| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| 5g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Requires F420 cofactor for activation; activates autophagy in macrophages; inhibits mycolic acid biosynthesis (TMM and TDM). Exact molecular target is unknown but involves an F420-dependent nitroreductase distinct from Ddn. [2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
5-硝基-1,10-菲咯啉(25 μM;24 小时)可诱导 THP-1 巨噬细胞自噬,从而杀死天然耐药的胞内细菌 [2]。5-硝基-1,10-菲咯啉(1 倍、5 倍、20 倍或 50 倍 MIC,MIC=0.78 μM;1 小时)可通过抑制结核分枝杆菌 (Mtb) 的分枝菌酸生成,改变宿主对胞内感染的防御机制 [2]。
对牛分枝杆菌 (M. bovis) 和卡介苗 (BCG) 均表现出抗分枝杆菌活性,MIC99 为 1.56 μM。[2] - 对结核分枝杆菌 (M. bovis) 表现出抗分枝杆菌活性。对结核分枝杆菌H37Rv(药物敏感)的MIC99为1.56 μM,对异烟肼耐药的结核分枝杆菌H37Rv的MIC99为3.125 μM。[2] - 对结核分枝杆菌H37Rv的MIC值为1.25 μM(见表2)。[2] - 对MIC值范围为0.3至1.25 μM的多重耐药临床结核分枝杆菌菌株(例如,菌株210、536b、116b、692)有效。对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、卡那霉素、链霉素、卷曲霉素、PAS 或 MmpL3 抑制剂(SQ109、DA8)无交叉耐药性。[2] - 对大肠杆菌无活性(MIC > 50 μM),对耻垢分枝杆菌活性降低(MIC = 25 μM)。[2] - 在液体培养中具有杀菌作用:将牛分枝杆菌 BCG 暴露于 8× MIC(约 12.5 μM)7 天,与未处理的对照组相比,细菌数量减少约 60 至 100 倍(P < 0.05)。[2] - 细胞内活性:在感染牛分枝杆菌的 THP-1 巨噬细胞中,牛卡介苗 (BCG) 和 5-硝基苯酚 (5-NP,8× MIC) 可使细菌数量减少约 8.0 倍 (P < 0.01)。[2] - 抑制结核分枝杆菌 (M. tuberculosis) 在 THP-1 巨噬细胞内的生长 (P < 0.01)。[2] - 诱导 THP-1 巨噬细胞自噬:以剂量依赖的方式 (3.125 μM 至 25 μM) 增加 Beclin-1、Atg-3 和 Atg-7 的表达以及 LC3-I 向 LC3-II 的转化。在 25 μM 浓度下,24 小时后观察到显著的诱导作用 (Beclin-1、Atg-3 和 Atg-7 的 P < 0.05;LC3-II 转化的 P < 0.05)。 [2] - 增加THP-1巨噬细胞中LC3斑点的形成(P < 0.05)。[2] - 硝基对于抗分枝杆菌活性和自噬诱导均至关重要;去硝基衍生物(1,10-菲咯啉)的活性降低约10倍(MIC = 12.5 μM),且不诱导自噬。[2] - 金属螯合并非其作用机制;添加MgCl₂、ZnCl₂、CaCl₂或Fe₂(SO₄)₃不会改变MIC值。注:200 μg/ml和1 μg/ml的ZnCl₂可完全抑制牛分枝杆菌BCG的生长。 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
注: 报告的体内疗效数据是针对类似物3-甲基-6-硝基-1,10-菲咯啉(化合物 10),而非 5-硝基苯酚本身。[2]
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| 酶活实验 |
液相色谱-质谱联用代谢物分析:将处于对数生长期的牛分枝杆菌卡介苗(M. bovis) BCG培养物在37℃下用20 μM 5-硝基苯酚(5-NP)处理8小时,并进行端对端混合。收集细菌细胞,并加入乙腈裂解。通过离心制备澄清的裂解液,并使用0.22 μm孔径的滤膜过滤。将过滤后的裂解液进行质谱分析(AB Sciex 5600三重飞行时间质谱仪)。鉴定出的主要代谢物为1,10-菲咯啉和1,10-菲咯啉-5-胺。一种提出的机制涉及氢负离子从 H₂F₄₂₀ 转移到菲咯啉的 4' 位,形成硝酸中间体,然后该中间体发生质子化或还原反应生成两种代谢物。[2] - 分枝菌酸生物合成抑制试验:将结核分枝杆菌培养物(OD₆₀ 0.3-0.4)用 5-硝基苯酚(5-NP)(1×、5×、20×、50× MIC)处理 1 小时,然后用 1 μCi/ml [¹⁴C]乙酸盐标记 4 小时。收集标记的细菌,加入四正丁基氢氧化铵 (TBAB) 进行水解,并在 100°C 下孵育过夜。脂肪酸用碘甲烷酯化,用二氯甲烷萃取,干燥后重悬于乙醚中。等体积的样品上样至硅胶 60F254 薄层色谱板,用己烷-乙酸乙酯(19:1,体积比;两次展开)进行分离。通过磷光成像法显影对应于脂肪酸甲酯 (FAME) 和甲基异噻唑啉酮甲酯 (MAME) 的条带。5-硝基苯酚 (5-NP) 处理导致 MAME 和 FAME 含量降低,表明分枝菌酸生物合成受到抑制。[2]
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| 细胞实验 |
细胞活力测定[2]
细胞类型:结核分枝杆菌H37Rv、牛分枝杆菌BCG和牛分枝杆菌BCG-5NP耐药菌株 测试浓度:0-12.5 μM 孵育时间:24小时 实验结果:对病原体的抑制作用MIC99值分别为0.78 μM(结核分枝杆菌H37Rv)、0.78 μM(牛分枝杆菌BCG)和>12.5 μM(牛分枝杆菌BCG-5NP)。 MIC测定:化合物配制成50 mM的DMSO储备液。将多种分枝杆菌菌株在 Middlebrook 7H9 培养基中培养至 OD600 = 0.2,稀释 1000 倍,然后加入含有浓度范围为 50 至 0.05 μM 药物的 96 孔板中。对牛分枝杆菌、卡介苗和结核分枝杆菌进行培养,培养 14 天。MIC99 定义为未观察到可见细菌生长的药物浓度。[2] - 细胞毒性试验 (MTT):将 THP-1 细胞(每孔 2.5 × 104 个)接种于 96 孔板中。洗涤巨噬细胞后,加入含有浓度范围为 25 μM 至 0.05 μM 药物的培养基,培养 96 小时。向每个孔中加入 MTT 试剂 (10 μl),用 100 μl 裂解液溶解甲臜晶体,并在 562 nm 处测量吸光度。细胞存活率百分比 = (测试样品 OD562 / 对照组 OD562) × 100。CC50 为导致 50% 细胞存活的浓度。对于 5-NP,表格中未明确列出细胞毒性数据;然而,该研究指出,24 个主要候选化合物即使在 25 μM 的浓度下也无细胞毒性。 [2] - 巨噬细胞胞内杀伤试验:将THP-1巨噬细胞(牛分枝杆菌BCG为2 × 10⁵个细胞;耻垢分枝杆菌为5 × 10⁵个细胞)用PMA诱导分化,然后以1:10(牛分枝杆菌BCG)或1:1(耻垢分枝杆菌)的MOI感染分枝杆菌。3-4小时后,加入含200 μg/ml阿米卡星的RPMI培养基,孵育2小时以去除胞外细菌。之后,在巨噬细胞上覆盖含药物(25 μM 5-硝基苯酚)的RPMI培养基。在 72 小时(耻垢分枝杆菌)或 96 小时(牛分枝杆菌 BCG)时,用含 0.1% Triton X-100 的 PBS 裂解巨噬细胞,并将 100 μl 的 10 倍系列稀释液接种于 Middlebrook 7H11 平板上进行菌落形成单位 (CFU) 计数。[2] - 自噬诱导实验(Western blot):将分化的 THP-1 巨噬细胞(12 孔板中每孔 1.5 × 10⁶ 个)用 5-硝基苯酚 (5-NP)(3.125、6.25、12.5、25 μM)处理 24 小时。用含有蛋白酶抑制剂混合物的 RIPA 裂解缓冲液裂解细胞。用 BCA 法定量蛋白质浓度。每个样品取50 μg蛋白进行15% SDS-PAGE凝胶电泳,然后转移至硝酸纤维素膜,用2%脱脂奶粉封闭,并在4℃下与Beclin-1、Atg-3、Atg-7或LC3抗体孵育过夜。室温下与二抗孵育45分钟,通过增强化学发光法显色。膜经脱色后,用β-肌动蛋白抗体作为上样对照进行重新检测。 [2] - LC3斑点形成实验(免疫荧光法):将分化的THP-1巨噬细胞(5 × 10⁵)接种于玻璃盖玻片上,用25 μM 5-NP处理24小时,PBS洗涤,4%多聚甲醛固定,含2% BSA和0.3% NP-40的缓冲液封闭1小时,然后与抗人LC3抗体在4℃孵育过夜。洗涤后,细胞与Alexa Fluor 568标记的二抗孵育1小时,Fluoromount封片剂封片,并在共聚焦扫描激光显微镜下观察。由一位不知晓分组情况的观察者在随机视野中计数每个细胞的LC3斑点数。[2] |
| 动物实验 |
注:未对 5-NP 本身进行动物实验。体内疗效研究采用类似物 3-甲基-6-硝基-1,10-菲咯啉(化合物 10)进行。为完整起见,实验方案如下:雌性 BALB/c 小鼠经气溶胶途径感染约 100 CFU 的结核分枝杆菌 H37Rv。感染后 4 周,小鼠每日灌胃给予化合物 10(25 mg/kg 或 100 mg/kg)或利福平(10 mg/kg,阳性对照),持续 14 或 28 天。化合物配制于 1% 羧甲基纤维素溶液中。分别于治疗后 2 周和 4 周对肺和脾脏中的细菌载量进行计数。[2]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
代谢:在牛分枝杆菌卡介苗中,5-硝基苯酚 (5-NP) 以 F420 依赖的方式被激活,产生两种主要代谢物:1,10-菲咯啉(脱硝基)和 1,10-菲咯啉-5-胺。该激活过程不需要 Ddn 硝基还原酶 (Rv3547),因为 Ddn 缺陷型结核分枝杆菌菌株对 5-NP 仍然完全敏感。[2]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
THP-1巨噬细胞的细胞毒性:该研究指出,5-NP(NSC 4263)是少数几种即使在25 μM浓度下也无细胞毒性的主要候选化合物之一。[2]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
硝基铁醌是一种菲咯啉类化合物。
作用机制: 5-硝基铁醌对结核分枝杆菌具有双重作用机制。(1) 在病原体中,它是一种前药,由F420依赖性硝基还原酶(未知,不同于Ddn)激活,从而抑制分枝菌酸的生物合成(消耗TMM、TDM、MAMEs、FAMEs)。(2) 在宿主中,它通过自噬体的形成诱导巨噬细胞自噬,从而清除细胞内分枝杆菌,包括耐药菌株。硝基对于这两种活性都至关重要。[2] - 耐药机制: 结核分枝杆菌的自发耐药突变体牛卡介苗对 5-硝基苯酚 (5-NP) 的耐药性发生频率约为 10⁻⁶。全基因组测序显示 fbiB 基因(编码 F₄₂₀ 辅酶 L-谷氨酸连接酶)存在失活的移码突变。用功能性 FbiB 进行互补可恢复其敏感性。5-NP 耐药菌株对 PA-824 具有交叉耐药性,但仍对异烟肼和左氧氟沙星敏感。[2] - 结构要求:R₄ 位的硝基对活性至关重要;用氨基、甲氧基、甲基、氨甲酰基、溴、氯或氰基取代硝基会降低或消除其活性。在 3' 位 (R2) 引入甲基或乙基可增强其效力(例如,3-甲基-6-硝基-1,10-菲咯啉,MIC = 0.195 μM)。[2] - 交叉耐药性研究:5-NP 对携带 fgd(F420 脱氢酶)或 fbiC(F420 生物合成)突变的 PA-824 耐药结核分枝杆菌菌株仍具有活性,但对携带 fbiB 突变的菌株无效。Ddn 缺陷型菌株对 5-NP 完全敏感,表明其激活途径与双环硝基咪唑类化合物不同。 [2] - 潜在应用: 该研究强调了 5-NP 作为一种有前景的支架,可用于开发针对耐药结核病的宿主导向疗法,因为它具有病原体和宿主双重调节作用。[2] - 参考文献[1]: 5-NP(5-硝基-1,10-菲咯啉)被评估为生物传感器和生物燃料电池应用中葡萄糖氧化酶 (GOX) 的氧化还原介体。它对 GOX 的氧化还原介导活性约为 5-氨基-1,10-菲咯啉的四分之一,约为 5,6-二氨基-1,10-菲咯啉的三分之一。硝基表现出负诱导效应,从芳香结构中提取电子,这使得该化合物更容易在电极表面被氧化。[1] |
| 分子式 |
C12H7N3O2
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|---|---|
| 分子量 |
225.20288
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| 精确质量 |
225.053
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| CAS号 |
4199-88-6
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| PubChem CID |
72790
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
444.0±30.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
202-204 °C(lit.)
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| 闪点 |
222.3±24.6 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.768
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| LogP |
1.56
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| tPSA |
71.6
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
0
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| 重原子数目 |
17
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| 分子复杂度/Complexity |
305
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
PDDBTWXLNJNICS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H7N3O2/c16-15(17)10-7-8-3-1-5-13-11(8)12-9(10)4-2-6-14-12/h1-7H
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| 化学名 |
5-nitro-1,10-phenanthroline
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.4405 mL | 22.2025 mL | 44.4050 mL | |
| 5 mM | 0.8881 mL | 4.4405 mL | 8.8810 mL | |
| 10 mM | 0.4440 mL | 2.2202 mL | 4.4405 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01818362 | COMPLETED | Biological: MVA NP+M1 Biological: ChAdOx1 NP+M1 |
Seasonal Influenza | University of Oxford | 2013-04 | Phase 1 |
| NCT00942071 | COMPLETED | Biological: MVA-NP+M1 Biological: MVA-NP+M1 Biological: MVA-NP+M1 |
Influenza | University of Oxford | 2008-08 | Phase 1 |
| NCT02071602 | COMPLETED | Drug: CD-NP | ST Elevation (STEMI) Myocardial Infarction of Anterior Wall | Mayo Clinic | 2013-10 | Phase 1 |
| NCT03091998 | WITHDRAWN | Drug: CD-NP Other: Placebo |
Heart Failure Left Ventricular Assist Device Natriuretic Peptide |
Mayo Clinic | 2017-09-30 | Phase 1 |
| NCT01750905 | COMPLETED | Drug: CD-NP Drug: Placebo |
Left Ventricular Insufficiency | Mayo Clinic | 2013-04 | Phase 1 |