Enduracidin (Enramycin)

别名: Enramycin; 11115-82-5; Enramicina; ENDURACIDIN; Enramycinum; Enradin; Enramycin [INN]; 12772-37-1; 恩拉霉素;持久菌素;持久杀菌素;安耒霉素;持久霉素;恩霉素;恩拉毒素;安来霉素;恩拉霉素(Enduracidin A和EnduracidinB混合物);恩拉霉素,持久杀菌素;恩拉霉素[载体白炭黑];恩拉霉素预混剂; 安来霉素 ,恩拉霉素预混剂;恩拉霉素标准品
目录号: V53503 纯度: Assay 4%
Enduracidin (Enramycin) 是一种由链霉菌产生的生物活性肽抗生素。
Enduracidin (Enramycin) CAS号: 11115-82-5
产品类别: Antibiotic
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: Assay 4%

产品描述
Enduracidin (Enramycin) 是一种由链霉菌产生的生物活性肽抗生素。Enduracidin (Enramycin/恩拉霉素)是由杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus)产生的一种环状多肽类抗生素。其结构由多个氨基酸与一个脂肪酸侧链组成,通过与细菌细胞壁合成前体脂质II竞争性结合,阻断肽聚糖的转糖基作用,从而发挥对革兰氏阳性菌的强效杀菌活性,且与万古霉素或β-内酰胺类抗生素无交叉耐药性。作为被广泛认可的动物生长促进剂,Enduracidin已在全球(包括中国、日本和欧美)的畜禽养殖业中安全应用数十年,主要用于预防猪和鸡由产气荚膜梭菌等病原体引起的坏死性肠炎,并可改善饲料效率,其最高残留限量标准已被相关食品安全机构所确立。
生物活性&实验参考方法
靶点
Lipopeptide antibiotics first isolated from Streptomyces fungicidicus No.B547 [1]
体外研究 (In Vitro)
Endurocidn对革兰氏阳性菌显示出良好的抑制活性,包括许多耐药病原体,例如耐万古霉素的屎肠球菌(VRE)和耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)。它们可以通过与脂质II竞争性结合来阻断细菌细胞壁的合成,并阻止随后肽聚糖安装的转糖基化步骤,这与万古霉素和β-内酰胺抗生素等实际使用的药物完全不同,后者通过与D,D转肽酶中的亲核活性位点丝氨酸残基共价结合来抑制细菌细胞壁合成。Ramoplanin A2现在是一种经美国食品药品监督管理局批准的分子,正在进入治疗VRE和艰难梭菌感染的III期临床试验[1]。
体内研究 (In Vivo)
除了抗菌活性外,enduracidins还显示出有效的促生长活性,并已广泛应用于畜牧业[1]。
共有200头22日龄、体重6.0±0.9kg的PIC®仔猪在育苗阶段(22至64日龄)接受了四种处理:CONTR(对照饮食);ENR+ZnO(对照饮食+10mg/kg恩拉霉素+2500 mg/kg氧化锌,前21天);BUT(对照饮食+900 mg/kg丁酸钠)和TAN(对照饮食+2000 mg/kg缩合单宁)。实验设计是一个随机区组,有4个治疗组和10个重复组,每组5只动物作为实验单位。对直肠深层微生物群的动物技术性能、腹泻指数评分、日粮消化率和宏基因组学进行了评估。[2]
TAN在育苗阶段和最终体重的增加(p<0.05)大于CONTR(分别为394和360 g/d,22.6和21.1 kg),这些值在ENR+ZnO和BUT中处于中间水平(分别为365和382 g/d,21.3和22.1 kg)。半液体性腹泻的治疗方法之间没有差异(评分2),但CONTR的严重腹泻病例(评分3;p<0.05)多于ENR+ZnO、but和TAN,分别为42、18、29和21例。这些处理对稀有类群或分类群的相对丰度(一致性)没有影响,但与其他处理相比,TAN的使用促进了短杆菌属和肠球菌属丰度的增加(p<0.05)。 结论:使用黑荆树浓缩单宁作为性能增强添加剂是有效的,对性能和肠道健康有影响,表明其在仔猪育雏期日粮中替代氧化锌和恩拉霉素的潜力。
酶活实验
Enduracidins的发酵和生产[1]
真菌链霉菌ATCC 31731在MS琼脂上生长6-8天以收集孢子。将约1.0×107个孢子的等分试样接种到50ml种子培养基中。将种子培养物在28°C、220转/分-1的温度下生长48小时。随后,将5毫升上述种子培养物接种到250毫升烧瓶中的50毫升发酵培养基中,温度为28°C,220转/分钟-1,持续8天。离心后收集菌丝体并冷冻干燥。用甲醇洗涤干燥的菌丝体并超声处理30分钟。随后,将混合物在18°C下摇动3小时并离心以去除颗粒。将上清液在30°C下真空蒸发,然后溶解在2ml甲醇中进行HPLC分析。敲除和过表达菌株的发酵和抗生素生产条件与野生型相同。
enduracidins产生的光谱分析[1]
在Shimadzu HPLC系统上使用反向C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm,Alltech,Deerfield,IL)进行HPLC分析,使用含有0.1%三氟乙酸的乙腈/水(10-30%20分钟,30-40%20分钟,100%5分钟,流速0.8 ml min-1)的线性梯度。检测波长为267nm。使用安捷伦1260/6460三四极LC/MS系统和电喷雾电离源进行LC-MS分析。HR-ESI-MS在安捷伦1260 HPLC/6520 QTOF-MS仪器上进行。
动物实验
共选取200头22日龄、体重6.0±0.9 kg的PIC®仔猪,在保育期(22至64日龄)进行四种处理:CONTR(对照日粮);ENR+ZnO(对照日粮+10 mg/kg恩拉霉素+2500 mg/kg氧化锌,饲喂期前21天);BUT(对照日粮+900 mg/kg丁酸钠);TAN(对照日粮+2000 mg/kg缩合单宁)。试验设计为随机区组设计,共4个处理,10个重复,每个试验单元为5头猪的猪栏。评估指标包括畜牧生产性能、腹泻指数评分、日粮消化率和深部直肠微生物群宏基因组学。[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
大鼠口服LD50 >10 g/kg,武田研究所年报,28(76),1969
大鼠腹腔注射LD50 830 mg/kg 行为:震颤;行为:共济失调;肺、胸腔或呼吸:呼吸抑制,武田研究所年报,28(76),1969
大鼠皮下注射LD50 >5 g/kg,武田研究所年报,28(76),1969
大鼠静脉注射LD50 66600 μg/kg 行为:震颤;行为:共济失调;肺、胸腔或呼吸:呼吸抑制 武田研究所年报,28(76),1969
大鼠肌注LD50 >5 gm/kg 武田研究所年报,28(76),1969
参考文献

[1]. Characterization of Three Regulatory Genes Involved in Enduracidin Biosynthesis and Improvement of Enduracidin Production in Streptomyces Fungicidicus. J Appl Microbiol. 2019 Dec;127(6):1698-1705.

[2]. Performance and intestinal health of piglets in the nursery phase subjected to diets with condensed black wattle (Acacia mearnsii) tannin. Anim Biosci . 2024 Aug 23. doi: 10.5713/ab.24.0112.

其他信息
目的:通过过表达内杜拉酸生物合成的正调控因子,提高链霉菌(Streptomyces fungicidicus ATCC 31731)中内杜拉酸的产量。[1]
方法与结果:采用基于CRISPR/Cas9技术的框内缺失方法敲除orf22和orf42基因,同时利用快速筛选蓝白系统,将orf41基因替换为阿普拉霉素抗性基因盒aac(3)IV,使其失活。使用整合型质粒pSET152ermE分别过表达orf22、orf41和orf42基因。将构建的质粒转化到野生型菌株链霉菌 ATCC 31731 中。对三种基因失活突变体 Δorf22、Δorf41 和 Δorf42 以及三种过表达 orf22、orf41 和 orf42 的重组菌株进行发酵,并通过 HPLC 分析检测和比较每种菌株的内切酶产量。通过在链霉菌(Streptomyces fungicidicus)中分别过表达orf22和orf42基因,构建了两个工程菌株。与野生型菌株相比,这两个菌株的内切酶活性分别提高了约4.0倍和2.3倍。[1]
结论:本研究探讨了链霉菌(Streptomyces fungicidicus ATCC 31731)内切酶活性基因簇中三个调控基因orf22、orf41和orf42的功能。orf22基因编码SARP家族蛋白,被认为发挥正向调控作用。orf41和orf42基因编码的蛋白被认为构成一个双组分调控系统,其中响应蛋白Orf41被鉴定为阻遏蛋白,而激酶Orf42被证实为激活蛋白。通过过表达两个正调控基因orf22和orf42,恩杜拉酸的产量显著提高。[1]
研究意义及影响:通过调控参与恩杜拉酸生物合成的调控基因,成功提高了恩杜拉酸的产量,为发酵工业和合成生物学研究提供了一种进一步提高恩杜拉酸产量的有效方法。[1]
恩拉霉素是一种常用的鸡和猪生长促进剂,对革兰氏阳性菌敏感,其最大残留限量(MRL)为30 μg/kg。然而,已报道的恩拉霉素检测方法未能满足准确度要求,所需的定量限高于最大残留限量。为了解决这一问题,我们开发了一种基于超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)的高灵敏度、高稳定性分析方法,用于测定猪组织(包括肝脏、肾脏、猪肉和脂肪)中的恩拉霉素残留。采用ENV固相萃取柱对经55%甲醇和0.2 M盐酸混合液萃取的样品进行净化和富集。经全面验证,该方法在各组织中对恩拉霉素的线性度良好,变异系数均高于0.99。四个不同加标水平的回收率均令人满意(70.99%~101.40%),相对标准偏差均低于9%。本研究中恩拉霉素在脂肪中的定量限为5 μg/kg,在其他组织中的定量限为10 μg/kg,满足开展相应安全性评价研究的要求。该方法具有优异的特异性、稳定性和高灵敏度。总之,这种新方法灵敏度高、稳健性强,足以用于评估恩拉霉素在食品中的安全性。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39290506/
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C107H138N26O31CL2
分子量
2355.30224275589
精确质量
2337.92
元素分析
C, 54.15; H, 5.95; Cl, 2.99; N, 15.34; O, 21.57
CAS号
11115-82-5
PubChem CID
56842192
外观&性状
Light brown to brown solid powder
LogP
3.835
tPSA
922.33
氢键供体(HBD)数目
34
氢键受体(HBA)数目
35
可旋转键数目(RBC)
34
重原子数目
167
分子复杂度/Complexity
5280
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CCC(C)CCCC/C=C/C=C/C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC1C(OC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)N(C(=O)C(NC1=O)C2=CC=C(C=C2)O)CCCCN)C(C)O)C3=CC=C(C=C3)O)C4=CC=C(C=C4)O)C(C)O)CCCNC(=O)N)CC5CNC(=N5)N)C6=CC=C(C=C6)O)CO)C7=CC(=C(C(=C7)Cl)O)Cl)CC8CNC(=N8)N)C)C9=CC=C(C=C9)O)C.O
InChi Key
NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N
InChi Code
InChI=1S/C107H138Cl2N26O31.H2O/c1-7-51(2)17-12-10-8-9-11-13-19-76(144)120-74(47-77(145)146)92(152)126-80-55(6)166-102(162)86(60-28-38-68(143)39-29-60)132-88(148)52(3)117-90(150)73(46-63-49-116-104(112)119-63)124-106(164)134-100(160)84(61-43-69(108)87(147)70(109)44-61)128-93(153)75(50-136)123-97(157)81(56-20-30-64(139)31-21-56)127-91(151)72(45-62-48-115-103(111)118-62)122-89(149)71(18-16-41-114-105(113)163)121-94(154)78(53(4)137)125-98(158)82(57-22-32-65(140)33-23-57)130-99(159)83(58-24-34-66(141)35-25-58)129-95(155)79(54(5)138)133-107(165)135(42-15-14-40-110)101(161)85(131-96(80)156)59-26-36-67(142)37-27-59;/h9,11,13,19-39,43-44,51-55,62-63,71-75,78-86,136-143,147H,7-8,10,12,14-18,40-42,45-50,110H2,1-6H3,(H,117,150)(H,120,144)(H,121,154)(H,122,149)(H,123,157)(H,125,158)(H,126,152)(H,127,151)(H,128,153)(H,129,155)(H,130,159)(H,131,156)(H,132,148)(H,133,165)(H,145,146)(H3,111,115,118)(H3,112,116,119)(H3,113,114,163)(H2,124,134,160,164);1H2/b11-9+,19-13+;
化学名
4-[[41-(4-aminobutyl)-9,23-bis[(2-amino-4,5-dihydro-1H-imidazol-4-yl)methyl]-26-[3-(carbamoylamino)propyl]-14-(3,5-dichloro-4-hydroxyphenyl)-29,38-bis(1-hydroxyethyl)-17-(hydroxymethyl)-3,20,32,35,43-pentakis(4-hydroxyphenyl)-6,47-dimethyl-2,5,8,11,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,42,45-hexadecaoxo-1-oxa-4,7,10,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,41,44-pentadecazacycloheptatetracont-46-yl]amino]-3-[[(2E,4E)-10-methyldodeca-2,4-dienoyl]amino]-4-oxobutanoic acid;hydrate
别名
Enramycin; 11115-82-5; Enramicina; ENDURACIDIN; Enramycinum; Enradin; Enramycin [INN]; 12772-37-1;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.4246 mL 2.1229 mL 4.2457 mL
5 mM 0.0849 mL 0.4246 mL 0.8491 mL
10 mM 0.0425 mL 0.2123 mL 0.4246 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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