性抑制。为了诱导最佳刺激，CD4 T细胞群被CMV感染的细胞提取物刺激，而CD8 T细胞群则被CMVpp65刺激。两种细胞群的抑制范围均为60%至80%。 我们还通过结合CFSE稀释试验和细胞内流式细胞术，研究了PKA I型激活对结核菌素PPD诱导的T细胞增殖和IFN-γ产生的影响（图7b）。正如SEB和CMV诱导的免疫反应所观察到的那样，结核菌素PPD诱导的T细胞增殖和IFN-γ表达以浓度依赖的方式下降，Sp-8-Br-cAMPS。此外，cAMP拮抗剂Rp-8-Br-cAMPS可完全逆转T细胞增殖和IFN-γ表达（数据未显示）。

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cAMP激活Csk[2]
为了评估本研究中使用的cAMP激动剂对先前绘制的cAMP-PKA抑制T细胞功能的机制的影响（11），我们检查了Sp-8-Br-cAMPS是否会导致Csk活性的增加。在用cAMP类似物处理浓度增加后，体外评估了Csk磷酸转移酶活性，导致Csk活性呈浓度依赖性增加，使用最高浓度时活性增加了2倍以上（图8）。

Sp-8-Br-cAMPS (50 nM) 可抑制血细胞释放蛋白质，抑制细菌从血淋巴中清除，但不影响 G. mellonella 幼虫的活力 [1]。
单独注射Sp-8-Br-cAMPS后30分钟内，与PBS对照幼虫相比，总血细胞计数增加，而PKA抑制剂降低了血细胞水平（图7）。在含有抑制剂的昆虫中观察到结节（直径1.2±0.1mm）和广泛的血细胞聚集（2×105/mL），但在含有激活剂的组中没有。增加抑制剂的量会降低含有固定量PKA激活剂的幼虫的血细胞计数。

PKA生化测定[1]
为了确定PKA调节剂影响PKA活性以及PKA活性在血细胞粘附过程中发生变化，使用了PKA生化测定。将冷冻幼虫放血，并将180µL血淋巴加入200µL抗凝剂中23。将200微升血细胞悬浮液离心（200 g，2分钟，4°C），通过离心将血细胞沉淀在100µL PBS中洗涤两次。将第一组颗粒重新悬浮在20µL PBS中，PBS中含有选定量的Rp-8-Br-cAMPS和/或Sp-8-Br-cAMPS。孵育30分钟后，在1 mL PBS中离心三次洗涤细胞，通过剧烈移液溶解，并根据制造商的说明测定PKA活性。将第二组血细胞放置在含有玻璃盖玻片（直径5mm）的96孔微量滴定板中。为了防止血细胞粘附引起PKA活性的可能变化，立即裂解血细胞作为非附着血细胞对照组。在室温下孵育30分钟后，其他孔中主要代表粘附血细胞的细胞被裂解。测定两组PKA活性。四个重复中的每一个至少使用两个样品。

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Csk活性评估[2]
纯化的外周T细胞（RPMI 1640中为40×106个细胞/ml）在37°C下孵育30分钟，加入或不加入指定浓度的cAMP类似物Sp-8-Br-cAMPS。此后，将细胞在裂解缓冲液（50 mM HEPES（pH 7.4）、100 mM NaCl、5 mM EDTA、1%Triton X-100、50 mM n-β-辛基葡萄糖苷、10 mM NaPPi、1 mM Na3VO4、50 mM NaF和1 mM PMSF）中破碎，并用抗Csk Ab进行免疫沉淀。在4°C下孵育过夜后，加入蛋白A-Sepharose并继续孵育1小时。免疫复合物在裂解缓冲区中洗涤三次，在Csk激酶测定缓冲液（50mM HEPES和5mM MgCl2，pH 7.4）中洗涤三倍，然后进行Csk激酶分析和Western blot分析。人Csk的酪氨酸激酶活性是通过将[32P]磷酸盐掺入合成的聚氨基酸聚（Glu，Tyr）4:1中来测量的。遵循标准方案，反应体积为50μl，含有HEPES缓冲液（pH 7.4）、5 mM MgCl2、200μM[γ-32P]ATP（0.15 Ci/mmol）、200μg/ml聚（Glu，Tyr）和免疫沉淀的Csk。孵育温度为30°C，孵育时间为12分钟。

细菌吞噬作用和血细胞与相关细菌[1]
通过将从总共六只在冰上冷却（15分钟）的幼虫中收集的60µL昆虫血淋巴加入1 mL冰冷的PBS（1.6×106个血细胞/mL）中制备血细胞单层。除非另有说明，否则血细胞不会被洗掉血浆，这样它们更接近体内情况。将15微升悬浮液置于无内毒素载玻片上，在相对湿度>95%的条件下孵育30分钟，使血细胞粘附。通过用2mL PBS冲洗载玻片三次来去除未附着的血细胞。将含有和不含选定浓度PKA调节剂（PKA激活剂Sp-8-Br-cAMPS；PKA I型抑制剂RP-8-Br-cAMPS27）的PBS中的荧光细菌添加到单层中，使细菌与血细胞的比例为10:1。将载玻片在高湿度下摇动（25 r.p.m.）1小时，然后用PBS冲洗三次，去除未附着的细菌。用台盼蓝（0.2%w/v28）淬灭非吞噬细菌的荧光。将带有细菌的血细胞在戊二醛-甲醛蒸汽中固定10分钟，并用PBS中的甘油（20%v/v）固定。必要时，血细胞被鉴定为颗粒细胞或浆细胞29。通过荧光显微镜测定总吞噬血细胞和浆细胞的水平（以总血细胞和总浆细胞的百分比表示）。使用相差显微镜测定每种附着细菌的血细胞类型的数量（附着包括吞噬细菌和血细胞表面的细菌）和每种血细胞类型附着细菌的数量。在包含10个样本的10个重复中，每个重复检查至少150个每种类型的血细胞。

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血细胞蛋白排出量[1]
通过在冰上冷却10只幼虫（15分钟）并在1毫升冷冻抗凝剂中收集75µL血淋巴，获得不含血淋巴血浆的血细胞。通过离心洗涤血细胞三次，以去除血浆和抗凝剂（200g，2分钟）。然后将沉淀物重新悬浮在冷PBS（5°C，1 mL）中。将血细胞悬浮液（100µL）加入96孔微量滴定板的孔中，该微量滴定板含有圆形（直径5mm）玻璃盖玻片和PBS，含有和不含有选定浓度的Rp-8-Br-cAMPS和Sp-8-Br-cAMPS，或含有固定水平的激活剂和10和50 nmol/L的抑制剂。其他孔含有缓冲液和PKA调节剂，这两种细菌产生10:1的细菌：血细胞比。含有和不含酶调节剂的细菌作为无血细胞对照。将板在22°C下孵育15-60分钟，在此期间通过移液移取样品并离心（2000 g，2分钟）。测定上清液中的总蛋白。在整个培养过程中使用了10个重复，每个重复包含两个样本。

体内PKA调节剂[1]
将包含两组各10只幼虫的5个重复组，在幼虫前胸足基部注射10 µL含有特定浓度Sp-8-Br-cAMPS和/或Rp-8-Br-cAMPS的PBS溶液。注射30分钟后，对其中一组幼虫进行采血，并使用血细胞计数器测定每只幼虫的总血细胞数。注射24小时后，对另一组幼虫进行解剖，以检测结节。同样，使用含有1 × 10⁸个细菌/10 µL的测试溶液，评估PKA调节剂对枯草芽孢杆菌和线虫黄单胞菌清除的影响。细菌和血细胞数量均使用血细胞计数器测定。

[1]. Inhibition of antigen-specific T cell proliferation and cytokine production by protein kinase A type I. J Immunol. 2002 Jul 15;169(2):802-8.

[2]. , Protein kinase A affects Galleria mellonella (Insecta: Lepidoptera) larval haemocyte non-self responses. Immunol Cell Biol. 2005 Apr;83(2):150-9.

我们单独使用蛋白激酶A (PKA) 特异性激活剂Sp-8-Br-cAMPS和I型抑制剂Rp-8-Br-cAMPS，以及二者联合使用，以明确PKA在体外和体内大蜡螟幼虫血细胞非自身反应中的作用。活性PKA抑制血细胞反应，而PKA抑制剂则增强多种反应，包括体外细菌吞噬作用、附着细菌的血细胞数量、细菌诱导的血细胞蛋白释放以及血细胞在载玻片上的黏附，以及体内血淋巴中细菌的清除。未黏附的血细胞比黏附的血细胞具有更高的PKA活性；因此，活性PKA限制了血细胞对异物的反应。我们发现：(i) 单独使用PKA抑制剂可诱导非自身反应，包括体内血细胞蛋白释放和血细胞数量减少，并诱导结节形成；(ii) 酶激活剂的作用与抑制剂的作用相反； (iii) 这些调节因子相互抵消，共同影响血细胞裂解液中的PKA活性。这些发现证实PKA是血细胞非自身反应的介质。[1] cAMP通过激活脂筏中组装的抑制性蛋白激酶A (PKA)-C端Src激酶通路，抑制导致T细胞活化的生化事件。在本研究中，我们证明Sp-8-溴-cAMPS（一种cAMP激动剂）激活I型PKA对周围效应T细胞中的抗原特异性免疫反应具有显著的抑制作用。I型PKA的激活以浓度依赖的方式抑制CD4⁺和CD8⁺ T细胞的细胞因子产生和增殖反应。观察到的cAMP效应似乎是内源性地发生在T细胞中，并且不依赖于抗原呈递细胞(APC)。免疫应答的抑制并非由特定T细胞凋亡引起，且可被PKA I型选择性cAMP拮抗剂逆转。这支持了PKA I型作为免疫应答负调控关键酶以及抑制自身反应性T细胞潜在靶点的观点。[2]我们和其他研究者已证实，cAMP和PKA I型在分子水平上可作为TCR/CD3信号通路的急性抑制剂。本研究的数据表明，cAMP通过激活PKA I型，成为T细胞功能的普遍抑制剂。Sp-8-Br-cAMPS预孵育可剂量依赖性地抑制抗原诱导的IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4的表达。该抑制作用涉及CD4和CD8 T细胞，且不依赖于抗原呈递细胞（APC），也不会诱导细胞凋亡。此外，cAMP类似物抑制了SEB诱导的增殖以及对CMV和结核菌素PPD的抗原特异性免疫反应。与PKA I型选择性抑制剂Rp-8-Br-cAMPS共同孵育，可完全逆转PKA激动剂Sp-8-Br-cAMPS的抑制作用。这表明观察到的效应是由于PKA I型的激活所致，并且cAMP孵育后T细胞功能的抑制作用可及时被cAMP拮抗剂逆转。[2]

C10H11BRN5O5PS

424.17

444.922

127634-20-2

24757345

Typically exists as solid at room temperature

1.731

182.5

2

10

1

24

542

4

C1[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N3C4=NC=NC(=C4N=C3Br)N)O)OP(=S)(O1)[O-].[Na+]

SKJLJCVVXRNYGJ-QKAIHBBZSA-M

InChI=1S/C10H11BrN5O5PS.Na/c11-10-15-4-7(12)13-2-14-8(4)16(10)9-5(17)6-3(20-9)1-19-22(18,23)21-6;/h2-3,5-6,9,17H,1H2,(H,18,23)(H2,12,13,14);/q;+1/p-1/t3-,5-,6-,9-,22?;/m1./s1

sodium;(4aR,6R,7R,7aS)-6-(6-amino-8-bromopurin-9-yl)-2-oxido-2-sulfanylidene-4a,6,7,7a-tetrahydro-4H-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-7-ol

129735-00-8; 127634-20-2; 8-Bromoadenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate, Rp-isomer sodium salt; 8-Bromoadenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate, Sp-isomer sodium salt; 8-BROMOADENOSINE-3',5'-CYCLIC MONOPHOSPHOROTHIOATE, SP-ISOMER SODIUM SALT; Sp-8-Br-cAMPS*Na; 8-Br-cAMPS*Na Sp-isomer; YMC11590;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。