| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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描述： 360A 是一种高效且选择性的 G-四链体稳定剂，同时还能抑制端粒酶活性，在 TRAP-G4 检测中，其对端粒酶的 IC50 值为 300 nM。它对端粒 3' 突出端的 G-四链体结构具有很强的选择性。
| 靶点 |
Telomeric G-quadruplex (G4) structures. [1]
Telomerase (indirectly, by stabilizing G4). In vitro telomerase inhibition IC50 = 0.31 μM (measured by TRAP-G4 assay). Selectivity ratio for telomerase vs. Taq polymerase inhibition > 50-100. [1] G-quadruplex stabilization: ΔTm > 21°C (measured by G4 FRET assay). Selectivity index for G4 over B-DNA > 50-100. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
化合物 360A 可抑制端粒酶活性并稳定 G-四链体，在 TRAP-G4 测试中，其对端粒酶的 IC50 值为 300 nM。化合物 360A 可降低包括 T98G、CB193、U118-MG、SAOS-2 和原代星形胶质细胞在内的多种胶质瘤细胞系的活力，其 IC50 值分别为 4.8 ± 1.1 μM、3.9 ± 0.4 μM、8.4 ± 0.5 μM、> 15 μM 和 17.4 ± 1.2 μM[1]。 360A 会导致依赖于 DNA PKcs 的姐妹端粒融合，并产生 Rad51 依赖性的端粒异常，优先影响滞后链端粒，例如端粒丢失或端粒双联体 [2]。
在三种端粒酶阳性胶质瘤细胞系（T98G、CB193 和 U118-MG）以及 ALT 细胞系 SAOS-2 中，经数天处理后，360A 以剂量依赖的方式抑制细胞增殖并诱导大量细胞凋亡。处理 72 小时后未观察到任何作用。[1] - 在 T98G 细胞中，1 μM 360A 处理可显著降低 G0/G1 期细胞比例，并显著增加 S 期细胞比例（从对照组的 21% 增加到 9 天后的 >55%），随后在 12 天后，亚 G1 期细胞比例（凋亡）显著增加。 [1] - 在 CB193 细胞中，5 μM 360A 处理诱导 S 期阻滞，随后发生大量细胞凋亡，表现为亚 G1 期细胞比例增加、TUNEL 阳性细胞比例 >20%（第 11 天为 20.6%，第 14 天为 39%）以及含有裂解型 caspase-3 的细胞比例（第 11 天为 21.9%，第 14 天为 35.2%）。[1] - 在 SAOS-2 细胞中，360A 诱导细胞凋亡，并伴有 S 期和 G2/M 期细胞比例的适度增加。[1] - 对用 1 μM 360A 处理 7 天的 T98G 细胞进行延时视频显微镜观察，结果显示中期持续时间显著延长（部分细胞阻滞超过 500 分钟，而正常细胞分裂约为 200 分钟），且胞质分裂发生重大改变。 [1] - 用 360A 处理 T98G 或 CB193 细胞并未诱导衰老程序（未检测到 SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞）。[1] - 用 1 μM 360A 持续处理 T98G 细胞导致端粒 G 突出端信号轻微但显著降低（10 天后降低 27%）。[1] - 360A 诱导 T98G 和 CB193 细胞端粒不稳定，表现为频繁检测到双着丝粒染色体、环状染色体和后期桥。[1] |
| 酶活实验 |
G-四链体稳定性测定 (G4-FRET)：使用荧光共振能量转移 (FRET) 熔解测定法评估了 360A 稳定端粒 G-四链体的能力。实验采用荧光标记的端粒寡核苷酸 (F21T)。测量了加入配体后 G-四链体熔解温度的变化 (ΔTm)。360A 的 ΔTm > 21°C，表明其与 G4 结构具有强相互作用。[1]
- 端粒酶抑制测定 (TRAP-G4)：使用改进的 TRAP（端粒重复序列扩增方案）测定法（称为 TRAP-G4）来测量端粒酶抑制作用。该测定法增加了一个步骤，即在 PCR 步骤中将端粒酶产物与配体孵育，以强制 G-四链体形成，从而使该测定法对 G4 配体敏感。化合物 360A 对端粒酶的抑制 IC50 值为 0.31 μM。通过比较其对端粒酶的抑制 IC50 值与对内部 Taq 聚合酶 PCR 对照的抑制 IC50 值，评估了该化合物的选择性。选择性比值大于 50-100。[1] |
| 细胞实验 |
细胞活力检测（WST-1）：将细胞接种于96孔板中，并用不同浓度的360A（0.1-20 μM）或DMSO对照处理，于37℃培养7天。第3天更换培养基。7天后，加入WST-1试剂，检测细胞活力/增殖情况。计算IC50值（抑制50%细胞增殖的浓度）。T98G细胞的IC50值为4.8±1.1 μM；CB193细胞的IC50值为3.9±0.4 μM；U118-MG细胞的IC50值为8.4±0.5 μM；原代星形胶质细胞的IC50值为17.4±1.2 μM；SAOS-2细胞的IC50值大于15 μM。 [1]
- 长期群体倍增实验：将细胞（5×10⁵）接种于75 cm²培养瓶中，并用360A或DMSO处理。每隔3-4天，用胰蛋白酶消化细胞，用台盼蓝染色计数以评估细胞活力，然后以5×10⁵个细胞/瓶的密度重新接种。计算随时间推移的累积群体倍增数。该实验表明，360A处理1-3周后，可降低T98G、U118-MG、CB193和SAOS-2细胞的增殖速率，并诱导细胞生长停滞和细胞死亡。[1] - 流式细胞术细胞周期分析：将细胞（0.5-1×10⁶）固定于70%乙醇中，然后用碘化丙啶和RNase染色。采用流式细胞术分析细胞悬液，以确定处于亚G1期、G0/G1期、S期和G2/M期的细胞百分比。360A处理可诱导胶质瘤细胞系发生S期阻滞并随后发生细胞凋亡。[1] - TUNEL凋亡检测：采用TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记）法检测凋亡细胞。对细胞进行染色，并通过流式细胞术或荧光显微镜进行分析。每个样本至少检测200个细胞，计算TUNEL阳性细胞的百分比。360A可显著增加胶质瘤细胞系中TUNEL阳性细胞的比例（例如，CB193细胞中>20%）。 [1] - 裂解型 caspase-3 检测：细胞经固定、透化处理后，与针对裂解型（活性）caspase-3 的兔抗体孵育。洗涤后，细胞与荧光标记的二抗孵育，并用 DAPI 复染。通过荧光显微镜测定活化 caspase-3 细胞的百分比。360A 处理增加了 CB193 培养物中裂解型 caspase-3 阳性细胞的比例（例如，第 14 天为 35.2%）。[1] - 端粒长度分析（Southern 印迹）：高分子量基因组 DNA 用 HinfI 限制性内切酶消化。消化后的 DNA 通过琼脂糖凝胶电泳分离，转移至尼龙膜，并与 32P 标记的端粒探针 (CCCTAA)4 杂交。分析平均端粒限制性片段 (TRF) 长度。在用 360A 处理的细胞中未检测到明显的端粒缩短。[1] - 端粒 G 突出端分析（非变性杂交）：将未消化的基因组 DNA (2.5 μg) 与 33P 标记的 21C 寡核苷酸探针在钠/镁缓冲液中进行杂交。将样品在含有溴化乙锭的琼脂糖凝胶上进行电泳。凝胶干燥后，扫描溴化乙锭的荧光和放射性。将相对 G 突出端信号标准化至溴化乙锭信号。用 360A 处理 10 天后，G 突出端信号下降了 27%。[1] - 中期和后期染色体分析：制备胶质瘤细胞的中期染色体涂片，并用吉姆萨染液进行复染。将后期细胞培养在腔室载玻片上，用甲醛固定，并用吉姆萨染液染色。对染色体端粒连接（双着丝粒染色体和环状染色体）和后期桥进行计数。360A 处理诱导了这些端粒不稳定标记（例如，在 T98G 细胞中，用 1 μM 360A 处理 10 天后，55% 的中期细胞含有双着丝粒染色体）。[1] - 延时视频显微镜：将细胞置于倒置显微镜的培养箱中，在 37°C 下培养。每 10 分钟拍摄一次相差图像，持续 18 小时。用 1 μM 360A 处理 7 天的 T98G 细胞显示出中期持续时间显著延长（>500 分钟）和胞质分裂缺陷。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
与癌细胞系相比，360A（浓度高达 20 μM）对原代人星形胶质细胞培养物的作用较弱（7 天后 IC50 = 17.4±1.2 μM），表明这些端粒酶阴性的正常细胞对该化合物的敏感性较低。[1]
- 360A 处理并未在 T98G 或 CB193 胶质瘤细胞系中诱导衰老程序（未检测到 SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞）。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
360A 是一种 2,6-吡啶二甲酰胺衍生物，因其与端粒 G-四链体结构而非双链 DNA 具有高度选择性相互作用，以及其强效的端粒酶抑制作用而被选中。[1]
- 360A 的细胞效应（生长停滞和细胞凋亡）被认为与端粒处 G-四链体结构的稳定有关，导致端粒不稳定（染色体末端融合、后期桥）和细胞周期改变（S 期阻滞、中期延长、胞质分裂缺陷），而非整体端粒缩短。[1] - 360A 对端粒酶阳性胶质瘤细胞和 ALT（端粒替代延长）细胞系 (SAOS-2) 均有效。 [1] - 该化合物可诱导p53突变（例如T98G）的胶质瘤细胞系发生凋亡。[1] - 这些基于吡啶的G-四链体配体，包括360A，被认为是治疗包括恶性胶质瘤在内的多种肿瘤的潜在药物。[1] |
| 分子式 |
C27H23N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
449.503825426102
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| 精确质量 |
449.185
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| CAS号 |
794458-56-3
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| 相关CAS号 |
360A iodide;737763-37-0
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| PubChem CID |
11430774
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
4
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| tPSA |
78.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
674
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C[N+]1=CC(=CC2=CC=CC=C21)NC(=O)C3=NC(=CC=C3)C(=O)NC4=CC5=CC=CC=C5[N+](=C4)C
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| InChi Key |
KPOOEJJPTYXNTN-UHFFFAOYSA-P
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H21N5O2/c1-31-16-20(14-18-8-3-5-12-24(18)31)28-26(33)22-10-7-11-23(30-22)27(34)29-21-15-19-9-4-6-13-25(19)32(2)17-21/h3-17H,1-2H3/p+2
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| 化学名 |
3,3'-((pyridine-2,6-dicarbonyl)bis(azanediyl))bis(1-methylquinolin-1-ium)
iodide (2,6-N,N′-Methyl-quinolinio-3-yl)-pyridine dicarboxamide
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| 别名 |
360-A 360A 360 A
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2247 mL | 11.1235 mL | 22.2469 mL | |
| 5 mM | 0.4449 mL | 2.2247 mL | 4.4494 mL | |
| 10 mM | 0.2225 mL | 1.1123 mL | 2.2247 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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