NEP (neprilysin) (IC50 = 5 nM)

化合物 sacubitril (AHU-377) 是一种脑啡肽酶抑制剂，由缬沙坦（ARB）和 sacubitril (AHU-377) 分子部分以 1:1 的比例组成。 Sacubitril (AHU-377) 经过乙酯的酶裂解，生成活性脑啡肽酶抑制代谢物 LBQ657 [2]。无活性的 NEPi 前体 Sacubitril (AHU-377) 不会抑制成纤维细胞中的胶原蛋白形成或心肌细胞肥大。活性 NEPi LBQ657 似乎对心脏成纤维细胞没有任何影响。相反，LBQ657 会在一定程度上抑制心肌细胞肥大 [3]。

ANF 使用媒介物治疗的狗的尿钠从 17.3±3.6 提高到 199.5±18.4 pequivkglmin。沙库巴曲 (AHU-377) 的作用在动物体内显着增强。静脉注射 Sacubitril (AHU-377) 的动物的尿量也同样增加 [1]。 Sacubitril（3、10 和 30 mg/kg，PO）预处理可使正常血压大鼠 ANP 诱导的血浆 cGMP 水平分别提高 2.4、3.3 和 4.0 倍（与媒介物相比，4 小时 AUC）[4]。在 Dahl-SS 大鼠中，sacubitril（30 和 100 mg/kg，PO）具有剂量依赖性抗高血压作用 [4]。

体外培养的细胞性心脏肥大和纤维化[3]
大鼠新生心肌细胞和成纤维细胞通过酶促胶原酶消化法从1至2天大的Sprague-Dawley大鼠幼崽中获得，并按照我们实验室的常规方法制备用于体外测定。22通过掺入3[H]亮氨酸的AngII刺激（100 nmol/L）新生心肌细胞60小时来评估心肌细胞肥大。通过在新生儿心脏成纤维细胞中掺入3[H]脯氨酸48小时来测定AngII刺激的（100nmol/L）胶原合成。在刺激前，将细胞与缬沙坦、AHU377、LBQ657或缬沙坦+LBQ657（ARNi）预孵育1小时。使用的剂量范围和NEPi与ARB的比率旨在尽可能复制临床使用的LCZ696的剂量。这些药物是瑞士巴塞尔诺华公司的一份厚礼。此外，就在AngII刺激之前，将不同浓度的外源性B型钠尿肽（BNP）加入细胞培养基中，以评估NP信号直接增强的效果。实验重复2-4次，每次一式三份。

One week after MI, adult male Sprague-Dawley rats were randomized to treatment for 4 weeks with LCZ696 (68 mg/kg body weight perorally; MI-ARNi, n=11) or vehicle (MI-vehicle, n=6). Five weeks after MI, MI-ARNi versus MI-vehicle demonstrated lower LV end-diastolic diameter (by echocardiography; 9.7±0.2 versus 10.5±0.3 mm), higher LV ejection fraction (60±2 versus 47±5%), diastolic wall strain (0.23±0.02 versus 0.13±0.02), and circular strain (-9.8±0.5 versus -7.3±0.5%; all P<0.05). LV pressure-volume loops confirmed improved LV function. Despite similar infarct size, MI-ARNi versus MI-vehicle had lower cardiac weights (P<0.01) and markedly reduced fibrosis in peri-infarct and remote myocardium. Angiotensin II-stimulated incorporation of 3[H]leucine in cardiac myocytes and 3[H]proline in cardiac fibroblast was used to evaluate hypertrophy and fibrosis, respectively. The neprilysin inhibitor component of LCZ696, LBQ657, inhibited hypertrophy but not fibrosis. The angiotensin receptor blocker component of LCZ696, valsartan inhibited both hypertrophy and fibrosis. Dual valsartan+LBQ augmented the inhibitory effects of valsartan and the highest doses completely abrogated angiotensin II-mediated effects.[3]

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We determined the relationship between atrial natriuretic peptide (ANP) and blood pressure in anesthetized, normotensive rats. We studied the relationship between NEP inhibition and elevation of plasma cGMP evoked by ANP in the absence and presence of AHU-377, an ester prodrug of LBQ657 and a component of LCZ696. Finally, using telemetry, we assessed the antihypertensive effects of AHU-377 in conscious Dahl-SS and DOCA-salt models of hypertension [4].

[1]. Ksander GM, et al. Dicarboxylic acid dipeptide neutral endopeptidase inhibitors. J Med Chem. 1995 May 12;38(10):1689-700.
[2]. Voors AA, et al. The potential role of valsartan + AHU377 ( LCZ696 ) in the treatment of heart failure. Expert Opin Investig Drugs. 2013 Aug;22(8):1041-7.
[3]. von Lueder TG, et al. Angiotensin receptor neprilysin inhibitor LCZ696 attenuates cardiac remodeling and dysfunction after myocardial infarction by reducing cardiac fibrosis and hypertrophy. Circ Heart Fail. 2015 Jan;8(1):71-8.
[4]. Hegde, L.G., et al. Comparative efficacy of AHU-377, a potent neprilysin inhibitor, in two rat models of volume-dependent hypertension. BMC Pharmacol 11, P33 (2011).

C24H29NO5

411.49076

411.2045

149709-62-6

Sacubitril hemicalcium salt;1369773-39-6;Sacubitril-d4 hemicalcium salt;(2S,4S)-Sacubitril;149709-63-7;2R,4R-Sacubitril;766480-48-2;2R,4S-Sacubitril;761373-05-1;(Z)2S,4R-Sacubitril;Sacubitril sodium;149690-05-1;Sacubitril-d4;1884269-07-1;2S,4R-Sacubitril;2307668-79-5

White to light yellow solid

3.96

96.19

O=C(CCC(O)=O)N[C@H](CC1=CC=C(C2=CC=CC=C2)C=C1)C[C@@H](C)C(OCC)=O

PYNXFZCZUAOOQC-UTKZUKDTSA-N

InChI=1S/C24H29NO5/c1-3-30-24(29)17(2)15-21(25-22(26)13-14-23(27)28)16-18-9-11-20(12-10-18)19-7-5-4-6-8-19/h4-12,17,21H,3,13-16H2,1-2H3,(H,25,26)(H,27,28)/t17-,21+/m1/s1

4-[[(2S,4R)-5-ethoxy-4-methyl-5-oxo-1-(4-phenylphenyl)pentan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid

LCZ696; AHU377; LCZ 696; AHU 377; LCZ696; AHU-377; Entresto

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~75 mg/mL (~182.26 mM)
H2O : ~0.67 mg/mL (~1.63 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。