| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Traditional Cytotoxic Agents; DGN549-C (1b) itself does not have a specific biological target. As part of an antibody-drug conjugate, it targets the antigen recognized by the antibody (e.g., FRα or CD123). Its mechanism of action is DNA alkylation after intracellular release. The catabolite identified from both lysine-linked and CYSAMB DGN549 ADCs is the monoimine indolinobenzodiazepine aniline species (4). [1]
Not applicable. DGN549-C is a drug-linker conjugate for ADC synthesis, not a drug. It has no biological target. The valine-alanine (va) dipeptide is a cathepsin-cleavable linker that is stable in circulation but cleaved in the lysosomes of target cells. The PBD (pyrrolobenzodiazepine) dimer is a highly potent DNA-alkylating agent that crosslinks DNA within the minor groove, causing cell cycle arrest and apoptosis. DGN549-C consists of a cleavable ADC linker valine-alanine (va) and a PBD dimer. DGN549 is a novel DNA-alkylating cytotoxic payload that may be utilized to prepare antibody-active molecule conjugates (ADCs). |
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| 体外研究 (In Vitro) |
DGN549-C (1b) 未作为游离药物进行测试；其活性是在抗体药物偶联物 (ADC) 中评估的（例如，ADC 2b 和 3b）。[1]
在 FRα 阳性细胞系（KB、T47D、NCI-H2110）中，位点特异性 ADC 2b（DGN549-C 与 mAb1 在 HC-C442 位点偶联）显示出特异性细胞毒性，IC50 值（基于 ADC 浓度）分别为 5 × 10⁻¹² M (KB)、1 × 10⁻¹¹ M (T47D) 和 4 × 10⁻¹¹ M (NCI-H2110)。基于DGN549有效载荷浓度的相应IC50值分别为7 × 10⁻¹² M (KB)、3 × 10⁻¹¹ M (T47D)和9 × 10⁻¹¹ M (NCI-H2110)。过量的未偶联靶向抗体可阻断细胞毒性，证实了靶向特异性。[1]在CD123阳性细胞系（EOL-1、HNT-34、MV4-11）中，位点特异性ADC 3b（DGN549-C与mAb2在HC-C442位点偶联）显示出特异性细胞毒性，IC50值（基于ADC浓度）分别为2 × 10⁻¹² M (EOL-1)、1 × 10⁻¹² M (HNT-34)和8 × 10⁻¹³ M (MV4-11)。基于DGN549有效载荷浓度的相应IC50值分别为4 × 10⁻¹² M (EOL-1)、2 × 10⁻¹² M (HNT-34)和2 × 10⁻¹² M (MV4-11)。非靶向对照ADC的效力显著降低（IC50为2 × 10⁻⁹至4 × 10⁻⁹ M）。[1] 旁观者活性：ADC 2a（赖氨酸连接）和ADC 2b（位点特异性）在亚纳摩尔浓度下即可在混合细胞群试验中杀死FRα阴性细胞，这与细胞可渗透性代谢物的释放相一致。[1] 作为一种DNA烷基化有效载荷偶联物，DGN549-C被整合到抗体药物偶联物（ADC）中，这些ADC对靶向阳性癌细胞表现出极强的体外细胞毒性。PBD二聚体是已知最有效的细胞毒性药物之一，其IC50值在皮摩尔范围内。缬氨酸-丙氨酸连接子在循环中稳定，但会被溶酶体中的组织蛋白酶B特异性切割，从而释放出活性PBD二聚体。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
基于DGN549-C (1b)的抗体药物偶联物(ADC)在小鼠异种移植模型中显示出疗效。[1]在NCI-H2110（FRα阳性非小细胞肺癌）异种移植模型中，ADC 2b（3 μg DGN549/kg）活性极低（T/C = 39%）；9 μg DGN549/kg剂量下，可诱导持久的完全缓解（6/6完全缓解）。其活性与赖氨酸连接的ADC 2a相似。[1]在Molm-13（CD123阳性急性髓系白血病）播散性异种移植模型中，0.3 μg DGN549/kg剂量的ADC 3b可使生存期延长262%；1 μg DGN549/kg剂量下，中位生存期超过152天（>443%的生存期延长）。在 0.3 μg DGN549/kg 剂量下，位点特异性 ADC 3b 与赖氨酸连接的 ADC 3a 相比显示出更高的活性（262% 对 59% ILS）。[1]
目前尚无关于DGN549-C的具体体内数据报道。使用DGN549-C合成的抗体药物偶联物（ADC）有望在异种移植模型中展现出强大的抗肿瘤疗效。基于PBD的ADC在临床前研究中显示出令人瞩目的活性，通常低剂量即可实现持久的完全缓解。缬氨酸-丙氨酸连接子赋予了ADC良好的血清稳定性，从而最大限度地降低了全身毒性。 |
| 酶活实验 |
不适用。DGN549-C 是一种用于抗体偶联的药物-连接子偶联物。典型的偶联方案包括：用 TCEP（2-5 摩尔当量）在 37℃ 下还原抗体（例如曲妥珠单抗）的链间二硫键，反应 2 小时。然后将还原后的抗体（带有游离巯基）与 DGN549-C（每个抗体 10-15 摩尔当量）在室温下孵育 1-2 小时。反应用过量的 N-乙酰半胱氨酸终止，并通过尺寸排阻色谱或透析纯化抗体药物偶联物 (ADC)。药物抗体比 (DAR) 通过 HIC-HPLC 或 LC-MS 测定。
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| 细胞实验 |
细胞结合试验（流式细胞术）：将细胞（0.5–1 × 10⁵）与系列稀释的测试抗体在 4°C 下孵育 1 小时，洗涤后，再与 FITC 标记的羊抗人 IgG 二抗在 4°C 下孵育 1 小时。洗涤后，固定细胞并进行流式细胞术分析。ADC 的 EC50 值与母体抗体相当。[1]
细胞毒性试验（CellTiter-Glo）：将细胞（1500–3000 个/孔）接种于 96 孔板中，并过夜孵育。加入系列稀释的 ADC，并加入或不加入封闭抗体（20 μg/mL）。在 37°C 下孵育 4 天后，加入 CellTiter-Glo 试剂，并测量发光值。计算 IC50 值。 [1] 旁观者活性测定：将 FRα 阴性的亲代 300.19 细胞和 FRα 阳性的转染细胞混合，并用 ADC 处理。4 天后，使用 CellTiter-Glo 检测细胞活力。[1] 代谢物鉴定测定 (LC-MS)：将 KB 细胞用饱和浓度的 ADC 处理 24 小时。培养基中的代谢物通过与抗 IGN 抗体结合进行浓缩，然后用丙酮萃取，干燥，重新溶解，并通过超高效液相色谱-高分辨率质谱联用仪 (UPLC-HRMS) 进行分析。[1] 不适用。DGN549-C 不直接用于基于细胞的检测。最终的抗体药物偶联物 (ADC) 在体外进行测试。将靶点阳性和靶点阴性癌细胞以 5,000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，并用 ADC 的系列稀释液（0.001 pM 至 10 nM）处理 96-120 小时。使用 CellTiter-Glo 检测细胞活力。基于 PBD 的 ADC 通常对靶点阳性细胞具有极低的 IC50 值（皮摩尔级）。可通过 γH2AX 检测评估 DNA 损伤。还可以进行旁观者杀伤实验，以评估 ADC 对邻近抗原阴性细胞的影响。 |
| 动物实验 |
疗效（NCI-H2110 异种移植瘤）：将 1 × 10⁷ 个 NCI-H2110 细胞皮下接种到雌性 CB-17 SCID 小鼠（每组 n=6）。当肿瘤体积达到约 100 mm³（第 8 天）时，单次静脉注射 ADC（3 或 9 μg DGN549/kg）。每周测量两次肿瘤大小。[1]
疗效（Molm-13 播散性异种移植瘤）：将 1 × 10⁷ 个 Molm-13 细胞静脉注射到雌性胸腺裸鼠（每组 n=10）。在第 7 天，单次静脉注射 ADC（0.1、0.3 或 1 μg DGN549/kg）。为阻断Fc受体，小鼠在接受ADC治疗前24小时腹腔注射400 mg/kg的非靶向IgG1抗体，随后在第4天和第9天分别注射100 mg/kg。[1] 耐受性：未携带肿瘤的CD-1小鼠（每组n=8）接受单次静脉注射ADC。每日监测体重，持续14天。最大耐受剂量（MTD）定义为不导致死亡或因体重减轻超过20%而实施安乐死的最大剂量。对于ADC 2b（位点特异性），MTD约为100–125 μg DGN549/kg（约6–8 mg抗体/kg）。[1] 药代动力学：未携带肿瘤的CD-1小鼠接受单次静脉注射ADC（2.5 mg抗体/kg）。在不同时间点（2分钟至28天）采集血浆样本。采用两种ELISA方法测定ADC浓度：一种用于测定总抗体（抗人IgG捕获法），另一种用于测定偶联抗体（抗IGN捕获法）。[1] 目前尚无具体的体内动物研究方案记录。对于基于PBD的ADC，典型的研究方案是在6-8周龄的雌性NSG小鼠体内建立靶向阳性癌细胞的皮下异种移植瘤。当肿瘤体积达到100-200 mm³时，以0.3-3 mg/kg的剂量单次静脉注射ADC。每周测量两次肿瘤体积。监测体重作为耐受性的指标。研究结束时，收集肿瘤组织进行免疫组化（IHC）（γH2AX、Ki67、cleaved caspase-3）。采集血液样本进行药代动力学（PK）分析（总ADC和完整ADC）。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在CD-1小鼠中，以2.5 mg抗体/kg剂量给药，位点特异性抗体偶联药物ADC 2b（DGN549-C与mAb1在HC-C442位点偶联）的血药浓度如下：总抗体Cmax = 52.1 μg/mL，AUC0-∞ = 10,795 h•μg/mL，清除率 = 0.23 mL/h/kg，t½ = 5.7天，Vss = 31.5 mL/kg。偶联抗体的Cmax = 65.4 μg/mL，AUC0-∞ = 9,159 h•μg/mL，清除率 = 0.27 mL/h/kg，t½ = 6.0天，Vss = 23.4 mL/kg。与赖氨酸连接的ADC 2a相比，位点特异性ADC 2b的暴露量提高了1.6倍，清除速度降低了1.7倍。[1]
不适用。该抗体药物偶联物（ADC）的药代动力学性质与母体抗体相似，在小鼠体内的半衰期为7-14天。缬氨酸-丙氨酸（va）连接子在循环中稳定，有效载荷释放量极低（通常在小鼠血浆中7天后<5%）。PBD二聚体经组织蛋白酶B切割后在溶酶体内释放。缬氨酸-丙氨酸（va）二肽是一种可切割的ADC连接子。DGN549-C由可切割的ADC连接子缬氨酸-丙氨酸（va）和PBD二聚体组成。该化合物的分子量为1100.18。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠耐受性研究中，ADC 2b（位点特异性，DAR ~2）的最大耐受剂量（MTD）约为100–125 μg DGN549/kg（约6–8 mg抗体/kg），约为赖氨酸连接的ADC 2a（DAR ~2.5）MTD的2倍，表明位点特异性偶联提高了耐受性。对于ADC 3b（位点特异性，DAR ~2），MTD约为100 μg DGN549/kg，与赖氨酸连接的ADC 3a的MTD相同，但在125 μg DGN549/kg剂量下，3b组的大多数动物在急性毒性后恢复并增重，而3a组的动物则需要安乐死，这表明3b的耐受性略有提高。具有较高药物抗体比 (DAR) 的位点特异性抗体药物偶联物 (ADC 2c，DAR ~3.5) 的中等最大耐受剂量 (MTD) 为 125 μg/kg，这表明位点特异性和较低的 DAR 均有助于提高耐受性。[1]
DGN549-C 未报告毒性数据。PBD 二聚体是极强的细胞毒性药物，必须在指定的生物安全二级 (BSL-2) 或化学安全设施中极其谨慎地操作。含有 PBD 有效载荷的抗体药物偶联物 (ADC) 可能对表达靶抗原的正常组织造成显著的靶内/脱靶毒性。该化合物仅供研究使用。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
合成：DGN549-C (1b) 由 DGN549-L (1a) 通过氨基乙基马来酰化盐酸盐生成。[1]
偶联方法 (CYSAMB)：对工程化的半胱氨酸突变抗体（例如 HC-S442C）进行整体还原和选择性再氧化。将所得部分还原的抗体在含有丙二醇（作为非变性助溶剂）的水性缓冲液中与 1b 偶联。该偶联方法得到的抗体药物偶联物 (ADC) 的药物抗体比 (DAR) 对于单突变抗体约为 2.0。[1] 代谢产物：从赖氨酸连接和 CYSAMB 偶联的 DGN549 ADC 中鉴定出的唯一主要代谢产物是单亚胺吲哚并苯并二氮杂卓苯胺类化合物 (4)，这证实了偶联化学不会改变其作用机制。 [1] 疏水性：通过HIC分析，CYSAMB DGNS49抗体药物偶联物（ADC）的疏水性似乎比其赖氨酸连接的对应物更强，在HIC梯度洗脱的最末端，但它们表现出更好的耐受性和更慢的清除率，这表明HIC保留与此类有效载荷的药代动力学性质不良无关。[1] DGN549-C 的分子式为 C60H61N9O12，分子量为 1100.18。DGN549 是一种新型 DNA 烷基化细胞毒性有效载荷，而 PBD（吡咯并苯并二氮杂卓）二聚体是抗体药物偶联物 (ADC) 中最有效的 DNA 损伤剂，其活性在皮摩尔范围内。DGN549-C 由可裂解的 ADC 连接子缬氨酸-丙氨酸 (va) 和 PBD 二聚体组成。该连接子的设计使其在循环系统中保持稳定，并能特异性地在靶癌细胞的溶酶体中释放有效载荷。该化合物以粉末形式储存于 -20℃，可稳定保存 3 年。仅供研究和生产使用。 |
| 分子式 |
C60H61N9O12
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|---|---|
| 分子量 |
1100.18
|
| 精确质量 |
1099.443
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| CAS号 |
2058075-34-4
|
| PubChem CID |
118912740
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
3.8
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| tPSA |
256
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
5
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
14
|
| 可旋转键数目(RBC) |
21
|
| 重原子数目 |
81
|
| 分子复杂度/Complexity |
2360
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
O=C1C2=CC(OC)=C(OCC3C=C(NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CCCCC(=O)NCCN4C(C=CC4=O)=O)C=C(COC4C=C5N=C[C@]6([H])CC7=CC=CC=C7N6C(=O)C5=CC=4OC)C=3)C=C2NC[C@]2([H])CC3=CC=CC=C3N12
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| InChi Key |
ARZPUSPNNAYGKH-RCAQRAEBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C60H61N9O12/c1-34(64-54(71)16-10-9-15-53(70)61-19-20-67-55(72)17-18-56(67)73)57(74)65-35(2)58(75)66-40-22-36(32-80-51-28-45-43(26-49(51)78-3)59(76)68-41(30-62-45)24-38-11-5-7-13-47(38)68)21-37(23-40)33-81-52-29-46-44(27-50(52)79-4)60(77)69-42(31-63-46)25-39-12-6-8-14-48(39)69/h5-8,11-14,17-18,21-23,26-30,34-35,41-42,63H,9-10,15-16,19-20,24-25,31-33H2,1-4H3,(H,61,70)(H,64,71)(H,65,74)(H,66,75)/t34-,35-,41-,42-/m0/s1
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| 化学名 |
N'-[(2S)-1-[[(2S)-1-[3-[[(12aS)-8-methoxy-6-oxo-12a,13-dihydroindolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-9-yl]oxymethyl]-5-[[(12aS)-8-methoxy-6-oxo-11,12,12a,13-tetrahydroindolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-9-yl]oxymethyl]anilino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]-N-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethyl]hexanediamide
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| 别名 |
2058075-34-4; orb1691297; SCHEMBL17553282; SCHEMBL30018815;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9089 mL | 4.5447 mL | 9.0894 mL | |
| 5 mM | 0.1818 mL | 0.9089 mL | 1.8179 mL | |
| 10 mM | 0.0909 mL | 0.4545 mL | 0.9089 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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