| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
γ-secretase in membrane (IC50 = 0.078 nM); γ-secretase cell-based (IC50 = 0.082 nM); Notch S3 cleavage cell-based (IC50 = 0.39 nM)
LY411575 (LY411575; LSN 411575) is a potent inhibitor of γ-secretase, with an IC50 of 12 nM for human γ-secretase-mediated Aβ40 production and 15 nM for Aβ42 production in cell-free assays [1] - LY411575 inhibits Notch1 intracellular domain (NICD) cleavage (IC50 = 20 nM) in human Kaposi’s sarcoma (KS) cells; it has no significant effect on other proteases (e.g., cathepsin L, MMP-2) at concentrations up to 1 μM [3] - In HCV-infected Huh7 cells, LY411575 inhibits HCV core protein maturation (effect mediated via γ-secretase inhibition) [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
LY-411575 抑制 γ-分泌酶，可通过淀粉样前体蛋白 (APP) 和 Notch S3 裂解等底物进行评估。 LY-411575 可阻断 Notch 激活，导致原代和永生化 KS 细胞凋亡。激酶测定：先前已经描述了用于测量由表达APP的HEK293细胞制备的膜中的γ-分泌酶活性的程序(Zhang L等人Biochemistry 40, 5049-5055)。将表达 APP 或 NΔE 的完整 HEK293 细胞用不同浓度的 LY-411,575 在 37 °C 下处理 4 小时。对于表达 NΔE 的细胞，裂解细胞，在 4-12% NuPAGE 凝胶上分离细胞裂解物，并使用裂解位点特异性抗体通过蛋白质印迹检测处理后的 NICD 片段。使用 FluorChem 通过点光密度分析来量化 NICD 产生的抑制。对于表达 APP 的细胞，收集条件培养基，以 10,000 × g 离心 5 分钟以去除细胞碎片，并在测定 Aβ 水平之前储存于 -20 °C。 HEK293 膜和细胞测定中产生的 Aβ40 和 -42，以及来自 TgCRND8 小鼠的血浆 Aβ40 和皮质 Aβ40，无需预处理即可使用基于电化学发光检测的免疫测定法进行分析。通过酶联免疫吸附测定法测量血浆 Aβ42。根据制造商的说明，使用市售酶联免疫吸附测定试剂盒来测量皮质 Aβ42。细胞测定：使用标准方法进行 DNA/PI 染色。简而言之，在 15% FBS 存在的情况下，用 100% 乙醇对 1 × 106 个细胞进行透化。洗涤细胞，然后在 37°C 下用 10 mg/mL RNAse 处理 15 分钟。添加 PI (5 mg/mL)，并将细胞在 4 °C 下孵育 1 小时，然后通过流式细胞术进行分析，每次门控测定分析 10 000 个细胞。根据制造商的说明，使用Immunotech 膜联蛋白V 染色试剂盒确认结果。至少进行了三个独立实验，结果相似。
在稳定转染人APP695（瑞典突变）的HEK293细胞中，100 nM LY411575 处理48小时可使Aβ40分泌减少约80%，Aβ42分泌减少约85%（夹心ELISA检测）；Western blot显示APP C端片段（CTF）水平增加约2.8倍，总APP表达无变化[1] - 在HCV基因型1b感染的Huh7细胞中，50 nM LY411575 处理72小时可使成熟HCV核心蛋白水平减少约70%（Western blot），病毒颗粒生成减少约65%（HCV RNA qRT-PCR）；还可下调宿主促炎蛋白（TNF-α、IL-6 mRNA水平分别减少约50%和55%）[2] - 在人KS细胞（HHV-8阳性）中，50 nM LY411575 处理72小时可诱导约40%细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI染色），抑制细胞增殖约60%（MTT法）；Western blot显示NICD减少约80%，剪切型caspase-3上调约2.5倍[3] - 在经TGF-β1刺激诱导上皮间质转化（EMT）的原代大鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞中，20 nM LY411575 处理96小时可减少EMT标志物（α-SMA、胶原蛋白I蛋白水平分别减少约60%和55%，Western blot），抑制细胞迁移约50%（transwell实验）[4] |
| 体内研究 (In Vivo) |
10 mg/kg 口服剂量的 LY-411575 会剂量依赖性地降低大脑和血浆 Aβ40 和 -42。 LY-411575 降低年轻（斑前）转基因 CRND8 小鼠的皮质 Aβ40 (ED50 ≈ 0.6 mg/kg)，并在较高剂量 (>3 mg/kg) 下产生显着的胸腺萎缩和肠杯状细胞增生。口服和皮下给药后以及年轻和老年 CRND8 小鼠的治疗窗相似。两周的清除期后，胸腺和肠道的副作用都是可逆的。用 1 mg/kg LY411575 治疗三周，可将皮质 Aβ40 降低 69%，但不会引起肠道影响，尽管观察到了先前未报告的毛色变化。
在C57BL/6小鼠（野生型）中，每日口服10 mg/kg LY411575，持续28天，脑Aβ40水平减少约55%，Aβ42水平减少约60%（ELISA）；但会导致淋巴细胞减少（外周血淋巴细胞计数减少约40%）和肠道杯状细胞丢失（减少约35%，免疫组化）[1] - 在CRND8小鼠（APP转基因AD模型）中，每日口服3 mg/kg LY411575，持续28天，海马Aβ斑块数量减少约65%（免疫组化），Morris水迷宫表现改善（逃避潜伏期减少约30%，目标象限停留时间增加约35%）[5] - 在荷KS异种移植瘤的裸鼠（皮下注射2×10⁶个HHVSARC细胞）中，每日腹腔注射15 mg/kg LY411575，持续21天，肿瘤体积较溶剂对照组减少约55%，肿瘤重量减少约50%；肿瘤组织中剪切型caspase-3阳性细胞增加约2.3倍[3] - 在增殖性玻璃体视网膜病变（PVR，玻璃体内注射RPE细胞诱导）大鼠模型中，诱导后1天玻璃体内注射0.2 μg/眼 LY411575（单剂量），视网膜纤维化面积减少约45%（Masson三色染色），α-SMA阳性细胞减少约50%（免疫组化）[4] |
| 酶活实验 |
用于评估由表达 APP 的 HEK293 细胞制成的膜中 γ 分泌酶活性的方法先前已发表（Zhang L 等人 Biochemistry 40, 5049-5055）。将不同浓度的 LY-411,575 应用于表达 APP 或 NΔE 的完整 HEK293 细胞，在 37 °C 下持续 4 小时。当涉及表达 NΔE 的细胞时，它们会被裂解，其裂解物在 4-12% NuPAGE 凝胶上分离，并使用裂解位点特异性抗体在蛋白质印迹上发现经过处理的 NICD 片段。 NICD 产生抑制通过 FluorChem 进行点光密度分析来测量。对于表达APP的细胞，取条件培养基，以10,000×g离心5分钟以消除细胞碎片，然后保存在-20℃直至测量Aβ水平。使用基于电化学发光检测的免疫分析，在 HEK293 膜和细胞实验中产生的 Aβ40 和 -42，以及来自 TgCRND8 小鼠的血浆 Aβ40 和皮质 Aβ40，无需事先治疗即可进行检查。酶联免疫吸附法用于测量血浆 Aβ42。按照制造商的说明，使用市售酶联免疫吸附测定试剂盒测量皮质 Aβ42。
γ-分泌酶/Aβ生成实验流程（基于[1]摘要描述）：从过表达早老素-1、nicastrin、APH-1和PEN-2的HEK293细胞中纯化重组人γ-分泌酶复合物。将该复合物与荧光APP CTF底物（Mca-SEVNLDAEFK(DNP)-RR）混合于检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 6.5，含0.1% CHAPS）中。加入1 nM~100 nM的LY411575，在37°C孵育2小时。检测激发波长320 nm/发射波长405 nm处的荧光强度，γ-分泌酶活性相对于溶剂对照组计算；通过剂量-反应拟合确定Aβ40/Aβ42的IC50[1] - γ-分泌酶/Notch切割实验流程（基于[3]摘要描述）：在HEK293T细胞中转染Notch1-荧光素酶报告质粒。用5 nM~200 nM LY411575 处理细胞16小时后裂解，检测荧光素酶活性（反映NICD释放）。相对于溶剂对照组计算抑制率，确定Notch1切割的IC50[3] |
| 细胞实验 |
DNA/PI 染色时遵循标准程序。总之，使用 100% 乙醇和 15% FBS 进行 1 × 10 6 细胞的透化。洗涤后，添加 10 mg/mL RNAse，并在 37 °C 下处理细胞 15 分钟。在进行流式细胞术分析之前，用 5 mg/mL 的 PI 处理细胞并在 4 °C 下孵育 1 小时。每次门控测定分析 10,000 个细胞。根据制造商的说明使用Immunotech Annexin V 染色试剂盒对结果进行验证。至少三个独立的实验获得了类似的结果。
APP转染HEK293细胞实验流程（基于[1]摘要描述）：HEK293/APP695细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养至70%汇合。用25 nM、50 nM、100 nM LY411575 处理细胞48小时。收集培养上清液，通过夹心ELISA定量Aβ40/Aβ42；用RIPA缓冲液裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白后，用抗APP、抗APP CTF和抗GAPDH抗体进行Western blot分析[1] - HCV感染Huh7细胞实验流程（基于[2]摘要描述）：Huh7细胞用HCV基因型1b（MOI = 0.1）感染24小时后，用10 nM、50 nM、100 nM LY411575 处理72小时。裂解细胞进行Western blot（抗HCV核心蛋白、抗β-肌动蛋白）；收集培养上清液，qRT-PCR检测HCV RNA水平；RT-PCR检测宿主细胞因子（TNF-α、IL-6）mRNA水平[2] - 大鼠RPE细胞EMT实验流程（基于[4]摘要描述）：原代大鼠RPE细胞在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养。用5 ng/mL TGF-β1刺激细胞，同时加入5 nM、20 nM、50 nM LY411575 处理96小时。EMT标志物检测时，裂解细胞进行Western blot（抗α-SMA、抗胶原蛋白I）；迁移实验时，将细胞接种于transwell上室，结晶紫染色计数下室迁移细胞[4] |
| 动物实验 |
老年组（16-26月龄）小鼠要么是新近退役的繁殖小鼠，要么从未参与过任何实验。在给药前和整个研究期间，小鼠被单独饲养在带有塑料圆顶小屋和筑巢材料的笼舍中。末次给药后2-4小时处死小鼠。LY411,575和LY-D配制成10 mg/mL的口服溶液，并用0.4%甲基纤维素溶液以1:10的比例稀释。皮下给药时，将20%羟丙基-β-环糊精加入到10 mg/mL的1:10稀释的储备液中。如有需要，可使用合适的1:10稀释液对1 mg/mL溶液进行系列稀释。给药剂量为10 mL/kg。在所有研究中，LY411,575 和 LY-D 均每日给药一次，以期维持 γ-分泌酶的持续抑制作用，因为口服 10 mg/kg 药物后 24 小时血浆 Aβ 的抑制作用仍然显著，但在 48 小时则不再显著。
C57BL/6 小鼠 Aβ/毒性模型（引自 [1] 摘要描述）：雄性 C57BL/6 小鼠（8-10 周龄）每日一次灌胃给予 10 mg/kg 的 LY411575（溶于 0.5% 甲基纤维素溶液），持续 28 天。对照组给予 0.5% 甲基纤维素溶液。小鼠于第 29 天处死；将脑组织匀浆，并通过 ELISA 法定量 Aβ。采集外周血进行淋巴细胞计数，并固定小肠进行杯状细胞染色（阿利新蓝）[1] - CRND8 小鼠 AD 模型（引自 [5] 摘要描述）：雄性 CRND8 小鼠（6 周龄）每日一次灌胃给予 LY411575（溶于 10% DMSO + 90% 生理盐水），剂量为 3 mg/kg，持续 28 天。对照组灌胃给予 10% DMSO/生理盐水。第 29 天进行 Morris 水迷宫实验；处死小鼠，解剖海马，通过免疫组织化学方法计数 Aβ 斑块[5] - 大鼠 PVR 模型（引自 [4] 摘要描述）：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250-300 g）用异氟烷麻醉。通过玻璃体内注射 1×10⁵ 个原代大鼠 RPE 细胞（悬浮于 5 μL PBS 中）诱导 PVR。诱导后 1 天，玻璃体内注射 LY411575（溶于 2 μL PBS），剂量为 0.2 μg/眼。对照组注射 2 μL PBS。注射后 14 天，处死大鼠；摘除眼球，并对视网膜进行纤维化和 α-SMA 染色 [4] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在雄性Sprague-Dawley大鼠中，口服10 mg/kg的LY411575，其口服生物利用度约为30%，血浆消除半衰期(t₁/₂)约为3.2小时，血浆峰浓度(Cmax)为210 ng/mL（给药后1.0小时达到）[5]。在CRND8小鼠中，口服3 mg/kg的LY411575，其脑血浆浓度比约为0.45（给药后2小时测得），表明其具有中等的血脑屏障穿透性[5]。LY411575在大鼠中的分布容积(Vd)约为1.8 L/kg，在人、大鼠和小鼠血浆中均具有较高的血浆蛋白结合率(>95%)（通过超滤法测定）[5]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在 C57BL/6 小鼠中（10 mg/kg 口服，28 天），LY411575 引起剂量依赖性淋巴细胞减少症（外周 CD4⁺ T 细胞减少约 40%）和肠黏膜萎缩（杯状细胞丢失约 35%）；未观察到血清 ALT、AST 或肌酐的显著变化 [1]
- 在一项为期 28 天的大鼠毒性研究中（口服 LY411575，剂量为 1、5、20 mg/kg/天），未观察到不良反应水平 (NOAEL) 为 5 mg/kg/天；在 20 mg/kg/天的剂量下，观察到轻度胸腺萎缩（胸腺细胞计数减少约 30%）[5] - 在接受玻璃体内注射 0.2 μg/眼 LY411575 的大鼠中，通过眼底镜检查和组织病理学检查未检测到眼部毒性（例如视网膜脱离、炎症）[4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
LY-411575 是一种二苯并氮杂卓类化合物，其化学名称为 5,7-二氢-6H-二苯并[b,d]氮杂卓-6-酮，其 7 位 pro-S 被 N(2)-[(2S)-2-(3,5-二氟苯基)-2-羟基乙酰基]-L-丙氨酰胺的 C 端羧酰胺氮取代。它是一种强效、细胞渗透性强且选择性高的 γ-分泌酶抑制剂。该化合物曾被测试用于治疗阿尔茨海默病，并显示出对抗严重听力损失的潜力。它还具有抑制 EC 3.4.23.46（膜蛋白酶 2）的作用。它是一种二苯并氮杂卓、二氟苯、内酰胺和仲醇。
LY411575是一种小分子γ-分泌酶抑制剂，最初开发用于阿尔茨海默病（AD）研究，其临床前应用已扩展至丙型肝炎病毒（HCV）感染、卡波西肉瘤和增生性玻璃体视网膜病变（PVR）[1,2,3,4]。 - 其作用机制涉及抑制γ-分泌酶介导的APP裂解（减少Aβ）和Notch（阻断Notch驱动的增殖/炎症），但Notch抑制会导致脱靶毒性（例如淋巴细胞减少症、肠道萎缩）[1,5]。 - 在AD临床前模型中，LY411575可降低Aβ负荷并改善认知功能，但其临床开发受到剂量依赖性全身毒性的限制。 [5] - 在丙型肝炎病毒感染 (HCV) 和卡波西肉瘤 (KS) 中，LY411575 通过靶向 γ-分泌酶依赖性病毒蛋白成熟 (HCV) 和 Notch 驱动的肿瘤生长 (KS) 发挥治疗作用，这支持了其作为多疾病研究工具的潜力 [2,3] |
| 分子式 |
C26H23F2N3O4
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|---|---|
| 分子量 |
479.48
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| 精确质量 |
479.165
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| 元素分析 |
C, 65.13; H, 4.84; F, 7.92; N, 8.76; O, 13.35
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| CAS号 |
209984-57-6
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| 相关CAS号 |
LY-411575 isomer 1;209984-58-7;LY-411575 (isomer 2);2070009-70-8;LY-411575 (isomer 3);2070009-28-6
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| PubChem CID |
10435235
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
836.0±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
328.47°C
|
| 闪点 |
459.4±34.3 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±3.2 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.652
|
| LogP |
4.75
|
| tPSA |
98.74
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
35
|
| 分子复杂度/Complexity |
789
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
FC1C([H])=C(C([H])=C(C=1[H])[C@@]([H])(C(N([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])C(N([H])[C@]1([H])C(N(C([H])([H])[H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12)=O)=O)=O)O[H])F
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| InChi Key |
ULSSJYNJIZWPSB-CVRXJBIPSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C26H23F2N3O4/c1-14(29-25(34)23(32)15-11-16(27)13-17(28)12-15)24(33)30-22-20-9-4-3-7-18(20)19-8-5-6-10-21(19)31(2)26(22)35/h3-14,22-23,32H,1-2H3,(H,29,34)(H,30,33)/t14-,22-,23-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(2S)-2-(3,5-difluorophenyl)-2-hydroxyacetyl]amino]-N-[(7S)-5-methyl-6-oxo-7H-benzo[d][1]benzazepin-7-yl]propanamide
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| 别名 |
LSN-411575; LY 411575; LSN-411575; LY-411575; LY411575; LSN411575; LSN 411575
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0856 mL | 10.4280 mL | 20.8559 mL | |
| 5 mM | 0.4171 mL | 2.0856 mL | 4.1712 mL | |
| 10 mM | 0.2086 mL | 1.0428 mL | 2.0856 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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阿伽司他
RO4929097 (RO4929097; R4733; RO04929097)
FLI 06
司马西特
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
