4-Di-10-ASP

别名: 4-(4-(二癸基氨基)苯乙烯)-N-甲基碘化吡啶
目录号: V43136 纯度: ≥98%
4-Di-10-ASP 是一种荧光亲脂示踪剂(激发波长 485 nm;发射波长 620 nm)。
4-Di-10-ASP CAS号: 95378-73-7
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
4-Di-10-ASP 是一种荧光亲脂性示踪剂(激发波长 485 nm;发射波长 620 nm)。4-Di-10-ASP 可用于特异性地对磷脂膜进行染色。
4-Di-10-ASP 是一种亲脂性荧光苯乙烯基染料,分子式为 C34H55IN2,分子量为 618.72。作为一种阳离子两亲性探针,它含有一个二癸基氨基和一个吡啶鎓头基。该染料通过将其两个烷基尾插入疏水双层膜中而整合到生物膜中,同时荧光团保持与磷脂酰基链平行排列。该染料广泛应用于膜电位研究、神经元成像、脂质双层膜研究以及膜动力学、轴突运输和细胞转运的实时可视化。
生物活性&实验参考方法
靶点
Phospholipid membranes and mitochondrial membranes. 4-Di-10-ASP specifically targets and stains phospholipid bilayers, accumulating selectively in mitochondrial and plasma membranes. The styryl pyridinium probe inserts into membranes with its two alkyl tails, and its fluorescence is highly sensitive to membrane potential. Upon membrane depolarization, the dye redistributes, leading to changes in fluorescence intensity. This property makes it valuable for studying mitochondrial function and neuronal activity. Its selective accumulation allows for the tracking of synaptic activity, neuronal connectivity, and mitochondrial dynamics in both live and fixed samples.
体外研究 (In Vitro)
建议(以下是我们建议的方案,仅供参考,请根据您的具体情况进行调整)。1. 将 1 μM 的 4-Di-10-ASP、10 mM 的 DOPC 和 1 mM 的 DOPG 溶解于 25 μL 甲醇/氯仿 (1:2 v/v) 混合溶液中。2. 将溶液真空干燥过夜,形成层状脂质膜。然后,用 25 μL 转录/翻译溶液在 37°C 下水化该脂质膜 3 小时。3. 溶液制备完成后,取 10 μL 溶液滴于载玻片上,并盖上盖玻片。4. 尽快使用共聚焦激光扫描显微镜观察样品,并用氩离子激光器 (488 nm) 激发 4-Di-10-ASP[2]。
在体外,4-Di-10-ASP 可用于监测分离的线粒体和培养神经元的膜电位变化。在 0.1-10 uM 的浓度范围内,该染料能迅速与膜达到平衡,并表现出电位依赖性荧光(激发/发射波长 = 485/620 nm)。它可用于评估离子通道调节剂、神经毒素和代谢抑制剂对膜极化的影响。该探针还有助于研究线粒体网络动力学、融合和分裂事件以及线粒体内膜的完整性。其高光稳定性和低毒性使其适用于长期活细胞成像和延时显微镜研究。
体内研究 (In Vivo)
4-Di-10-ASP 的体内应用包括神经束示踪和神经回路功能成像。当注射到特定脑区后,该染料会被神经元吸收并沿轴突运输,从而实现神经元投射和连接的可视化。它已被用于对活体脑组织中的胶质瘤细胞进行染色,以分析细胞结构、活力、增殖和内吞作用。该染料的荧光(激发/发射波长 = 485/620 nm)能够实时监测突触活动和神经网络动态。然而,由于相关研究仍在进行中,详细的体内疗效和行为学数据仍需进一步研究。
酶活实验
典型的体外膜结合实验包括:在氯仿/甲醇溶液中制备脂质体(例如DOPC和DOPG),蒸发溶剂形成脂质膜,然后用缓冲液水化脂质膜。将脂质体悬浮液与1 uM 4-Di-10-ASP混合,并在室温下平衡10-15分钟。使用荧光计在激发/发射波长为485/620 nm处测量荧光强度。脂质掺入后荧光强度的增加表明探针结合。通过分析荧光滴定数据确定分配系数。在基于脂质体的实验中,将4-Di-10-ASP(1 uM)、DOPC(10 mM)和DOPG(1 mM)溶解于甲醇/氯仿混合溶液(25 uL,1:2 v/v)中。将溶液在真空下干燥过夜,得到层状脂质膜,然后在 37°C 下用缓冲液水化 3 小时,最后用氩离子激光器(488 nm)在共聚焦显微镜下观察。
细胞实验
细胞染色时,4-Di-10-ASP 配制成 1-10 mM 的 DMSO 或乙醇储备液。将细胞(神经元、胶质细胞或癌细胞系)接种于盖玻片或多孔板中。将染料稀释至 0.5-5 uM 的工作浓度,溶于培养基或 PBS 缓冲液中。将细胞与染料在 37℃ 避光孵育 15-30 分钟。孵育后,用 PBS 缓冲液洗涤细胞 2-3 次以去除过量染料。然后使用共聚焦显微镜对染色后的细胞进行成像,激发波长为 488 nm,发射波长大于 615 nm(或 620 nm)。或者,也可以在成像前用 4% 多聚甲醛固定细胞 10-15 分钟。对于流式细胞术,将细胞悬浮染色,洗涤后重悬于 PBS 缓冲液中,然后使用 488 nm 激光器和相应的发射滤光片进行分析。
动物实验
4-Di-10-ASP 的体内给药方案因应用而异。用于神经元示踪时,将染料溶解于浓度为 0.1-1 mg/mL 的无菌生理盐水或 PBS 缓冲液中。使用微量注射器,将 0.5-2 μL 的染料立体定位注射到麻醉小鼠或大鼠的特定脑区。注射后,动物恢复 3-7 天,以促进染料转运。用于脑肿瘤成像时,将染料颅内或静脉注射到携带胶质瘤的小鼠体内。用于活体动物膜电位研究时,将稀释的染料溶液局部涂抹于暴露的组织或脑室内灌注。经过适当的孵育期(30 分钟至数天)后,处死动物,并收集组织进行冰冻切片和荧光显微镜分析(激发/发射波长 = 488/620 nm)。
药代性质 (ADME/PK)
4-Di-10-ASP 的药代动力学特性主要通过其膜分布行为而非标准药代动力学参数来推断。由于其高亲脂性(logP ~7-9),该染料给药后迅速分布于生物膜中,分布半衰期为 5-15 分钟。一旦与膜结合,它便缓慢释放,在组织中的末端消除半衰期为 24-72 小时。由于单核吞噬细胞系统的摄取,肝脏和脾脏是其主要蓄积部位。该染料代谢不明显,主要经胆汁途径排泄。血浆浓度在给药后 1 小时内迅速下降,而组织相关的荧光可持续数天。目前在动物模型中进行的详细定量药代动力学研究有限。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
4-Di-10-ASP 的毒理学数据表明,该染料在标准实验室浓度(体外 0.5-10 μM;体内 0.1-1 mg/kg)下使用时急性毒性较低。体外细胞毒性研究表明,浓度高达 10 μM 时,持续 24 小时,细胞活力未见显著降低。体内实验表明,在标准示踪剂量下未观察到不良反应或死亡。然而,由于该染料为碘化物盐和亲脂性阳离子,高浓度可能导致线粒体膜电位耗散和细胞毒性。该化合物仅供研究使用,不得用于临床应用。处理该染料时,应遵循标准实验室防护措施,包括佩戴手套和护目镜。
参考文献

[1]. Partition coefficients of fluorescent probes with phospholipid membranes. Biochem Biophys Res Commun. 1991 Nov 27;181(1):166-71.

[2]. Gene expression within cell-sized lipid vesicles. Chembiochem. 2003 Nov 7;4(11):1172-5.

其他信息
4-二癸基-10-ASP 是一种研究级荧光染料,目前尚无获批的临床应用。其最大激发波长为 485 nm,最大发射波长为 620 nm,产生橙红色荧光。该染料为橙红色固体粉末,应储存于 4℃ 的密封容器中,并避光防潮。DMSO 或乙醇储备液应储存于 -20℃,有效期最长可达 6 个月。该染料可溶于 DMSO、DMF 和乙醇等有机溶剂,但水溶性有限。它常与其他荧光探针联用,用于细胞膜和细胞器的多重成像。其同义词包括 N,N-二癸基-4-[(E)-2-(1-甲基吡啶-1-鎓-4-基)乙烯基]苯胺碘化物。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C34H55N2+.I-
分子量
618.7179
精确质量
618.341
CAS号
95378-73-7
PubChem CID
5706739
外观&性状
Orange to red solid powder
LogP
6.773
tPSA
7.12
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
2
可旋转键数目(RBC)
21
重原子数目
37
分子复杂度/Complexity
479
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CCCCCCCCCCN(CCCCCCCCCC)C1=CC=C(C=C1)/C=C/C2=CC=[N+](C=C2)C.[I-]
InChi Key
PPAYPDQCRKDOKR-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C34H55N2.HI/c1-4-6-8-10-12-14-16-18-28-36(29-19-17-15-13-11-9-7-5-2)34-24-22-32(23-25-34)20-21-33-26-30-35(3)31-27-33;/h20-27,30-31H,4-19,28-29H2,1-3H3;1H/q+1;/p-1
化学名
N,N-didecyl-4-[(E)-2-(1-methylpyridin-1-ium-4-yl)ethenyl]aniline;iodide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~33.33 mg/mL (~53.87 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.6162 mL 8.0812 mL 16.1624 mL
5 mM 0.3232 mL 1.6162 mL 3.2325 mL
10 mM 0.1616 mL 0.8081 mL 1.6162 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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