MTX/methotrexate metabolite; DHFR/dihydrofolate reductase; anticancer

与甲氨蝶呤（MTX）对DHFR的亲和力大于100倍相比，7-羟基甲氨蝶呤（7-OHMTX）的亲和力要低得多[1]。

7-羟基甲氨蝶呤（4 mg/kg；IV）的总体清除率为 9.6 mL/min·mg，终末半衰期为 97.2 分钟 [1]。

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在戊巴比妥麻醉的大鼠中，静脉注射4mg/kg甲氨蝶呤（MTX）或7-羟基甲氨喋呤（7-OH-MTX），两种药物的药代动力学相似。两种药物的血浆浓度呈双指数下降，MTX的终末半衰期为90.6分钟，7-OH-MTX为97.2分钟。总清除率值分别为9.2和9.6 ml x kg-1 x min-1。使用MTX，48.2%的剂量在200分钟内通过尿液排泄，另有31.6%从胆汁中回收；5.8%被代谢为7-OH-MTX并出现在胆汁中。MTX给药后代谢物7-OH-MTX的血浆浓度低于检测限值。注射的7-OH-MTX主要排泄到胆汁中（剂量的72.8%）；从尿液中回收率仅为11.2%。MTX和7-OH-MTX的物理化学性质之间的差异或对活性转运系统的不同亲和力可能解释了这两种排泄途径对这两种化合物的重要性不同[1]。

甲氨蝶呤（MTX）是一种抗癌药物，广泛用于各种人类癌症，包括原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）。直接影响MTX在PCNSL中使用的重要药理学特性，如控制其在脑肿瘤中摄取的机制，尚不清楚，但可以在小鼠模型中进行研究。为了进行此类临床前药理学研究，需要一种快速灵敏的液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法来测定脑肿瘤和脑脊液（CSF）血浆和微量透析液样本中MTX及其代谢产物7-羟基甲氨蝶呤（7-OH MTX）的含量。血浆测定基于10微升样品，并遵循蛋白质沉淀程序，使用正电喷雾电离直接注射到LC/MS/MS系统上。采用柱切换技术对脑组织中的微量透析液样本进行脱盐和净化。这些方法在脑肿瘤和脑脊液的血浆和微量透析液样本中验证了MTX和7-OH MTX的有效性，并在血浆中产生了MTX的3.7 ng/ml和7-OH MT的7.4 ng/ml的定量下限（LLOQ），在微量透析液样品中产生了MTS和7-OH MTS的0.7 ng/ml的定量限。通过估计MTX和7-OH MTX在清醒小鼠体内的药代动力学（PK）和脑分布特性，证明了该方法的实用性。该方法具有样品量小、清理速度快、同时测量血浆和脑组织中MTX和7-OH MTX的优点，可以在单个小鼠中完成详细的PK研究[2]。

Animal/Disease Models: Male Wistar rat (270-440 g) [1]
Doses: 4 mg/kg (pharmacokinetic/PK/PK analysis)
Route of Administration: intravenous (iv) (iv)injection
Experimental Results: Terminal half-life was 97.2 minutes, total clearance rate was 9.6 mL /min·mg.

[1]. Pharmacokinetics of methotrexate (MTX) and 7-hydroxymethotrexate (7-OH-MTX) in rats and evidence for the metabolism of MTX to 7-OH-MTX. Cancer Chemother Pharmacol. 1989;23(3):156-60.

[2]. Determination of methotrexate and its major metabolite 7-hydroxymethotrexate in mouse plasma and brain tissue by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J Pharm Biomed Anal. 2007 Apr 11;43(5):1789-95.

Methotrexate (MTX) is an anticancer agent that is widely used in a variety of human cancers including primary central nervous system lymphoma (PCNSL). Important pharmacological properties that directly bear on the use of MTX in PCNSL, such as mechanisms that govern its uptake into brain tumors, are poorly defined, but are amenable to investigation in mouse models. In order to pursue such preclinical pharmacological studies, a rapid and sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) method for the determination of MTX and its metabolite, 7-hydroxymethotrexate (7-OH MTX) in plasma and microdialysate samples from brain tumors and cerebrospinal fluid (CSF) is needed. The plasma assay was based on 10 microl samples and following a protein precipitation procedure enabled direct injection onto a LC/MS/MS system using positive electrospray ionization. A column switching technique was employed for desalting and the clean-up of microdialysate samples from brain tissues. The methods were validated for MTX and 7-OH MTX in both plasma and microdialysate samples from brain tumor and CSF, and produced lower limits of quantification (LLOQ) in plasma of 3.7 ng/ml for MTX and 7.4 ng/ml for 7-OH MTX, and in microdialysate samples of 0.7 ng/ml for both MTX and 7-OH MTX. The utility of the method was demonstrated by estimation of pharmacokinetic (PK) and brain distribution properties of MTX and 7-OH MTX in conscious mice. The method has the advantages of low sample volume, rapid clean-up, and the simultaneous measurement of MTX and 7-OH MTX in plasma and brain tissues allowing detailed PK studies to be completed in individual mice.[2]

470.166

C, 51.06; H, 4.71; N, 23.82; O, 20.40

5939-37-7

7-Hydroxymethotrexate-d3 sodium;7-Hydroxymethotrexate-d3;432545-62-5;7-Hydroxymethotrexate-d3 ammonium

5484402

Typically exists as solid at room temperature

1.68g/cm3

230ºC dec.

1.76

1.527

230.77

6

12

9

34

830

1

CN(CC1=NC2=C(N=C(N=C2NC1=O)N)N)C3=CC=C(C=C3)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O

HODZDDDNGRLGSI-NSHDSACASA-N

InChI=1S/C20H22N8O6/c1-28(8-12-18(32)26-16-14(23-12)15(21)25-20(22)27-16)10-4-2-9(3-5-10)17(31)24-11(19(33)34)6-7-13(29)30/h2-5,11H,6-8H2,1H3,(H,24,31)(H,29,30)(H,33,34)(H5,21,22,25,26,27,32)/t11-/m0/s1

(2S)-2-[[4-[(2,4-diamino-7-oxo-8H-pteridin-6-yl)methyl-methylamino]benzoyl]amino]pentanedioic acid

NSC-380963; 7-Hydroxymethotrexate; NSC380963; 7-Hydroxymethotrexate; 5939-37-7; 7-Hydroxy Methotrexate; 7-Hydroxymethotrexat; X019Z9S1DL; (S)-2-(4-(((2,4-Diamino-7-oxo-7,8-dihydropteridin-6-yl)methyl)(methyl)amino)benzamido)pentanedioic acid; NSC 380962; Glutamic acid, N-(p-(((2,4-diamino-7-hydroxy-6-pteridinyl)methyl)methylamino)benzoyl)-; NSC 380963

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。