| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 500μg |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 靶点 |
JAK2; STAT3/5
Butyzamide targets the thrombopoietin receptor Mpl (also known as TPO-R or CD110). Mpl is a cytokine receptor that plays a critical role in megakaryopoiesis and platelet production. By acting as a potent and specific non-peptidyl agonist, Butyzamide binds to human Mpl and activates downstream signaling pathways including JAK2, STAT3, STAT5, and MAPK. It shows species specificity for human Mpl and does not stimulate other cytokine receptors such as EPO, G-CSF, GM-CSF, or IL-3. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 Ba/F3-hMpl 细胞中，丁酰胺（3 μM；15 分钟）可磷酸化 JAK2、STAT3、STAT5 和 MAPK [1]。丁酰胺（3 μM；48 小时）可刺激人 CD34+ 造血祖细胞产生多倍体巨核细胞和形成集落形成单位的巨核细胞 [1]。体外实验表明，丁酰胺可促进表达人 Mpl 的 Ba/F3 细胞（Ba/F3-hMpl）增殖，EC50 为 10 nM。它不促进不表达人 Mpl 的亲代 Ba/F3 细胞增殖。在 3 μM 浓度下，丁酰胺作用 15 分钟可诱导 Ba/F3-hMpl 细胞中 JAK2、STAT3、STAT5 和 MAPK 的磷酸化。它能以 3 μM 的浓度刺激人类 CD34+ 造血祖细胞产生多倍体巨核细胞和集落形成单位-巨核细胞，作用时间为 48 小时。
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| 体内研究 (In Vivo) |
丁酰胺（10 mg/kg，50 mg/kg；侧向；每日一次，持续 20 天）可提高植入人胎肝来源 CD34+ 细胞的 NOG 中人类预期水平 [1]。
丁酰胺可增加移植了FL-CD34+细胞的NOG小鼠体内的人血小板数量[1] 为了评估丁酰胺在体内产生人血小板的能力，研究人员将FL-CD34细胞移植到缺乏淋巴细胞或自然杀伤细胞且补体活性低的免疫缺陷型NOG小鼠体内。28由于NOG小鼠中人细胞的移植率高于NOD/SCID小鼠，一些研究者已使用NOG小鼠分析造血干细胞、肥大细胞和巨核细胞的造血功能。26,29当以10或50 mg/kg的剂量每日一次，连续20天给予移植了FL-CD34细胞的NOG小鼠丁酰胺时，人血小板数量增加，但对小鼠血小板数量没有影响（图4A、B）。在人血小板数量增加之前，噻唑橙染色的网状人CD41+血小板数量也因丁酰胺而增加（图4C）。丁酰胺治疗21天后，处死小鼠，并通过冲洗股骨收集骨髓细胞。丁酰胺给药增加了骨髓中人CD41+巨核细胞的数量（图4D）。另一侧股骨用抗人CD42b抗体染色，以在石蜡切片中观察人巨核细胞（图4E）。与对照组相比，丁酰胺治疗增加了人CD42b+细胞的数量，这表明丁酰胺在体内刺激人巨核细胞的增殖和成熟。这些数据表明，口服布替酰胺可有效增加体内人血小板数量。[1] 在体内，口服布替酰胺（10 或 50 mg/kg；每日一次，持续 20 天）可增加移植了人胎肝来源 CD34+ 细胞的 NOG 小鼠体内的人血小板水平。它还能增加骨髓中人 CD41+ 巨核细胞的数量，并刺激体内人巨核细胞的增殖和成熟。布替酰胺不影响小鼠血小板数量，表明其对人血小板生成具有特异性。 |
| 酶活实验 |
为了构建 Ba/F3-hMpl、Ba/F3-mMpl 和 Ba/F3-hMpl(H499L) 细胞系，我们采用电穿孔法将构建好的质粒转染至 Ba/F3 细胞中。在 2 mg/mL 遗传霉素存在下，通过有限稀释法进行细胞克隆。为了构建 Ba/F3-mMpl(L490H) 细胞系，我们按照制造商的方案，使用 Fugene 6 转染试剂将 pQCXIP-mMpl(L490H) 和 pVSV-G 载体转染至 293GP2 包装细胞中。收集培养上清液并用于感染 Ba/F3 细胞。这些建立的稳定细胞系与亲代 Ba/F3 细胞一样，能够响应 rmIL-3 而增殖，并且似乎保持了亲代 Ba/F3 细胞的特性 [1]。丁酰胺的体外酶活性测定通常包括测量其与 Mpl 受体的结合亲和力或激活情况。例如，在基于细胞的增殖实验中，将Ba/F3-hMpl细胞在不同浓度的丁酰胺存在下培养，并使用MTT或CellTiter-Glo等比色法测定细胞增殖。EC50值由剂量反应曲线计算得出。下游信号蛋白的磷酸化水平通过使用磷酸化特异性抗体的Western blotting方法进行评估。
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| 细胞实验 |
将细胞以 7.5×10⁴ 个细胞/200 μL 的密度接种于 96 孔板中，并加入不同浓度的丁酰酰胺或重组细胞因子。将培养板置于 37°C、5% CO₂ 的加湿培养箱中培养 48 小时，并在培养的最后 4 小时向每个孔中加入 10 μL WST-8 试剂。使用 96 孔微孔板读数仪（型号 680）在 450 nm 波长处测量吸光度 [1]。
人骨髓来源 CD34+ 细胞的液体培养[1] 将人骨髓来源 CD34 细胞以 5.0×10⁴ 个细胞/mL 的密度接种于 24 孔板中。使用添加 20% BIT9500 的 Iscove 改良 Dulbecco 培养基作为无血清培养基。细胞在37°C、5% CO₂的湿润培养箱中，分别用1 nM rhTPO或3 μM丁酰胺处理10天，每个处理设置三个复孔。体外细胞活性评估在Ba/F3-hMpl细胞和人CD34+造血祖细胞中进行。Ba/F3-hMpl细胞用浓度范围为0.1至10 μM的丁酰胺处理，48-72小时后使用细胞活力检测法测量细胞增殖。信号通路研究中，细胞用3 μM丁酰胺处理15分钟，并通过Western blotting分析蛋白质磷酸化。巨核细胞分化通过将人CD34+细胞与丁酰胺共培养48小时并计数集落形成单位来评估。 |
| 动物实验 |
将8-10周龄的免疫缺陷型NOD/Shi-scid,IL-2Rγ (NOG)小鼠用MBR-1520R-3（日本日立医疗株式会社，东京）照射2.4 Gy（125 kV，10 mA，0.45 Gy/min），次日静脉注射6.7×10⁶个人胎肝(FL)来源的CD34⁺细胞。移植两个月后，根据人血小板计数和体重，将NOG小鼠随机分为三组。分别口服给予赋形剂或丁酰酰胺（剂量分别为10 mg/kg和50 mg/kg），连续21天。人血小板和巨核细胞数量的计算方法如下[1]。体内疗效研究在免疫缺陷型NOD/Shi-scid,IL-2Rγnull (NOG)小鼠中进行，这些小鼠已移植了人胎肝来源的CD34+细胞。丁酰酰胺以10或50 mg/kg的剂量每日一次口服给药，持续20天。采用流式细胞术，使用人特异性抗CD41或抗CD42b抗体检测外周血中人血小板水平。收集骨髓细胞以定量人CD41+巨核细胞。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
丁酰胺的药代动力学数据显示其具有口服生物活性。作为一种小分子药物，预计其口服生物利用度良好。现有文献中关于其半衰期、Cmax 和 AUC 等详细药代动力学参数的报道并不多。该化合物在 DMSO 中的溶解度为 10 mM，通常采用口服给药进行体内研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
布替扎米特的体内毒性数据尚未得到充分报道。在小鼠研究中，布替扎米特以10和50 mg/kg的剂量每日口服一次，连续给药20天，耐受性良好。这些研究中未报告任何显著不良反应。与所有研究化合物一样，布替扎米特仅供研究使用，不得用于人类治疗。临床开发需要进行全面的毒理学研究。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景：血小板减少症是癌症和其他造血细胞疾病治疗的常见并发症。既往临床试验表明，聚乙二醇（PEG）偶联的重组人巨核细胞生长发育因子（rHMGF）可提高特发性血小板减少性紫癜和接受化疗的实体瘤患者的血小板计数。然而，健康志愿者和接受化疗的患者体内会产生针对PEG偶联rHMGF的抗体，这些抗体与内源性血小板生成素发生交叉反应。因此，PEG偶联的重组人巨核细胞生长发育因子的临床开发于1998年终止。本研究旨在寻找一种口服生物利用度高且不会产生针对内源性血小板生成素自身抗体的Mpl激活剂。 [1]
设计与方法：我们筛选了一个化合物库，并合成了一种新型非肽类血小板生成素受体Mpl激活剂，命名为丁酰胺。我们使用表达Mpl的Ba/F3细胞和人工造血干细胞，在体外评估了丁酰胺对巨核细胞生成的影响。为了评估其体内作用，我们向移植了人胎肝来源的CD34(+)细胞的免疫缺陷型NOD/Shi-scid,IL-2R γ (NOG)小鼠口服丁酰胺，并研究了人血小板的生成。[1]结果：丁酰胺特异性地与人Mpl反应，并激活与血小板生成素相同的信号转导通路。然而，与血小板生成素不同，丁酰胺不与小鼠Mpl反应，并且其激动活性需要Mpl跨膜结构域中的组氨酸残基。丁酰胺可诱导人CD34(+)造血祖细胞分化为集落形成单位——巨核细胞和多倍体巨核细胞，其作用与血小板生成素相当。当连续20天以10和50 mg/kg的剂量口服丁酰胺给移植了人胎肝来源CD34(+)细胞的NOG小鼠时，人血小板计数分别增加了6.2倍和22.9倍。[1] 结论：丁酰胺是一种具有高口服生物利用度的MP1激活剂，具有作为血小板减少症治疗药物的临床开发潜力。[1] 丁酰胺是一种新型非肽类血小板生成素受体激动剂，具有治疗血小板减少症的潜力。丁酰亚胺是一种小分子化合物，它通过与Mpl受体结合并激活该受体，模拟血小板生成素的活性。该化合物对人Mpl受体具有物种特异性，使其成为在小鼠异种移植模型中研究人类血小板生成的宝贵工具。丁酰亚胺仅供研究使用，尚未获准用于临床治疗。 |
| 分子式 |
C29H32CL2N2O5S
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|---|---|
| 精确质量 |
590.14
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| CAS号 |
1110767-45-7
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| PubChem CID |
44602781
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| LogP |
7.6
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| tPSA |
126Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
11
|
| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
857
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CCCOC(C1=CC=CC(=C1OC)C2=CSC(=N2)NC(=O)C3=CC(=C(C(=C3)Cl)/C=C(\C)/C(=O)O)Cl)C(C)(C)C
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| InChi Key |
BBEZGQPYGPBSLA-FOWTUZBSSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H32Cl2N2O5S/c1-7-11-38-25(29(3,4)5)19-10-8-9-18(24(19)37-6)23-15-39-28(32-23)33-26(34)17-13-21(30)20(22(31)14-17)12-16(2)27(35)36/h8-10,12-15,25H,7,11H2,1-6H3,(H,35,36)(H,32,33,34)/b16-12+
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| 化学名 |
(E)-3-[2,6-dichloro-4-[[4-[3-(2,2-dimethyl-1-propoxypropyl)-2-methoxyphenyl]-1,3-thiazol-2-yl]carbamoyl]phenyl]-2-methylprop-2-enoic acid
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| 别名 |
Butyzamide; 1110767-45-7; (E)-3-(2,6-Dichloro-4-((4-(3-(2,2-dimethyl-1-propoxypropyl)-2-methoxyphenyl)thiazol-2-yl)carbamoyl)phenyl)-2-methylacrylic acid; SCHEMBL3059522; SCHEMBL3059524;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~169.05 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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