PF-543

别名: PF543; PF-543 HCl;PF543; PF 543; PF-543 hydrochloride (2R)-1-[[4-[[3-甲基-5-[(苯磺酰基)甲基]苯氧基]甲基]苯基]甲基]-2-吡咯烷甲醇; (2R)-1-[[4-[[3-甲基-5-[(苯基磺酰基)甲基]苯氧基]甲基]苯基]甲基]-2-吡咯烷甲醇

目录号: V1504 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

PF-543（也称为 PF543；PF 543；Sphingosine Kinase 1 Inhibitor II）是一种新型细胞渗透性、鞘氨醇竞争性的 SphK1 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。

PF-543 CAS号: 1415562-82-1
产品类别: S1P Receptor

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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产品描述

PF-543（也称为 PF543；PF 543；Sphingosine Kinase 1 Inhibitor II）是一种新型细胞渗透性、鞘氨醇竞争性的 SphK1 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。它抑制 SphK1，IC50 和 Ki 分别为 2.0 nM 和 3.6 nM，并且对 SphK1 的选择性是 SphK2 同工型的 100 倍以上。

生物活性&实验参考方法

靶点	SphK1 Sphingosine kinase 1 (SK1) (Ki = 0.6 nM, human; IC50 = 1.2 nM for enzyme activity inhibition) [1] - Sphingosine kinase 2 (SK2) (Ki = 480 nM, human; >400-fold lower affinity than SK1) [1] - No significant affinity for other kinases (e.g., PI3K, Akt, ERK, PKC) (Ki > 10000 nM) [1]
体外研究 (In Vitro)	PF543是一种细胞渗透性羟甲基吡咯烷化合物，以可逆和鞘氨醇竞争性的方式抑制SphK-1/SphK1催化的鞘氨醇磷酸化，对S1P受体没有亲和力，并且对SphK2的抑制活性大大降低（抑制6.8%） 10 μM) 或 46 个其他脂质和蛋白激酶 (IC50 >10 μM)。在 SphK1 过表达的 1483 头颈癌细胞中，PF-543 使内源性 S1P 水平降低 10 倍，同时鞘氨醇水平成比例增加。 PF-543 以高亲和力可逆地结合 SphK1（k off t1/2=8.5 分钟），结合常数 (Kd) 为 5 nM。尽管细胞S1P/鞘氨醇比率发生显着变化，PF543对1483、A549、LN229、Jurkat、U937和MCF-7细胞的增殖和存活没有影响。 PF-543 是全血中 S1P 形成的有效抑制剂，表明鞘氨醇激酶的 SphK1 亚型是人类血液中 S1P 的主要来源。激酶测定：开发了一种 384 孔形式的 SphK 酶测定，其基于使用微流体毛细管电泳迁移率变动系统将 FITC-S1P 与未反应的 FITC-鞘氨醇底物分离。简而言之，将 3 nM SphK1–His6 与 1 μM FITC-鞘氨醇、20 μM ATP 和 10 μM 化合物（DMSO 终浓度为 2%）在含有 100 mM Hepes (pH 7.4)、1 mM MgCl2、0.01 的缓冲液中一起孵育。在 384 孔 Matrical MP-101-1-PP 板中加入 % Triton X-100、10% 甘油、100 μM 原钒酸钠和 1 mM DTT 1 小时。通过在 100 mM Hepes 中添加 20 μL 30 mM EDTA 和 0.15% Coating Reagent-3 来淬灭反应混合物 (10 μL)，并在 Caliper LabChip 3000 仪器中分析每个反应的一小部分（几纳升）在 -1.5 psi (psi=6.9 kPa) 压力下，下游电压为 -1900 V，吸气时间为 0.2 s。磷酸化荧光产物和未磷酸化荧光底物显示为独特的峰，并使用卡尺数据进行定量。细胞测定：在表达高水平 SphK1 且 S1P 产生率异常高的 1483 头颈癌细胞培养物中，PF-543 预处理 1 小时，使内源性 S1P 水平降低 10 倍，同时 S1P 水平成比例增加。鞘氨醇水平。这表明pf-543对SphK1具有显着抑制作用。然而，尽管细胞 S1P/鞘氨醇比率发生了巨大变化，但特异性抑制 SphK1 对 1483 细胞培养物的增殖和存活没有影响。 PF-543 是强效、高选择性鞘氨醇激酶1（SK1）抑制剂，对SK2及其他激酶活性极低[1][2][3] - 在重组人SK1酶实验中，PF-543（0.001-10 nM）剂量依赖性抑制SK1活性，IC50为1.2 nM，10 nM浓度下减少90%的S1P生成[1] - 在人头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞（SCC-25、CAL-27）中，PF-543（1-20 μM）抑制细胞增殖，IC50分别为3.5 μM和4.8 μM，通过上调LC3-II/LC3-I比值（2.8-3.6倍）和下调p62表达诱导自噬[3] - 在大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中，PF-543（0.1-10 μM）减少缺氧诱导的细胞增殖45-70%，阻断S1P介导的ERK1/2和Akt磷酸化[2] - 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，PF-543（0.5-5 μM）抑制S1P诱导的管腔形成55-68%，减少内皮细胞迁移40-55%[1] - 在HNSCC细胞中（10-20 μM）诱导caspase依赖性凋亡，凋亡率从对照组的12%升至20 μM浓度下的42%[3]
体内研究 (In Vivo)	还在人全血中离体检测了 PF-543 的抑制活性。制备了具有高SphK1活性的人全血，能够快速将C17-鞘氨醇转化为C17-S1P。 PF-543 处理表明 PF-543 是 SphK1 的有效抑制剂，能够阻断 >90% 的 C17-S1P 形成在缺氧诱导的肺动脉高压（PAH）大鼠模型中，口服PF-543（3-10 mg/kg/天，连续21天）剂量依赖性降低平均肺动脉压（mPAP）25-40%，减轻肺血管重构（中膜厚度减少30-50%）[2] - 在携带SCC-25 HNSCC异种移植瘤的裸鼠中，腹腔注射PF-543（5-15 mg/kg/天，连续28天）减少肿瘤体积40-65%，增加瘤内自噬（LC3-II阳性细胞）3.2倍[3] - 在PAH大鼠中，PF-543（10 mg/kg/天）下调肺组织SK1活性75%，减少S1P水平60%，改善右心室收缩功能[2] - 在HNSCC异种移植小鼠中，PF-543（15 mg/kg/天）抑制肿瘤细胞增殖（Ki-67阳性细胞减少45%），诱导凋亡（TUNEL阳性细胞增加2.5倍）[3]
酶活实验	SphK 酶测定采用 384 孔格式开发，使用微流体毛细管电泳迁移率变换系统将未反应的 FITC-鞘氨醇底物与 FITC-S1P 分离。总之，将 1 μM FITC-鞘氨醇、20 μM ATP 和 10 μM 化合物（DMSO 最终浓度为 2%）以及 3 nM SphK1–His6 在 384 孔 Matrical MP-101 中孵育 1 小时-1-PP 板，其缓冲液含有 100 mM Hepes (pH 7.4)、1 mM MgCl2、0.01% Triton X-100、10% 甘油、100 μM 原钒酸钠和 1 mM DTT。通过添加 20 μL 30 mM EDTA 和 100 mM Hepes 中的 0.15% Coating Reagent-3 淬灭反应混合物 (10 μL)。然后在 Caliper LabChip 3000 仪器中以 -1900 V 的下游电压、0.2 s 的吸液时间和 -1.5 psi (psi=6.9 kPa) 的压力对每个反应的一小部分（几纳升）进行分析。卡尺数据用于量化作为磷酸化荧光产物和未磷酸化荧光底物出现的不同峰。 SK1/SK2酶活性实验：重组人SK1/SK2与鞘氨醇（5 μM）、ATP（1 mM）及不同浓度的PF-543（0.001-1000 nM）在37°C孵育30分钟。液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量生成的S1P，确定IC50和Ki值[1] - 激酶选择性实验：PF-543（1 μM）与70余种激酶（含PI3K、Akt、ERK、PKC）在37°C孵育60分钟。放射性ATP掺入法检测激酶活性，评估脱靶效应[1] - 细胞内S1P定量实验：PASMCs/HUVECs经PF-543（0.1-10 μM）预处理1小时后，用鞘氨醇（5 μM）刺激2小时。提取细胞内S1P，ELISA法定量[1][2]
细胞实验	在 1483 个表达高水平 SphK1 并以极高速率产生 S1P 的头颈癌细胞培养物中，用 PF-543 预处理一小时，可将内源性 S1P 水平降低十倍，同时按比例增加鞘氨醇水平。观察到 pf-543 对 SphK1 的显着抑制。然而，SphK1 的特异性抑制并不影响 1483 细胞培养物的存活和增殖，尽管细胞 S1P/鞘氨醇比率发生了巨大变化。肿瘤细胞增殖实验：SCC-25/CAL-27细胞接种于96孔板，经PF-543（0.1-50 μM）处理72小时。CCK-8法测定细胞活力，计算IC50值[3] - 自噬实验：SCC-25细胞经PF-543（1-20 μM）处理48小时后固定，对LC3和p62进行免疫染色。共聚焦显微镜定量自噬水平，Western blot检测LC3-II/LC3-I比值[3] - PASMC增殖实验：大鼠PASMCs接种于24孔板，经PF-543（0.1-10 μM）预处理1小时后，暴露于缺氧环境（1% O₂）72小时。BrdU掺入法测定细胞增殖[2] - 内皮细胞管腔形成实验：HUVECs接种于基质胶包被的培养板，经PF-543（0.5-5 μM）联合VEGF（10 ng/mL）处理12小时。计数分支点和总管腔长度定量管腔形成[1]
动物实验	溶于载体（PBS）；0 或 30 mg/kg；尾静脉注射小鼠：将溶于载体（PBS）的 RB-005 或 PF-543（10 或 30 mg/kg）腹腔注射（IV）至 2 月龄雌性 C57BL/6J 小鼠体内。给药后，分别于 15、30、1、1、4、6 和 24 小时进行尾静脉采血，每次取血 20 μL。采用质谱分析测定药物浓度。缺氧诱导的 PAH 大鼠模型：将雄性 Sprague-Dawley 大鼠（200-250 g）暴露于缺氧环境（10% O₂）21 天。在缺氧暴露期间，将悬浮于 0.5% CMC-Na 中的 PF-543 以 3、5 和 10 mg/kg/天的剂量口服给药。评估平均肺动脉压 (mPAP)、肺血管重塑和右心室功能 [2] - 头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC) 异种移植模型：将 SCC-25 细胞（2×10⁶ 个细胞/只）皮下接种到雌性裸鼠（18-22 g）中。当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，将溶解于 0.5% CMC-Na 中的 PF-543 以 5、10 和 15 mg/kg/天的剂量腹腔注射，持续 28 天。测量肿瘤体积、重量、自噬和细胞凋亡 [3]
药代性质 (ADME/PK)	口服生物利用度：大鼠口服10 mg/kg后约为70% [2] - 消除半衰期：大鼠6.5小时；小鼠8.2小时 [2][3] - 血浆蛋白结合率：人血浆中95-97%（浓度范围：0.1-10 μg/mL）[1] - 分布：大鼠分布容积(Vd) = 1.8 L/kg，主要分布于肺、肿瘤组织和肝脏 [2][3]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	急性毒性：大鼠口服LD50 > 300 mg/kg；小鼠 > 250 mg/kg [2] - 亚慢性毒性（小鼠腹腔注射28天）：剂量高达15 mg/kg/天时，未见明显的肝毒性或肾毒性；体重或血液学参数无变化 [3] - 慢性毒性（PAH大鼠口服给药21天）：剂量高达10 mg/kg/天时，血清肌酐、BUN、ALT/AST水平无明显异常 [2] - 治疗动物未观察到明显的不良反应（例如，胃肠道不适、器官损伤）[2][3]
参考文献	[1]. Modulation of cellular S1P levels with a novel, potent and specific inhibitor of sphingosine kinase-1. Biochem J. 2012 May 15;444(1):79-88. [2]. Effect of the sphingosine kinase 1 selective inhibitor, PF-543 on arterial and cardiac remodelling in a hypoxic model of pulmonary arterial hypertension. Cell Signal. 2016 Aug;28(8):946-55. [3]. Induction of autophagy by sphingosine kinase 1 inhibitor PF-543 in head and neck squamous cell carcinoma cells. Cell Death Discov. 2017 Aug 14;3:17047.
其他信息	[(2R)-1-[[4-[[3-(苯磺酰甲基)-5-甲基苯氧基]甲基]苯基]甲基]-2-吡咯烷基]甲醇是一种磺酰胺。 PF-543 是一种高选择性鞘氨醇激酶 1 (SK1) 抑制剂，被开发为研究癌症和心血管疾病中 SK1 介导的信号通路的研究工具 [1][2][3] - 其核心机制包括特异性抑制 SK1 介导的鞘氨醇磷酸化，降低细胞内和细胞外 S1P 水平，并阻断参与细胞增殖、自噬和血管重塑的 S1P 依赖性信号通路（ERK1/2、Akt）[1][2][3] - 研究应用包括抑制肿瘤生长（头颈部鳞状细胞癌）和通过抑制血管重塑来缓解肺动脉高压 [2][3] -它能诱导头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞自噬和凋亡，提示其具有作为靶向SK1过表达癌症的抗肿瘤药物的潜力[3] - 对SK1的高选择性最大限度地减少了脱靶效应，使其成为独立于SK2解析SK1特异性生物学功能的宝贵工具[1] - 在大鼠中表现出良好的口服生物利用度，支持其在临床前和临床研究中进行口服给药的潜力[2]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式

C27H31NO4S

分子量

465.6

精确质量

465.197

元素分析

C, 69.65; H, 6.71; N, 3.01; O, 13.74; S, 6.89

CAS号

1415562-82-1

相关CAS号

PF-543 Citrate; 1415562-83-2; PF-543 hydrochloride; 1706522-79-3

PubChem CID

66577038

外观&性状

White to off-white Waxy semisolid

密度

1.2±0.1 g/cm3

沸点

666.0±55.0 °C at 760 mmHg

闪点

356.6±31.5 °C

蒸汽压

0.0±2.1 mmHg at 25°C

折射率

1.610

LogP

4.16

tPSA

75.22

氢键供体(HBD)数目

氢键受体(HBA)数目

可旋转键数目(RBC)

重原子数目

分子复杂度/Complexity

679

定义原子立体中心数目

SMILES

CC1=CC(OCC2=CC=C(CN3[C@@H](CO)CCC3)C=C2)=CC(CS(C4=CC=CC=C4)(=O)=O)=C1

InChi Key

NPUXORBZRBIOMQ-RUZDIDTESA-N

InChi Code

InChI=1S/C27H31NO4S/c1-21-14-24(20-33(30,31)27-7-3-2-4-8-27)16-26(15-21)32-19-23-11-9-22(10-12-23)17-28-13-5-6-25(28)18-29/h2-4,7-12,14-16,25,29H,5-6,13,17-20H2,1H3/t25-/m1/s1

化学名

[(2R)-1-[[4-[[3-(benzenesulfonylmethyl)-5-methylphenoxy]methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol

别名

PF543; PF-543 HCl;PF543; PF 543; PF-543 hydrochloride

HS Tariff Code

2934.99.9001

存储方式

Powder -20°C 3 years

4°C 2 years

In solvent -80°C 6 months

-20°C 1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

运输条件

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)

DMSO: 93~100 mg/mL (199.7~214.8 mM)

Water: <1 mg/mL

Ethanol: <1 mg/mL

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (10.74 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (10.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.1478 mL	10.7388 mL	21.4777 mL
	5 mM	0.4296 mL	2.1478 mL	4.2955 mL
	10 mM	0.2148 mL	1.0739 mL	2.1478 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。