4,5-Diaminofluorescein(DAF-2)

别名: 4,5-二氨基荧光黄
目录号: V45473 纯度: ≥98%
4,5-二氨基荧光素是细胞和组织中一氧化氮 (NO) 的荧光检测器。
4,5-Diaminofluorescein(DAF-2) CAS号: 205391-01-1
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
4,5-二氨基荧光素是一种用于检测细胞和组织中一氧化氮 (NO) 的荧光探针。
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 是一种细胞渗透性荧光探针,专门用于检测和定量生物系统中的一氧化氮 (NO)。它是一种荧光素衍生物,在氧气存在下与 NO 反应生成高荧光性的三唑衍生物。DAF-2 广泛应用于生物化学和细胞生物学研究,用于测量细胞内 NO 生成、NO 合酶 (NOS) 活性以及 NO 介导的信号通路。该化合物在与 NO 反应之前几乎不发荧光,因此提供了一种灵敏、特异且背景荧光极低的 NO 检测方法。
生物活性&实验参考方法
靶点
4,5-Diaminofluorescein (DAF-2) does not have a biological target in the traditional pharmacological sense. Its mechanism of action is chemical rather than biological. DAF-2 reacts with nitric oxide (NO) in the presence of oxygen to form a highly fluorescent triazole derivative. The reaction involves the nitrosation of the diamine groups on the fluorescein ring, followed by cyclization to form the fluorescent product. This reaction is specific for NO and does not occur with other reactive nitrogen species or reactive oxygen species, making DAF-2 a highly selective probe for NO detection.
体外研究 (In Vitro)
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 在天然状态下基本不发荧光。在氧气存在下与一氧化氮 (NO) 反应后,它会生成一种高荧光性的三唑衍生物,其激发和发射最大值分别约为 495 nm 和 515 nm。荧光强度与样品中 NO 的浓度成正比。DAF-2 可以检测纳摩尔至微摩尔范围内的 NO 浓度,因此适用于测量生理 NO 水平。该化合物不具有药理活性;其用途是作为 NO 的荧光指示剂。
体内研究 (In Vivo)
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 不具有体内药理活性。它是一种化学探针,主要用于体外和离体研究,以检测和定量生物样品中的一氧化氮 (NO) 生成。该化合物可加载到细胞或组织中,以实时测量 NO 生成。然而,它不用于动物治疗。其用途仅限于研究 NO 生物学和 NOS 活性。
酶活实验
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 的非细胞检测方法是将其用作荧光探针,用于检测无细胞体系中的 NO。在典型的检测中,DAF-2 以 5-10 μM 的浓度溶解于合适的缓冲液(例如,pH 7.4 的 PBS)中。加入 NO 供体,例如硝普钠 (SNP)、S-亚硝基谷胱甘肽 (GSNO) 或 DEA/NONOate,以生成 NO。使用荧光分光光度计或荧光微孔板读数仪,在 495 nm 激发波长和 515 nm 发射波长下,测量荧光强度随时间的变化。使用已知浓度的 NO 供体绘制标准曲线,以定量 NO 的生成量。
细胞实验
体外细胞检测4,5-二氨基荧光素(DAF-2)的方法通常包括用探针加载细胞以测量细胞内NO的产生。将细胞与DAF-2二乙酸酯(DAF-2 DA)孵育,DAF-2 DA是探针的细胞渗透性酯化形式,可被细胞内酯酶水解以释放活性DAF-2。然后用NO诱导剂(如脂多糖(LPS)和细胞因子(例如IFN-γ))刺激细胞以激活诱导型一氧化氮合酶(iNOS),或用钙离子载体刺激细胞以激活内皮型一氧化氮合酶(eNOS)。使用荧光显微镜、流式细胞仪或荧光微孔板读数仪测量荧光强度的增加。
动物实验
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 不用于体内动物研究的治疗或药理学用途。其应用仅限于对从动物身上采集的生物样本(例如组织匀浆或血浆)进行离体分析,以测量 NO 的生成。在某些研究中,DAF-2 可以局部给药(例如,通过组织注射)以测量体内 NO 的生成,但这仅用于研究目的,而非用于治疗评估。
药代性质 (ADME/PK)
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 并非药物,也不具有药代动力学特性。其物理化学性质更为重要:它是一种细胞渗透性荧光探针,分子量为 348.31,分子式为 C₂₀H₁₄N₄O₅。该化合物可溶于二甲基亚砜 (DMSO),通常配制成 DMSO 储备液,用于添加到水性缓冲液或细胞培养基中。由于其细胞渗透性更高,二乙酸酯形式 (DAF-2 DA) 常用于细胞加载。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
标准产品信息中并未详细列出4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 的具体毒理学数据。作为一种研究用化学品,应按照标准实验室防护措施进行操作,避免吸入、摄入和皮肤接触。该化合物不适用于人体。DAF-2 在用于检测 NO 的浓度(通常为 5-10 μM)下通常被认为毒性较低。然而,更高浓度可能导致细胞毒性或干扰细胞功能。
参考文献

[1]. Jourd'heuil D. Increased nitric oxide-dependent nitrosylation of 4,5-diaminofluorescein by oxidants: implications for the measurement of intracellular nitric oxide. Free Radic Biol Med. 2002 Sep 1;33(5):676-84.

其他信息
4,5-二氨基荧光素是一种有机分子实体,其功能与二苯并吡喃类化合物相关。
4,5-二氨基荧光素 (DAF-2) 是一种研究级荧光探针,仅供实验室使用,未获准用于临床。其 CAS 编号为 205391-01-1。DAF-2 的主要应用包括检测和定量生物系统中的一氧化氮 (NO)、测量细胞和组织中的一氧化氮合酶 (NOS) 活性以及研究 NO 介导的信号通路。由于其高灵敏度、特异性和细胞渗透性,DAF-2 是应用最广泛的 NO 检测荧光探针之一。该化合物可以以游离酸形式或细胞渗透性二乙酸酯 (DAF-2 DA) 的形式提供。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H14N2O5
分子量
362.33556
精确质量
362.09
CAS号
205391-01-1
PubChem CID
10666340
外观&性状
Brown to black solid powder
密度
1.7±0.1 g/cm3
沸点
760.8±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
413.9±32.9 °C
蒸汽压
0.0±2.7 mmHg at 25°C
折射率
1.848
LogP
1.41
tPSA
128.03
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
0
重原子数目
27
分子复杂度/Complexity
589
定义原子立体中心数目
0
SMILES
0
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7598 mL 13.7992 mL 27.5984 mL
5 mM 0.5520 mL 2.7598 mL 5.5197 mL
10 mM 0.2760 mL 1.3799 mL 2.7598 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们